RU2477635C1 - Способ получения инцистерола - Google Patents
Способ получения инцистерола Download PDFInfo
- Publication number
- RU2477635C1 RU2477635C1 RU2012104911/15A RU2012104911A RU2477635C1 RU 2477635 C1 RU2477635 C1 RU 2477635C1 RU 2012104911/15 A RU2012104911/15 A RU 2012104911/15A RU 2012104911 A RU2012104911 A RU 2012104911A RU 2477635 C1 RU2477635 C1 RU 2477635C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- separated
- organic layer
- evaporated
- dissolved
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области органической химии, а именно к области получения производных стерола, и может быть использовано при получении 4-hydroxy-17R-methylincisterol из эргостерола с использованием фотоизомеризации. При реализации способа растворяют навеску эргостерола в слабополярном растворителе при освещении раствора оптическим излучением в диапазоне ближнего УФ. Полученный раствор разделяют хроматографически. Собирают фракцию, обладающую цитотоксичностью для раковых клеток линии HeLa и клеток миелоидного лейкоза человека. Доводят величину pH до нейтрального значения и упаривают до появления опалесценции раствора. Добавляют слабополярный растворитель, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке. Органический слой упаривают и растворяют, полученный раствор разделяют с использованием аналитической ВЭЖХ с последующей очисткой и выделением инцистерола. Изобретение обеспечивает возможность получения препарата 4-hydroxy-17R-methylincisterol способом химического синтеза. 9 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к области органической химии, а именно - к области получения производных стерола, и может быть использовано при получении 4-hydroxy-17R-methylincisterol из эргостерола с использованием фотоизомеризации.
Известен (RU, патент 2435599) способ приготовления препарата, влияющего на тканевой обмен, включающий глубинное культивирование гриба Pleurotus 1137 (ВКПМ, F-819) с последующим отделением мицелия от культуральной жидкости и выделением из мицелия экстракцией этанолом при кислом значении pH среды низкомолекулярных от 100 до 500 дальтон биологически активных веществ с последующим выделением из них дихлорметаном производной стерола 4-hydroxy-17R-methylincisterol с установленным молекулярным весом 332,2452 и брутто-формулой C21H32O3.
Недостатком известного способа следует признать сложность выделения целевого продукта из культуральной жидкости культивирования гриба Pleurotus 1137 (ВКПМ, F-819).
В ходе проведения патентно-информационного поиска не выделен источник информации, который мог бы быть использован в качестве ближайшего аналога.
Техническая задача, решаемая в ходе настоящей работы, состоит в разработке способа синтеза препарата инцистерола (4-hydroxy-17R-methylincisterol).
Технический результат, получаемый при реализации разработанного способа, состоит в обеспечении возможности получения препарата 4-hydroxy-17R-methylincisterol способом химического синтеза.
Для достижения указанного технического результата предложено использовать разработанный способ химического синтеза препарата 4-hydroxy-17R-methylincisterol. Согласно разработанному способу растворяют навеску эргостерола в слабополярном растворителе при освещении раствора оптическим излучением в диапазоне ближнего УФ, полученный раствор разделяют хроматографически, собирают фракцию, обладающую цитотоксичностью для раковых клеток линии HeLa и клеток миелоидного лейкоза человека, доводят величину pH до нейтрального значения и упаривают до появления опалесценции раствора, к оставшемуся раствору добавляют слабополярный растворитель, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке, органический слой упаривают и растворяют, полученный раствор разделяют с использованием аналитической ВЭЖХ с последующей очисткой и выделением инцистерола (4-hydroxy-17R-methylincisterol).
Предпочтительно раствор освещают оптическим излучением с длиной волны 210-350 нм при мощности оптического излучения 250 Ватт.
В большинстве вариантов реализации способа в качестве растворителя эргостерола используют хлористый метилен, хлороформ, метанол, этанол. Однако приведенный перечень не исчерпывает возможные варианты выбора растворителя.
Предпочтительно навеску эргостерола растворяют в слабополярном растворителе и облучают ближним УФ с длиной волны при постоянном перемешивании на магнитной мешалке или при пробулькивании воздухом при температуре 6-8°C в течение 5-10 часов с последующим упариванием раствора на роторном испарителе без подогрева и растворением полученного остатка в 96% этаноле.
В некоторых вариантах реализации хроматографическое разделение облученного раствора эргостерола проводят на полупрепаративной ВЭЖХ-системе Gilson, состоящей из 2-х насосов с головками 25SC, манометрического модуля, смесителя, инжектора с петлей 500 мкл, колоночного термостата и делителя потока (1:10), УФ-детектора с переменной длиной волны и управляющей программы.
Обычно для продолжения синтеза отбирают фракцию, обладающую цитотоксичностью для раковых клеток линии HeLa и клеток миелоидного лейкоза человека, выражающуюся в индукции апоптоза в концентрациях 1-100 мкг/мл среды инкубации.
В некоторых вариантах реализации упаривание отобранной фракции с нейтральным pH проводят на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему.
В большинстве вариантов реализации разработанного способа органический слой после делительной воронки упаривают на роторном испарителе без нагревания и остаток растворяют в 96% этанола.
Предпочтительно полученный раствор инцистерола разделяют с использованием аналитической ВЭЖХ на системе Agalint 1100, состоящей из четырехканального насоса с дегазатором, колоночного термостата, автосамплера, диодно-матричного УФ-детектора и управляющей программы ChemStstion.
В большинстве вариантов реализации на стадии выделения и очистки фракцию, содержащую инцистерол, собирают и упаривают на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему до появления опалесценции раствора, к оставшемуся раствору добавляют объем хлористого метилена, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке, органический слой упаривают на роторном испарителе без нагревания с последующим растворяют в хлористом метилене и сушке в эксикаторе.
На практике способ реализуют следующим образом.
1 г эргостерола растворяют в 100 мл хлористого метилена (или хлороформа, или этанола) и облучают УФ-светом с длиной волны 210-350 нм при постоянном перемешивании на магнитной мешалке, или при пробулькивании воздухом при температуре 6-8°C в течение 5-10 часов. Затем раствор упаривают на роторном испарителе без подогрева. Остаток растворяют в 96% этаноле в концентрации 100 мг/мл.
Полученный раствор (аликвоты по 400 мкл) разделяют хроматографически на полупрепаративной ВЭЖХ-системе Gilson, состоящей из 2-х насосов с головками 25SC, манометрического модуля, смесителя, инжектора с петлей 500 мкл, колоночного термостата и делительного потока (1:10), УФ-детектора с переменной длиной волны и управляющей программы. Используется полупрепаративная колонка 24×250 мм с сорбентом Диасорб С16Т (10 мкм). Состав подвижной фазы: 96% этанол: 0.1% ТФУ в воде / 60:40, при скорости потока 10 мл/мин и температуре 30°C. Возможно использование аналогичной хроматографической системы и аналогичной обращенно-фазной колонки. Время анализа - 40 мин, детектирование при длине волны 230 нм, интересующий пик имеет время удерживания 20-25 мин.
Фракцию, содержащую интересующий пик, собирают, добавляют 305 раствор аммиака до нейтрального значения pH 6-8 и упаривают на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему до появления опалесценции раствора. К оставшемуся раствору добавляют равный объем хлористого метилена, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке. Органический слой упаривают на роторном испарителе без нагревания и растворяют в 1 мл 96% этанола. Полученный раствор (аликвоты по 100 мкл) разделяют с помощью аналитической ВЭЖХ на системе Agalint 1100, состоящей из четырехканального насоса с дегазатором, колоночного термостата, автосамплера, диодно-матричного УФ-детектора и управляющей программы ChemStstion. Была использована аналитическая колонка 4.6×250 мм с сорбентом Luna C18(2) (5 мкм). Возможно использование аналогичной хроматографической системы и аналогичной обращенно-фазной колонки.
Состав подвижной фазы: ацетонирил: вода / 79:21, при скорости потока 1 мл/мин и температуре 25°C. Время анализа - 21 мин, детектирование при длине волны 230 нм, интересующий пик имеет время удержания 15-18 мин. Фракцию, содержащую интересующий пик, собирают и упаривают на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему до появления опалесценции раствора. К оставшемуся раствору добавляют равный объем хлористого метилена. Экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке. Органический слой упаривают на роторном испарителе без нагревания. Растворяют в 1 мл хлористого метилена и сушат в эксикаторе. Выход составляет 1-2 мг инцистерола.
Claims (10)
1. Способ получения инцистерола, характеризуемый тем, что растворяют навеску эргостерола в слабополярном растворителе при освещении раствора оптическим излучением в диапазоне ближнего УФ, полученный раствор разделяют хроматографически, собирают фракцию, обладающую цитотоксичностью для раковых клеток линии HeLa и клеток миелоидного лейкоза человека, доводят величину pH до нейтрального значения и упаривают до появления опалесценции раствора, к оставшемуся раствору добавляют слабополярный растворитель, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке, органический слой упаривают и растворяют, полученный раствор разделяют с использованием аналитической ВЭЖХ с последующей очисткой и выделением инцистерола.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что раствор освещают оптическим излучением с длиной волны 210-350 нм.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют хлористый метилен, хлороформ, метанол, этанол.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что навеску эргостерола растворяют в слабополярном растворителе и облучают ближним УФ с длиной волны при постоянном перемешивании на магнитной мешалке или при пробулькивании воздухом при температуре 6-8°C в течение 5-10 ч с последующим упариванием раствора на роторном испарителе без подогрева и растворением полученного остатка в 96% этаноле.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что хроматографическое разделение раствора эргостерола проводят на полупрепаративной ВЭЖХ-системе Gilson, состоящей из 2-х насосов с головками 25SC, манометрического модуля, смесителя, инжектора с петлей 500 мкл, колоночного термостата и делительного потока (1:10), УФ-детектора с переменной длиной волны и управляющей программы.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что отбирают фракцию, обладающую цитотоксичностью для раковых клеток линии HeLa и клеток миелоидного лейкоза человека, выражающейся в индукции апоптоза в концентрациях 1-100 мкг/мл среды инкубации.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что упаривание фракции с нейтральным pH проводят на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что органический слой упаривают на роторном испарителе без нагревания и остаток растворяют в 96% растворе этанола.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что полученный раствор инцистерола разделяют с использованием аналитической ВЭЖХ на системе Agalint 1100, состоящей из четырехканального насоса с дегазатором, колоночного термостата, автосамплера, диодно-матричного УФ-детектора и управляющей программы ChemStstion.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что на стадии выделения и очистки фракцию, содержащую инцистерол, собирают и упаривают на роторном испарителе при температуре 45-55°C на 2/3 по объему до появления опалесценции раствора, к оставшемуся раствору добавляют объем хлористого метилена, экстрагируют и органический слой отделяют на делительной воронке, органический слой упаривают на роторном испарителе без нагревания с последующим растворением в хлористом метилене и сушкой в эксикаторе.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012104911/15A RU2477635C1 (ru) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Способ получения инцистерола |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2012104911/15A RU2477635C1 (ru) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Способ получения инцистерола |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2477635C1 true RU2477635C1 (ru) | 2013-03-20 |
Family
ID=49124375
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012104911/15A RU2477635C1 (ru) | 2012-02-14 | 2012-02-14 | Способ получения инцистерола |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2477635C1 (ru) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01246299A (ja) * | 1988-03-28 | 1989-10-02 | Nichirei Corp | エルゴステロール誘導体およびその製法 |
EP1330999A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-30 | Sakamoto Bio Co. Ltd. | Melanogenesis inhibitors and whitening agents comprising ergosterol derivative and compositions containing ergosterol derivative |
JP2005073502A (ja) * | 2003-08-29 | 2005-03-24 | National Food Research Institute | アポトーシス誘導能を有する食品又は食品素材 |
US20090170822A1 (en) * | 2007-12-28 | 2009-07-02 | Deluca Hector F | 2-Methylene-20-Methyl-19,24,25,26,27-Pentanor-Vitamin D Analogs |
US20100143452A1 (en) * | 2006-12-11 | 2010-06-10 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | Polyphenol containing compositions |
RU2435599C1 (ru) * | 2010-07-21 | 2011-12-10 | Валерий Павлович Герасименя | ПРЕПАРАТ 4-Hydroxy-17R-Methylincisterol, ВЛИЯЮЩИЙ НА ТКАНЕВОЙ ОБМЕН, И ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММА ГРИБА Pleurotus 1137 ДЛЯ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ |
-
2012
- 2012-02-14 RU RU2012104911/15A patent/RU2477635C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01246299A (ja) * | 1988-03-28 | 1989-10-02 | Nichirei Corp | エルゴステロール誘導体およびその製法 |
EP1330999A1 (en) * | 2000-10-11 | 2003-07-30 | Sakamoto Bio Co. Ltd. | Melanogenesis inhibitors and whitening agents comprising ergosterol derivative and compositions containing ergosterol derivative |
JP2005073502A (ja) * | 2003-08-29 | 2005-03-24 | National Food Research Institute | アポトーシス誘導能を有する食品又は食品素材 |
US20100143452A1 (en) * | 2006-12-11 | 2010-06-10 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | Polyphenol containing compositions |
US20090170822A1 (en) * | 2007-12-28 | 2009-07-02 | Deluca Hector F | 2-Methylene-20-Methyl-19,24,25,26,27-Pentanor-Vitamin D Analogs |
RU2435599C1 (ru) * | 2010-07-21 | 2011-12-10 | Валерий Павлович Герасименя | ПРЕПАРАТ 4-Hydroxy-17R-Methylincisterol, ВЛИЯЮЩИЙ НА ТКАНЕВОЙ ОБМЕН, И ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММА ГРИБА Pleurotus 1137 ДЛЯ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Xie et al. | Separation and purification of echinacoside from Penstemon barbatus (Can.) Roth by recycling high-speed counter-current chromatography | |
Zhou et al. | Large-scale isolation and purification of geniposide from the fruit of Gardenia jasminoides Ellis by high-speed counter-current chromatography | |
CN109824568B (zh) | 马齿苋中两种吲哚类新生物碱化合物及其提取分离方法与应用 | |
Pinzon et al. | Isolation and characterization of antimicrobial, anti-inflammatory and chemopreventive flavones from Premna odorata Blanco | |
Zhang et al. | Analysis of free fatty acids in Notopterygium forbesii Boiss by a novel HPLC method with fluorescence detection | |
Li et al. | Bioassay-guided separation and purification of water-soluble antioxidants from Carthamus tinctorius L. by combination of chromatographic techniques | |
Ayanlowo et al. | UHPLC-DPPH method reveals antioxidant tyramine and octopamine derivatives in Celtis occidentalis | |
Rueda et al. | Identification of dihydrostilbenes in Pholidota chinensis as a new scaffold for GABAA receptor modulators | |
Wang et al. | pH-gradient counter-current chromatography isolation of natural antioxidant chlorogenic acid from Lonicera japonica Thumb. using an upright coil planet centrifuge with three multi-layer coils connected in series | |
CN106929006A (zh) | 一种以萘酰亚胺为母核的识别半胱氨酸和同型半胱氨酸荧光探针及其制备与应用 | |
Amelia et al. | Two new bisindole alkaloids from Tabernaemontana macrocarpa Jack | |
Dang et al. | Large-scale preparative isolation of bergenin standard substance from Saxifraga atrata using polyamide coupled with MCI GEL® CHP20P as stationary phases in medium pressure chromatography | |
Liu et al. | A highly sensitive coupling technique for the determination of trace quercetin based on solid substrate room temperature phosphorimetry and poly (vinyl alcohol) complex imprinting | |
Czejka et al. | Determination of thalidomide and its major metabolites by high-performance liquid chromatography | |
Mitani et al. | Process for the purification of cis-p-coumaric acid by cellulose column chromatography after the treatment of the trans isomer with ultraviolet irradiation | |
Wang et al. | HPLC determination of five polyphenols in rat plasma after intravenous administrating hawthorn leaves extract and its application to pharmacokinetic study | |
RU2477635C1 (ru) | Способ получения инцистерола | |
Noula et al. | Solid-phase extraction for purification of alkannin/shikonin samples and isolation of monomeric and dimeric fractions | |
CN102898502B (zh) | 香豆素衍生物及其制备方法和应用 | |
RU2308267C1 (ru) | Способ выделения биологически активных изомеров дигидрокверцетина | |
Dong et al. | Effect of inorganic salt on partition of high‐polarity parishins in two‐phase solvent systems and separation by high‐speed counter‐current chromatography from Gastrodia elata Blume | |
CN108456515B (zh) | 一种具有非对称半花菁结构的新型荧光探针及其制备方法和应用 | |
CN109251161B (zh) | 2-亚硫酸氢色氨酸的制备方法 | |
CN105078938B (zh) | 大环吉马烷型倍半萜类化合物在制备抗补体药物中的用途 | |
Peng et al. | A comparative study of chromatographic methods for separating chemical compounds from Spiranthes australis (R. Brown) Lindl roots |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140215 |