RU2477860C2 - Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen - Google Patents
Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477860C2 RU2477860C2 RU2010134106/10A RU2010134106A RU2477860C2 RU 2477860 C2 RU2477860 C2 RU 2477860C2 RU 2010134106/10 A RU2010134106/10 A RU 2010134106/10A RU 2010134106 A RU2010134106 A RU 2010134106A RU 2477860 C2 RU2477860 C2 RU 2477860C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- immunoglobulins
- optical density
- tick
- antigen
- sibirica
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, иммунологии и биотехнологии. В настоящее время в качестве серологических тестов для лабораторной диагностики клещевого риккетсиоза (КР), вызываемового Rickettsia sibirica, рекомендованы реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) и реакция связывания комплемента (РСК) (МУ 3.1.1755-03, 2004 г.). Однако для постановки РНИФ необходим корпускулярный антиген, коммерческий выпуск которого отсутствует. Существенным недостатком РНИФ является также возможность осуществлять достоверную диагностику риккетсиоза лишь не ранее 13-15 дня от начала заболевания. Другим (традиционным) методом, применяемым в лабораторной диагностике КР, остается РСК. В настоящее время осуществляется коммерческий выпуск «Диагностикум риккетсиозного Сибирика сухого для РСК». Коммерческие цельнорастворимые антигены для РСК обладают выраженной группоспецифичностью и низкой чувствительностью (выявляют антитела примерно у половины больных с диагнозом «клещевой риккетсиоз»). Кроме того, стандартная методика РСК выявляет суммарные антитела без дифференциации по классам иммуноглобулинов.The invention relates to the field of medicine, immunology and biotechnology. At present, indirect immunofluorescence reaction (RNIF) and complement fixation reaction (RSC) (MU 3.1.1755-03, 2004) are recommended as serological tests for laboratory diagnosis of tick-borne rickettsiosis (CR) caused by Rickettsia sibirica. However, for the formulation of RNIF, a particulate antigen is needed, the commercial release of which is absent. A significant disadvantage of RNIF is also the ability to carry out reliable diagnosis of rickettsiosis only not earlier than 13-15 days from the onset of the disease. Another (traditional) method used in the laboratory diagnosis of KR remains RSK. Currently, a commercial release of Diagnosticum of Rickettsial Dry Siberian for DSC is being carried out. Commercial fully soluble antigens for CSCs have pronounced group specificity and low sensitivity (antibodies are detected in about half of patients diagnosed with tick-borne rickettsiosis). In addition, the standard method of CSC reveals total antibodies without differentiation according to the classes of immunoglobulins.
Наиболее близким по технической сущности решением (аналогом) к заявленному изобретению по совокупности признаков является способ диагностики клещевого риккетсиоза путем выявления антител к R. sibirica с использованием РСК, основанной на применении «Диагностикума риккетсиозного Сибирика сухого для РСК» (Инструкция по применению утверждена Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 01.07.1999).The closest in technical essence to the solution (analog) to the claimed invention in terms of features is a method for the diagnosis of tick-borne rickettsiosis by detecting antibodies to R. sibirica using RSK, based on the use of "Diagnosticum of rickettsial dry Siberia for RSK" (Instructions for use approved by the Main State Sanitary doctor of the Russian Federation 07/01/1999).
Задача изобретения - повышение точности и упрощение технологии лабораторной диагностики КР путем выявления антител методом иммуноферментного анализа, позволяющего с высокой специфичностью и чувствительностью выявлять антитела к R. sibirica в сыворотке (плазме) крови человека в ранние сроки заболевания.The objective of the invention is to improve the accuracy and simplify the technology of laboratory diagnosis of CR by detecting antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay, which allows with high specificity and sensitivity to detect antibodies to R. sibirica in human serum (plasma) in the early stages of the disease.
Сущность предлагаемого технического решения состоит в том, что выявление антител в сыворотке (плазме) к возбудителю КР R. sibirica проводят при помощи непрямого иммуноферментного анализа на твердофазном носителе с использованием коммерческого диагностикума риккетсиозного Сибирика сухого для РСК. Данный диагностикум представляет собой лиофилизированные антигенные комплексы, выделенные методом эфирной обработки из R. sibirica, выращенных в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов и инактивированных фенолом. Применение одной схемы ИФА с двумя различными коньюгатами Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup и Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup, представляющими собой поликлональные иммуноглобулины кролика против иммуноглобулинов человека, меченные пероксидазой хрена, позволяет выявлять иммуноглобулины классов М и G, т.е. проводить как раннюю, так и ретроспективную диагностику КР.The essence of the proposed technical solution consists in the fact that the detection of antibodies in serum (plasma) to the causative agent of R. sibirica is carried out using indirect enzyme-linked immunosorbent assay on a solid-phase carrier using a commercial diagnostic test for rickettsial dry Siberia for CSC. This diagnosticum is a lyophilized antigenic complexes isolated by ether treatment from R. sibirica grown in yolk sacs of developing chicken embryos and inactivated by phenol. Application of the same ELISA with two different conjugates Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup and Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup, which are rabbit polyclonal immunoglobulins against human immunoglobulins, labeled with horseradish peroxidase, allows the detection of immunoglobulins of classes M and G, i.e. conduct both early and retrospective diagnosis of CR.
Технический результат - использование иммуноферментного анализа на основе коммерческого диагностикума риккетсиозного Сибирика сухого для РСК позволяет почти вдвое, в сравнении с РСК, повысить эффективность верификации диагноза «клещевой риккетсиоз» за счет повышения чувствительности заявляемого теста (91,7% и 52,9% соответственно).The technical result - the use of an enzyme-linked immunosorbent assay based on a commercial diagnosticum of rickettsial Sibirik dry for RSC allows almost double, compared with RSC, to increase the effectiveness of the diagnosis of tick-borne rickettsiosis by increasing the sensitivity of the claimed test (91.7% and 52.9%, respectively) .
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Определение иммуноглобулинов класса М к R. sibirica методом иммуноферментного анализа.Example 1. Determination of class M immunoglobulins to R. sibirica by enzyme immunoassay.
Для постановки ИФА используют следующее.For the production of ELISA use the following.
1. «Диагностикум риккетсиозный Сибирика сухой для РСК» (серия 6 К 1299) ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, г.Пермь.1. “Diagnosticum rickettsial Siberia dry for DSC” (series 6 K 1299) FSUE NPO Microgen of the Ministry of Health of the Russian Federation, Perm.
2. Раствор хлорида натрия 0,9% для разведения диагностикума риккетсиозного Сибирика.2. A solution of sodium chloride 0.9% for breeding diagnosticum rickettsial Sibirik.
3. Сыворотка лошадиная нормальная.3. Normal horse serum.
4. В качестве коньюгата - поликлональные иммуноглобулины кролика против иммуноглобулинов М человека, меченные пероксидазой хрена (Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup).4. As a conjugate - rabbit polyclonal immunoglobulins against human M immunoglobulins labeled with horseradish peroxidase (Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup).
5. Субстратный буферный раствор - 3,3',5,5'-тетраметилбензидин - в качестве хромогена, прозрачная бесцветная жидкость.5. The substrate buffer solution - 3.3 ', 5.5'-tetramethylbenzidine - as a chromogen, a clear, colorless liquid.
6. Фосфатно-солевой pH 7,3 (или карбонатно-бикарбонатный pH 9,6) буферный раствор для разведения образцов.6. Phosphate-salt pH 7.3 (or carbonate-bicarbonate pH 9.6) buffer solution for dilution of samples.
7. Фосфатно-солевой буферный раствор с твином 20 для отмывки.7. Phosphate-saline buffer solution with tween 20 for washing.
8. Стоп-реагент - раствор серной кислоты 0,75 моль/л, прозрачная бесцветная жидкость.8. Stop reagent - a solution of sulfuric acid 0.75 mol / l, a clear, colorless liquid.
9. Исследуемая сыворотка (плазма) крови.9. Test serum (plasma) of blood.
10. Положительный контрольный образец, инактивированный, слегка опалесцирующая жидкость, полученная путем смешивания 5 положительных в РСК сывороток больных клещевым риккетсиозом людей.10. A positive control sample, an inactivated, slightly opalescent liquid, obtained by mixing 5 positive sera in patients with tick-borne rickettsiosis.
11. Отрицательный контрольный образец, инактивированный, слегка опалесцирующая жидкость, полученная путем смешивания 10 сывороток здоровых людей (доноров).11. Negative control sample, inactivated, slightly opalescent liquid obtained by mixing 10 sera of healthy people (donors).
Процедура выполнения ИФА.The procedure for performing ELISA.
Для сенсибилизации полистерола поверхностей лунок планшета используют диагностикум риккетсиозный Сибирика сухой для РСК в разведении 1:4 в объеме 50 мкл в каждую лунку. Закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 18 часов при температуре +4°C или в условиях влажной камеры в течение 2 часов при температуре 37°C. Содержимое лунок удаляют без промывания планшета. Затем в лунки планшета вносят исследуемые сыворотки в объеме 50 мкл в разведениях от 1:10 до 1:50, приготовленных на 0,05 М фосфатно-солевом буфере (ФСБ) pH 7,3, содержащем 10% цельной лошадиной сыворотки. После внесения разведений сывороток закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 1 часа при температуре 37°C. Далее содержимое лунок удаляют в емкость для сбора инфицированного материала и лунки планшета промывают 3 раза рабочим промывочным раствором (фосфатно-солевой буфер) в объеме 350 мкл. Во все лунки планшета вносят по 50 мкл конъюгата - Polyclonal Rabbit Anti-Human лунки планшета вносят по 50 мкл конъюгата - Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup в разведении 1:1000. Для получения нужного разведения конъюгата используют 0,05М ФСБ pH 7,3, содержащий 10% цельной лошадиной сыворотки. После внесения конъюгата закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 1 часа при температуре 37°C. Далее, содержимое лунок удаляют в емкость для сбора инфицированного материала и лунки планшета промывают 5 раз рабочим промывочным раствором (фосфатно-солевой буфер) в объеме 350 мкл. Во все лунки планшета вносят по 100 мкл субстратного буферного раствора (раствор тетраметилбензидина) и выдерживают 15 мин в защищенном от света месте при температуре 20°±2°C. Реакцию останавливают добавлением во все лунки планшета по 50 мкл стоп-реагента (0,75 моль/л раствор серной кислоты).To sensitize polystyrene to the surfaces of the plate wells, use the Rickettsial Sibirica diagnosticum dry for CSC in a dilution of 1: 4 in a volume of 50 μl per well. The lidded tablet is kept for 18 hours at a temperature of + 4 ° C or in a humid chamber for 2 hours at a temperature of 37 ° C. The contents of the wells are removed without washing the tablet. Then, test sera are added to the plate wells in a volume of 50 μl in dilutions from 1:10 to 1:50 prepared in 0.05 M phosphate-buffered saline (PBS) pH 7.3 containing 10% whole horse serum. After making the dilutions of the sera, the lid-coated plate is kept for 1 hour at 37 ° C. Next, the contents of the wells are removed into a container for collecting infected material and the wells of the plate are washed 3 times with a working wash solution (phosphate-buffered saline) in a volume of 350 μl. 50 μl of conjugate - Polyclonal Rabbit Anti-Human conjugate is added to all wells of the tablet; 50 μl of conjugate - Polyclonal Rabbit Anti-Human IgM / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup in 1: 1000 dilution is added. To obtain the desired dilution of the conjugate using 0.05 M FSB pH 7.3, containing 10% whole horse serum. After application of the conjugate, the lid-closed plate was incubated for 1 hour at a temperature of 37 ° C. Next, the contents of the wells are removed into a container for collecting infected material and the wells of the plate are washed 5 times with a working wash solution (phosphate-buffered saline) in a volume of 350 μl. 100 μl of substrate buffer solution (tetramethylbenzidine solution) is added to all wells of the plate and incubated for 15 minutes in a dark place at a temperature of 20 ° ± 2 ° C. The reaction is stopped by adding 50 μl of stop reagent (0.75 mol / L sulfuric acid solution) to all wells of the plate.
Учет результатов проводят спектрофотометрически при длине волны 450 нм с настройкой прибора «по воздуху». Интерпретацию результатов проводят следующим образом: значение оптической плотности каждой исследуемой сыворотки делят на произведение среднего арифметического значения показателей оптических плотностей позитивного и негативного контроля. Проба считается положительной, если оптическая плотность анализируемой сыворотки выше значения (cut off), рассчитанного по формуле (ОПкк+ОПок)/2+0,2, где 0,2 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки, ОПкк - оптическая плотность контроля конъюгата, ОПок - оптическая плотность отрицательного контроля.The results are taken into account spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm with the instrument tuned “over the air”. The results are interpreted as follows: the optical density of each test serum is divided by the product of the arithmetic mean of the optical densities of the positive and negative controls. A sample is considered positive if the optical density of the analyzed serum is higher than the cut off value calculated by the formula (OPcc + OPoc) / 2 + 0.2, where 0.2 is the coefficient determined by the statistical processing method, OPcc is the optical density of the conjugate control, Flock - the optical density of the negative control.
Пример 2. Определение иммуноглобулинов класса G к R. sibirica методом иммуноферментного анализа.Example 2. Determination of class G immunoglobulins to R. sibirica by enzyme immunoassay.
Для выполнения ИФА используют следующее.To perform ELISA use the following.
1. «Диагностикум риккетсиозный Сибирика сухой для РСК» (серия 6 К 1299) ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, г.Пермь.1. “Diagnosticum rickettsial Siberia dry for DSC” (series 6 K 1299) FSUE NPO Microgen of the Ministry of Health of the Russian Federation, Perm.
2. Раствор хлорида натрия 0,9% для разведения диагностикума риккетсиозного Сибирика.2. A solution of sodium chloride 0.9% for breeding diagnosticum rickettsial Sibirik.
3. Сыворотка лошадиная нормальная.3. Normal horse serum.
4. В качестве конъюгата - поликлональные иммуноглобулины кролика против иммуноглобулинов G человека, меченные пероксидазой хрена (Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup).4. As a conjugate, polyclonal rabbit immunoglobulins against human G immunoglobulins labeled with horseradish peroxidase (Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup).
5. Субстратный буферный раствор - 3,3',5,5'-тетраметилбензидин - в качестве хромогена, прозрачная бесцветная жидкость.5. The substrate buffer solution - 3.3 ', 5.5'-tetramethylbenzidine - as a chromogen, a clear, colorless liquid.
6. Фосфатно-солевой буферный раствор pH 7,3 для разведения образцов.6. Phosphate-saline buffer pH 7.3 for sample dilution.
7. Фосфатно-солевой буферный раствор с твином 20 для отмывки.7. Phosphate-saline buffer solution with tween 20 for washing.
8. Стоп-реагент - раствор серной кислоты 0,75 моль/л, прозрачная бесцветная жидкость.8. Stop reagent - a solution of sulfuric acid 0.75 mol / l, a clear, colorless liquid.
9. Исследуемая сыворотка (плазма) крови.9. Test serum (plasma) of blood.
10. Положительный контрольный образец, инактивированный, слегка опалесцирующая жидкость, полученная путем смешивания 5 положительных в РСК сывороток больных клещевым риккетсиозом людей.10. A positive control sample, an inactivated, slightly opalescent liquid, obtained by mixing 5 positive sera in patients with tick-borne rickettsiosis.
11. Отрицательный контрольный образец, инактивированный, слегка опалесцирующая жидкость, полученная путем смешивания 10 сывороток здоровых людей (доноров).11. Negative control sample, inactivated, slightly opalescent liquid obtained by mixing 10 sera of healthy people (donors).
Процедура выполнения ИФА.The procedure for performing ELISA.
Для сенсибилизации полистерола поверхностей лунок планшета используют диагностикум риккетсиозный Сибирика сухой для РСК в разведении 1:4 в объеме 50 мкл в каждую лунку. Закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 18 часов при температуре +4°C или в условиях влажной камеры в течение 2 часов при температуре 37°C. Содержимое лунок удаляют без промывания планшета. Затем в лунки планшета вносят исследуемые сыворотки в объеме 50 мкл в разведениях от 1:10 до 1:50, приготовленных на 0,05М ФСБ pH 7,3, содержащем 10% цельной лошадиной сыворотки. После внесения разведений сывороток закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 1 часа при температуре 37°C. Далее содержимое лунок удаляют в емкость для сбора инфицированного материала и лунки планшета промывают 3 раза рабочим промывочным раствором (фосфатно-солевой буфер) в объеме 350 мкл. Во все лунки планшета вносят по 50 мкл конъюгата - Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG/HRP, Dako Denmark A/S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup в разведении 1:1000. Для получения нужного разведения конъюгата используют 0,05М ФСБ pH 7,3, содержащий 10% цельной лошадиной сыворотки. После внесения конъюгата закрытый крышкой планшет выдерживают в течение 1 часа при температуре 37°C. Далее, содержимое лунок удаляют в емкость для сбора инфицированного материала и лунки планшета промывают 5 раз рабочим промывочным раствором (фосфатно-солевой буфер) в объеме 350 мкл. Во все лунки планшета вносят по 100 мкл субстратного буферного раствора (раствор тетраметилбензидина) и выдерживают 15 мин в защищенном от света месте при температуре 20°±2°C. Реакцию останавливают добавлением во все лунки планшета по 50 мкл стоп-реагента (0,75 моль/л раствор серной кислоты).To sensitize polystyrene to the surfaces of the plate wells, use the Rickettsial Sibirica diagnosticum dry for CSC in a dilution of 1: 4 in a volume of 50 μl per well. The lidded tablet is kept for 18 hours at a temperature of + 4 ° C or in a humid chamber for 2 hours at a temperature of 37 ° C. The contents of the wells are removed without washing the tablet. Then, test sera are added to the plate wells in a volume of 50 μl in dilutions from 1:10 to 1:50 prepared on 0.05 M FSB pH 7.3 containing 10% whole horse serum. After making the dilutions of the sera, the lid-coated plate is kept for 1 hour at 37 ° C. Next, the contents of the wells are removed into a container for collecting infected material and the wells of the plate are washed 3 times with a working wash solution (phosphate-buffered saline) in a volume of 350 μl. 50 μl of conjugate - Polyclonal Rabbit Anti-Human IgG / HRP, Dako Denmark A / S Produktionsvei 42 Denmark DK-2600 Glostrup in 1: 1000 dilution are added to all wells of the plate. To obtain the desired dilution of the conjugate using 0.05 M FSB pH 7.3, containing 10% whole horse serum. After application of the conjugate, the lid-closed plate was incubated for 1 hour at a temperature of 37 ° C. Next, the contents of the wells are removed into a container for collecting infected material and the wells of the plate are washed 5 times with a working wash solution (phosphate-buffered saline) in a volume of 350 μl. 100 μl of substrate buffer solution (tetramethylbenzidine solution) is added to all wells of the plate and incubated for 15 minutes in a dark place at a temperature of 20 ° ± 2 ° C. The reaction is stopped by adding 50 μl of stop reagent (0.75 mol / L sulfuric acid solution) to all wells of the plate.
Учет результатов проводят спектрофотометрически при длине волны 450 нм с настройкой прибора «по воздуху». Интерпретацию результатов проводят следующим образом: значение оптической плотности каждой исследуемой сыворотки делят на произведение среднего арифметического значения показателей оптических плотностей позитивного и негативного контроля. Проба считается положительной, если оптическая плотность анализируемой сыворотки выше значения (cut off), рассчитанного по формуле (ОПкк+ОПок)/2+0,2, где 0,2 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки, ОПкк - оптическая плотность контроля конъюгата, ОПок - оптическая плотность отрицательного контроля.The results are taken into account spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm with the instrument tuned “over the air”. The results are interpreted as follows: the optical density of each test serum is divided by the product of the arithmetic mean of the optical densities of the positive and negative controls. A sample is considered positive if the optical density of the analyzed serum is higher than the cut off value calculated by the formula (OPcc + OPoc) / 2 + 0.2, where 0.2 is the coefficient determined by the statistical processing method, OPcc is the optical density of the conjugate control, Flock - the optical density of the negative control.
Пример 3. Оценка эффективности предлагаемого способа определения антител к R. sibirica.Example 3. Evaluation of the effectiveness of the proposed method for the determination of antibodies to R. sibirica.
Для оценки эффективности серологической верификации диагноза «клещевой риккетсиоз» с использованием различных алгоритмов применения ИФА были рассчитаны с использованием метода четырехпольной таблицы (Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. - М.: Медиа Сфера, 1998. - 352 с.) показатели, рекомендуемые для характеристики лабораторных тестов:To assess the effectiveness of serological verification of the diagnosis of tick-borne rickettsiosis using various algorithms for the application of ELISA, we calculated using the four-table method (Fletcher R., Fletcher S., Wagner E. Clinical epidemiology. Fundamentals of evidence-based medicine. - M .: Media Sphere, 1998 . - 352 p.) Indicators recommended for the characterization of laboratory tests:
- чувствительность = а/(а+с);- sensitivity = a / (a + s);
- специфичность = d/(b+d);- specificity = d / (b + d);
- прогностическая ценность позитивного результата ПЦП+=а/(а+b);- prognostic value of a positive result of PCP + = a / (a + b);
- прогностическая ценность негативного результата ПЦН-=d/(с+d),- prognostic value of the negative result of the monitoring station- = d / (s + d),
где 'а' - число положительных проб сывороток крови в группе лиц с клиническим диагнозом «клещевой риккетсиоз»;where 'a' is the number of positive blood serum samples in the group of people with a clinical diagnosis of tick-borne rickettsiosis;
'b' - число положительных проб сывороток крови в группе клинически здоровых лиц;'b' is the number of positive blood serum samples in the group of clinically healthy individuals;
'с' - число отрицательных проб сывороток крови в группе лиц с клиническим диагнозом «клещевой риккетсиоз»;'c' is the number of negative blood serum samples in the group of persons with a clinical diagnosis of tick-borne rickettsiosis;
'd' - число отрицательных проб сывороток крови в группе клинически здоровых лиц.'d' is the number of negative blood serum samples in the group of clinically healthy individuals.
Показано, что у большинства больных (77,8%) для подтверждения диагноза КР достаточно исследовать в ИФА только первую сыворотку крови на наличие IgM к R. sibirica. Исследование парных сывороток на наличие IgM и IgG повышает подтверждаемость диагноза до 100%.It was shown that in the majority of patients (77.8%), in order to confirm the diagnosis of KR, it is sufficient to examine in ELISA only the first blood serum for the presence of IgM to R. sibirica. The study of paired sera for the presence of IgM and IgG increases the confirmation of the diagnosis up to 100%.
Пример 4. Сравнение эффективности РСК и ИФА для лабораторного подтверждения диагноза «клещевой риккетсиоз».Example 4. Comparison of the effectiveness of CSC and ELISA for laboratory confirmation of the diagnosis of tick-borne rickettsiosis.
С целью сравнения эффективности РСК и ИФА в качестве лабораторных тестов, подтверждающих диагноз «клещевой риккетсиоз», параллельно двумя методами исследованы сыворотки крови от больных КР.In order to compare the effectiveness of CSC and ELISA as laboratory tests confirming the diagnosis of tick-borne rickettsiosis, serum from patients with CR was studied in parallel with two methods.
Сравнительная оценка РСК и ИФА показывает, что оба метода обладают высокой специфичностью, однако, РСК значительно уступает ИФА в чувствительности, особенно при исследовании парных сывороток (52,9% и 91,7% соответственно), что имеет важное диагностическое значение.A comparative assessment of CSC and ELISA shows that both methods are highly specific, however, CSC is significantly inferior to ELISA in sensitivity, especially in the study of paired sera (52.9% and 91.7%, respectively), which is of great diagnostic value.
Claims (1)
(ОПКК+ОПОК)/2+0,2,
где 0,2 - коэффициент, определяемый методом статистической обработки,
ОПКК - оптическая плотность контроля конъюгата,
ОПОК - оптическая плотность отрицательного контроля. A method for laboratory diagnosis of tick-borne rickettsiosis, which consists in determining immunoglobulins of classes M and G to the causative agent of tick-borne rickettsiosis (Rickettsia sibirica) in the blood serum of patients by enzyme-linked immunosorbent assay using diagnostic antigen and evaluating the results of optical density, characterized in that as an antigen for sensitization the polystyrene wells of the tablet use a rickettsial Sibirika diagnosticum dry for CSC, in the case of determining immunoglobulins M as a conjug ata polyclonal rabbit immunoglobulins are used against human immunoglobulins labeled with horseradish peroxidase; in case of determination of immunoglobulins G, rabbit polyclonal immunoglobulins against human immunoglobulins G labeled with horseradish peroxidase are used as the conjugate, and the results are calculated spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm, if the optical density of the analyzed serum is higher than the value calculated by the formula:
(OP KK + OP OK ) / 2 + 0.2,
where 0.2 is the coefficient determined by the method of statistical processing,
OP KK - optical density control conjugate,
OP OK - the optical density of the negative control.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010134106/10A RU2477860C2 (en) | 2010-08-13 | 2010-08-13 | Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010134106/10A RU2477860C2 (en) | 2010-08-13 | 2010-08-13 | Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010134106A RU2010134106A (en) | 2012-02-20 |
RU2477860C2 true RU2477860C2 (en) | 2013-03-20 |
Family
ID=45854307
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010134106/10A RU2477860C2 (en) | 2010-08-13 | 2010-08-13 | Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2477860C2 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2726484C1 (en) * | 2019-04-29 | 2020-07-14 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for rickettsial diseases group of spotted fever, immunoassay diagnostic test system for implementation thereof |
RU2728340C1 (en) * | 2019-12-20 | 2020-07-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for producing a set of fluorescent rickettsial and query fever diagnosticums and use thereof for serological diagnosis of rickettsiosis and query fever, a serological diagnostic technique |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2198922C2 (en) * | 2001-03-29 | 2003-02-20 | Вирусологический центр научно-исследовательского института микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Strain of hybrid cells r1/s-5a6 of animals mus musculus l producing monoclonal antibody raised to rickettsia prowazekii |
CN1616968A (en) * | 2004-09-30 | 2005-05-18 | 浙江大学 | Quick detecting near river oyster pathogenic rickettsiosis by indirect ELISA method |
-
2010
- 2010-08-13 RU RU2010134106/10A patent/RU2477860C2/en active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2198922C2 (en) * | 2001-03-29 | 2003-02-20 | Вирусологический центр научно-исследовательского института микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Strain of hybrid cells r1/s-5a6 of animals mus musculus l producing monoclonal antibody raised to rickettsia prowazekii |
CN1616968A (en) * | 2004-09-30 | 2005-05-18 | 浙江大学 | Quick detecting near river oyster pathogenic rickettsiosis by indirect ELISA method |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ШПЫНОВ С.Н. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антигенов риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки и обоснование ее применения в системе эпидемиологического надзора за клещевым риккетсиозом. - Омск, 1999, Автореф. дисс., стр.1-23. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2726484C1 (en) * | 2019-04-29 | 2020-07-14 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for rickettsial diseases group of spotted fever, immunoassay diagnostic test system for implementation thereof |
RU2728340C1 (en) * | 2019-12-20 | 2020-07-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for producing a set of fluorescent rickettsial and query fever diagnosticums and use thereof for serological diagnosis of rickettsiosis and query fever, a serological diagnostic technique |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2010134106A (en) | 2012-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7258994B2 (en) | Saliva immunoassay for detection of antibodies for cardiovascular disease | |
AU2012207267B2 (en) | Methods and apparatus for detection of gluten sensitivity, and its differentiation from celiac disease | |
JP5660027B2 (en) | Crohn's disease diagnostic reagent | |
Yu et al. | Distinction between bacterial and viral infections by serum measurement of human neutrophil lipocalin (HNL) and the impact of antibody selection | |
RU2477860C2 (en) | Laboratory diagnostic technique for tick typhus with use of enzyme-linked immunoelectrodiffusion assay for detecting antibodies to rickettsia sibirica antigen | |
Imafuku et al. | Reactivity of agalactosyl IgG with rheumatoid factor | |
RU2314534C1 (en) | Method for diagnosing rheumatic uveitis cases | |
Beck et al. | Discriminating acute from chronic human schistosomiasis mansoni | |
Darelid et al. | Legionella pneumophila serogroup 1 antibody kinetics in patients with Legionnaires' disease: implications for serological diagnosis | |
RU2572717C1 (en) | Immune diagnostic technique for diseases caused by helicobacter pylori infection | |
JP5830771B2 (en) | Parasite detection method and kit | |
JP4577083B2 (en) | How to diagnose Crohn's disease | |
RU2726484C1 (en) | Diagnostic technique for rickettsial diseases group of spotted fever, immunoassay diagnostic test system for implementation thereof | |
Bahgat et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay with worm vomit and cercarial secretions of Schistosoma mansoni to detect infections in an endemic focus of Burkina Faso | |
RU2205409C2 (en) | Method for serodiagnostics of early neurosyphilis | |
Al-Rawazq et al. | Seroprevalence of celiac disease among children in Baghdad, Iraq | |
Anggraini et al. | Western Blot Analysis to Detect Cross-reaction in Toxocara vitulorum Protein with Anti-Mecistocirrus digitatus Serum | |
Velasco Rodríguez-Belvís et al. | P201 Faecal calprotectin in healthy children: are there factors affecting levels other than age? | |
RU2247383C2 (en) | Method for serological diagnosis of chlamydium conjunctivitis | |
RU2157536C1 (en) | Differential diagnosis method for identifying the cases of early latent syphilis and false positive serologic syphilis tests | |
EP3298028B1 (en) | Method for detecting and measuring endogenous complexes as a new tumour marker | |
RU2291437C2 (en) | Method for carrying out monitoring of diabetes mellitus patients state and neurological and vascular complications development | |
Gabriel et al. | New para-clinical investigations in the celiac disease | |
RU2429480C1 (en) | Diagnostic technique for pseudotuberculosis | |
SU1767435A1 (en) | Method of immunoenzymodiagnosis of yersinioses |