RU2466404C1 - Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors - Google Patents
Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors Download PDFInfo
- Publication number
- RU2466404C1 RU2466404C1 RU2011132624/15A RU2011132624A RU2466404C1 RU 2466404 C1 RU2466404 C1 RU 2466404C1 RU 2011132624/15 A RU2011132624/15 A RU 2011132624/15A RU 2011132624 A RU2011132624 A RU 2011132624A RU 2466404 C1 RU2466404 C1 RU 2466404C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gstm1
- gstt1
- del
- factors
- allergic dermatoses
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия.The invention relates to medicine and can be used to predict the timing of the development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of an irritating and sensitizing effect.
Известен способ прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия, включающий забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфных вариантов гена GSTM1 (см. Лазарашвили Н.А., Роль системы «оксиданты-антиоксиданты» и генетического биохимического полиморфизма в патогенезе профессиональных аллергических дерматозов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук, Москва, 2006 г., с.48-86).A known method for predicting the timing of the development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of irritating and sensitizing effects, including venous blood sampling, isolation of genetic material, polymerase chain reaction with specific primers 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5 '-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg, determination of the nucleotide sequence and, on the basis of this, the determination of polymorphic variants of the GSTM1 gene (see N. Lazarashvili, Role of the “oxidant-antioxidant” system and genetic biochemical olymorphism in the pathogenesis of occupational allergic dermatoses. The dissertation for the degree of candidate of medical sciences, Moscow, 2006, p. 48-86).
Однако известный способ прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов имеет малую информативность и, как следствие малой информативности способа, им можно прогнозировать только то, что при наличии делеции в гене GSTM1 заболевание может развиться в первые 5 лет от начала работы с вредными производственными факторами. Этот способ имеет низкую точность прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.However, the known method for predicting the timing of the development of occupational allergic dermatoses has low information content and, as a consequence of the low information content of the method, they can only predict that if there is a deletion in the GSTM1 gene, the disease can develop in the first 5 years from the start of work with harmful production factors. This method has low accuracy in predicting the timing of the development of professional allergic dermatoses, for example, during medical examinations or periodic medical examinations of a large number of people working in harmful and / or dangerous working conditions for short (short) periods of time.
Задачей настоящего изобретения является усовершенствование способа прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов путем повышения его информативности, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.The objective of the present invention is to improve the method for predicting the timing of the development of occupational allergic dermatoses by increasing its information content, for example, during medical examinations or periodic medical examinations of a large number of people working in harmful and / or dangerous working conditions for short (short) periods of time.
Техническим результатом изобретения является повышение точности прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия за счет повышения информативности.The technical result of the invention is to improve the accuracy of predicting the timing of development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of an irritating and sensitizing effect due to increased information content.
Указанная задача достигается тем, что в известном способе прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия, включающем забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-tgc-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc и 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, oпpeдeлeниe нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфных вариантов гена GSTM1, дополнительно определяют полиморфный вариант гена GSTT1 при проведении полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg, причем при обнаружении одновременно делеций и GSTM1-del, и GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют ранние сроки развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия в течение первых 3-х лет от начала контакта с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия с тяжелым течением в виде распространенных форм профессиональных аллергических дерматозов и частыми рецидивами, при наличии одной из делеций GSTM1-del или GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют развитие профессиональных аллергических дерматозов в течение от 3-х до 5-и лет после начала контакта с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия, при отсутствии делеций и GSTM1-del, и GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют развитие профессиональных аллергических дерматозов не менее чем через 5 лет работы в контакте с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия.This task is achieved by the fact that in the known method for predicting the timing of the development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of irritating and sensitizing effects, including venous blood sampling, isolation of genetic material, polymerase chain reaction with specific primers 5'-tgc-ttc-acg-tgt- tat-gga-ggt-tc and 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, the determination of the nucleotide sequence and based on this the determination of the polymorphic variants of the GSTM1 gene, additionally determine the polymorphic variant of the gene GSTT1 during the polymerase chain reaction with specific primers 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg, and when detecting both deletions and GSTM1 -del and GSTT1-del, respectively, in the GSTM1 and GSTT1 genes predict early development of occupational allergic dermatoses when exposed to irritating and sensitizing factors during the first 3 years from the onset of contact with severe irritating and sensitizing factors in the form of common forms occupational allergic dermato call and frequent relapses, in the presence of one of the deletions of GSTM1-del or GSTT1-del in the GSTM1 and GSTT1 genes, respectively, they predict the development of occupational allergic dermatoses within 3 to 5 years after the onset of contact with irritating and sensitizing factors, with In the absence of deletions, both GSTM1-del and GSTT1-del in the GSTM1 and GSTT1 genes, respectively, predict the development of occupational allergic dermatoses after at least 5 years of work in contact with irritating and sensitizing factors.
Проведенные исследования по патентным и научно-техническим информационным источникам показали, что предлагаемый способ неизвестен и не следует явным образом из изученного уровня техники, т.е. соответствует критериям “новизна” и “изобретательский уровень”.Studies on patent and scientific and technical information sources have shown that the proposed method is unknown and does not follow explicitly from the studied prior art, i.e. meets the criteria of “novelty” and “inventive step”.
Предлагаемый способ может быть применен в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных широко используемым оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.The proposed method can be applied in clinical, biochemical, molecular genetic laboratories equipped with widely used equipment manufactured by domestic or foreign industry.
Следовательно, заявленный способ является доступным и практически применимым.Therefore, the claimed method is affordable and practically applicable.
Таким образом, предложена совокупность приемов, позволяющих обеспечить повышение информативности получаемых результатов, что, в свою очередь, позволит повысить точность прогнозирования сроков развития течения профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени.Thus, a set of techniques has been proposed that allows to increase the information content of the results, which, in turn, will improve the accuracy of predicting the timing of the development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of irritating and sensitizing effects, for example, during medical examinations or periodic medical examinations of large the number of workers in harmful and / or hazardous working conditions for short (tight) time periods.
Предлагаемый способ основан на исследовании комплекса диагностических тестов, при этом наличие или отсутствие делеций GSTM1-del и GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 играет основную роль при прогнозировании сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия.The proposed method is based on the study of a set of diagnostic tests, while the presence or absence of deletions of GSTM1-del and GSTT1-del in the GSTM1 and GSTT1 genes, respectively, plays a major role in predicting the timing of development of occupational allergic dermatoses when exposed to irritating and sensitizing factors.
В таблице 1 представлена последовательность использованных праймеров при выделении генетического материала в процессе полимеразной цепной реакции.Table 1 presents the sequence of primers used for the isolation of genetic material during the polymerase chain reaction.
Предлагаемый способ пояснен на чертеже.The proposed method is illustrated in the drawing.
На фиг.1 представлена электрофореграмма продуктов амплификации GST-τ1 и GST-µ1 в 3% агарозном геле, где М - маркер, 1 - GST-µ1 0/0, GST-τ1 +/+, 2 - GST-µ1 +/+, GST-τ1 +/+, 3 - GST-µ1 +/+, GST-τ1 +/+, 4 - GST-µ1 +/+, GST-τ1 +/+, 5 - GST-µ1 +/+, GST-τ1 0/0, 6 - GST-µ1 0/0, GST-τ1 0/0.Figure 1 presents the electrophoregram of the amplification products GST-τ1 and GST-μ1 in a 3% agarose gel, where M is a marker, 1 is GST-μ1 0/0, GST-τ1 + / +, 2 is GST-μ1 + / + , GST-τ1 + / +, 3 - GST-µ1 + / +, GST-τ1 + / +, 4 - GST-µ1 + / +, GST-τ1 + / +, 5 - GST-µ1 + / +, GST -τ1 0/0, 6 - GST-µ1 0/0, GST-τ1 0/0.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.The proposed method is as follows.
У пациентов осуществляют забор венозной крови. Кровь исследуют в соответствии с предлагаемым способом. Из 100 мкл цельной крови выделяют ДНК-сорбент однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.Venous blood sampling is performed in patients. Blood is examined in accordance with the proposed method. DNA sorbent is isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) готовят серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавляют 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-tgc-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc и 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.A series of dilutions in TE buffer is prepared from the obtained DNA preparation (with a volume of 50 μl) to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution are added to the tube for polymerase chain reaction with specific primers 5'-tgc-ttc-acg -tgt-tat-gga-ggt-tc and 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5'- ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.
Объем полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом используют реагенты производства ЦНИИ Эпидемиологии: «ПЦР-смесь-2-blue», смесь десоксинуклеотидтрифосфатов «dNTPs (Т)», «Воск для ПЦР», «Минеральное масло для ПЦР».The volume of the polymer chain reaction is 25 μl, using reagents manufactured by the Central Research Institute of Epidemiology: PCR-2-blue PCR, dNTPs (T) desoxynucleotide triphosphates, PCR Wax, and PCR Mineral Oil.
Реакцию амплификации проводят по следующей программе.The amplification reaction is carried out according to the following program.
При использовании амплификатора «Терцик» (фирма ДНК-Технология), когда температура достигнет 95°С (режим паузы), ставят пробирки в ячейки амплификатора и выдерживают их при температуре 95°С - 5 мин. Далее выдерживают пробирки 45 циклов: при 95°С - 10 с, при 65°С - 10 с, при 72°С - 10 с, а в конце при 72°С - 2 мин.When using the Tercik amplifier (DNA-Technology company), when the temperature reaches 95 ° C (pause mode), put the tubes in the cells of the amplifier and maintain them at a temperature of 95 ° C for 5 minutes. The tubes are then kept for 45 cycles: at 95 ° С - 10 s, at 65 ° С - 10 s, at 72 ° С - 10 s, and at the end at 72 ° С - 2 min.
При использовании амплификаторов «Gradient Palm Cycler» («MAXYGEN»), «GeneAmp PCR System 2700», «PalmCycler», когда температура достигнет 95°С (режим паузы), пробирки ставят в ячейки амплификатора и продолжают программу при температуре 95°С - 5 мин. Далее пробирки выдерживают 45 циклов: при 95°С - 15 с, при 65°С - 15 с, при 72°С - 20 с, а в конце при 95°С - 2 мин.When using amplifiers “Gradient Palm Cycler” (“MAXYGEN”), “GeneAmp PCR System 2700”, “PalmCycler”, when the temperature reaches 95 ° C (pause mode), the tubes are placed in the cells of the amplifier and continue the program at a temperature of 95 ° C - 5 minutes. Further, the tubes withstand 45 cycles: at 95 ° C - 15 s, at 65 ° C - 15 s, at 72 ° C - 20 s, and at the end at 95 ° C - 2 min.
После проведения амплификации осуществляют анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете (фиг.1). Гомозиготы или гетерозиготы по нормальному аллелю «+» определяют по наличию на электрофореграммах продукта амплификации размером 271 н.п. для GST-µ1 и фрагмента 315 н.п. для GST-τ1. Отсутствие соответствующего фрагмента указывает на гомозиготность индивидуума по делеции гена.After amplification, the reaction products are analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualization in transmitted UV light (Fig. 1). Homozygotes or heterozygotes by the normal “+” allele are determined by the presence of an amplification product on electrophoregrams of 271 bp in size. for GST-µ1 and fragment 315 n.p. for GST-τ1. The absence of an appropriate fragment indicates homozygosity of the individual for gene deletion.
При обнаружении одновременно делеции и GSTM1-del, и GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют ранние сроки развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия в течение первых 3-х лет от начала контакта с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия с тяжелым течением в виде распространенных форм профессиональных аллергических дерматозов и частых рецидивов. При наличии одной из делеции GSTM1-del или GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют развитие профессиональных аллергических дерматозов в течение от 3-х до 5-и лет после начала контакта с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия. При отсутствии делеции и GSTM1-del, и GSTT1-del соответственно в генах GSTM1 и GSTT1 прогнозируют развитие профессиональных аллергических дерматозов не менее чем через 5 лет работы в контакте с факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия.When deletions of both GSTM1-del and GSTT1-del are detected in the GSTM1 and GSTT1 genes, early development of occupational allergic dermatoses is predicted when exposed to irritating and sensitizing factors during the first 3 years from the onset of contact with irritating and sensitizing factors with severe course in the form of common forms of occupational allergic dermatoses and frequent relapses. In the presence of one deletion of GSTM1-del or GSTT1-del in the GSTM1 and GSTT1 genes, the development of occupational allergic dermatoses is predicted within 3 to 5 years after the onset of contact with irritating and sensitizing factors. In the absence of deletion, both GSTM1-del and GSTT1-del in the GSTM1 and GSTT1 genes, respectively, predict the development of occupational allergic dermatoses after at least 5 years of work in contact with irritating and sensitizing factors.
Пример 1. Больная Ф., 77 лет.Example 1. Patient F., 77 years old.
При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациентки было выявлено, что больная Ф. работала прессовщиком на Московской фабрике по производству детских игрушек, подвергаясь воздействию полистирола. Через год после начала работы по результатам обследования был поставлен диагноз профессиональная экзема.When analyzing the patient’s medical history and professional route, it was revealed that patient F. worked as a presser at the Moscow factory for the production of children's toys, being exposed to polystyrene. A year after the start of work, a professional eczema was diagnosed based on the results of the examination.
По данным биохимических исследований: значительное повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов, кетодиенов и карбонилов) в сыворотке крови и угнетение антиоксидантной защиты - значительное снижение тиолдисульфидного соотношения.According to biochemical studies: a significant increase in the content of lipid peroxidation products (diene conjugates, ketodienes and carbonyls) in blood serum and inhibition of antioxidant protection - a significant decrease in the thiol disulfide ratio.
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделили суммарную ДНК однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.The total DNA was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA-sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серию разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавили 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-tgc-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc и 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.From the obtained DNA preparation (50 μl), a series of dilutions was prepared in TE buffer to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for polymerase chain reaction with specific primers 5'-tgc-ttc-acg -tgt-tat-gga-ggt-tc and 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5'- ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.
Объем полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом использовали реагенты производства ЦНИИ Эпидемиологии: «ПЦР-смесь-2-blue», смесь десоксинуклеотидтрифосфатов «dNTPs (Т)», «Воск для ПЦР», «Минеральное масло для ПЦР».The volume of the polymeric chain reaction was 25 μl, using reagents manufactured by the Central Research Institute of Epidemiology: PCR-2-blue PCB, dNTPs (T) desoxynucleotide triphosphates, PCR Wax, and PCR Mineral Oil.
Реакцию амплификации проводили с использованием амплификатора «Терцик» (фирма ДНК-технология). При его нагреве до температуры 95°С (режим паузы) пробирки поставили в ячейки амплификатора и выдержали их при температуре 95°С - 5 мин. Далее выдерживали пробирки 45 циклов: при 95°С - 10 с, при 65°С - 10 с, при 72°С - 10 с, а в конце при 72°С - 2 мин.The amplification reaction was carried out using a Tercik amplifier (DNA technology company). When it was heated to a temperature of 95 ° C (pause mode), the tubes were placed in the cells of the amplifier and kept at a temperature of 95 ° C for 5 minutes. Then the tubes were kept for 45 cycles: at 95 ° С - 10 s, at 65 ° С - 10 s, at 72 ° С - 10 s, and at the end at 72 ° С - 2 min.
После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualizing in transmitted UV light.
При анализе результатов была выявлены делеции GSTM1-del и GSTT1-del соответственно по генам GSTM1 и GSTT1.When analyzing the results, deletions of GSTM1-del and GSTT1-del were revealed for the GSTM1 and GSTT1 genes, respectively.
Вывод: у больной Ф. выявлены делеции GSTM1-del и GSTT1-del соответственно по генам GSTM1 и GSTT1, т.е. ферменты глутатион-S-трансфераза M1 и Т1 не синтезируются, следовательно, не осуществляются процессы антиоксидантной защиты. Следствием этого явилось развитие профессиональной экземы с частыми рецидивами в первый же год работы с вредными производственными факторами раздражающего и сенсибилизирующего действия.Conclusion: in patient F., deletions of GSTM1-del and GSTT1-del were revealed according to the genes GSTM1 and GSTT1, i.e. Glutathione S-transferase M1 and T1 enzymes are not synthesized; therefore, antioxidant defense processes are not carried out. The consequence of this was the development of occupational eczema with frequent relapses in the first year of work with harmful production factors of irritating and sensitizing effects.
Пример 2. Больная Б., 60 лет.Example 2. Patient B., 60 years old.
При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больная Б. работала парикмахером в парикмахерской, подвергаясь воздействию химического состава «Локон». Через 4 года после начала работы по результатам обследования был поставлен диагноз профессиональная экзема конечностей.When analyzing the patient’s history and professional route, it was revealed that patient B. worked as a hairdresser in a hairdresser, being exposed to the chemical composition “Lockon”. 4 years after the start of work, the results of the examination were diagnosed with occupational eczema of the extremities.
По данным биохимических исследований: повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов, кетодиенов и карбонилов) в сыворотке крови и угнетение антиоксидантной защиты - снижение тиолдисульфидного соотношения.According to biochemical studies: an increase in the content of lipid peroxidation products (diene conjugates, ketodienes and carbonyls) in blood serum and inhibition of antioxidant protection - a decrease in the thiol disulfide ratio.
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделили суммарную ДНК однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.The total DNA was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA-sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серию разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавили 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-tgc-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc и 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.From the obtained DNA preparation (50 μl), a series of dilutions was prepared in TE buffer to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for polymerase chain reaction with specific primers 5'-tgc-ttc-acg -tgt-tat-gga-ggt-tc and 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5'- ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.
Объем полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом использовали реагенты производства ЦНИИ Эпидемиологии: «ПЦР-смесь-2-blue», смесь десоксинуклеотидтрифосфатов «dNTPs (Т)», «Воск для ПЦР», «Минеральное масло для ПЦР».The volume of the polymeric chain reaction was 25 μl, using reagents manufactured by the Central Research Institute of Epidemiology: PCR-2-blue PCB, dNTPs (T) desoxynucleotide triphosphates, PCR Wax, and PCR Mineral Oil.
Реакцию амплификации проводили с использованием амплификатора «Терцик» (фирма ДНК-технология). При его нагреве до температуры 95°С (режим паузы) пробирки поставили в ячейки амплификатора и выдержали их при температуре 95°С - 5 мин. Далее пробирки выдерживали 45 циклов: при 95°С - 10 с, при 65°С - 10 с, при 72°С - 10 с, а в конце при 72°С - 2 мин.The amplification reaction was carried out using a Tercik amplifier (DNA technology company). When it was heated to a temperature of 95 ° C (pause mode), the tubes were placed in the cells of the amplifier and kept at a temperature of 95 ° C for 5 minutes. Further, the tubes were kept for 45 cycles: at 95 ° С - 10 s, at 65 ° С - 10 s, at 72 ° С - 10 s, and at the end at 72 ° С - 2 min.
После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualizing in transmitted UV light.
При анализе результатов была выявлена делеция GSTM1-del по гену GSTM1 и отсутствие делеции по гену GSTT1.When analyzing the results, a deletion of GSTM1-del by the GSTM1 gene and the absence of deletion of the GSTT1 gene were revealed.
Вывод: у больной Б. выявлена делеция GSTT1-del по гену GSTT1 и отсутствие делеции по гену GSTM1, т.е. фермент глутатион-S-трансфераза M1 не синтезируется, а фермент глутатион-S-трансфераза Т1 синтезируется. Следовательно, процессы антиоксидантной защиты осуществляются не в полной мере. Следствием этого явилось развитие профессиональной экземы конечностей через 4 года работы с вредным производственным фактором раздражающего и сенсибилизирующего действия.Conclusion: patient B. revealed a deletion of GSTT1-del by the GSTT1 gene and the absence of deletion by the GSTM1 gene, i.e. the glutathione-S-transferase M1 enzyme is not synthesized, and the glutathione-S-transferase T1 enzyme is synthesized. Therefore, the processes of antioxidant protection are not fully implemented. The consequence of this was the development of occupational eczema of the extremities after 4 years of work with a harmful production factor of irritating and sensitizing effects.
Пример 3. Больная Р., 51 годExample 3. Patient R., 51 years old
При анализе анамнеза и профессионального маршрута пациента было выявлено, что больная Р. работала сборщиком микросхем на заводе «Компонент» в течение 34 лет, в контакте с эпоксидной смолой, припоем ПОС 61 (оловянно-свинцовым), в состав которого входит никель. Через 34 года после начала работы по результатам обследования в Научно-исследовательском институте медицины труда РАМП был поставлен диагноз профессиональная экзема верхних конечностей.When analyzing the patient’s history and professional route, it was revealed that patient R. had been working as a chip collector at the Komponent factory for 34 years, in contact with epoxy resin, POS 61 solder (tin-lead), which contains nickel. 34 years after the start of work according to the results of a survey at the Scientific Research Institute of Occupational Medicine RAMP, a diagnosis of occupational eczema of the upper extremities was diagnosed.
По данным биохимических исследований: незначительное повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов, кетодиенов и карбонилов) в сыворотке крови и незначительное угнетение антиоксидантной защиты - снижение тиолдисульфидного соотношения.According to biochemical studies: a slight increase in the content of lipid peroxidation products (diene conjugates, ketodienes and carbonyls) in the blood serum and a slight inhibition of antioxidant protection - a decrease in the thiol disulfide ratio.
Согласно предлагаемому способу кровь исследовали следующим образом.According to the proposed method, the blood was examined as follows.
Из 100 мкл цельной крови выделили суммарную ДНК однопробирочным методом с использованием комплекта для выделения "ДНК-сорб-В" (ТУ9398-071-01897593-2008), в соответствии с инструкцией к используемому комплекту.The total DNA was isolated from 100 μl of whole blood using a single-tube method using the DNA-sorb-B isolation kit (TU9398-071-01897593-2008), in accordance with the instructions for the kit used.
Из полученного препарата ДНК (объемом 50 мкл) приготовили серии разведений в ТЕ-буфере до конечной концентрации 1-3 нг/мкл, добавили 10 мг конечного раствора ДНК в пробирку для осуществления полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами 5'-tgc-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc и 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg и 5'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.A series of dilutions in TE buffer was prepared from the obtained DNA preparation (with a volume of 50 μl) to a final concentration of 1-3 ng / μl, 10 mg of the final DNA solution was added to the tube for polymerase chain reaction with specific primers 5'-tgc-ttc-acg -tgt-tat-gga-ggt-tc and 5'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g, 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg and 5'- ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg.
Объем полимерной цепной реакции - 25 мкл, при этом использовали реагенты производства ЦНИИ Эпидемиологии: «ПЦР-смесь-2-blue», смесь десоксинуклеотидтрифосфатов «dNTPs (Т)», «Воск для ПЦР», «Минеральное масло для ПЦР».The volume of the polymeric chain reaction was 25 μl, using reagents manufactured by the Central Research Institute of Epidemiology: PCR-2-blue PCB, dNTPs (T) desoxynucleotide triphosphates, PCR Wax, and PCR Mineral Oil.
Реакцию амплификации проводили с использованием амплификатора «Терцик» (фирма ДНК-технология). При его нагреве до температуры 95°С (режим паузы) пробирки поставили в ячейки амплификатора и выдержали их при температуре 95°С - 5 мин. Далее выдерживали пробирки 45 циклов: при 95°С - 10 с, при 65°С - 10 с, при 72°С - 10 с, а в конце при 72°С - 2 мин.The amplification reaction was carried out using a Tercik amplifier (DNA technology company). When it was heated to a temperature of 95 ° C (pause mode), the tubes were placed in the cells of the amplifier and kept at a temperature of 95 ° C for 5 minutes. Then the tubes were kept for 45 cycles: at 95 ° С - 10 s, at 65 ° С - 10 s, at 72 ° С - 10 s, and at the end at 72 ° С - 2 min.
После проведения амплификации осуществили анализ продуктов реакции в 3% полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ-свете.After amplification, the reaction products were analyzed in a 3% polyacrylamide gel, followed by staining with ethidium bromide and visualizing in transmitted UV light.
При анализе результатов было выявлено отсутствие делеций по генам GSTM1 и GSTT1.An analysis of the results revealed the absence of deletions for the GSTM1 and GSTT1 genes.
Вывод: у больной Р. выявлено отсутствие делеций по генам GSTM1 и GSTT1, т.е. ферменты глутатион-S-трансфераза M1 и Т1 синтезируются в полной мере, следовательно, процессы антиоксидантной защиты осуществляются удовлетворительно. Однако они несколько снижены под воздействием производственных факторов. Следствием этого являлось развитие профессиональной экземы верхних конечностей спустя 34 года после начала работы с вредным производственным фактором раздражающего и сенсибилизирующего действия.Conclusion: patient R. revealed the absence of deletions for the GSTM1 and GSTT1 genes, i.e. enzymes glutathione-S-transferase M1 and T1 are fully synthesized, therefore, antioxidant defense processes are carried out satisfactorily. However, they are slightly reduced under the influence of production factors. The consequence of this was the development of occupational eczema of the upper extremities 34 years after the start of work with a harmful production factor of irritating and sensitizing effects.
Предлагаемый способ прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов позволяет повысить точность прогнозирования сроков развития течения профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия на 50% за счет повышения информативности проводимых исследований, например, при проведении диспансеризации или периодических медицинских осмотров большого количества работающих во вредных и/или опасных условиях труда за короткие (сжатые) сроки времени, а также повысить достоверность прогнозирования сроков развития течения профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия,The proposed method for predicting the timing of the development of occupational allergic dermatoses can improve the accuracy of predicting the timing of the development of occupational allergic dermatoses when the body is exposed to factors of irritating and sensitizing effects by 50% by increasing the information content of the studies, for example, during medical examinations or periodic medical examinations of a large number of workers harmful and / or dangerous working conditions for short (short) periods of time change, and also increase the reliability of predicting the timing of the development of professional allergic dermatoses when exposed to factors of an irritating and sensitizing effect,
Он может быть применен в клинических, биохимических, молекулярно-генетических лабораториях, укомплектованных оборудованием, выпускаемым отечественной или зарубежной промышленностью.It can be used in clinical, biochemical, molecular genetic laboratories equipped with equipment manufactured by domestic or foreign industry.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011132624/15A RU2466404C1 (en) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2011132624/15A RU2466404C1 (en) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2466404C1 true RU2466404C1 (en) | 2012-11-10 |
Family
ID=47322374
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011132624/15A RU2466404C1 (en) | 2011-08-04 | 2011-08-04 | Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2466404C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2552031C1 (en) * | 2014-05-15 | 2015-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Method for prediction of risk of occupational allergodermatoses |
EA024837B1 (en) * | 2013-09-06 | 2016-10-31 | Российская Академия Медицинских Наук Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Научно-Исследовательский Институт Медицины Труда" Российской Академии Медицинских Наук (Фбгу "Нии Мт" Рамн) | Method for predicting risk of early development of professional allergodermatosis affected by chrome, nickel and cobalt |
-
2011
- 2011-08-04 RU RU2011132624/15A patent/RU2466404C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЛАЗАРАШВИЛЛИ Н.А. Роль системы «оксиданты-антиоксиданты» и генетического биохимического полиморфизма в патогенезе профессиональных аллергических дерматозов: Дисс. канд. мед.наук. - М., 2006, с.48-86. КУЗЬМИНА Л.П. и др. Роль полиморфных генов системы биотрансформации ксенобиотиков в патогенезе профессиональных аллергодерматозов // 2011, № 7, с.17-23. БУГАКОВА Е.Н. Медико-социальные аспекты заболеваемости аллергическими дерматозами взрослого населения и пути ее профилактики (на примере Воронежской области): Автореф. дисс. - Воронеж, 2011. JOHN S.M. Occupational skin diseases: options for multidisciplinary networking in preventive medicine // Ger Med Sci. 2008 Oct 27;6:Doc07.PMID: 19675734 [PubMed]. DIEPGEN T.L., KANERVA L., Occupational skin diseases // European Journal of Dermatology. Volume 16, Number 3, 324-30, May-June 2006, European Dermatology Forum [найдено он-лайн 12.05.2012] [http://www.jle.com/en/revues/medecine/ejd/e-docs/00/04/19/19/article.phtml]. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA024837B1 (en) * | 2013-09-06 | 2016-10-31 | Российская Академия Медицинских Наук Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Научно-Исследовательский Институт Медицины Труда" Российской Академии Медицинских Наук (Фбгу "Нии Мт" Рамн) | Method for predicting risk of early development of professional allergodermatosis affected by chrome, nickel and cobalt |
RU2552031C1 (en) * | 2014-05-15 | 2015-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Method for prediction of risk of occupational allergodermatoses |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1325963B1 (en) | Method for non-invasive diagnosis of transplantations and transfusions | |
Andreadou et al. | A novel non-amplification assay for the detection of Leishmania spp. in clinical samples using gold nanoparticles | |
Fagan et al. | Ascites bacterial burden and immune cell profile are associated with poor clinical outcomes in the absence of overt infection | |
CN104109716B (en) | A kind of human HLA-B27 genotyping kit | |
Duque-Afonso et al. | Cell-free DNA characteristics and chimerism analysis in patients after allogeneic cell transplantation | |
FR2900936B1 (en) | METHOD AND METHODS FOR DETECTING ALZHEIMER'S DISEASE | |
RU2466404C1 (en) | Method for prediction of time of developing occupational allergic dermatoses after exposure to irritant and sensitising factors | |
RU2620561C1 (en) | Method for psoriasis diagnosing | |
WO2021039777A1 (en) | Method for examining rheumatoid arthritis | |
CN103923981B (en) | HLA-B*27 Allele Detection Method and kit thereof | |
RU2467330C1 (en) | Method for prediction of risk of developing early occupational allergic dermatoses | |
RU2564914C2 (en) | Method of determining hereditary predisposition to sensitisation with industrial allergens | |
CN102465181A (en) | Paternity test method for goats and microsatellite primer and kit thereof | |
CN105506110A (en) | Method and primer for detecting 8th and 25th whole exons of TEX11 gene | |
EA201900323A1 (en) | COAGULATION TEST DETERMINATION SCREENING TEST (STOKPK) | |
Sharawat et al. | High receptor tyrosine kinase (FLT3, KIT) transcript versus anti-apoptotic (BCL2) transcript ratio independently predicts inferior outcome in pediatric acute myeloid leukemia | |
RU2585960C1 (en) | Method for detection of genetic predisposition to disruption of skin barrier function | |
RU2525059C2 (en) | Kit for detecting q fever agent in biological material by real time polymerase chain reaction (rt pcr) | |
CN107557470A (en) | A kind of detection method using people MUC13 as hepatocellular carcinoma specific markers | |
CN113866415B (en) | Diagnostic and prognostic markers for breast cancer brain metastasis | |
CN102495214B (en) | Application of prosaposin (psap) serving as effect marker in detection of male reproductive toxicity of polychlorinated biphenyl | |
TWI837699B (en) | Methods and kits for diagnosis of t cell lymphoma using non-completely recombined t cell receptor nucleotide sequences | |
WO2017135850A8 (en) | Method of diagnosing a disease accompanied by excessive cell death and kit for the implementation thereof | |
Abdelhamid et al. | PB2424 AUGMENTED AND SYNERGISTIC EFFECT OF FACTOR V LEIDEN (FVL) AND MTHFR GENES POLYMORPHISMS AND PLATELET ACTIVITY AND REACTIVITY AS RISK FACTORS FOR ISCHEMIC CEREBROVASCULAR STROKE (IS) | |
CN109609642B (en) | Kit for detecting epithelial ovarian cancer susceptibility |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160805 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20170523 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190805 |