RU2282852C1 - Method for predicting the flow of multiple myeloma - Google Patents
Method for predicting the flow of multiple myeloma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2282852C1 RU2282852C1 RU2005106447/15A RU2005106447A RU2282852C1 RU 2282852 C1 RU2282852 C1 RU 2282852C1 RU 2005106447/15 A RU2005106447/15 A RU 2005106447/15A RU 2005106447 A RU2005106447 A RU 2005106447A RU 2282852 C1 RU2282852 C1 RU 2282852C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- multiple myeloma
- patient
- genotype
- polymorphism
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно, к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования выживаемости при множественной миеломе.The invention relates to medicine, namely to hematology, and can be used to predict survival in multiple myeloma.
Множественная миелома (ММ) относится к группе лимфопролиферативных заболеваний с низкой степенью злокачественности, продолжительность жизни при этом заболевании колеблется от нескольких месяцев до более 10 лет, но в среднем не превышает 5 лет. Заболеваемость множественной миеломой в среднем в мире составляет 3 случая на 100000 взрослого населения. Заболевание характеризуется сложностью прогнозирования течения, ранней утратой трудоспособности и высокой смертностью.Multiple myeloma (MM) belongs to the group of lymphoproliferative diseases with a low degree of malignancy, the life expectancy for this disease ranges from several months to more than 10 years, but on average does not exceed 5 years. The incidence of multiple myeloma in the world on average is 3 cases per 100,000 adult population. The disease is characterized by the complexity of predicting the course, early disability and high mortality.
Вместе с тем, своевременное прогнозирование течения заболевания необходимо для организации квалифицированной медицинской помощи, планирования объемов социальной помощи, финансовых расходов на лечение и обслуживание конкретного больного. Вышеизложенное определяет необходимость разработки новых способов прогнозирования выживаемости при ММ.At the same time, timely forecasting of the course of the disease is necessary for the organization of qualified medical care, planning the volume of social assistance, financial costs for the treatment and care of a particular patient. The above determines the need to develop new methods for predicting survival in MM.
Согласно литературным данным, к факторам неблагоприятного прогноза ММ относятся: содержание плазматических клеток более 10%; наличие костных повреждений, увеличение концентрации сывороточного β2-микроглобулина более 6 мг/мл, морфологические признаки дисгемопоэза в гранулоцитарном ростке костного мозга (Подольцева Э.И. Классификация множественной миеломы. Гематология и трансфузиология. -1997. - Т.42. № 3. С.8-11).According to published data, the factors of the unfavorable prognosis of MM include: the content of plasma cells more than 10%; the presence of bone damage, an increase in the concentration of serum β2-microglobulin more than 6 mg / ml, morphological signs of dyshemopoiesis in the granulocyte bone marrow growth (Podoltseva EI Classification of multiple myeloma. Hematology and transfusiology. -1997. - T.42. No. 3. C .8-11).
Известен способ прогнозирования развития ММ по стадии заболевания, сывороточным уровням β-микроглобулина, С-реактивного белка (Anderson K.C., Kyle R.A., Dalton W.S. et al. Multiple Myeloma: New Insights and Therapeutic Approaches // Hematology. - 2000. - P.147-165). Однако установлено, что изменения этих показателей не всегда выявляются в начале развития патологического процесса, когда впервые возникает необходимость в планировании медицинской и социальной помощи. Известен цитогенетический способ прогнозирования развития и исходов MM (Worel N. et al. Deletion of chromosome 13q14 detected by fluorescence in situ hybridization has prognostic impact on survival after high-dose therapy in patients with multiple myeloma // Ann. Hemat. - 2001. - V.80. - P.345-348). Так, например, пациенты с ММ с выявленной делецией хромосомы 13q14 имели более короткую продолжительность заболевания и более низкую выживаемость. Существенными недостатками этого метода являются его трудоемкость и необходимость дорогостоящего оборудования и реактивов.A known method for predicting the development of MM according to the stage of the disease, serum levels of β-microglobulin, C-reactive protein (Anderson KC, Kyle RA, Dalton WS et al. Multiple Myeloma: New Insights and Therapeutic Approaches // Hematology. - 2000. - P.147 -165). However, it was found that changes in these indicators are not always detected at the beginning of the development of the pathological process, when for the first time there is a need for planning medical and social assistance. A known cytogenetic method for predicting the development and outcome of MM (Worel N. et al. Deletion of chromosome 13q14 detected by fluorescence in situ hybridization has prognostic impact on survival after high-dose therapy in patients with multiple myeloma // Ann. Hemat. - 2001. - V.80. - P.345-348). So, for example, patients with MM with an identified deletion of chromosome 13q14 had a shorter duration of the disease and lower survival. Significant disadvantages of this method are its complexity and the need for expensive equipment and reagents.
Прототипом изобретения является способ прогнозирования течения и выживаемости при ММ путем генотипирования полиморфизма - 174 G/C гена интерлейкин 6 (ИЛ-6) в ДНК лимфоцитов периферической крови больных с различной степенью агрессивности ММ (Клинико-генетические ассоциации у больных множественной миеломой / Д.Х.Калимуллина, А.Б.Бакиров, Т.В.Викторова // Гематология и трансфузиология. - 2004. - № 4. - С.13-17). Было выявлено, что в группе с доброкачественным течением ММ статистически значимо чаще встречается генотип СС полиморфизма - 174 G/C гена ИЛ-6, чем генотипы GC и GG. Указанный способ позволяет достоверно прогнозировать характер течения заболевания. Вместе с тем к недостаткам способа следует отнести следующее: 1) на выживаемость при ММ влияет не только характер течения заболевания, определяемый уровнем ИЛ-6, низкий уровень которого ассоциируется с генотипом СС - 174 G/C гена ИЛ-6; 2) значительную роль в выживаемости при множественной миеломе играет чувствительность к химиотерапии и токсические осложнения от нее. Известно, что резистентность к терапии определяется, в том числе, и геном множественной лекарственной устойчивости MDR1, который обеспечивает выведение из клетки токсических веществ за счет увеличения содержания Ргликопротеина (Fishman D., Faulds G., Jeffery R. et al. The effect of novel polymorphisms in the interleukin-6 on IL-6 transcription and plasma levels, and an association with systemic-onset juvenile chronic arthritis // J.Clin. Invest - 1998. - V.102. P.1369-1376; Kafka A., Sauer G., Jaeger C. et al. Polymorphism C3435T of the MDR-1 gene predicts response to preoperative chemotherapy in locally advanced breast cancer // Int. J. Oncol. - 2003. - Vol.22. - N5. - P.1117-21; Ameyaw M.M., Regateiro F., Li T. et al. MDR1 pharmacogenetics: frequency of the C3435T mutation in exon 26 significantly ifluenced by ethnicity // Pharmacogenetics. - 2001. - Vol.11. - N3. - P.217-221). Ассоциации полиморфизма C3435T гена MDR1 с выживаемостью при ММ ранее не исследовались.The prototype of the invention is a method for predicting the course and survival in MM by genotyping polymorphism - 174 G / C of the interleukin 6 gene (IL-6) in the DNA of peripheral blood lymphocytes of patients with various degrees of MM aggressiveness (Clinical and genetic associations in patients with multiple myeloma / D.X .Kalimullina, A.B.Bakirov, T.V. Viktorova // Hematology and transfusiology. - 2004. - No. 4. - P.13-17). It was found that in the group with a benign course of MM, the genotype of SS polymorphism — 174 G / C of the IL-6 gene — is statistically significantly more common than the GC and GG genotypes. The specified method allows to reliably predict the nature of the course of the disease. However, the disadvantages of the method include the following: 1) the survival rate for MM is affected not only by the nature of the course of the disease, determined by the level of IL-6, a low level of which is associated with the genotype CC - 174 G / C of the IL-6 gene; 2) sensitivity to chemotherapy and toxic complications from it play a significant role in survival in multiple myeloma. It is known that resistance to therapy is determined, among other things, by the MDR1 multidrug resistance gene, which provides the elimination of toxic substances from the cell by increasing the content of Rglikoprotein (Fishman D., Faulds G., Jeffery R. et al. The effect of novel polymorphisms in the interleukin-6 on IL-6 transcription and plasma levels, and an association with systemic-onset juvenile chronic arthritis // J. Clin. Invest - 1998.- V.102. P.1369-1376; Kafka A., Sauer G., Jaeger C. et al. Polymorphism C3435T of the MDR-1 gene predicts response to preoperative chemotherapy in locally advanced breast cancer // Int. J. Oncol. - 2003. - Vol.22. - N5. - P. 1117-21; Ameyaw MM, Regateiro F., Li T. et al. MDR1 pharmacogenetics: frequency of the C3435T mutation in exon 26 significant ly ifluenced by ethnicity // Pharmacogenetics. - 2001. - Vol.11. - N3. - P.217-221). The associations of the C3435T polymorphism of the MDR1 gene with MM survival have not been previously studied.
Главным недостатком способа является невозможность прогнозировать показатели выживаемости и неблагоприятного течения заболевания на начальной стадии и тем самым запланировать объем помощи данному больному.The main disadvantage of this method is the inability to predict indicators of survival and the adverse course of the disease at the initial stage and thereby to plan the amount of care for this patient.
Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования выживаемости при ММ.The technical result of the invention is to improve the accuracy of predicting survival in MM.
Указанный технический результат достигается тем, что в выделенной методом фенольно-хлороформной экстракции ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови проводят генотипирование полиморфизма C3435T промоторной области гена множественной лекарственной устойчивости MDR1 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК с последующей рестрикцией. После амплификации и рестрикции фрагменты ДНК разделяют электрофоретически в 7%-ном полиакриламидном неденатурированном геле и анализируют при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе: наличие ДНК-фрагментов 62+145 нуклеотидных пар (н.п.) интерпретируют как цитозин - СС, размером 62+145+207 н.п. - цитозин-тимин - СТ; размером 207 н.п. - как тимин - ТТ.The indicated technical result is achieved by the fact that C3435T polymorphism of the promoter region of the MDR1 multidrug resistance gene is polymerized by the method of phenol-chloroform extraction of DNA from peripheral venous blood lymphocytes by polymerase chain reaction (PCR) DNA synthesis followed by restriction. After amplification and restriction, DNA fragments are separated electrophoretically in a 7% polyacrylamide non-denatured gel and analyzed under ultraviolet light on a transilluminator: the presence of DNA fragments of 62 + 145 nucleotide pairs (n.p.) is interpreted as cytosine - SS, size 62 + 145 + 207 n.p. - cytosine thymine - ST; size 207 n.p. - like thymine - TT.
Для анализа полиморфизма C3435T гена MDR1 были взяты специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров из работы Tanabe М. et al (2001). Состав реакционной смеси и условия для ПЦР изложены ниже. Нуклеотидную замену С→Т в положении 3435 гена MDR1 выявляли рестрикцией полученного ПЦР-продукта размером 207 н.п. ферментом Kzo 9I при 37°С. Генотипы типировались по критерию присутствия сайта рестрикции: наличие двух фрагментов длиной 62 и 145 н.п. определяло генотип СС, трех фрагментов длиной 62, 145, 207 н.п. - генотип СТ, одного фрагмента длиной 207 н.п. - генотип ТТ. При выявлении у обследуемого пациента генотипа СТ прогнозируется благоприятное течение заболевания, связанное с отсутствием токсического поражения внутренних органов и ведущее к лучшим показателям выживаемости.For analysis of the C3435T polymorphism of the MDR1 gene, specific sequences of oligonucleotide primers were taken from M. Tanabe et al (2001). The composition of the reaction mixture and the conditions for PCR are described below. The C → T nucleotide substitution at position 3435 of the MDR1 gene was detected by restriction of the obtained PCR product with a size of 207 bp Kzo 9I enzyme at 37 ° C. Genotypes were typed by the criterion for the presence of a restriction site: the presence of two fragments 62 and 145 np in length determined the genotype of SS, three fragments with a length of 62, 145, 207 n.p. - genotype CT, one fragment with a length of 207 n.p. - TT genotype. If the CT genotype is detected in the examined patient, a favorable course of the disease is predicted, associated with the absence of toxic damage to the internal organs and leading to better survival rates.
На чертеже представлена кумулятивная выживаемость больных множественной миеломой в зависимости от генотипа по полиморфизму С3435Т гена MDR1.The drawing shows the cumulative survival of patients with multiple myeloma, depending on the genotype for polymorphism C3435T gene MDR1.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
ДНК выделяют из лимфоцитов периферической крови. В качестве консерванта используют раствор следующего состава: 0.48% лимонной кислоты, 1.32% цитрата натрия, 1.47% глюкозы. При заборе крови к 1 мл консерванта добавляют 6 мл крови и хорошо перемешивают.DNA is isolated from peripheral blood lymphocytes. As a preservative, a solution of the following composition is used: 0.48% citric acid, 1.32% sodium citrate, 1.47% glucose. During blood sampling, 6 ml of blood is added to 1 ml of preservative and mixed well.
Для получения ДНК необходимой степени чистоты и достаточного молекулярного веса используется метод выделения ДНК из крови фенольно-хлороформной экстракцией, описанный Мэтью (Mathew С.С. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y, L.: Human Press.; - 1984. - V.2. - P.31-34).To obtain DNA of the required degree of purity and sufficient molecular weight, the method of isolating DNA from blood by phenol-chloroform extraction, described by Matthew (Mathew C. C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker JM, NY, L .: Human Press .; - 1984.- V.2. - P.31-34).
1. Кровь в пробирке с консервантом тщательно перемешивается и переливается в центрифужный стакан на 100 мл, туда же добавляли 50 мл охлажденного лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% раствор тритона Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис HCl (рН 7,6).1. Blood in a test tube with a preservative is thoroughly mixed and poured into a 100 ml centrifuge beaker, 50 ml of chilled lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100 solution, 5 mM MgCl 2 , 10 mM Tris HCl were added there ( pH 7.6).
2. Смесь центрифугируется 20 мин при 4000 об/мин.2. The mixture is centrifuged for 20 minutes at 4000 rpm.
3. Надосадочную жидкость сливают, к получившемуся осадку приливают 8 мл 25 мМ ЭДТА, рН 8.0, суспендируют.3. The supernatant is drained, 8 ml of 25 mM EDTA, pH 8.0 are poured onto the resulting precipitate, and suspended.
4. К суспензии добавляют 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К (концентрация - 10 мг/ мл). Смесь для лизиса оставляют на ночь в термостате при температуре 38°С.4. To the suspension add 0.8 ml of 10% SDS and proteinase K (concentration - 10 mg / ml). The lysis mixture is left overnight in an incubator at a temperature of 38 ° C.
Экстракцию ДНК осуществляют в следующем порядке.DNA extraction is carried out in the following order.
1. Для депротеинизации к лизату добавляют 0,5 мл 5М перхлората натрия и 8 мл фенола, насыщенного 1 М трис HCl до рН 7.8.1. For deproteinization, 0.5 ml of 5M sodium perchlorate and 8 ml of phenol saturated with 1 M Tris HCl are added to the lysate to pH 7.8.
2. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.2. The mixture is centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes.
3. Отбирают водную фазу, содержащую ДНК, РНК и неденатурированные белки.3. Select the aqueous phase containing DNA, RNA and undenatured proteins.
4. Отобранную фазу обрабатывают смесью фенол-хлороформа (1:1), а затем - хлороформом.4. The selected phase is treated with a mixture of phenol-chloroform (1: 1), and then with chloroform.
5. Препараты осаждают двумя объемами 96% этанола.5. The preparations are precipitated with two volumes of 96% ethanol.
6. Образовавшийся осадок ДНК растворяют в 1,5 мл деионизированной Н2О; раствор хранят при -20°С.6. The resulting DNA precipitate is dissolved in 1.5 ml of deionized H 2 O; the solution is stored at -20 ° C.
1. В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) для амплификации нужного фрагмента промоторной области гена MDR1. Специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров приведены в работе Expression of P-glycoprotein in Human Placenta: Relation to genetic polymorphism of the Multidrug Resistance (MDR)-1 gene / M.Tanabe, I.Ieiri, N.Nagata et al. // J. Pharm. Exper. Therapy. - 2001. - Vol.297. - P.1137-1143.1. In the future, the obtained DNA is used as a template for polymerase chain reaction (PCR) to amplify the desired fragment of the promoter region of the MDR1 gene. The specific sequences of oligonucleotide primers are given in Expression of P-glycoprotein in Human Placenta: Relation to genetic polymorphism of the Multidrug Resistance (MDR) -1 gene / M. Tanabe, I. Yeiri, N. Nagata et al. // J. Pharm. Exper. Therapy. - 2001 .-- Vol.297. - P.1137-1143.
Нуклеотидную замену С→Т в положении 3435 гена выявляют рестрикцией полученного ПЦР-продукта размером 207 н.п. ферментом Kzo 9I. Состав реакционной смеси для ПЦР следующий: 0.1-1 мкг геномной ДНК, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (Promega, USA) помещали в 25 мкл однократного буфера для ПЦР следующего состава: 67 mM Tris-HCl, рН 8.8, 6.7 mM MgCl2, 16,6 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween-20. Полученную смесь прогревают 2 минуты при 94°С, добавляют 5 единиц термофильной ДНК-полимеразы, 20-30 мкл минерального масла. Режим амплификации: 30 циклов со следующими параметрами: 94°С - 45 секунд, 55°С - 45 секунд, 72°С - 45 секунд.The C → T nucleotide substitution at position 3435 of the gene is detected by restriction of the obtained PCR product of 207 bp in size. enzyme Kzo 9I. The composition of the reaction mixture for PCR is as follows: 0.1-1 μg of genomic DNA, 0.25 μM of each oligoprimer, 250 μM of each deoxynucleoside triphosphate (Promega, USA) were placed in 25 μl of a single PCR buffer of the following composition: 67 mM Tris-HCl, pH 8.8, 6.7 mM MgCl 2 , 16.6 mM (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.01% Tween-20. The resulting mixture is heated for 2 minutes at 94 ° C, add 5 units of thermophilic DNA polymerase, 20-30 μl of mineral oil. Amplification mode: 30 cycles with the following parameters: 94 ° C - 45 seconds, 55 ° C - 45 seconds, 72 ° C - 45 seconds.
После 30-го цикла проводили инкубацию при 72°С в течение 7 минут. ПЦР-продукты подвергают рестрикции с помощью фермента Kzo 9I при 37°С в течение ночи и электрофорезу в вертикальном 7% полиакриламидном геле. Для этого 7 мкл ПЦР-продукта смешивают 5 ед. фермента, смесь выдерживают при 37°С в течение 10 часов. В качестве электролита для электрофореза применяют 1X боратный буфер (0,089 М трис HCl, рН=7,8; 0,089 М борная кислота, 0,002 М ЭДТА с рН=8,0).After the 30th cycle, incubation was performed at 72 ° C for 7 minutes. PCR products are subjected to restriction using the enzyme Kzo 9I at 37 ° C overnight and electrophoresis in a vertical 7% polyacrylamide gel. For this, 7 μl of the PCR product is mixed with 5 units. enzyme, the mixture is maintained at 37 ° C for 10 hours. As an electrolyte for electrophoresis, 1X borate buffer (0.089 M Tris HCl, pH = 7.8; 0.089 M boric acid, 0.002 M EDTA with pH = 8.0) is used.
Перед нанесением на вертикальный электрофорез пробы смешивают в соотношении 1:5 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола, 15% фикола. Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 15-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания полиакриламидного геля бромистым этидием в течение 10 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе. Идентифицированные генотипы типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции, так что Kzo 9I - генотипы СС - это гомозиготы по наличию вариабельного сайта (65+145 н.п.), СТ - гетерозиготы по наличию сайта (65+145+207 н.п.) и ТТ - гомозиготы по наличию сайта (207 н.п.).Before applying to vertical electrophoresis, the samples are mixed in a 1: 5 ratio with paint containing 0.25% bromophenol blue, 0.25% xylencyanol, 15% ficol. Electrophoresis is carried out at a constant voltage of 10 volts / cm after a 15-minute pre-electrophoresis. The results are detected by staining the polyacrylamide gel with ethidium bromide for 10 minutes, followed by visualization in ultraviolet light on a transilluminator. The identified genotypes are typed by the criterion for the presence or absence of a restriction site, so Kzo 9I — CC genotypes — are homozygotes for the presence of a variable site (65 + 145 n.p.), CT — heterozygotes for the presence of a site (65 + 145 + 207 n.p. .) and TT - homozygotes for the presence of a site (207 n.p.).
В качестве конкретных примеров обследовано в целом 66 больных ММ, находившихся на лечении в гематологическом отделении РКБ, в возрасте от 32 до 75 лет.As specific examples, a total of 66 patients with MM who were treated in the hematology department of the RCH, aged 32 to 75 years, were examined.
Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфного локуса С3435Т гена MDR1 у больных ММ представлены в таблице.The results of molecular genetic analysis of the polymorphic locus C3435T of the MDR1 gene in patients with MM are presented in the table.
Частоты генотипов полиморфизма локуса С3435Т гена MDR1Table
Frequencies of genotypes of polymorphism of the C3435T locus of the MDR1 gene
С целью оценки влияния роли полиморфизма С3435Т гена множественной лекарственной устойчивости MDR1 на течение множественной миеломы, проведено сравнение выживаемости по Caplan-Meier пациентов с различными генотипами по этому полиморфизму.In order to assess the influence of the role of the C3435T polymorphism of the MDR1 multidrug resistance gene on the course of multiple myeloma, a comparison was made of Caplan-Meier survival of patients with different genotypes for this polymorphism.
Наилучшие показатели выживаемости были характерны для гетерозигот СТ: 25% больных погибли в течение 34,2 месяцев, медиана выживаемости равна 48 месяцам, а 75% больных погибли в течение 66,8 месяцев.The best survival rates were characteristic for CT heterozygotes: 25% of patients died within 34.2 months, median survival was 48 months, and 75% of patients died within 66.8 months.
Значительно худшие показатели у гомозигот ТТ: 25% больных погибли в течение года, 50% - в течение 28,4 месяцев. Мы не приводим показатели выживаемости больных с генотипом СС, так как их было всего 6 человек. Анализ достоверности различий между группами с генотипами ТС и ТТ по Gexan р=0,01; Cox-Mantel p=0,04.Significantly worse performance in TT homozygotes: 25% of patients died within a year, 50% - within 28.4 months. We do not give survival rates for patients with the SS genotype, since there were only 6 of them. Analysis of the significance of differences between groups with TS and TT genotypes by Gexan p = 0.01; Cox-Mantel p = 0.04.
Сравнительные кривые выживаемости приведены на чертеже.Comparative survival curves are shown in the drawing.
Анализ кривых свидетельствует о том, что гетерозиготы СТ по полиморфизму С3435Т гена MDR1, характеризующиеся повышением Р-гликопротеина в клетке и, соответственно, снижением в клетке токсических веществ, отличались благоприятным течением ММ.An analysis of the curves indicates that CT heterozygotes for the C3435T polymorphism of the MDR1 gene, characterized by an increase in P-glycoprotein in the cell and, accordingly, a decrease in toxic substances in the cell, were distinguished by a favorable course of MM.
Пример 1. Б-ой М.З. 1941 года рождения, город Уфа, Республика Башкортостан. Диагноз ММ установлен в августе 2001 года, подтвержден стернальной пункцией, где обнаружено 24,5% плазматических клеток. Регулярно получал полихимиотерапию с включением циклофосфана, винкристина, алкерана, белюстина, преднизолона; винкристина, адриабластина и дексаметазона. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующем выделением ДНК и амплификацией полиморфного участка С3435Т гена MDR1 в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов рестриктазой Kzo 9I провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфного локуса гена MDR1 больного выявило генотип ТТ. Выявление данного генотипа позволило прогнозировать плохие показатели выживаемости при лечении больного. Пациент скончался в декабре 2001 года.Example 1. B-th M.Z. Born in 1941, the city of Ufa, the Republic of Bashkortostan. The diagnosis of MM was established in August 2001, confirmed by sternal puncture, where 24.5% of plasma cells were detected. He regularly received chemotherapy with the inclusion of cyclophosphamide, vincristine, alkeran, belustin, prednisolone; vincristine, adriablastin and dexamethasone. During molecular genetic testing, 8 ml of venous blood was taken from the patient, followed by DNA extraction and amplification of the C3435T polymorphic region of the MDR1 gene in a reaction mixture containing about 0.1-1 μg of genomic DNA, 1 unit. Taq polymerase, 0.25 μM of each oligoprimer, 250 μM of each deoxynucleoside triphosphate in 25 μl of a single PCR buffer. After restriction of the amplified PCR products with Kzo 9I restriction enzyme, electrophoresis of the fragments was carried out at a constant voltage of 250-300 volts after a 15-minute pre-electrophoresis. After electrophoresis, the gel was stained with a solution of ethidium bromide for 10 minutes and analyzed under ultraviolet light on a transilluminator. The study of the polymorphic locus of the patient's MDR1 gene revealed the TT genotype. Identification of this genotype made it possible to predict poor survival rates in the treatment of the patient. The patient passed away in December 2001.
Пример 2. Пациент X.М.С. 1933 года рождения, г.Дюртюли, Республика Башкортостан. Диагноз ММ установлен в январе 2000 года, подтвержден миелограммой - 14% плазматических клеток. Заболевание было диагностировано во 2 стадии. Проводилось лечение по схеме МР с включением преднизолона и мелфалана с соблюдением доз и интервалов лечения. В настоящее время находится в фазе «плато». При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфного участка С3435Т гена MDR1 в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов рестриктазой Kzo 9I провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфного локуса гена MDR1 больного выявило генотип СТ. Выявление данного генотипа позволило прогнозировать лучшие показатели выживаемости при лечении больного. Пациент наблюдается в настоящее время (январь 2005 года).Example 2. Patient X.M.S. Born in 1933, Dyurtyuli, Republic of Bashkortostan. The diagnosis of MM was established in January 2000, confirmed by a myelogram - 14% of plasma cells. The disease was diagnosed in 2 stages. The treatment was carried out according to the MR scheme with the inclusion of prednisone and melphalan in compliance with the doses and treatment intervals. It is currently in the "plateau" phase. During molecular genetic testing, 8 ml of venous blood was taken from the patient, followed by DNA isolation and amplification of the C3435T polymorphic region of the MDR1 gene in a reaction mixture containing about 0.1-1 μg of genomic DNA, 1 unit. Taq polymerase, 0.25 μM of each oligoprimer, 250 μM of each deoxynucleoside triphosphate in 25 μl of a single PCR buffer. After restriction of the amplified PCR products with Kzo 9I restriction enzyme, electrophoresis of the fragments was carried out at a constant voltage of 250-300 volts after a 15-minute pre-electrophoresis. After electrophoresis, the gel was stained with a solution of ethidium bromide for 10 minutes and analyzed under ultraviolet light on a transilluminator. The study of the polymorphic locus of the MDR1 gene of the patient revealed the CT genotype. Identification of this genotype allowed us to predict the best survival rates in the treatment of the patient. The patient is currently observed (January 2005).
Таким образом, нами проведено молекулярно-генетическое изучение полиморфного локуса С3435Т гена MDR1 66 больных ММ и в контрольной группе. Установлено, что больные с генотипом СТ характеризуются лучшими показателями выживаемости, чем с генотипом ТТ.Thus, we carried out a molecular genetic study of the polymorphic C3435T locus of the MDR1 gene in 66 patients with MM and in the control group. It was found that patients with the CT genotype are characterized by better survival rates than with the TT genotype.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005106447/15A RU2282852C1 (en) | 2005-03-09 | 2005-03-09 | Method for predicting the flow of multiple myeloma |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005106447/15A RU2282852C1 (en) | 2005-03-09 | 2005-03-09 | Method for predicting the flow of multiple myeloma |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2282852C1 true RU2282852C1 (en) | 2006-08-27 |
Family
ID=37061366
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005106447/15A RU2282852C1 (en) | 2005-03-09 | 2005-03-09 | Method for predicting the flow of multiple myeloma |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2282852C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2456924C1 (en) * | 2010-12-14 | 2012-07-27 | Федеральное государственное учреждение "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method of predicting overall survival of patients with multiple myeloma |
-
2005
- 2005-03-09 RU RU2005106447/15A patent/RU2282852C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КАЛЛИМУЛИНА Д.Х. и др. Клинико-генетические ассоциации у больных множественной миеломой. Гематология и трансфузиология, 2004, №4, с.13-17. SCHWARZENBACH H., Expression of MDR1P-glycoprotein, the multidrug resistance protein MRP< and the lung-resistance protein LRP in multiple mieloma, Med. Oncol., 2002, 19(2), pp.87-104. PETRINI M., GALIMBERTI S., Treatment of multidrug resistance in oncology and hematology, Tumori, 1997, Sep-Oct, 83(5 suppl) pp.17-20. JAMROZIAK K. et al., Functional C343ST polymorphism of MDR1 gene: an impact on genetic susceptibility and clinical outcome of childhood acute lymphoblastic leukemia, Eur., J. Haematol., 2004, May, 72(5), pp.314-321. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2456924C1 (en) * | 2010-12-14 | 2012-07-27 | Федеральное государственное учреждение "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Method of predicting overall survival of patients with multiple myeloma |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6849403B1 (en) | Apparatus and method for drug screening | |
| CN101679971A (en) | The decision method of progression risk of glaucoma | |
| CN113528663A (en) | Circulating tumor and tumor stem cell detection using genome-specific probes | |
| Fisher et al. | Previous hydatidiform mole identified as the causative pregnancy of choriocarcinoma following birth of normal twins | |
| JP2014511691A (en) | A novel marker related to beta-ceracemic traits | |
| JP7515456B2 (en) | Prediction and characterization of subtypes of cellular origin of DLBCL | |
| RU2282852C1 (en) | Method for predicting the flow of multiple myeloma | |
| US20240180981A1 (en) | Methods to analyze host-microbiome interactions at single-cell and associated gene signatures in cancer | |
| CA2393864A1 (en) | Apparatus and methods for drug screening | |
| JP6053681B2 (en) | Method and kit for diagnosing glaucoma in dogs | |
| US20210222233A1 (en) | Compositions and methods for diagnosing and treating arrhythmias | |
| RU2490642C1 (en) | Method for prediction of clinical form of chronic lympholeukaemia | |
| RU2558927C1 (en) | Method for specific detection of microsporum canis in clinical material in various clinical forms of disease | |
| CN109652536B (en) | Inner ear malformation/incomplete separation III type cochlear malformation pathogenic gene POU3F4 mutation detection kit | |
| CN109652537B (en) | Kit for detecting inner ear malformation/incomplete separation type III cochlear malformation pathogenic gene POU3F4 mutation | |
| KR102063486B1 (en) | Association of RNF213 single nucleotide polymorphism with the risk of Moyamoya disease in a Korean population | |
| RU2248574C1 (en) | Method for predicting the development and flow of chronic lympholeukosis | |
| EP2764116B1 (en) | Genetic polymorphisms associated with venous thrombosis in women, methods of detection and uses thereof | |
| RU2490638C1 (en) | Method for prediction of developing b cell and t cell non-hodgkin lymphomas | |
| Watling et al. | Loss of heterozygosity analysis of chromosomes 9, 10 and 17 in gliomas in families | |
| RU2490641C1 (en) | Method for prediction of clinical course of non-hodgkin lymphomas | |
| RU2225612C2 (en) | Method for prognosis of multiple myeoloma course | |
| CA3211981A1 (en) | Major histocompatibility complex single nucleotide polymorphisms | |
| RU2496110C1 (en) | Method for prediction of smouldering form of chronic lympholeukaemia | |
| RU2394242C1 (en) | Method of forecasting of primary adentiae |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090310 |