RU2481119C1 - Peptide, amino acid and phospholipid rich agent - Google Patents
Peptide, amino acid and phospholipid rich agent Download PDFInfo
- Publication number
- RU2481119C1 RU2481119C1 RU2012108497/15A RU2012108497A RU2481119C1 RU 2481119 C1 RU2481119 C1 RU 2481119C1 RU 2012108497/15 A RU2012108497/15 A RU 2012108497/15A RU 2012108497 A RU2012108497 A RU 2012108497A RU 2481119 C1 RU2481119 C1 RU 2481119C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- agent
- kda
- separation
- viscera
- insides
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Беспозвоночные являются одним из перспективных объектов мирового промысла: на их долю приходится 8-8,5% улова. Известно около 800 видов съедобных морских беспозвоночных, которые широко используются для приготовления пищевой, технической, кормовой продукции, а также в лечебно-профилактических целях [1].Invertebrates are one of the promising objects of world fishing: they account for 8-8.5% of the catch. About 800 species of edible marine invertebrates are known, which are widely used for the preparation of food, technical, feed products, as well as for therapeutic and preventive purposes [1].
Морские ежи являются типичными представителями беспозвоночных и источником ряда интересных биологически активных веществ [2, 3].Sea urchins are typical representatives of invertebrates and a source of a number of interesting biologically active substances [2, 3].
Известен способ комплексной переработки морских ежей, в котором морских ежей предварительно разделывают на четыре фракции, получают икру, целомическую жидкость, внутренности и панцирь, далее проводят извлечение целевых продуктов: пептидно-аминокислотного комплекса из целомической жидкости; ганглиозидов и фосфолипидного концентрата из икры; суммы хиноидных пигментов, хитозана, кальция из панциря; ферментов из внутренностей [4]. Недостатком данного изобретения является потеря части биологически активных веществ, содержащихся во внутренностях, например пептидов, аминокислот, минеральных веществ.There is a method of complex processing of sea urchins, in which sea urchins are preliminarily divided into four fractions, caviar, coelomic fluid, viscera and carapace are obtained, then the target products are extracted: peptide-amino acid complex from coelomic fluid; gangliosides and phospholipid concentrate from caviar; the amount of quinoid pigments, chitosan, calcium from the shell; enzymes from the guts [4]. The disadvantage of this invention is the loss of part of the biologically active substances contained in the viscera, for example peptides, amino acids, minerals.
Известен способ получения лечебно-профилактических средств, пищевых и кормовых добавок, питательных сред для культивирования микроорганизмов и клеток эукариот. Технический результат в предлагаемом изобретении достигают созданием способа получения ферментативного гидролизата на основе белков рыб, в котором согласно изобретению белоксодержащую массу получают из внутренностей рыб или путем смешивания внутренностей и тушек рыб, а гидролиз массы проводят непосредственно или смешивая ее с водой, при этом в качестве щелочного агента используют гидроокись кальция, а кислотного - ортофосфорную кислоту. Окончательную очистку продукта (удаление пигментов, специфического запаха и вкуса рыбы) проводят хроматографией на носителях типа Амберлайт XAD. Изобретение обеспечивает получение конечного продукта с низким содержанием золы (солей); уменьшение длительности технологических режимов проведения процесса; улучшение вкусовых свойств получаемого продукта за счет устранения специфического запаха [5]. Недостатком данного изобретения является применение гидролизной технологии, приводящей к большому количеству отходов и сточных вод, требующих очистки.A known method for producing therapeutic and prophylactic agents, food and feed additives, culture media for the cultivation of microorganisms and eukaryotic cells. The technical result in the present invention is achieved by creating a method for producing an enzymatic hydrolyzate based on fish proteins, in which, according to the invention, a protein-containing mass is obtained from the intestines of fish or by mixing the entrails and carcasses of the fish, and the hydrolysis of the mass is carried out directly or by mixing it with water, as the agent uses calcium hydroxide, and acid - phosphoric acid. The final purification of the product (removal of pigments, specific smell and taste of fish) is carried out by chromatography on media such as Amberlight XAD. The invention provides a final product with a low content of ash (salts); reducing the duration of technological modes of the process; improving the taste properties of the resulting product by eliminating a specific smell [5]. The disadvantage of this invention is the use of hydrolysis technology, leading to a large amount of waste and wastewater requiring treatment.
Известен способ получения кормовой добавки для животных из голотурии: голотурии (трепанг и кукумария) разделывают, удаляют внутренности, венчики и внутрибрюшную пленку и варят в морской, пресной или подсоленной воде в течение 5-15 мин при соотношении 1:1 или 1:2 (по массе). Варку в одной и той же варочной среде новых порций сырья проводят от 3 до 5 раз, получая полуфабрикат для изготовления пищевой продукции, подбирая кратность варки таким образом, чтобы в варочных водах количество сухих веществ составляло от 4 до 10%, сушку термически обработанной кукумарии производят при температуре от 10 до 65°C до содержания воды в продукте, равного 5-12%, минеральных веществ 4-8% с получением полуфабриката для производства пищевого продукта. Внутренности голотурии, венчики и внутрибрюшную пленку подвергают стечке, легкой подпрессовке, подмораживанию, измельчению и сушке при температуре 10-75°C, до остаточного содержания воды 5-15%. Охлаждают до температуры окружающего воздуха, упаковывают во влагонепроницаемые пакеты и хранят при температуре не выше 20°C в течение 8 мес. Полученную кормовую биологически активную добавку используют как средство, повышающее устойчивость животных к инфекционным заболеваниям в виде добавки к корму [6]. Недостатками данной технологии является многократное выпаривание при высоких температурах, присутствие в конечном продукте липидов, приводящих к быстрой порче конечного продукта, а также ограниченность применения в качестве кормовой добавки для животных.A known method of obtaining a feed additive for animals from holothuria: holothuria (trepang and cucumaria) is cut, the entrails, corollas and intraperitoneal film are removed and boiled in sea, fresh or salted water for 5-15 minutes at a ratio of 1: 1 or 1: 2 ( by weight). Cooking in the same cooking medium of new portions of raw materials is carried out from 3 to 5 times, obtaining a semi-finished product for the manufacture of food products, selecting the cooking frequency so that the amount of solids in the cooking water is from 4 to 10%, and the heat-treated cucumaria is dried at a temperature of 10 to 65 ° C to a water content of 5-12% in the product, 4-8% of minerals to produce a semi-finished product for the production of a food product. The internals of holothuria, corollas and the intraperitoneal film are subjected to drainage, light pressing, freezing, grinding and drying at a temperature of 10-75 ° C, to a residual water content of 5-15%. It is cooled to ambient temperature, packaged in waterproof bags and stored at a temperature not exceeding 20 ° C for 8 months. The obtained biologically active feed additive is used as a means of increasing the resistance of animals to infectious diseases in the form of a feed additive [6]. The disadvantages of this technology are repeated evaporation at high temperatures, the presence of lipids in the final product, leading to rapid spoilage of the final product, as well as the limited use as an animal feed additive.
Известен способ комплексной переработки двустворчатых зарывающихся моллюсков с получением деликатесной продукции, биологически активных веществ и минерально-белковых подкормок для животных и птиц. В качестве сырья используют моллюски любого размера. Способ предусматривает сортировку, мойку моллюсков, извлечение из раковины сырой мышечной ткани моллюсков и внутренностей, разделку мышечной ткани с отделением двигательного мускула - ноги и мантии с аддуктором, мойку и гидротермическую обработку последних в течение 5-25 мин при температуре 40-55°C. Затем двигательный мускул - ногу и мантию с аддуктором обрабатывают посольной смесью или посольной смесью с ферментным препаратом, в качестве которого используют протеолитический фермент из печени камчатского краба в количестве 0,5-1,5% к массе сырья, промывают водой и выдерживают в растворе уксусной кислоты pH 3,2±0,2 в течение 20-25 мин. Полученное сырье используют либо для получения пресервов либо паштета. В качестве сырья для получения биологически активных веществ и минерально-белковой подкормки для животных и птиц используют внутренности и раковины моллюсков. При разделке моллюсков внутренности и раковины отбирают отдельно. Внутренности измельчают, обезвоживают и делят на белковую и жировую фракции. Раковины варят в воде в течение 40-60 мин и затем измельчают с получением минеральной муки. Белковую фракцию внутренностей смешивают с минеральной мукой и получают минерально-белковую кормовую добавку для животных и птиц [7]. Недостатком данного изобретения является использование ферментативного гидролиза, приводящего к получению большого количества сточных вод, требующих очистки, и отсутствие подтвержденной биологической активности у продукта, получаемой из внутренностей с последующим присоединением данной фракции к кормовой добавке.A known method of complex processing of bivalve burrowing mollusks to obtain gourmet products, biologically active substances and mineral-protein nutrition for animals and birds. As raw materials, shellfish of any size are used. The method includes sorting, washing mollusks, extracting mollusks and viscera from the shell of raw muscle tissue, cutting muscle tissue with separation of the motor muscle - legs and mantles with an adductor, washing and hydrothermal treatment of the latter for 5-25 minutes at a temperature of 40-55 ° C. Then the motor muscle - leg and mantle with an adductor is treated with a salted mixture or a salted mixture with an enzyme preparation, which is used as a proteolytic enzyme from king crab liver in the amount of 0.5-1.5% by weight of the raw material, washed with water and kept in an acetic solution acid pH 3.2 ± 0.2 for 20-25 minutes. The resulting raw materials are used either to obtain preserves or paste. As raw materials for the production of biologically active substances and mineral-protein nutrition for animals and birds, insides and mollusk shells are used. When cutting mollusks, the insides and shells are taken separately. The insides are crushed, dehydrated and divided into protein and fat fractions. The shells are boiled in water for 40-60 minutes and then crushed to obtain mineral flour. The protein fraction of the entrails is mixed with mineral flour and a mineral-protein feed additive for animals and birds is obtained [7]. The disadvantage of this invention is the use of enzymatic hydrolysis, resulting in a large amount of wastewater requiring treatment, and the lack of confirmed biological activity of the product obtained from the insides with the subsequent addition of this fraction to the feed additive.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ комплексной переработки внутренностей голотурий с получением биологически активных добавок к пище и биологически активных пищевых добавок "ТИНГОЛ-2" и "ЭРОГОЛ" [8], характеризующийся тем, что внутренности голотурий измельчают до частиц величиной не более 0,5 мм, экстрагируют этиловым спиртом в соотношении от 1:1 до 1:3 при температуре от минус 5 до плюс 60°C в течение от 5 ч до 10 суток, отделяют жидкую часть с получением водно-спиртового экстракта, затем остаток внутренностей голотурий с содержанием воды от 55 до 75% высушивают при 60-75°C в течение 2,5-4 ч, измельчают до порошкообразного состояния, таблетируют или капсулируют. В результате переработки внутренностей голотурий по данному способу получают две биологически активные добавки (БАД) к пище: БАД "ТИНГОЛ-2", представляющий собой водно-спиртовой экстракт из внутренностей голотурии, содержащий тритерпеновые гликозиды в количестве 700-3500 мкг/мл с содержанием спирта 10-50% и липидов 0,5-4% и БАД "Эрогол", представляющий собой сухой порошок, содержащий 3-12% воды, тритерпеновые гликозиды в количестве 800-4500 мкг/мл, белка 35-45%, марганца 13,5-24,5 мг/кг, цинка 44,0-82,0 мг/кг, железа 481,2-893,5 мг/кг, меди 5,6-10,4 мг/кг, никеля 2,4-4,2 мг/кг, а также суммы элементов кальция, магния, калия 6500-12000 мг/кг. Используемая в качестве сырья голотурия богата тритерпеновыми гликозидами.Closest to the claimed method is a method of complex processing of the internals of holothuria with the production of biologically active food additives and biologically active food additives "TINGOL-2" and "EROGOL" [8], characterized in that the interiors of holothuria are crushed to particles of no more than 0, 5 mm, extracted with ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 to 1: 3 at a temperature of minus 5 to plus 60 ° C for 5 hours to 10 days, the liquid part is separated to obtain an aqueous-alcoholic extract, then the remainder of the holothurium internals with soder by water, from 55 to 75% are dried at 60-75 ° C for 2.5-4 hours, crushed to a powder state, tabletted or encapsulated. As a result of processing the entrails of holothuria according to this method, two biologically active food supplements (BAA) are obtained: dietary supplement TINGOL-2, which is a water-alcohol extract from the entrails of holothuria containing triterpene glycosides in an amount of 700-3500 μg / ml containing alcohol 10-50% and lipids 0.5-4% and dietary supplement "Erogol", which is a dry powder containing 3-12% water, triterpene glycosides in an amount of 800-4500 μg / ml, protein 35-45%, manganese 13, 5-24.5 mg / kg, zinc 44.0-82.0 mg / kg, iron 481.2-893.5 mg / kg, copper 5.6-10.4 mg / kg, nickel 2.4- 4.2 mg / kg; and the sum of the elements of calcium, magnesium, potassium 6500-12000 mg / kg. The holothurium used as raw material is rich in triterpene glycosides.
Из литературных данных известно, что иглокожие, в частности целомическая жидкость морских ежей является источником пептидов [9]. Однако во внутренностях ежей содержатся и другие биологически активные вещества.From literature data it is known that echinoderms, in particular coelomic fluid of sea urchins, are a source of peptides [9]. However, other biologically active substances are also contained in the hedgehog's insides.
Задачей изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противовоспалительной и иммунотропной активностью.The objective of the invention is to expand the arsenal of funds with anti-inflammatory and immunotropic activity.
Поставленная задача решается путем создания комплекса биологически активных веществ, содержащего пептиды, аминокислоты, фосфолипиды и минеральные вещества, природного происхождения, полученного из внутренностей морского ежа, обладающего противовоспалительной и иммунотропной активностью.The problem is solved by creating a complex of biologically active substances containing peptides, amino acids, phospholipids and mineral substances of natural origin, obtained from the insides of the sea urchin, which has anti-inflammatory and immunotropic activity.
Задача изобретения решается тем, что в известном способе внутренности голотурий измельчают до частиц величиной не более 0,5 мм, экстрагируют этиловым спиртом в соотношении от 1:1 до 1:3 при температуре от минус 5 до плюс 60°C в течение от 5 ч до 10 суток, отделяют жидкую часть с получением водно-спиртового экстракта, остаток внутренностей голотурий с содержанием воды от 55 до 75% высушивают при 60-75°C в течение 2,5-4 ч, измельчают до порошкообразного состояния, таблетируют или капсулируют, согласно изобретению после отделения гонад из ежей извлекают внутренности, экстрагируют этиловым спиртом в соотношении 1:1-3 при температуре от 0 до плюс 10°C в течение от 2 ч до 10 суток, отделяют жидкую часть с получением водно-спиртового экстракта, отгоняют спирт, высушивают, используют в качестве средства, обладающего противовоспалительной и иммунотропной активностью.The objective of the invention is solved in that in the known method, the internals of holothuria are crushed to particles no larger than 0.5 mm, extracted with ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 to 1: 3 at a temperature of minus 5 to plus 60 ° C for 5 hours up to 10 days, the liquid part is separated to obtain a water-alcohol extract, the remainder of the internals of holothuria with a water content of 55 to 75% is dried at 60-75 ° C for 2.5-4 hours, ground to a powder state, tabletted or encapsulated, according to the invention after separation of the gonads from the hedgehogs are extracted inside rynnosti, extracted with ethyl alcohol in a ratio of 1: 1-3 at a temperature of from 0 to plus 10 ° C for 2 hours to 10 days, the liquid part is separated to obtain a water-alcohol extract, the alcohol is distilled off, dried, used as an agent, possessing anti-inflammatory and immunotropic activity.
Причем в качестве сырья используют внутренности морских ежей в свежем, мороженом или сухом виде.Moreover, the raw materials used are the insides of sea urchins in fresh, ice cream or dry form.
Отличительной особенностью настоящего изобретения является:A distinctive feature of the present invention is:
- использование внутренностей промысловых морских ежей любых видов, в частности зеленых морских ежей;- the use of the entrails of commercial sea urchins of any species, in particular green sea urchins;
- получение в конечном итоге продукта, представляющего собой комплекс биологически активных веществ, содержащий пептиды, аминокислоты, фосфолипиды и минеральные вещества, обладающий противовоспалительной активностью.- obtaining in the end a product that is a complex of biologically active substances containing peptides, amino acids, phospholipids and minerals, which has anti-inflammatory activity.
Принципиально новым в предлагаемом изобретении является применение комплекса биологически активных веществ, получаемого из внутренностей морского ежа, который является селективными ингибиторами циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2), оказывает противовоспалительное и иммунотропное действие.Fundamentally new in the present invention is the use of a complex of biologically active substances obtained from the insides of the sea urchin, which are selective inhibitors of cyclooxygenase-2 (COX-2), has an anti-inflammatory and immunotropic effect.
Новое свойство комплекса биологически активных веществ, содержащего пептиды, аминокислоты, фосфолипиды и минеральные вещества, выделяемого из внутренностей морского ежа, установлено авторами впервые экспериментально.A new property of a complex of biologically active substances containing peptides, amino acids, phospholipids and mineral substances isolated from the entrails of a sea urchin was established by the authors for the first time experimentally.
Новое свойство комплекса биологически активных веществ, содержащего пептиды, аминокислоты, фосфолипиды и минеральные вещества, выделяемого из внутренностей морского ежа, явным образом не вытекает для специалиста из уровня техники и описание его не обнаружено авторами в патентной и научно-медицинской литературе.A new property of a complex of biologically active substances containing peptides, amino acids, phospholipids and minerals isolated from the insides of the sea urchin does not explicitly follow from the prior art and its description was not found by the authors in the patent and medical literature.
В качестве противовоспалительного и иммунотропного средства комплекс биологически активных веществ, содержащий пептиды, аминокислоты, фосфолипиды и минеральные вещества, выделяемые из внутренностей морского ежа, можно использовать для профилактики и лечения различных заболеваний, включая воспалительные и аллергические процессы на коже и слизистой: дерматиты различной этиологии; кожные проявления заболеваний внутренних органов, острые заболевания суставов, заболевания носоглотки (острые риносинуситы и др.).As an anti-inflammatory and immunotropic agent, a complex of biologically active substances containing peptides, amino acids, phospholipids and minerals secreted from the insides of the sea urchin can be used for the prevention and treatment of various diseases, including inflammatory and allergic processes on the skin and mucous membranes: dermatitis of various etiologies; skin manifestations of diseases of internal organs, acute diseases of the joints, diseases of the nasopharynx (acute rhinosinusitis, etc.).
Технический результат изобретения заключается в получении безопасного средства в виде различных готовых лекарственных форм с выраженным терапевтическим эффектом для лечения воспалений различной этиологии.The technical result of the invention is to obtain a safe tool in the form of various finished dosage forms with a pronounced therapeutic effect for the treatment of inflammations of various etiologies.
Проведенные нами исследования показали, что свежие, замороженные или сушеные внутренности морских ежей, являющиеся отходами после добычи съедобных гонад, измельчать не требуется. Внутренности заливают спиртом при соотношении сырье: экстрагент 1:1-1:3. Суспензию инкубируют при температуре от 0 до плюс 10°C в течение от 2 ч до 10 суток. Нагрев выше 10°C может привести к разложению биологически активных веществ. Инкубирование при отрицательных температурах требует дополнительного охлаждения и не приводит к повышению выхода целевых компонентов. Осадок целесообразно отделять на промышленном сепараторе или проточной центрифуге непрерывного действия. После фильтрации и отгонки спирта твердый остаток сушат тем или иным способом, за исключением высокотемпературного выпаривания.Our studies have shown that fresh, frozen or dried insides of sea urchins, which are waste after the extraction of edible gonads, are not required to be crushed. The insides are filled with alcohol at a ratio of raw materials: extractant 1: 1-1: 3. The suspension is incubated at a temperature of from 0 to plus 10 ° C for 2 hours to 10 days. Heating above 10 ° C can lead to the decomposition of biologically active substances. Incubation at low temperatures requires additional cooling and does not increase the yield of the target components. It is advisable to separate the precipitate on an industrial separator or continuous flow centrifuge. After filtration and distillation of the alcohol, the solid residue is dried in one way or another, with the exception of high-temperature evaporation.
Конечный продукт представляет собой субстанцию светло-коричневого цвета, с солоноватым привкусом и не обладающий неприятным запахом, не содержит токсичных элементов в количествах, превышающих ПДК, и патогенную микрофлору, т.е. является безопасным.The final product is a light brown substance with a brackish taste and no unpleasant odor, does not contain toxic elements in amounts exceeding the MPC, and pathogenic microflora, i.e. is safe.
Продукт содержит пептидов 10-15%, аминокислот 35-45%, фосфолипидов 4-8%, микроэлементы. При проведении электрофореза в полиакриламидном геле выяснилось, что в конечном продукте остаются пептидные фракции с молекулярной массой 19-15 кДа, 6-3,5 кДа и менее 3,5 кДа. В пептидной субстанции отсутствуют высокомолекулярные белковые соединения (по качественной реакции на белок методом осаждения трихлоруксусной кислотой).The product contains peptides 10-15%, amino acids 35-45%, phospholipids 4-8%, trace elements. When conducting polyacrylamide gel electrophoresis, it was found that peptide fractions with a molecular weight of 19-15 kDa, 6-3.5 kDa and less than 3.5 kDa remained in the final product. In the peptide substance there are no high molecular weight protein compounds (according to the qualitative reaction to the protein by the precipitation method with trichloroacetic acid).
Пример 1Example 1
К 1 кг внутренностей морских ежей добавляют 2,5 л 95% спирта этилового, экстрагируют при 5°C в течение 7 суток, фильтруют. Полученную жидкую часть упаривают до удаления спирта и высушивают. В результате получают 18 г сухого биологически активного комплекса.2.5 l of 95% ethyl alcohol are added to 1 kg of the insides of sea urchins, extracted at 5 ° C for 7 days, filtered. The resulting liquid portion was evaporated to remove the alcohol and dried. The result is 18 g of dry biologically active complex.
Конечный продукт представляет собой порошок светло-коричневого цвета, не гигроскопичный, с солоноватым привкусом и не обладающий неприятным запахом, не содержит токсичных элементов в количествах, превышающих ПДК, и патогенную микрофлору, т.е. соответствует показателям безопасности.The final product is a light brown powder, non-hygroscopic, with a brackish taste and no unpleasant odor, does not contain toxic elements in quantities exceeding the MPC, and pathogenic microflora, i.e. complies with safety indicators.
Пример 2Example 2
Раствор для ингаляционного применения (в г на 100 г)Solution for inhalation use (in g per 100 g)
Биологически активный комплекс - 0,01Biologically active complex - 0.01
Консерванты - q.s.Preservatives - q.s.
Вода для инъекций - до 100Water for injection - up to 100
Пример 3Example 3
Раствор для парентерального применения (в г на 100 г)Solution for parenteral use (in g per 100 g)
Биологически активный комплекс - 0,1Biologically active complex - 0.1
Консерванты - q.s.Preservatives - q.s.
Вода для инъекций - до 100Water for injection - up to 100
Пример 4. Оценка противовоспалительного действия на модели экспериментального острого риносинусита у крыс, индуцированного интраназальным введением формалина.Example 4. Evaluation of anti-inflammatory effects on a model of experimental acute rhinosinusitis in rats induced by intranasal administration of formalin.
Средство, приготовленное по примеру 2, вводили интраназально в дозах 0,025; 0,050; 0,100 мл/носовой ход крысы в течение 7 дней.The agent prepared according to example 2 was administered intranasally at doses of 0.025; 0.050; 0.100 ml / rat nasal passage for 7 days.
Установлено, что средство, приготовленное по пр. 2, оказало выраженный дозозависимый противовоспалительный эффект. Количество бокаловидных клеток значимо отличалось от показателей в интактной и контрольной группах животных. В максимальной дозе средство статистически значимо снижало выраженность инфильтрации мононуклеарами и лейкоцитами в собственной пластинке слизистой оболочки и инфильтрацию лейкоцитами в подслизистом слое. Такой эффект связан с более ранним по завершении воспалительного процесса исчезновением клеток крови, которые появились в очаге раньше (нейтрофильные гранулоциты), и более поздней элиминацией мононуклеаров, обладающих меньшей хемотоксической чувствительностью. Данные факты указывают на выздоровление и отражают выраженный противовоспалительный эффект композиции на основе комплекса биологически активных веществ, превосходящее по действию препараты сравнения.It was found that the agent prepared according to pr. 2 had a pronounced dose-dependent anti-inflammatory effect. The number of goblet cells significantly differed from those in the intact and control groups of animals. At the maximum dose, the agent statistically significantly reduced the severity of infiltration by mononuclear cells and leukocytes in the own plate of the mucous membrane and leukocyte infiltration in the submucosal layer. This effect is associated with the earlier disappearance of blood cells that appeared in the focus earlier (neutrophilic granulocytes) upon completion of the inflammatory process, and the later elimination of mononuclear cells with less chemotoxic sensitivity. These facts indicate recovery and reflect the pronounced anti-inflammatory effect of the composition based on a complex of biologically active substances, superior in comparison drugs.
Пример 5. Оценка иммунотропного действияExample 5. Evaluation of the immunotropic effect
Для оценки влияния композиции на клеточный иммунный ответ в соответствии с руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).To assess the effect of the composition on the cellular immune response in accordance with the guidelines for experimental (preclinical) study of new pharmacological substances, a delayed-type hypersensitivity reaction (HRT) was used.
С целью выявления фармакологической активности средства в отношении Т-клеточного иммунного ответа мышам вводили средство, приготовленное по примеру 3, в дозе 40 мкг/кг массы мыши в течение 6 суток (период развития реакции гиперчувствительности замедленного типа). Результаты проведенного исследования представлены в таблице 1.In order to identify the pharmacological activity of the agent with respect to the T-cell immune response, the mice were injected with the agent prepared according to Example 3 at a dose of 40 μg / kg of mouse weight for 6 days (delayed-type hypersensitivity reaction development period). The results of the study are presented in table 1.
Установлено, что средство, приготовленное по пр. 3, оказывает влияние на развитие реакции замедленного типа, в частности сокращает ее практически в 2 раза. Полученные данные свидетельствуют о том, что шестидневное введение средства оказывает иммуносупрессорное действие.It was found that the agent prepared according to pr. 3 has an effect on the development of a delayed type reaction, in particular, it reduces it by almost 2 times. The data obtained indicate that a six-day administration of the drug has an immunosuppressive effect.
Пример 6. Влияние на энзиматическую активность ЦОГ-1 и ЦОГ-2Example 6. The effect on the enzymatic activity of COX-1 and COX-2
Влияние средства по пр.1 на энзиматическую активность ЦОГ-1 и ЦОГ-2 проводилось с использованием коммерческого набора СОХ inhibitor screening assay kit (Cayman Chemical, USA). В качестве препаратов сравнения использовали селективный ингибитор ЦОГ-1 - SC-560 и неспецифичный ингибитор ЦОГ-2 - индометацин. Средство по примеру 1 исследовали в диапазоне концентраций 0,1-200 мкг/мл.The influence of the agent according to pr.1 on the enzymatic activity of COX-1 and COX-2 was carried out using a commercial COX inhibitor screening assay kit (Cayman Chemical, USA). The COX-1 selective inhibitor SC-560 and the non-specific COX-2 inhibitor indomethacin were used as comparison preparations. The agent of Example 1 was investigated in a concentration range of 0.1-200 μg / ml.
Тест-система напрямую оценивает количество простагландина F2a (PGF2α), сформированного в ходе редукции индуцированной хлоридом олова (SnCl2) PGH2 - продукта взаимодействия циклооксигеназы (фермента) и арахидоновой кислоты (субстрата). Тест-система включает телячью ЦОГ-1 и человеческую рекомбинантную ЦОГ-2, позволяя тем самым определять активность фармакологических субстанций в отношении обоих ферментов.The test system directly evaluates the amount of prostaglandin F2a (PGF2α) formed during the reduction of tin chloride (SnCl2) PGH2, a product of the interaction of cyclooxygenase (enzyme) and arachidonic acid (substrate). The test system includes calf COX-1 and human recombinant COX-2, thereby allowing to determine the activity of pharmacological substances in relation to both enzymes.
Установлено, что средство по примеру 1 обладает дозозависимым ингибирующим эффектом в отношении фермента ЦОГ-2. Ингибирование фермента в концентрациях 100 и 200 мкг/мл составило 43 и 55%, соответственно. IC50 средства по примеру 1 составила 67 мкг/мл. В отношении ЦОГ-1 активности не было выявлено. Таким образом, биологически активный комплекс из внутренностей морского ежа является селективным ингибитором фермента ЦОГ-2.It was found that the tool according to example 1 has a dose-dependent inhibitory effect against the enzyme COX-2. Inhibition of the enzyme at concentrations of 100 and 200 μg / ml was 43 and 55%, respectively. The IC50 of the agent of Example 1 was 67 μg / ml. With respect to COX-1 activity was not detected. Thus, the biologically active complex from the entrails of the sea urchin is a selective inhibitor of the COX-2 enzyme.
Пример 7. Оценка специфической фармакологической активности на модели экспериментального острого бронхита, индуцированного сигаретным дымомExample 7. Evaluation of specific pharmacological activity in a model of experimental acute bronchitis induced by cigarette smoke
Экспериментальная модель острого бронхита вызвана индукцией сигаретным дымом в течение 28 дней. Средство по примеру 1 вводили ингаляционно в дозе 100 мкг/кг массы тела крысы, в качестве препарата сравнения использовали амбробене в дозе 125 мг/кг.An experimental model of acute bronchitis caused by induction of cigarette smoke for 28 days. The agent of Example 1 was administered by inhalation at a dose of 100 μg / kg of rat body weight; Ambrobene at a dose of 125 mg / kg was used as a reference preparation.
После курсового применения средства по примеру 1 в клиническом анализе крови было отмечено изменение со стороны красной крови - развитие гипохромной микроцитарной анемии, но со стороны белой крови изменения были минимальны, и показатели не отличались от интактной группы животных. Также нормализовались и показатели антиоксидантной системы - концентрация малонового диальдегида MDA была минимальна и незначительно превышала интактные показатели. Патогистологическое исследование у всех животных выявило развитие острого катарального бронхита с увеличением толщины слизистой бронхов в 1,9 раза, при этом воспалительные изменения были минимальны как в ткани легкого, так и в организме в целом и сопоставимы с действием препарата сравнения - амбробене. В лейкоцитарной формуле по сравнению с интактной группой выявлено незначительное увеличение общего количества лейкоцитов с преобладанием гранулоцитов.After the course use of the drug according to example 1 in the clinical blood test, a change was noted on the part of red blood - the development of hypochromic microcytic anemia, but on the part of white blood the changes were minimal, and the indices did not differ from the intact group of animals. The indices of the antioxidant system also returned to normal — the concentration of MDA malondialdehyde was minimal and slightly exceeded intact indices. A histological examination in all animals revealed the development of acute catarrhal bronchitis with an increase in 1.9 times the thickness of the bronchial mucosa, while the inflammatory changes were minimal both in the lung tissue and in the body as a whole and were comparable to the action of the comparison drug ambrobene. In the leukocyte formula, compared with the intact group, a slight increase in the total number of leukocytes with a predominance of granulocytes was revealed.
Источники информацииInformation sources
1. Справочник по химическому составу и технологическим свойствам водорослей, беспозвоночных и морских млекопитающих / под ред. В.П.Быкова. - М.: Изд-во ВНИРО, 1999. - 262 с.1. Handbook on the chemical composition and technological properties of algae, invertebrates and marine mammals / ed. V.P. Bykova. - M.: VNIRO Publishing House, 1999 .-- 262 p.
2. Воробьев В.В. Создание биоактивных фармакологических субстанций и лекарственных средств из морских гидробионтов // Вестник биотехнол. - 2009. - Т.4, №1. - С.33-38.2. Vorobev V.V. Creation of bioactive pharmacological substances and medicines from marine hydrobionts // Bulletin of Biotechnol. - 2009. - T.4, No. 1. - S.33-38.
3. Bhakuni D.S., Rawat D.S. Bioactive marine natural products: Anamaya Publishers, New Delhi, India. 2005. 382 p.3. Bhakuni D.S., Rawat D.S. Bioactive marine natural products: Anamaya Publishers, New Delhi, India. 2005.382 p.
4. Пат. RU 2432956 C1, A61K 35/56, B01D 11/02, 08.07.2010.4. Pat. RU 2432956 C1, A61K 35/56, B01D 11/02, 08/08/2010.
5. Пат. RU 2262859, C2, A23J 1/04, A23L 3/30, A23K 1/10, 22.08.2003.5. Pat. RU 2262859, C2, A23J 1/04, A23L 3/30, A23K 1/10, 08.22.2003.
6. Пат. RU 2236155, C2, A23L 1/30, A23L 1/305, A23L 1/333, 05.08.2002.6. Pat. RU 2236155, C2, A23L 1/30, A23L 1/305, A23L 1/333, 08/05/2002.
7. Пат. RU 2231272, C2, A23L 1/33, 19.04.2002.7. Pat. RU 2231272, C2, A23L 1/33, 04/19/2002.
8. Пат. RU 2215532, C2, A61K 35/56, А61Р 15/00, 10.12.2001.8. Pat. RU 2215532, C2, A61K 35/56, A61P 15/00, 10/10/2001.
9. Haug Т., Kjuul A.K., Styrvold O.B. et al. Antibacterial activity in Strongylocentrotus droebachiensis (Echinoidea), Cucumaria frondosa (Holothuroidea), and Asterias rubens (Asteroidea) // J Invertebrate Pathology. - 2002. - 81 (2). - P.94-102.9. Haug T., Kjuul A.K., Styrvold O.B. et al. Antibacterial activity in Strongylocentrotus droebachiensis (Echinoidea), Cucumaria frondosa (Holothuroidea), and Asterias rubens (Asteroidea) // J Invertebrate Pathology. - 2002 .-- 81 (2). - P.94-102.
Claims (3)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012108497/15A RU2481119C1 (en) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Peptide, amino acid and phospholipid rich agent |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012108497/15A RU2481119C1 (en) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Peptide, amino acid and phospholipid rich agent |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2481119C1 true RU2481119C1 (en) | 2013-05-10 |
Family
ID=48789368
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012108497/15A RU2481119C1 (en) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | Peptide, amino acid and phospholipid rich agent |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2481119C1 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2545703C1 (en) * | 2014-04-09 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Санкт-Петербургский институт фармации" | Method for producing glycolised polypeptide agent |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3533563A1 (en) * | 1985-09-20 | 1987-03-26 | Michael Birzer | MEP AIDS composition |
RU2414914C1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-03-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Agent for supporting therapy and method for making agent of frozen-dried urchin hardroe |
RU2420212C1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Supporting therapy remedy and method for its production from frozen sea urchin spawn |
RU2440216C1 (en) * | 2010-06-16 | 2012-01-20 | Открытое акционерное общество "Автодизель" (Ярославский моторный завод) | Boring mandrel |
-
2012
- 2012-03-05 RU RU2012108497/15A patent/RU2481119C1/en active IP Right Revival
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3533563A1 (en) * | 1985-09-20 | 1987-03-26 | Michael Birzer | MEP AIDS composition |
RU2414914C1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-03-27 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Agent for supporting therapy and method for making agent of frozen-dried urchin hardroe |
RU2420212C1 (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гармония" | Supporting therapy remedy and method for its production from frozen sea urchin spawn |
RU2440216C1 (en) * | 2010-06-16 | 2012-01-20 | Открытое акционерное общество "Автодизель" (Ярославский моторный завод) | Boring mandrel |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2545703C1 (en) * | 2014-04-09 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Санкт-Петербургский институт фармации" | Method for producing glycolised polypeptide agent |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Grienke et al. | Bioactive compounds from marine mussels and their effects on human health | |
Khora | Marine fish-derived bioactive peptides and proteins for human therapeutics | |
Blanco et al. | Towards sustainable and efficient use of fishery resources: present and future trends | |
Kim et al. | Bioactive compounds from marine processing byproducts–a review | |
CN101275156B (en) | Collagen bioactive peptide, preparation and use thereof | |
JP3408958B2 (en) | Composition containing useful substance derived from fish and shellfish and method for producing the useful substance | |
JP5154964B2 (en) | Contains royal jelly-degrading enzyme | |
Castañeda-Valbuena et al. | Biological activities of peptides obtained by pepsin hydrolysis of fishery products | |
Yu et al. | Bioactive substances from marine fishes, shrimps, and algae and their functions: present and future | |
Ma et al. | Current state of insect proteins: extraction technologies, bioactive peptides and allergenicity of edible insect proteins | |
RU2409291C1 (en) | Method for production of water-soluble polypeptide complex of salmon fishes liver | |
KR102150122B1 (en) | Antioxidant composition comprising extract of Apis mellifera male pupa | |
RU2432956C1 (en) | Method of complex processing of echinus | |
RU2481119C1 (en) | Peptide, amino acid and phospholipid rich agent | |
KR101795655B1 (en) | medicinal marine collagen using fishes by-product and manufacturing method thereof | |
RU2562592C2 (en) | Method of obtaining oil extract from sea cucumbers, possessing biologically active properties (versions) | |
Zhang et al. | Promising hen egg-derived proteins/peptides (EDPs) for food engineering, natural products and precision medicines | |
JPS6287058A (en) | Novel peptide | |
CA2269397A1 (en) | A nutrition-enriched composition for feed, and feed | |
KR102333548B1 (en) | Animal feed composition comprising bass extract and preparation method thereof | |
RU2054292C1 (en) | Method of preparing biologically active substances from velvet antlers | |
Sethuramalingam et al. | Anti-oxidant, anti-inflammatory and anti-atherosclerotic activity of bioactive peptide HPAEDR isolated from Catla catal muscle on LPS induced inflammation on 246.7 raw macrophage cells and HCF induced hyperlipidemic Zebrafish Larvae | |
Mutalipassi et al. | Bioactive Compounds of Nutraceutical Value from Fishery and Aquaculture Discards. Foods 2021, 10, 1495 | |
RU2562595C2 (en) | Production of product with biologically active properties from holothurians | |
RU2545703C1 (en) | Method for producing glycolised polypeptide agent |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140306 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20150427 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20220421 |