RU2437620C2 - Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков - Google Patents
Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков Download PDFInfo
- Publication number
- RU2437620C2 RU2437620C2 RU2010108593/14A RU2010108593A RU2437620C2 RU 2437620 C2 RU2437620 C2 RU 2437620C2 RU 2010108593/14 A RU2010108593/14 A RU 2010108593/14A RU 2010108593 A RU2010108593 A RU 2010108593A RU 2437620 C2 RU2437620 C2 RU 2437620C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- exacerbations
- viral hepatitis
- activity
- exacerbation
- chronic viral
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии и педиатрии. Для прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита В у подростков проводят исследование крови. С помощью биолюминесцентного метода определяют активности ферментов лимфоцитов периферической крови больных: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) и лактатдегидрогеназы (НАДН-ЛДГ), вычисляют соотношение активностей. При значении полученного показателя, равном или более 1,15, прогнозируют обострения, а при значении показателя менее 1,15 прогнозируют отсутствие обострений. Способ позволяет с высокой точностью прогнозировать обострения хронического вирусного гепатита В у подростков с клинико-биохимической ремиссией. 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и гепатологии, и может быть использовано для прогнозирования характера течения хронического гепатита В (ХГВ) у детей подросткового возраста.
Известен способ прогнозирования обострений вирусных гепатитов путем исследования билирубина в сыворотке крови и определения уровня сывороточного железа на пике билирубинемии и через 7-10 дней после него [3]. При нарастании уровня сывороточного железа по сравнению с первоначальным уровнем прогнозируют обострение вирусного гепатита. Недостатком способа является прогнозирование обострений только при затяжном течении острых гепатитов. К тому же способ требует неоднократного забора крови.
Задачей изобретения является создание информативного способа раннего прогнозирования обострений ХГВ у подростков.
Поставленную задачу осуществляют за счет того, что с помощью биолюминесцентного метода определяют активности ферментов лимфоцитов периферической крови больных: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) и лактатдегидрогеназы (НАДН-ЛДГ), вычисляют соотношение активностей, и при значении полученного показателя, равном или более 1,15, прогнозируют обострения, а при значении показателя менее 1,15 прогнозируют отсутствие обострений.
Значение 1,15 получено опытным путем на основании сопоставления рассчитываемого показателя и характером течения ХГВ у обследуемых подростков.
Значение показателя, определяемое по соотношению величин активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ, равное или более 1,15 свидетельствует о значительном оттоке субстратов с гликолиза на реакции пентозофосфатного цикла, что снижает уровень анаэробных энергетических процессов и, соответственно, понижает функциональную активность лимфоцитов.
Известно, что лимфоциты, реализующие основные функции специфического иммунного ответа, являются главными клетками в системе иммунологического надзора и принимают активное участие в системе противоинфекционной защиты, в том числе и при вирусном гепатите В (ВГВ) [4]. От уровня функциональной активности лимфоцитов зависит исход острой инфекционной болезни и характер течения хронического инфекционного процесса. В то же время установлено, что функциональная активность лимфоцитов в значительной степени определяется уровнем их метаболических процессов [6]. К числу показателей, наиболее объективно отражающих основные параметры внутриклеточного метаболизма, можно отнести дегидрогеназы.
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (КФ 1.1.1.49) - осуществляет дегидрирование глюкозо-6-фосфата и кофермента НАДФ. Образовавшийся в ходе данной реакции 6-фосфоглюконо-δ-лактон является нестабильным и гидролизуется либо спонтанно, либо с помощью фермента 6-фосфоглюконолактоназы с образованием 6-фосфоглюконата [1]. Г6ФДГ катализирует инициализирующую и ключевую реакцию пентозофосфатного цикла, который является конкурентом гликолиза за субстрат (глюкоза-6-фосфат). В норме доля пентозофосфатного цикла в количественном превращении глюкозы обычно невелика и варьирует в зависимости от функционального состояния клеток.
Лактатдегидрогеназа (КФ 1.1.1.27) - фермент гликолиза, обратимо катализирующий окисление лактата в пировиноградную кислоту с участием в качестве кофермента НАД+. Лактатдегидрогеназа занимает ключевое положение в регуляции цитоплазматического уровня НАДН/НАД и характеризует уровень терминальных реакций гликолиза [1].
Способ выполняется следующим образом.
У детей подросткового возраста, больных ХГВ, забирают венозную кровь из локтевой вены свободным током в пробирки с гепарином. Выделяют лимфоциты. Центрифугируют на градиенте плотности фиколл-верографина по стандартной методике A.Boyum (1968) [5]. Подсчитывают концентрацию лимфоцитов, например, в камере Горяева. При контроле морфологического состава лейкоцитарных взвесей определяют чистоту выхода лимфоцитов, которая составляет не менее 97%. 1 млн выделенных клеток используют для определения активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ в лимфоцитах одним из известных способов, например, биолюминесцентным [2]. Для этого в 150 мкл инкубационной смеси, содержащей соответствующий субстрат и кофактор, вносят 50 мкл суспензии разрушенных лимфоцитов. Конкретные значения концентраций субстратов и кофакторов, а также рН среды для определяемых ферментов представлены в таблице 1.
Таблица 1 | |||
Фермент | Субстрат, мМ | Кофактор, мМ | РН буфера |
Г6ФДГ | Глюкоза-6-фосфат - 1,5 | НАДФ - 0,025 | 9,8 |
НАДН-ЛДГ | Пируват - 0,25 | НАДН - 0,005 | 7,0 |
Примечание: среду с рН 9,8 готовят на Трис-HCl буфере (ICN Biomedicals Inc., США); с рН 7,0 - на К+, Nа+-фосфатном буфере (буфер готовят из К2НРО4 и NaH2PO4 (Реахим, Россия)). |
После инкубации исследуемых проб при 37°C в течение 30 минут для Г6ФДГ или 5 минут для НАДН-ЛДГ к 200 мкл инкубационной смеси добавляют 50 мкл флавинмононуклеотида (ФМН) в концентрации 1,5×10-5 M, 50 мкл 0,0005% миристинового альдегида и 10 мкл ферментативной системы НАДН: ФМНоксидоредуктаза-люцифераза (все реактивы биолюминесцентной системы разводят в 0,1 M К+, Ка+-фосфатном буфере с рН 7,0). После смешивания биолюминесцентных реактивов и инкубационной пробы с помощью биохемилюминометра, например, марки "БЛМ-8803", измеряют свечение. Учитывая, что в клетках имеется определенное количество субстратов для течения различных метаболических реакций, в том числе и катализируемых исследуемыми ферментами, определяют показатели, условно названные "субстратный фон ферментов". Определение производят в тех же условиях, что и для вышеперечисленных дегидрогеназ, но в инкубационную смесь вместо соответствующего субстрата вносят буфер. В результате измерения свечения на биолюминометре получают относительные значения активности исследуемых ферментов. Чтобы получить абсолютные значения активности строят графики зависимости интенсивности биолюминесценции от концентрации НАДФН и НАДН (калибровочный график). Для этого 200 мкл стандартного раствора НАДФН или НАДН в диапазоне 10-9-10-4 M вносят в кюветы биолюминометра, содержащие ФМН, миристиновый альдегид и НАДФН: ФМНоксидоредуктазу-люциферазу в концентрациях, указанных выше, после чего производят измерение интенсивности биолюминесценции. В связи с широким диапазоном рН буферов, используемых для определения дегидрогеназной активности, а также рН-зависимостью биолюминесценции ферментативной системы из светящихся бактерий, калибровочные графики строят на основе соответствующего буфера. Активность ферментов рассчитывают по формуле А=Δ[C]×V/T,
где A - активность дегидрогеназы, E на 1×104 лимфоцитов (1E=1 мкмоль/мин [1]);
Δ[C] - разница концентраций НАД(Ф)Н в пробах "фермент" и "фон фермента", мкмоль;
V - объем пробы, мл;
T - время инкубации, мин.
Затем рассчитывают соотношение активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ (Г6ФДГ/НАДН-ЛДГ). Значение полученного показателя, равное или более 1,15, свидетельствует о развитии обострения, а значение показателя менее 1,15 - об отсутствии обострения.
Данный способ апробирован на 34 подростках, больных ХГВ. Все больные подростки при поступлении в стационар и в динамике через 6 месяцев были обследованы с помощью общепринятых лабораторных методов обследования. Проведены: анализ периферической крови, биохимический анализ крови с определением концентрации общего билирубина и его фракций, тимоловой пробы, аланиновой трансаминазы (АЛТ), аспарагиновой трансаминазы (ACT) и щелочной фосфатазы. При помощи иммуноферментного анализа в сыворотке крови определяли специфические серологические маркеры HBsAg и анти-HBcIgG. С помощью метода полимеразно-цепной реакции у больных определяли ДНК вируса гепатита В. Активность Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ в лимфоцитах крови подростков с ХГВ определяли с помощью биолюминесцентного метода.
По результатам биохимического анализа крови установлено, что у 22 детей и подростков в течение 6 месяцев не было обострения ХГВ (активность АЛТ и ACT были в пределах нормы), у 12 - в диапазоне от 3 недель до 6 месяцев развилось обострение ХГВ (при повторном обследовании обнаружено повышение активности трансаминаз в сыворотке крови).
У всех больных обнаружено совпадение прогноза, сделанного по предложенному способу (табл.2).
Таблица 2 | ||
Прогноз обострений ХГВ | ||
№ | Будет/не будет обострений | Показатель соотношения активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ |
1 | будет обострение | 12,31 |
2 | будет обострение | 18,47 |
3 | будет обострение | 1,19 |
4 | будет обострение | 1,60 |
5 | будет обострение | 1,56 |
6 | будет обострение | 44,15 |
7 | будет обострение | 2,29 |
8 | будет обострение | 27,42 |
9 | будет обострение | 3,77 |
10 | будет обострение | 1,76 |
11 | будет обострение | 1,24 |
12 | будет обострение | 30,51 |
13 | нет обострения | 0,15 |
14 | нет обострения | 1,13 |
15 | нет обострения | 0,14 |
16 | нет обострения | 0,00 |
17 | нет обострения | 1,14 |
18 | нет обострения | 0,79 |
19 | нет обострения | 0,00 |
20 | нет обострения | 0,35 |
21 | нет обострения | 0,14 |
22 | нет обострения | 1,06 |
23 | нет обострения | 0,22 |
24 | нет обострения | 0,27 |
25 | нет обострения | 1,05 |
26 | нет обострения | 0,77 |
27 | нет обострения | 0,39 |
28 | нет обострения | 0,10 |
29 | нет обострения | 0,11 |
30 | нет обострения | 0,89 |
31 | нет обострения | 0,00 |
32 | нет обострения | 0,04 |
33 | нет обострения | 1,03 |
34 | нет обострения | 1,04 |
Клинический пример 1. Больная Б., 9 лет (№ истории болезни 128), находилась на плановом обследовании в детском инфекционном отделении МУЗ ГКБ №20 им. И.С.Берзона г.Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит В, неактивный. Ребенок состоял на диспансерном учете в течение 3 лет в диспансерном кабинете гепатоцентра МУЗ ГКБ №20 г.Красноярска. Из анамнеза известно, что мать девочки также больна хроническим вирусным гепатитом В. При поступлении в детское инфекционное отделение девочка жалоб не предъявляла.
Результаты биохимического исследования: билирубин общий 14,6 мкмоль/л, АЛТ 0,5 ммольхч/л (в пределах нормы), ACT 0,24 ммоль×ч/л (в пределах нормы).
При исследовании лимфоцитов периферической крови биолюминесцентным методом по предложенному способу обнаружено, что соотношение активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ составило 0,14 (пример №15 из табл.2), что указывает на отсутствие обострения.
При амбулаторном обследовании больной в диспансерном кабинете гепатологического центра через 6 месяцев активность АЛТ и ACT была в пределах нормы.
Клинический пример 2. Больной Р., 16 лет (№ истории болезни 539), находился на лечении в детском инфекционном отделении МУЗ ГКБ №20 им. И.С.Берзона г.Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит В с умеренной степенью активности. Из анамнеза известно, что ребенок получал переливание препаратов крови в возрасте 5 лет в связи с оперативным вмешательством. Ребенок состоит на диспансерном учете в течение 5 лет в диспансерном кабинете МУЗ ГКБ №20 г.Красноярска. При плановом обследовании в диспансерном кабинете гепатоцентра выявлена гиперферментемия, и ребенок был направлен в стационар для уточнения характера поражения печени и решения вопроса о тактике лечения. При поступлении в стационар больной предъявлял жалобы на периодические боли в животе. Во время осмотра выявлено умеренное увеличение печени (1/3-2 см-2 см).
Результаты биохимического исследования: билирубин общий 11 мкмоль/л (норма до 20 мкмоль/л), АЛТ 1,6 ммольхч/л (выше нормы в 2,3 раза), ACT 0,99 ммоль×ч/л (немного выше нормы).
При исследовании лимфоцитов периферической крови по предложенному способу обнаружено, что соотношение активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ составило 1,13 (пример №14 из табл.2), что указывает на отсутствие обострения.
В контрольном биохимическом анализе крови отмечалось снижение концентрации билирубина и нормализация показателей АЛТ и ACT. На 23 день пребывания в стационаре больной выписан.
При амбулаторном обследовании больного в диспансерном кабинете гепатоцентра через 6 месяцев активность АЛТ и ACT сохранялась на уровне нормальных показателей.
Клинический пример 3. Больной Д., 11 лет (№ истории болезни 438), находился на плановом обследовании в детском инфекционном отделении МУЗ ГКБ №20 г.Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит В, с минимальной степенью активности. Больной наблюдается в течение 2 лет в диспансерном кабинете гепатоцентра МУЗ ГКБ №20 г.Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит В. При плановом обследовании в диспансерном кабинете гепатоцентра выявлена гиперферментемия, и ребенок был направлен в стационар для уточнения характера поражения печени и решения вопроса о тактике лечения.
Результаты биохимического исследования: билирубин общий 13,4 мкмоль/л, АЛТ 0,76 ммоль×ч/л (выше нормы), ACT 0,39 ммоль×ч/л (в пределах нормы).
При исследовании лимфоцитов периферической крови по предложенному способу обнаружено, что соотношение активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ составило 18,47 (пример №2 из табл.2), что указывает на развитие обострения.
На 16 день пребывания в стационаре больной выписан. Однако при амбулаторном обследовании в диспансерном кабинете гепатоцентра через 6 месяцев вновь отмечено увеличение активности АЛТ и ACT в 1,3 раза.
Клинический пример 4. Больной Б., 15 лет (№ истории болезни 108), находился на обследовании и лечении в детском инфекционном отделении МУЗ ГКБ №20 г. Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит В с высокой степенью активности. Из анамнеза известно, что ребенок наблюдается с 2008 г. в диспансерном кабинете МУЗ ГКБ №20 г.Красноярска с диагнозом: хронический вирусный гепатит B. При плановом обследовании у ребенка регистрировалось повышение активности АЛТ, и мальчик направлен в стационар.
Результаты биохимического исследования: билирубин общий 19,6 мкмоль/л, АЛТ 5,2 ммоль×ч/л (выше нормы в 7,7 раз), ACT 1,2 ммоль×ч/л (выше нормы в 2 раза).
При исследовании лимфоцитов периферической крови по предложенному способу обнаружено, что соотношение активностей Г6ФДГ и НАДН-ЛДГ составило 44,15 (пример №6 из табл.2), что указывает на развитие обострения.
На 28 день пребывания в стационаре больной выписан. Однако при амбулаторном наблюдении больного в диспансерном кабинете через 6 месяцев вновь отмечено увеличение активности АЛТ и ACT в 1,6 раз.
Технический результат предлагаемого способа:
- возможность прогноза обострений ХГВ у подростков с клинико-биохимической ремиссией;
- однократный забор венозной крови;
- высокий уровень совпадения прогноза.
Предложенный способ позволяет корректировать план и тактику лечения больного на этапах динамического наблюдения и может быть рекомендован для применения в клинической практике.
Источники информации
1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.
2. Савченко А.А., Сунцова Л.Н. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови человека биолюминесцентным методом // Лабораторное дело. - 1989. - №11. - С.23-25.
3. Томилка Г.С., Медяников О.Ю. Способ прогнозирования обострений вирусных гепатитов // Патент РФ №2188429 C2, G01N 33/68, G01N 33/84, БИПМ №6, 27.02.2002.
4. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. - М.: Медицина, 2000. - 432 с.
5. Boyum A. Isolation of lymphocytes from blood and bone marroow // Scand. J. Clin. Lab. Invest - 1968. - Vol.21 (Suppl. 97). - P.77-80.
6. Jacobs S.R., Rathmell J.C. Lymphocyte selection by starvation: glucose metabolism and cell death // Trends Immunol. - 2006. - Vol.27, №1. - P.4-7.
Claims (1)
- Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита В у подростков путем исследования крови, отличающийся тем, что с помощью биолюминесцентного метода определяют активности ферментов лимфоцитов периферической крови больных: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) и лактатдегидрогеназы (НАДН-ЛДГ), вычисляют соотношение активностей и при значении полученного показателя, равном или более 1,15, прогнозируют обострения, а при значении показателя менее 1,15 прогнозируют отсутствие обострений.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010108593/14A RU2437620C2 (ru) | 2010-03-09 | 2010-03-09 | Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010108593/14A RU2437620C2 (ru) | 2010-03-09 | 2010-03-09 | Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010108593A RU2010108593A (ru) | 2011-09-20 |
RU2437620C2 true RU2437620C2 (ru) | 2011-12-27 |
Family
ID=44758304
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010108593/14A RU2437620C2 (ru) | 2010-03-09 | 2010-03-09 | Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2437620C2 (ru) |
-
2010
- 2010-03-09 RU RU2010108593/14A patent/RU2437620C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
БЕЛОБОРОДОВА Э.И. и др. Метаболические аспекты прогнозирования исходов хронического вирусного гепатита. - Клиническая медицина, 2005, т.83, №2, с.53-56. * |
РОСЛЫЙ И.М. и др. Креатинфосфокиназа как показатель неблагоприятного течения вирусного гепатита. - Эпидемиология и инфекционные болезни, 1999, №1, с.46-49. САВЧЕНКО А.А. и др. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови человека биолюминесцентным методом. - Лабораторное дело, 1989, №11, с.23-25. BORSCH G. et al. Graphical analysis of laboratory data in the differential diagnosis of cholestasis: a computer-assisted prospective study. J Clin Chem Clin Biochem. 1988 Aug; 26(8):509-19, (реферат), [он-лайн], [найдено 01.11.2010], найдено из базы данных PubMed. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2010108593A (ru) | 2011-09-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5004367B2 (ja) | 軽症耐糖能異常またはインスリン分泌不全の検出方法 | |
CN102154442B (zh) | 1,5‑脱水山梨醇的检测方法和相关诊断试剂盒 | |
Dubourg et al. | Adaptation of an enzymatic polyfructosan assay to clinical practice | |
CN111505260B (zh) | 一种重金属经口生物可及性与毒性检测体系的建立方法 | |
CN112255219A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇的测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
US7198905B2 (en) | Method of screening methods prediabetic state and screening reagent | |
RU2437620C2 (ru) | Способ прогнозирования обострений хронического вирусного гепатита в у подростков | |
RU2315305C2 (ru) | Способ прогнозирования инфекционных осложнений после химиотерапии у больных острыми лейкозами | |
CN111455020A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及检测方法 | |
RU2412444C1 (ru) | Способ прогнозирования обострения хронического гепатита с у детей подросткового возраста | |
RU2452377C1 (ru) | Способ прогнозирования развития острого эндометрита после медицинского аборта | |
RU2498300C1 (ru) | Способ прогнозирования исхода распространенного гнойного перитонита | |
Frei et al. | UDP-glucuronyltransferase | |
Francisco et al. | Lack of NAD (P)+ transhydrogenase activity in patients with primary adrenal insufficiency due to NNT variants | |
RU2231069C1 (ru) | Способ прогноза течения кишечных инфекций у детей 1-3 лет | |
Peake et al. | Mechanism of platelet interference with measurement of lactate dehydrogenase activity in plasma. | |
RU2629837C1 (ru) | Способ прогнозирования развития осложнений при лечении внебольничной пневмонии | |
RU2284040C2 (ru) | Способ диагностики метастазов в лимфатических узлах корня легкого при раке легкого | |
Wang et al. | Development of a glucose reference material in human serum for clinical assay standardization | |
RU2657586C1 (ru) | Способ прогнозирования течения хронического гепатита С 1 генотипа у нелеченных больных с высокой вирусной нагрузкой | |
Jing et al. | A novel fully enzymatic method for determining glucose and 1, 5-anhydro-D-glucitol in serum of one cuvette | |
CN116783486A (zh) | 用于测量尿中海藻糖酶的溶液以及使用该溶液的测量方法 | |
Mafras et al. | Comparing the effect of delayed serum separation on Creatinine measurement by Jaffe and Sarcosine oxidase enzymatic methods with different time and temperature | |
CN101709325B (zh) | 一种定标测定5’-核苷酸酶活性的方法配用的试剂盒 | |
Alshujairi | Relationship between Interleukin 20 and Insulin Resistance in Men with Type 2 Diabetes Melletus and Myocardial Infraction Patients in Al-anbar Governorate |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120310 |