RU2490642C1 - Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia - Google Patents
Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia Download PDFInfo
- Publication number
- RU2490642C1 RU2490642C1 RU2012133015/15A RU2012133015A RU2490642C1 RU 2490642 C1 RU2490642 C1 RU 2490642C1 RU 2012133015/15 A RU2012133015/15 A RU 2012133015/15A RU 2012133015 A RU2012133015 A RU 2012133015A RU 2490642 C1 RU2490642 C1 RU 2490642C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chronic
- cll
- lympholeukaemia
- prediction
- aggressive form
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования риска развития хронического лимфолейкоза.The invention relates to medicine, namely to hematology, can be used to predict the risk of developing chronic lymphocytic leukemia.
Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) - моноклональное заболевание крови, относящееся к гемобластозам и характеризующееся накоплением атипичных В-лимфоцитов, преимущественно, в крови, костном мозге, лимфатических узлах, печени и селезенке.Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a monoclonal blood disease related to hemoblastoses and characterized by the accumulation of atypical B-lymphocytes, mainly in the blood, bone marrow, lymph nodes, liver and spleen.
При исследовании механизмов такого сложного многостадийного процесса, как опухоль, мутациям генов отводится большая роль. Хотя изменение отдельного онкогена может вызывать предрасположенность к раку, для того чтобы опухоль развилась, необходимы последующие мутации, затрагивающие другие онкогены, в частности, гены-суппрессоры опухолей или гены, контролирующие программируемую клеточную смерть. Каждый из генов, принадлежащих к этим трем категориям, выполняет свою роль по разным механизмам. Вопрос о том, как они взаимодействуют в многоступенчатом процессе, приводящем в конечном счете к возникновению раковой клетки, и какова их роль в нормальных процессах жизнедеятельности, до конца не раскрыт.In studying the mechanisms of such a complex multi-stage process as a tumor, gene mutations play a large role. Although a change in an individual oncogen can cause a cancer predisposition, for the tumor to develop, subsequent mutations are needed that affect other oncogenes, in particular tumor suppressor genes or genes that control programmed cell death. Each of the genes belonging to these three categories fulfills its role by different mechanisms. The question of how they interact in a multi-stage process, which ultimately leads to the appearance of a cancer cell, and what their role is in normal life processes, has not been fully resolved.
Белок р53 - это транскрипционный фактор, который регулирует клеточный цикл и является супрессором образования злокачественной трансформации клеток (р53, OMIM 191170. В нормальных условиях, наряду с белком р53, в клетке экспрессируется главный регулятор супрессора опухолей р53 - белок MDM2 (OMIM 164785). N-концевой домен белка MDM2 связывается с N-концевым трансактивирующим доменом белка р53, что ведет к снижению активности последнего. Показано, что повышенная экспрессия белка MDM2 является важным фактором прогрессии опухолей. Ген белка MDM2 локализован на длинном плече 12 хромосомы в локусе 12q14.3-12q15.The p53 protein is a transcription factor that regulates the cell cycle and is a suppressor of the formation of malignant cell transformation (p53, OMIM 191170. Under normal conditions, along with the p53 protein, the main regulator of the p53 tumor suppressor, MDM2 protein (OMIM 164785), is expressed in the cell. The β-terminal domain of MDM2 protein binds to the N-terminal transactivating domain of p53 protein, which leads to a decrease in the activity of the latter. It has been shown that increased expression of the MDM2 protein is an important factor in tumor progression. The MDM2 protein gene is localized on a long shoulder 12 of the chromosome at locus 12q14.3-12q15.
Существует много предложений по прогнозированию различных форм ХЛЛ на основе данных биохимического, иммунохимического, цитологического и молекулярно-генетического обследования. Так, Т.П.Загоскиной, В.И.Шардаковым, Е.Л.Назаровой, М.М.Куликовой, И.М.Земцовой предложен способ дифференциальной диагностики доброкачественной и прогрессирующей формы хронического лимфолейкоза на основе определение β2-микроглобулина в сыворотке крови с помощью радиоиммунологического метода с I125 в дебюте заболевания, на ранних стадиях опухолевого процесса, отличающийся тем, что доброкачественную форму ХЛЛ определяют уровнем β2-микроглобулина <5 мг/л; а прогрессирующую >5 мг/л (RU 2242004, 2003 г.). Однако данный метод остается достаточно трудоемким и дорогостоящим. Также его недостатком, на который указывают авторы, является прогнозирование формы заболевание лишь в его дебюте.There are many suggestions for predicting various forms of CLL based on biochemical, immunochemical, cytological, and molecular genetic studies. So, T.P. Zagoskina, V.I. Shardakov, E. L. Nazarova, M. M. Kulikova, I. M. Zemtsova proposed a method for differential diagnosis of benign and progressive forms of chronic lymphocytic leukemia based on the determination of β 2 -microglobulin in serum blood using the radioimmunological method with I 125 in the onset of the disease, in the early stages of the tumor process, characterized in that the benign form of CLL is determined by the level of β 2 -microglobulin <5 mg / l; and progressive> 5 mg / l (RU 2242004, 2003). However, this method remains quite time-consuming and expensive. Also, its drawback, which the authors point out, is the prediction of the form of the disease only in its debut.
Известен способ дифференциальной диагностики развернутой и терминальной стадии ХЛЛ (Цепова Е.Л., Литвинов А.В.). В крови больного определяют способность эритроцитов сорбировать витальные красители. При значении сорбционной способности эритроцитов менее 44,5% судят о развернутой стадии, при ее значении более 44,5% - о терминальной стадии ХЛЛ [патент RU 2138808, 1999 г.]. Существенным недостатком этого способа является отсутствие ранней диагностики ХЛЛ.A known method of differential diagnosis of the expanded and terminal stages of CLL (Tsepova E.L., Litvinov A.V.). In the patient’s blood, the ability of red blood cells to absorb vital dyes is determined. When the sorption capacity of red blood cells is less than 44.5%, the developed stage is judged, when its value is more than 44.5%, the terminal stage of CLL is judged [patent RU 2138808, 1999]. A significant disadvantage of this method is the lack of early diagnosis of CLL.
Известен способ диагностики форм ХЛЛ (Дудко Е.Т., Тищенко Л.М.). В лимфоцитах периферической крови больного определяют количество ядрышковых организаторов на клетку путем импрегнации серебром и при значении их 1,0-1,39 диагностируют прогрессирующий вариант ХЛЛ, а при значении - 1,4-1,7 диагностируют опухолевую форму заболевания [патент RU 2068995, 1996 г.]. Способ позволяет упростить диагностику форм ХЛЛ и повысить ее точность. Недостатками данного метода является, невозможность диагностики ХЛЛ до начала заболевания и в ранних периодах заболевания.A known method for the diagnosis of CLL forms (Dudko E.T., Tishchenko L.M.). In the patient’s peripheral blood lymphocytes, the number of nucleolar organizers per cell is determined by impregnation with silver and, with a value of 1.0-1.39, a progressive variant of CLL is diagnosed, and with a value of 1.4-1.7, the tumor form of the disease is diagnosed [patent RU 2068995, 1996]. The method allows to simplify the diagnosis of CLL forms and increase its accuracy. The disadvantages of this method is the inability to diagnose CLL before the onset of the disease and in the early periods of the disease.
Прототипом изобретения является способ прогнозирования течения и развития хронического лимфолейкоза, предложенный Б.А.Бакировым, А.Б.Бакировым, Т.В.Викторой, О.В.Гринчук [патент RU 2248574, 2003], включающий генотипирование полиморфных локусов генов TNFA и TNFB, на основе которого делается прогноз о течении и риске развития ХЛЛ. Недостатком данного способы является то, что прогнозирование основано на двух генных полиморфизмах, точность прогнозирования ниже.The prototype of the invention is a method for predicting the course and development of chronic lymphocytic leukemia, proposed by B. A. Bakirov, A. B. Bakirov, T. V. Viktoroi, O. V. Grinchuk [patent RU 2248574, 2003], including genotyping of polymorphic loci of TNFA and TNFB, on the basis of which a forecast is made about the course and risk of CLL. The disadvantage of this method is that the prediction is based on two gene polymorphisms, the accuracy of prediction is lower.
Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования агрессивной и доброкачественной формы ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания.The technical result of the invention is to increase the accuracy of prediction of an aggressive and benign form of CLL in the very early stages of the development of the disease.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования агрессивной формы хронического лимфолейкоза, включающем исследование лимфоцитов периферической венозной крови, выделение ДНК с последующими амплификацией и рестрикцией, согласно изобретению проводят генотипирование полиморфного локуса 309T>G гена главного регулятора супрессора опухолей р53 (MDM2) и при выявлении у больного генотипа GG прогнозируют высокую вероятность развития агрессивной формы хронического лимфолейкоза.The specified technical result is achieved by the fact that in the method for predicting an aggressive form of chronic lymphocytic leukemia, including the study of peripheral venous blood lymphocytes, DNA isolation, followed by amplification and restriction, according to the invention, the polymorphic locus 309T> G of the gene of the main regulator of tumor suppressor p53 (MDM2) is genotyped and the detection of the GG genotype in a patient predicts a high probability of developing an aggressive form of chronic lymphocytic leukemia.
Предлагаемый способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза осуществляется следующим образом.The proposed method for predicting the clinical form of chronic lymphocytic leukemia is as follows.
ДНК выделяют из лимфоцитов периферической венозной крови. В качестве консерванта используют раствор следующего состава: 0.48% лимонной кислоты, 1.32% цитрата натрия, 1.47% глюкозы. При заборе крови к 1 мл консерванта добавляют 4 мл крови и хорошо перемешивают.DNA is isolated from peripheral venous blood lymphocytes. As a preservative, a solution of the following composition is used: 0.48% citric acid, 1.32% sodium citrate, 1.47% glucose. During blood sampling, 4 ml of blood is added to 1 ml of preservative and mixed well.
Для получения ДНК необходимой степени чистоты и достаточного молекулярного веса используется метод выделения ДНК из крови фенольно-хлороформной экстракцией, описанный Мэтью (Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press; - 1984. - V.2. - P.31-34).To obtain DNA of the required degree of purity and sufficient molecular weight, the method of DNA isolation from blood by phenol-chloroform extraction, described by Matthew (Mathew CC The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker JM, NY, L, is used .: Human Press; - 1984. - V.2. - P.31-34).
1. Кровь в пробирке с консервантом тщательно перемешивается и переливается в центрифужный стакан на 100 мл, туда же добавляют 50 мл охлажденного лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% раствор тритона Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трисHCl (pH 7,6).1. Blood in a test tube with preservative is thoroughly mixed and poured into a 100 ml centrifuge beaker, 50 ml of chilled lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100 solution, 5 mM MgCl 2 , 10 mM Tris HCl (pH) are added there. 7.6).
2. Смесь центрифугируется 20 мин при 4000 об/мин.2. The mixture is centrifuged for 20 minutes at 4000 rpm.
3. Надосадочную жидкость сливают, к получившемуся осадку приливают 8 мл 25 мМ ЭДТА, pH 8.0, суспендируют.3. The supernatant is drained, 8 ml of 25 mM EDTA, pH 8.0 are poured onto the resulting precipitate, and suspended.
4. К суспензии добавляют 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К (концентрация - 10 мг/ мл). Смесь для лизиса оставляют на ночь в термостате при температуре 38°C.4. To the suspension add 0.8 ml of 10% SDS and proteinase K (concentration - 10 mg / ml). The lysis mixture is left overnight in an incubator at a temperature of 38 ° C.
Экстракцию ДНК осуществляют в следующем порядке.DNA extraction is carried out in the following order.
1. Для депротеинизации к лизату добавляют 0,5 мл 5М перхлората натрия и 8 мл фенола, насыщенного 1 М трисHCl до pH 7.8.1. For deproteinization, 0.5 ml of 5M sodium perchlorate and 8 ml of phenol saturated with 1 M Tris HCl to pH 7.8 are added to the lysate.
2. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.2. The mixture is centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes.
3. Отбирают водную фазу, содержащую ДНК, РНК и неденатурированные белки.3. Select the aqueous phase containing DNA, RNA and undenatured proteins.
4. Отобранную фазу обрабатывают смесью фенол-хлороформа (1:1), а затем - хлороформом.4. The selected phase is treated with a mixture of phenol-chloroform (1: 1), and then with chloroform.
5. Препараты осаждают двумя объемами 96% этанола.5. The preparations are precipitated with two volumes of 96% ethanol.
6. Образовавшийся осадок ДНК растворяют в 1,5 мл деионизированной H2O; раствор хранят при -20°C.6. The resulting DNA precipitate is dissolved in 1.5 ml of deionized H 2 O; the solution is stored at -20 ° C.
В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Последовательность олигонуклеотидных праймеров для полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 F: 5'-CGCGGGAGTTCAGGGTAAAG-3' R: 5'-CTGAGTCAACCTGCCCACTG-3'. Состав реакционной смеси для ПЦР был следующим: 0.1-1 мкг геномной ДНК, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (Promega, USA) помещали в 25 мкл однократного буфера для ПЦР следующего состава: 67 mM Tris-HCl, pH 8.8, 6.7 тМ MgCl2, 16,6 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween-20. Полученную смесь прогревают 2 минуты при 94°C, добавляют 5 единиц термофильной ДНК-полимеразы, 20-30 мкл минерального масла. Режим амплификации: 30 циклов со следующими параметрами: 94°C - 45 секунд, 55°C - 45 секунд, 72°C - 45 секунд. После 30-го цикла проводили инкубацию при 72°C в течение 7 минут.Subsequently, the obtained DNA is used as a template for polymerase chain reaction (PCR). The sequence of oligonucleotide primers for the polymorphic locus 309T> G of the gene MDM2 F: 5'-CGCGGGAGTTCAGGGTAAAG-3 'R: 5'-CTGAGTCAACCTGCCCACTG-3'. The composition of the reaction mixture for PCR was as follows: 0.1-1 μg of genomic DNA, 0.25 μM of each oligoprimer, 250 μM of each deoxynucleoside triphosphate (Promega, USA) were placed in 25 μl of a single PCR buffer of the following composition: 67 mM Tris-HCl, pH 8.8, 6.7 tM MgCl 2 , 16.6 mM (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.01% Tween-20. The resulting mixture is heated for 2 minutes at 94 ° C, add 5 units of thermophilic DNA polymerase, 20-30 μl of mineral oil. Amplification mode: 30 cycles with the following parameters: 94 ° C - 45 seconds, 55 ° C - 45 seconds, 72 ° C - 45 seconds. After the 30th cycle, incubation was performed at 72 ° C for 7 minutes.
Нуклеотидную замену T→G в положении 309 гена MDM2 выявляют при помощи рестрикционного анализа. Для этого 7 мкл амплификата смешивают с 5 ед. эндонуклеазы рестрикции Msp A1I, смесь выдерживают при 37°C в течение 10-12 часов в термостате. Затем проводят электрофорез в вертикальном 7% полиакриламидном геле. В качестве электролита для электрофореза применяют 1X боратный буфер (0,089 М трис HCl pH=7,8; 0,089 М борная кислота, 0,002 М ЭДТА с pH=8,0).The nucleotide substitution T → G at position 309 of the MDM2 gene is detected by restriction analysis. For this, 7 μl of the amplification is mixed with 5 units. restriction endonucleases Msp A1I, the mixture is kept at 37 ° C for 10-12 hours in a thermostat. Then electrophoresis is carried out in a vertical 7% polyacrylamide gel. As an electrolyte for electrophoresis, 1X borate buffer (0.089 M Tris HCl pH = 7.8; 0.089 M boric acid, 0.002 M EDTA with pH = 8.0) is used.
Перед нанесением на вертикальный электрофорез пробы смешивают в соотношении 1:5 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола, 15% фикола. Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 15-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания полиакриламидного геля бромистым этидием в течение 10 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе. Генотипы полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции и соответствующего фрагмента на электрофорезе так, что при наличии фрагмента размером 157 пар нуклеотидов (пн) идентифируется аллель Т и гомозиготный генотип ТТ, при наличии двух фрагментов размером 157 и 109 пн идентифицируется гетерозиготный генотип TG, при наличии фрагмента размером 109 пн идентифицируется гомозиготный по редкому аллелю генотип GG. При генотипировании полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 генетическим маркерами злокачественной формы ХЛЛ является генотип GG полиморфного локуса 309T>G гена MDM2.Before applying to vertical electrophoresis, the samples are mixed in a 1: 5 ratio with paint containing 0.25% bromophenol blue, 0.25% xylencyanol, 15% ficol. Electrophoresis is carried out at a constant voltage of 10 volts / cm after a 15-minute pre-electrophoresis. The results are detected by staining the polyacrylamide gel with ethidium bromide for 10 minutes, followed by visualization in ultraviolet light on a transilluminator. The genotypes of the 309T> G polymorphic locus of the MDM2 gene are typed according to the presence or absence of a restriction site and the corresponding fragment on electrophoresis so that in the presence of a fragment of 157 nucleotide pairs (bp) the T allele and the TT homozygous genotype are identified, in the presence of two fragments of 157 and 109 Mon-heterozygous TG genotype is identified; in the presence of a 109-bp fragment, the GG genotype homozygous for the rare allele is identified. When genotyping the polymorphic locus 309T> G of the MDM2 gene, the genetic markers of the malignant form of CLL is the GG genotype of the polymorphic locus 309T> G of the MDM2 gene.
Обследовано 133 больных ХЛЛ, находившихся на стационарном лечении в гематологическом отделении Республиканской клинической больнице. Средний возраст обследованных пациентов, отобранных случайным образом, составил 49,57±1,42 лет. Половое соотношение мужчин к женщинам - 56,4% (75) к 43,6%(58). Клиническое обследование больных проводилось врачами больницы и включало в себя обязательные и дополнительные методы исследования.A total of 133 CLL patients who were hospitalized in the hematology department of the Republican Clinical Hospital were examined. The average age of the examined patients, randomly selected, was 49.57 ± 1.42 years. The sex ratio of men to women is 56.4% (75) to 43.6% (58). Clinical examination of patients was carried out by hospital doctors and included mandatory and additional research methods.
В группу с агрессивной формой ХЛЛ вошли больные с прогрессирующим развитием заболевания (быстрое нарастание лимфоузлов и селезенки, диффузный или диффузно-интерстициальный рост опухоли в костном мозге), опухолевой трансформацией клеток (наличие больших плотных конгломератов лимфоузлов, диффузный рост опухоли в костном мозге) и абдоминальной формой (отличающейся наличием конгломератов лимфоузлов в брюшной полости и диффузной пролиферацией в трепанате), плохим ответом на проводимую терапию, небольшим сроком выживаемости. Так же включена опухолевая, спленомегалическая и костномозговая форма классификации А.И. Воробьева. В группу с доброкачественным течением вошли все остальные пациенты.The group with an aggressive form of CLL included patients with progressive development of the disease (rapid growth of lymph nodes and spleen, diffuse or diffuse-interstitial tumor growth in the bone marrow), tumor cell transformation (the presence of large dense conglomerates of lymph nodes, diffuse tumor growth in the bone marrow) and abdominal form (characterized by the presence of conglomerates of lymph nodes in the abdominal cavity and diffuse proliferation in trepanate), a poor response to the therapy, a short survival time. Also included is the tumor, splenomegaly and bone marrow classification form A.I. Vorobyov. The group with a benign course included all other patients.
Больные наблюдались в амбулаторных условиях. Длительность наблюдения с момента установления заболевания более двух лет.Patients were observed on an outpatient basis. The duration of observation since the establishment of the disease is more than two years.
С целью выявления клинико-генетических особенностей течения ХЛЛ проведено исследование полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 между группой с агрессивной и доброкачественной формой хронического лимфолейкоза (таблица).In order to identify the clinical and genetic features of the course of CLL, a study was made of the polymorphic locus 309T> G of the MDM2 gene between a group with an aggressive and benign form of chronic lymphocytic leukemia (table).
Проведя статистический анализ связи полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 с течением ХЛЛ было показано, что генотип GG связан со злокачественным течением заболевания (χ2=4,87; p=0,028; OR=3,27; 95% CI 1,22-8,72), также показано, что генотип TG ассоциирован с доброкачественным течением ХЛЛ (χ2=6,50; p=0,012; OR=0,36; 95% CI 0,18-0,76).After a statistical analysis of the relationship of the 309T> G polymorphic locus of the MDM2 gene with CLL, it was shown that the GG genotype is associated with the malignant course of the disease (χ2 = 4.87; p = 0.028; OR = 3.27; 95% CI 1.22-8 , 72), it was also shown that the TG genotype is associated with a benign course of CLL (χ2 = 6.50; p = 0.012; OR = 0.36; 95% CI 0.18-0.76).
На основании полученных результатов можно сделать вывод об ассоциации генотипа GG полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 с агрессивной формой ХЛЛ.Based on the results obtained, it can be concluded that the GG genotype of the polymorphic locus 309T> G of the MDM2 gene is associated with the aggressive form of CLL.
Для иллюстрации приведем клинический пример. Больной К., 1975 года рождения, город Ишимбай, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в марте 2008 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами 79%. Химиотерапию не получал. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по K. Rai II. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов и в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфного локуса 309T>G гена MDM2 выявило у больного генотип GG, что позволило, соответственно, прогнозировать агрессивную форму ХЛЛ. Прогноз был подтвержден в результате наблюдения за пациентом, у которого наблюдалось быстрое нарастание лимфоузлов и селезенки, диффузный рост опухоли в костном мозге, плохой ответом на проводимую терапию, срок жизни после постановки диагноза 6 месяцев.To illustrate, here is a clinical example. Patient K., born in 1975, the city of Ishimbay, Republic of Bashkortostan. The diagnosis of CLL was made in March 2008, confirmed by sternal puncture, the bone marrow is rich in cellular elements, represented by mature lymphocytes 79%. I did not receive chemotherapy. Currently diagnosed with CLL, stage by K. Rai II. During molecular genetic testing, 8 ml of venous blood was taken from the patient, followed by DNA extraction and amplification of polymorphic regions of genes and 1 unit in a reaction mixture containing about 0.1 μg of genomic DNA. Taq polymerase, 0.25 μM of each oligoprimer, 250 μM of each deoxynucleoside triphosphate in 25 μl of a single PCR buffer. After restriction of the amplified PCR products with endonuclease, electrophoresis of the fragments was carried out at a constant voltage of 250 volts after a 15-minute pre-electrophoresis. After electrophoresis, the gel was stained with a solution of ethidium bromide for 10 minutes and analyzed under ultraviolet light on a transilluminator. The study of the polymorphic locus 309T> G of the MDM2 gene revealed the GG genotype in the patient, which allowed, accordingly, to predict the aggressive form of CLL. The prognosis was confirmed by monitoring a patient who had a rapid increase in lymph nodes and spleen, diffuse tumor growth in the bone marrow, poor response to the therapy, and a life expectancy of 6 months after diagnosis.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012133015/15A RU2490642C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012133015/15A RU2490642C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2490642C1 true RU2490642C1 (en) | 2013-08-20 |
Family
ID=49162950
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012133015/15A RU2490642C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2490642C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2713458C1 (en) * | 2019-01-10 | 2020-02-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Уральский научно-практический центр радиационной медицины Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУН УНПЦ РМ ФМБА России) | Method for prediction of leukaemia disease in people exposed to chronic radiation exposure (embodiments) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1762895A1 (en) * | 1987-06-16 | 1992-09-23 | Свердловский государственный медицинский институт | Method for diagnosis of chronic lympholeukosis progressive form |
| RU2242004C1 (en) * | 2003-02-17 | 2004-12-10 | Государственное учреждение Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Method for differential diagnostics of benign and progressive forms of chronic lympholeukosis |
| RU2248574C1 (en) * | 2003-07-22 | 2005-03-20 | Государственное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for predicting the development and flow of chronic lympholeukosis |
-
2012
- 2012-08-01 RU RU2012133015/15A patent/RU2490642C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1762895A1 (en) * | 1987-06-16 | 1992-09-23 | Свердловский государственный медицинский институт | Method for diagnosis of chronic lympholeukosis progressive form |
| RU2242004C1 (en) * | 2003-02-17 | 2004-12-10 | Государственное учреждение Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови | Method for differential diagnostics of benign and progressive forms of chronic lympholeukosis |
| RU2248574C1 (en) * | 2003-07-22 | 2005-03-20 | Государственное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Method for predicting the development and flow of chronic lympholeukosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PHANG B.H. et al. MDM2 SNP309 G allele decreases risk but does not affect onset age or survival of Chinese leukaemia patients. Eur J Cancer. 2008 Mar; 44(5):760-6. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2713458C1 (en) * | 2019-01-10 | 2020-02-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Уральский научно-практический центр радиационной медицины Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУН УНПЦ РМ ФМБА России) | Method for prediction of leukaemia disease in people exposed to chronic radiation exposure (embodiments) |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021203359B2 (en) | Analysis of cell-free DNA in urine and other samples | |
| US10982282B2 (en) | MicroRNAs as biomarkers for endometriosis | |
| JP6203209B2 (en) | Plasma microRNA for detection of early colorectal cancer | |
| CN106661765A (en) | Diagnostic for sepsis | |
| US20140155280A1 (en) | Method of diagnosing neoplasms | |
| EP3122905B1 (en) | Circulating micrornas as biomarkers for endometriosis | |
| US10538812B2 (en) | Primer set and method for amplifying exons of PKD1 gene and PKD2 gene | |
| Luo et al. | Plasma exosomal miR-450b-5p as a possible biomarker and therapeutic target for transient ischaemic attacks in rats | |
| EP3372696B1 (en) | Methods and kits for assessing the risk of developing or diagnosing endometrial cancer | |
| WO2015179909A1 (en) | Mirna biomarkers of alzheimer's disease | |
| RU2490642C1 (en) | Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia | |
| CN111808946B (en) | Myelodysplastic syndrome marker and kit thereof | |
| RU2495427C1 (en) | Method for prediction chemotherapeutic response in chronic lymphatic leukaemia | |
| RU2490638C1 (en) | Method for prediction of developing b cell and t cell non-hodgkin lymphomas | |
| RU2496110C1 (en) | Method for prediction of smouldering form of chronic lympholeukaemia | |
| RU2282852C1 (en) | Method for predicting the flow of multiple myeloma | |
| RU2490641C1 (en) | Method for prediction of clinical course of non-hodgkin lymphomas | |
| Chasovnikova et al. | Prevalence of mutations BRCA1 5382insC, and CHEK2 1100delC in the population of Siberian region | |
| CA3211981A1 (en) | Major histocompatibility complex single nucleotide polymorphisms | |
| CN115772565B (en) | Methylation site for auxiliary detection of lung cancer somatic EGFR gene mutation and application thereof | |
| WO2014093504A1 (en) | Microrna biomarkers for graft versus host disease | |
| CN110484620B (en) | Biomarker and application thereof in preparation of product for diagnosing PTMC (ptm-associated tumor cell) | |
| CN113774123B (en) | MicroRNA molecular marker combination for predicting immune response level of HIV infected person and application thereof | |
| RU2225612C2 (en) | Method for prognosis of multiple myeoloma course | |
| KR102646011B1 (en) | Diagnostic methods for prognosis of non-small-cell lung cancer using BRD3 SNP |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140802 |