RU2473689C1 - Tick-borne encephalitis virus inhibitor - Google Patents
Tick-borne encephalitis virus inhibitor Download PDFInfo
- Publication number
- RU2473689C1 RU2473689C1 RU2011137011/10A RU2011137011A RU2473689C1 RU 2473689 C1 RU2473689 C1 RU 2473689C1 RU 2011137011/10 A RU2011137011/10 A RU 2011137011/10A RU 2011137011 A RU2011137011 A RU 2011137011A RU 2473689 C1 RU2473689 C1 RU 2473689C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- jrc
- tick
- borne encephalitis
- lcd lcd
- virus
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к вирусологии и может найти применение в медицине.The invention relates to virology and may find application in medicine.
Наиболее полно изучена противовирусная активность аналогов природных нуклеозидов. Обобщение работ по ингибирующей активности рибавирина на репродукцию вирусов выполнена R.A.Smith с соавт.(Clinical application of Ribavirin. Ads. by R.A.Smith, V.Knight, J.A.D.Smith. Academic Press Inc, New York, December 1984, 222 pages). В ходе экспериментов было установлено, что рибавирин подавляет репродукцию вирусов, влияя на стадию, следующую за синтезом вирусных РНК и белков. Однако, как было установлено, влияние рибавирина на репродукцию флавивирусов или отсутствует, или сомнительно (Л.К.Березина. Химиопрофилактика и химиотерапия. В книге "Арбовирусы и арбовирусные инфекции". Ред. Львов Д.К, Клименко С.М., Гайдамович С.Я. - М.: Медицина, 1989. - с.156-163). Клещевой энцефалит - острое тяжелое инфекционное заболевание, часто протекающее с поражением центральной нервной системы, вызываемое вирусом клещевого энцефалита (КЭ) семейства Flaviviridae, широко распространенного на территории России и Европы. Единственным клинически апробированным, рекомендованным препаратом, применяемым для лечения КЭ, является йодантипирин (Лепехин А.В., Лукашова Л.В., Жукова Н.Г., Бужак Н.С., Добкина М.Н. Лечение клещевого энцефалита, иксодовых клещевых боррелиозов и других клещевых инфекций. Методические рекомендации для врачей. Издание 2, Томск, 2009, 13 стр.). Йодантипирин не является противовирусным средством, а относится к индукторам интерферона. Однако в случае невозможности индукции собственного интерферона у больного, йодатипипирин не окажет воздействия на течение болезни у человека, уже заболевшего (Худолей В.Н., Замятина Е.В., Кропоткина Е.А., Лукашова Л.В., Лепехин А.В., Данчинова Г.А., Злобин В.И. Результаты исследования эпидемиологической эффективности йодантипирина как средства экстренной профилактики клещевого энцефалита. Материалы 5-й Межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы неврологии". Новосибирск, 26-27 ноября, 2008 г., с.205-209).The antiviral activity of analogues of natural nucleosides has been most fully studied. Clinical application of Ribavirin. Ads. By R.A.Smith, V.Knight, J.A.D.Smith. Academic Press Inc, New York, December 1984, 222 pages summarized the work on the inhibitory activity of ribavirin on virus reproduction. In the course of experiments, it was found that ribavirin inhibits the reproduction of viruses, affecting the stage following the synthesis of viral RNA and proteins. However, it was found that the effect of ribavirin on the reproduction of flaviviruses is either absent or doubtful (L.K. Berezina. Chemoprophylaxis and chemotherapy. In the book “Arboviruses and arbovirus infections.” Ed. Lvov D.K., Klimenko S.M., Gaidamovich S.Ya. - M .: Medicine, 1989. - p.156-163). Tick-borne encephalitis is an acute, serious infectious disease, often occurring with damage to the central nervous system, caused by tick-borne encephalitis virus (TBE) of the Flaviviridae family, which is widespread in Russia and Europe. The only clinically approved drug recommended for the treatment of TBE is iodantipyrine (Lepekhin A.V., Lukashova L.V., Zhukova N.G., Buzhak N.S., Dobkina M.N. Treatment of tick-borne encephalitis, tick-borne tick-borne Borreliosis and other tick-borne infections. Guidelines for doctors. Edition 2, Tomsk, 2009, 13 pages). Iodantipyrine is not an antiviral agent, but refers to interferon inducers. However, if it is impossible to induce intrinsic interferon in a patient, iodatipipyrine will not affect the course of the disease in a person who is already ill (Khudoley V.N., Zamyatina E.V., Kropotkina E.A., Lukashova L.V., Lepekhin A. V., Danchinova G.A., Zlobin V.I. Results of the study of the epidemiological effectiveness of iodantipyrine as a means of emergency prevention of tick-borne encephalitis.Materials of the 5th Interregional scientific-practical conference "Actual issues of neurology." Novosibirsk, November 26-27, 2008 ., p.205-209).
Задачей изобретения является подавление вирусной активности клещевого энцефалита в клетках.The objective of the invention is the suppression of the viral activity of tick-borne encephalitis in cells.
Задача достигается тем, что в качестве ингибитора вируса клещевого энцефалита в клетках in vitro применяют L-лизин-α-оксидазу Trichoderma harzianum Rifai, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № F-180 (Москва, Дорожный 1-й проезд, д.1, ФГУПГосНИИгенетики, 1982 г.).The objective is achieved by the fact that as an inhibitor of tick-borne encephalitis virus in cells in vitro, L-lysine-α-oxidase Trichoderma harzianum Rifai is used, deposited in the All-Russian collection of industrial microorganisms under number F-180 (Moscow, Dorozhny 1-y passage, 1 , FSUE State Research Institute of Genetics, 1982).
Морфолого-биохимическая характеристика штамма.Morphological and biochemical characteristics of the strain.
Штамм Trichoderma harzianum Rifai на среде сусло-агар образует колонии быстрорастущие. Мицелий гриба бесцветный, септированный, распростертый. На 4-5 сутки роста появляются дерновинки с конидиеносцами, подушковидные, сначала белые, со временем желтого или темно-зеленого цвета. Фиалиды бутыльчатые /9-12µ/, расположены мутовками по 3 и более. На каждой фиалиде образуются конидии, склеенные в головку. Конидии гриба округлые, гладкие, мелкие /3-5µ/, в проходящем свете бледно-зеленые, а в массе - темные.The strain Trichoderma harzianum Rifai on wort-agar medium forms fast-growing colonies. The fungal mycelium is colorless, septate, prostrate. On 4-5 days of growth, there are turfs with conidiophores, cushion-shaped, initially white, with a yellow or dark green color over time. Bottle phialides / 9-12µ /, located in whorls of 3 or more. Conidia glued into the head form on each phialid. The conidia of the fungus are round, smooth, small / 3-5µ /, in transmitted light pale green, and in the mass - dark.
На агаризованной среде Чапека колонии штамма-продуцента быстрорастущие, но слабо спороносящие. Штамм хорошо растет на среде Чапека, однако лучший рост наблюдается на среде сусло-агар. Агар и желатину не разжижает, молоко не пептонизирует. Аэробный гриб. Температурный оптимум +28-+29°С. На картофельно-декстрозном агаре наблюдается снижение интенсивности роста, образование воздушного мицелия и спороношения. Оптимальные условия роста гриба при рН 4-6, однако может расти и при рН от 1,5 до 9.On Chapek’s agar medium, the colonies of the producer strain are rapidly growing, but slightly spore-bearing. The strain grows well on the Chapek medium, but the best growth is observed on the wort-agar medium. Agar does not dilute gelatin, milk does not peptone. Aerobic mushroom. Temperature optimum + 28- + 29 ° С. On potato-dextrose agar there is a decrease in growth intensity, the formation of aerial mycelium and sporulation. Optimum conditions for the growth of the fungus at pH 4-6, however, can grow at pH from 1.5 to 9.
Trichoderma harziatum Rifai в одинаковой степени усваивает как аммонийные, так и азотнокислые соли. Лучшим источником азота из органических соединений является пептон. Хорошо растет на средах с аспарагином и с глутаминовой кислотой. Лучшими источниками углерода являются ксилоза, глюкоза, сахароза, лактоза, галактоза, маннит, крахмал. На средах с этими сахарами наблюдается интенсивный рост. Слабо усваиваются спирты метиловый, этиловый, дульцит. Хорошо усваивает в качестве источника углерода пшеничные отруби. Инокулят гриба, выросший на среде с пшеничными отрубями, дает положительный результат при использовании его при ферментации на средах разного состава и является индуктором биосинтеза L-лизин-α-оксидазы.Trichoderma harziatum Rifai equally assimilates both ammonium and nitrate salts. The best source of nitrogen from organic compounds is peptone. It grows well on media with asparagine and with glutamic acid. The best sources of carbon are xylose, glucose, sucrose, lactose, galactose, mannitol, and starch. On media with these sugars, intense growth is observed. Alcohols are poorly absorbed methyl, ethyl, dulcite. It assimilates wheat bran well as a carbon source. The inoculum of the fungus grown on a medium with wheat bran gives a positive result when used in fermentation on media of different compositions and is an inducer of the biosynthesis of L-lysine-α-oxidase.
Штамм Trichoderma harzianum Rifai обладает L-лизин-α-оксидазной активностью. Активность L-лизин-α-оксидазы в культуральной жидкости Trichoderma harzianum Rifai рассчитывали по приросту Н2О2, количество которой определяли спектрофотометрическим ортодиазидиновым микрометодом. Сущность метода заключается во взаимодействии всей образующейся в реакции Н2О2 с О-дианизидингидрохлоридом. Инкубационная смесь содержала 20 мкг пероксидазы, 250 мкг О-дианизидингидрохлорида и 0.1-0,5 мг белка в 1 мл конечного объема. После 20 минут инкубирования в термостате при температуре +37°С пробы охлаждали до +4°С. Оптическую плотность окрашенных растворов опытной и контрольной (без субстрата) проб измеряли на спектрофотометре СФ-16 при 540 нм против второй контрольной пробы (без пероксидазы).The strain Trichoderma harzianum Rifai has L-lysine-α-oxidase activity. The activity of L-lysine-α-oxidase in the Trichoderma harzianum Rifai culture fluid was calculated by the increase in H 2 O 2 , the amount of which was determined by a spectrophotometric orthodiazidine micromethod. The essence of the method is the interaction of all that is formed in the reaction of H 2 O 2 with O-dianisidine hydrochloride. The incubation mixture contained 20 μg of peroxidase, 250 μg of O-dianisidine hydrochloride and 0.1-0.5 mg of protein in 1 ml of the final volume. After 20 minutes of incubation in a thermostat at a temperature of + 37 ° С, the samples were cooled to + 4 ° С. The optical density of the colored solutions of the experimental and control (without substrate) samples was measured on an SF-16 spectrophotometer at 540 nm against the second control sample (without peroxidase).
Для построения калибровочной кривой молярность свежеприготовленного раствора Н2О2 определяли перманганатометрией. Субстратами служили L и DL-формы аминокислот («Reanal», Венгрия). Применяли 0,05 М фосфатный буфер. В качестве катализатора пероксидазной реакции использовали пероксидазу фирмы «Reanal», а в качестве донора протонов - О-дианизидингидрохлорид («Merck»,ФРГ). За единицу активности принимали количество фермента, катализирующего образование 1 мкмоль Н2О2 за 1 мин при температуре +37°С.To build a calibration curve, the molarity of a freshly prepared H 2 O 2 solution was determined by permanganometry. L and DL forms of amino acids served as substrates (Reanal, Hungary). Used 0.05 M phosphate buffer. Reanal peroxidase was used as a peroxidase reaction catalyst, and O-dianisidine hydrochloride (Merck, Germany) was used as a proton donor. The unit of activity was taken as the amount of enzyme that catalyzes the formation of 1 μmol H 2 O 2 for 1 min at a temperature of + 37 ° C.
Удельную активность фермента выражали числом единиц активности на 1 мг белка или 1 мл культуральной жидкости. Белок определяли по методу Лоури. В качестве стандарта использовали 0.05%-ный раствор кристаллического бычьего альбумина («Reanal», Венгрия).The specific activity of the enzyme was expressed by the number of units of activity per 1 mg of protein or 1 ml of culture fluid. Protein was determined by the Lowry method. A 0.05% solution of crystalline bovine albumin (Reanal, Hungary) was used as a standard.
Для оценки чистоты препарата использовали электрофорез в 10% ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия, а также капиллярный электрофорез на установке Капель 105 производства фирмы Люмекс (Санкт-Петербург).To assess the purity of the drug, we used electrophoresis in 10% PAAG in the presence of sodium dodecyl sulfate, as well as capillary electrophoresis on the Drops 105 device manufactured by Lumex (St. Petersburg).
Условия культивирования штамма Trichoderma harzianum RifaiThe cultivation conditions of the strain Trichoderma harzianum Rifai
Ферментация штамма № F-180 производилась на оборудовании Опытной технологической установки ИБФМ РАН им. Г.К.Скрябина (г.Пущино).Fermentation of strain No. F-180 was performed on the equipment of the Experimental Technological Installation of IBPM RAS named after G.K.Skryabin (Pushchino city).
Использовали ферментер типа БИОР-01 производства ОКБ ТБМ, г.Кириши, объемом 100 л с коэффициентом заполнения 0,6. Ферментер оснащен магнитной мешалкой, фильтрами тонкой очистки воздуха, датчиками температуры и рН.Used a BIOR-01 type fermenter manufactured by OKB TBM, Kirishi, with a volume of 100 l with a fill factor of 0.6. The fermenter is equipped with a magnetic stirrer, fine filters, air, temperature and pH sensors.
Питательную среду готовили непосредственно в аппарате. Для этого в аппарат заливали 60 л водопроводной воды, вносили 1% пшеничных отрубей, стимулятор - 0,1%, 1,3% сульфат аммония, значение рН 5.8-6,0 устанавливали 10%-ным раствором НСl. Пшеничные отруби и стимулятор предварительно замачивали в 10 литрах воды в течение 4-х часов, стерилизовали в автоклаве 1 час при t° +125°C. Затем подготовленный ферментер засевали посевным материалом из колб. Посевная доза не менее 5%. Культивирование проводили при температуре +26°С, расход воздуха на протяжении всей ферментации 30 л в минуту, скорость вращения мешалки 200 оборотов в минуту. Величину рН в процессе роста корректировали до 6,5. Продолжительность выращивания составила 94-98 часов, конечные значения рН от 5,3 до 7.5.The nutrient medium was prepared directly in the apparatus. To do this, 60 l of tap water was poured into the apparatus, 1% of wheat bran was added, a stimulant - 0.1%, 1.3% ammonium sulfate, the pH value of 5.8-6.0 was set with a 10% HCl solution. Wheat bran and the stimulator were pre-soaked in 10 liters of water for 4 hours, sterilized in an autoclave for 1 hour at t ° + 125 ° C. Then the prepared fermenter was seeded with seed from flasks. Sowing dose of at least 5%. The cultivation was carried out at a temperature of + 26 ° C, air flow throughout the fermentation 30 l per minute, the speed of rotation of the mixer 200 rpm. The pH during the growth process was adjusted to 6.5. The duration of cultivation was 94-98 hours, the final pH values from 5.3 to 7.5.
По окончании ферментации культуральную жидкость направляли на участок предварительной очистки, где мицелий гриба отделяли фильтрованием под вакуумом на нутч-фильтре. Вес полученной биомассы составил 3,5 кг.Полученный нативный раствор подвергали дополнительному сепарированию на сепараторе типа ОСБ при 9000 об/мин в течение часа при температуре +2-+4°С. Затем нативный раствор в объеме 55 л, полученный после отделения биомассы, концентрировали до 1,5 л (концентрат).At the end of the fermentation, the culture fluid was sent to the pre-treatment section, where the mycelium of the fungus was separated by filtration under vacuum on a suction filter. The weight of the obtained biomass was 3.5 kg. The resulting native solution was subjected to additional separation on an OSB separator at 9000 rpm for an hour at a temperature of + 2- + 4 ° С. Then the native solution in a volume of 55 l, obtained after separation of the biomass, was concentrated to 1.5 l (concentrate).
Определение активности L-лизин-а-оксидазы в опытах in vitro на модели вируса клещевого энцефалитаDetermination of the activity of L-lysine a-oxidase in in vitro experiments on a model of tick-borne encephalitis virus
Опыты по определению противовирусной активности в отношении вируса КЭ были выполнены в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи SPEV. Источником заражения клеток служили вируссодержащие суспензии мозговой ткани инфицированных новорожденных белых мышей. Для приготовления разведений вируса и L-лизин-α-оксидазы использовалась питательная среда 199 (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН) с 1% эмбриональной телячьей сыворотки («High Clone», США) - поддерживающая среда. Готовили 10% мозговую суспензию, а затем последовательные 10-кратные разведения вируса (разведения от 10-2 до 10-8). Каждое разведение, начиная с верхнего горизонтального ряда (А), вносили по 100 мкл в лунки 96-луночных планшетов («Corning», США) с монослоем клеток SPEV. В ряд (Н) вносили поддерживающую среду без вируса. Контакт вируса с клетками проводили в течение 1 часа при +37°С. После инкубации вируссодержащую среду удаляли из планшета. В лунки с контрольным (сравнительным) титрованием - 4 вертикальных ряда (№9-12) - вносили поддерживающую среду, а в лунки, предназначенные для определения противовирусной активности, добавляли поддерживающую среду, содержащую L-лизин-α-оксидазу в концентрациях 25 мкг/мл (4 вертикальных ряда (№1-4)) и 12,5 мкг/мл (4 вертикальных ряда (№5-8)) (Табл.1).Experiments to determine the antiviral activity against the TBE virus were performed in a transplanted culture of kidney cells of the SPEV pig embryo. Virus-containing suspensions of the brain tissue of infected newborn white mice served as a source of cell infection. Nutrient medium 199 (MP Chumakov Institute of Polio and Viral Encephalitis named after MP Chumakov RAMS) with 1% fetal calf serum (“High Clone”, USA) was used to prepare dilutions of the virus and L-lysine-α-oxidase (“High Clone”, USA) - support medium. A 10% cerebral suspension was prepared, followed by successive 10-fold dilutions of the virus (dilutions from 10 -2 to 10 -8 ). Each dilution, starting from the upper horizontal row (A), was added 100 μl to the wells of 96-well plates (Corning, USA) with a monolayer of SPEV cells. In a series of (H) introduced a supportive environment without the virus. The contact of the virus with cells was carried out for 1 hour at + 37 ° C. After incubation, the virus-containing medium was removed from the plate. Supporting medium was added to the wells with control (comparative) titration - 4 vertical rows (No. 9-12), and supportive medium containing L-lysine-α-oxidase at a concentration of 25 μg / was added to the wells intended for determination of antiviral activity ml (4 vertical rows (No. 1-4)) and 12.5 μg / ml (4 vertical rows (No. 5-8)) (Table 1).
Инкубацию планшетов проводили в термостате с 5% содержанием СО2 при +37°С. Учет реакции проводили ежедневно в течение 7 дней, наблюдая за развитием ЦПД вируса на клетки (гибель клеток), просматривая лунки планшетов под инвертированным микроскопом ("Leitz", Германия). Титр вируса оценивали в lg ЦПД100. Было установлено, что титр вируса в контроле составил 8,0 lg ЦПД100, а с L-лизин-α-оксдазой как в концентрации 25 мкг/мл, так и 12,5 мкг/мл составил 5,0 lg ЦПД100 (Табл. 2).The plates were incubated in a thermostat with a 5% CO 2 content at + 37 ° C. The reaction was taken into account daily for 7 days, observing the development of the virus CPD on the cells (cell death), looking at the wells of the plates under an inverted microscope ("Leitz", Germany). The virus titer was evaluated in lg CPD 100 . It was found that the virus titer in the control was 8.0 lg CPD 100 , and with L-lysine-α-oxidase both at a concentration of 25 μg / ml and 12.5 μg / ml was 5.0 lg CPD 100 (Table . 2).
Так как в контрольном титровании вируса не удалось обнаружить ни одной живой клетки, то обнаружение живых клеток в лунках с L-лизин-α-оксидазой свидетельствует о ее противовирусной активности. Индекс противовирусной активности составил 3 lg. L-лизин-α-оксидаза в концентрациях менее 1,0 мкг/мл не активна, а в концентрациях более 25,0 мкг/мл обладает выраженным цитотоксическим действием.Since no living cells were found in the control titration of the virus, the detection of living cells in the wells with L-lysine-α-oxidase indicates its antiviral activity. The antiviral activity index was 3 lg. L-lysine-α-oxidase in concentrations of less than 1.0 μg / ml is not active, and in concentrations of more than 25.0 μg / ml has a pronounced cytotoxic effect.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011137011/10A RU2473689C1 (en) | 2011-09-08 | 2011-09-08 | Tick-borne encephalitis virus inhibitor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011137011/10A RU2473689C1 (en) | 2011-09-08 | 2011-09-08 | Tick-borne encephalitis virus inhibitor |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2473689C1 true RU2473689C1 (en) | 2013-01-27 |
Family
ID=48806986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011137011/10A RU2473689C1 (en) | 2011-09-08 | 2011-09-08 | Tick-borne encephalitis virus inhibitor |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2473689C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527899C1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | Inhibitor of andis virus of potato mottling |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995020650A1 (en) * | 1994-01-28 | 1995-08-03 | Irina Pavlovna Smirnova | Strain of trichoderma harzianum rifai, process for obtaining l-lysine-alpha-oxidase as an inhibitor of viral and bacterial activity, immunomodulator and skin healing agent |
| SU1520844A1 (en) * | 1987-03-02 | 1997-01-27 | Университет дружбы народов им.Патриса Лумумбы | PROCESS FOR PREPARING L-LYSINE-α-OXIDASE |
-
2011
- 2011-09-08 RU RU2011137011/10A patent/RU2473689C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1520844A1 (en) * | 1987-03-02 | 1997-01-27 | Университет дружбы народов им.Патриса Лумумбы | PROCESS FOR PREPARING L-LYSINE-α-OXIDASE |
| WO1995020650A1 (en) * | 1994-01-28 | 1995-08-03 | Irina Pavlovna Smirnova | Strain of trichoderma harzianum rifai, process for obtaining l-lysine-alpha-oxidase as an inhibitor of viral and bacterial activity, immunomodulator and skin healing agent |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| I P SMIRNOVA et al.: "Effect of L-lysine-alpha-oxidase gel on development of ophthalmic herpes and herpetic skin lesions in rabbit", Antibiot Khimioter 48(11):7-9 (2003) PMID: 15106305. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2527899C1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | Inhibitor of andis virus of potato mottling |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vollenbroich et al. | Antimycoplasma properties and application in cell culture of surfactin, a lipopeptide antibiotic from Bacillus subtilis | |
| Merz et al. | Isolation and characterization of a polyene-resistant variant of Candida tropicalis | |
| Ti et al. | Anticandidal activity of pyrimidine-peptide conjugates | |
| WO2006075395A1 (en) | β-LACTAM ANTIBIOTIC ACTIVITY ENHANCER AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME | |
| EP1536018B1 (en) | Culture and specific identification media for different species of Candida and analysis methods | |
| RU2473689C1 (en) | Tick-borne encephalitis virus inhibitor | |
| CN105754875B (en) | One plant of marine fungi Trichoderma harzianum DLEN2008005 and its application | |
| CN103283482B (en) | Cordyceps militaris, cultivation method and separation method | |
| US7939081B2 (en) | Method for producing cercosporamide | |
| JP3063930B2 (en) | Allosamidine compound and method for producing the same | |
| KR20140007425A (en) | Method for preparing cyclic lipopeptide compound | |
| EP2032712B1 (en) | Regulation of acid metabolite production | |
| NO179755B (en) | Process for the preparation of deoxymulundocandin | |
| RU2481392C2 (en) | Producer of impatiens necrotic spot virus inhibitor | |
| Nona et al. | Effect of deuterium oxide on culturing of Penicillium janczewskii I. Growth, nutritional factors, and antibiotic production | |
| EP0817863B1 (en) | Process for preparing spirolaxine and spirolaxine methyl ether | |
| TWI663980B (en) | Use of anthraquinone active substance for inhibiting and/or reducing allergic reactions | |
| CN107058137A (en) | A kind of wet graceful mould and its method for producing wortmannin | |
| CN108048488B (en) | A kind of marine fungi extractive from fermentative and its application as anti senile dementia drug | |
| RU2569150C1 (en) | MYCOPLASMA (Mycoplasma hominis) INHIBITOR PRODUCER | |
| JP4263741B2 (en) | Microorganism used for production of pravastatin sodium and method for producing pravastatin sodium | |
| SHIRANE et al. | Mineral salt medium for the growth of Botrytis cinerea in vitro | |
| SU1742319A1 (en) | Strain of streptomycete streptomyces viridovulgaris - a producer of viridocine | |
| JP3063941B2 (en) | Didemethyl allosamidine and its production | |
| CN117158426A (en) | Application of sakurin in preventing and treating false smut of rice |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180909 |