RU2422535C1 - СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis - Google Patents
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2422535C1 RU2422535C1 RU2010100622/10A RU2010100622A RU2422535C1 RU 2422535 C1 RU2422535 C1 RU 2422535C1 RU 2010100622/10 A RU2010100622/10 A RU 2010100622/10A RU 2010100622 A RU2010100622 A RU 2010100622A RU 2422535 C1 RU2422535 C1 RU 2422535C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strains
- pestis
- pseudotuberculosis
- pcr
- specific
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Сущность изобретения заключается в том, что исследуемую пробу изучают параллельно двумя способами: первый - в реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИМФ), а второй - в полимеразной цепной реакции (ПЦР), причем НИМФ проводят с моноклональными антителами ВСКК (П-384Д и 434Д). Антитела взаимодействуют со специфическим для вида Y.pestis капсульным антигеном F1 или плазмидо-температуро-независимым поверхостным белком PFV, который имеется у всех штаммов Y.pestis и редких штаммов в R-форме Y. pseudotuberculosis. По свечению бактерий определяют присутствие в пробе полноценных или «бесфракционных» бактерий Y.pestis или типичных и PFV-атипичных штаммов Y.pseudotuberculosis. ПЦР выполняют с помощью двух пар праймеров «vlm33for/ISrevl754» - специфичных для вида Y.pestis и «JS» - специфичных для вида Y.pseudotuberculosis. Полученные с первой парой праймеров результаты оценивают как положительные при наличии ампликонов в 400 п.н., а второй пары - при наличии ампликонов в 223 п.н., идентификацию исследуемой пробы проводят путем совмещения результатов НИМФ и ПЦР с контрольными штаммами. Способ обеспечивает экспресс-идентификацию всех штаммов, принадлежащих к видам Y.pestis и Y.pseudotuberculosis, и их дифференциацию с высокой степенью достоверности. 8 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии, иммунологии и генетической инженерии и может быть использовано при экспресс-идентификации всех штаммов, принадлежащих к видам Yersinia pestis и Yersinia pseudotuberculosis, их дифференциации друг от друга.
В настоящее время отсутствуют диагностические тест-системы, имеющие высокую степень достоверности для проведения идентификации штаммов возбудителей чумы и псевдотуберкулеза вообще, и в том числе антигенизмененных штаммов, выделенных от больных людей, животных и из объектов окружающей среды.
Известен способ идентификации возбудителя чумы (Н.В.Божко, С.А.Лебедева и др. «Изучение возможности конструирования чумного диагностикума для реакции коагглютинации на основе иммуноглобулинов к антигену «фракция V» и выяснение его диагностической ценности». Клиническая лабораторная диагностика, №7, 2006, стр.49) путем использования жидкого диагностикума на основе кроличьих иммуноглобулинов к фракции V, дающий возможность выявлять все штаммы чумного микроба, независимо от наличия или отсутствия капсульного антигена F1.
Однако недостаточно высокая чувствительность способа (108 м.к.) и наличие случаев перекрестной реакции у части штаммов Y.pestis и Y.pseudotuberculosis требуют его совершенствования, так как имеют недостаточную степень достоверности результата при идентификации штаммов. Известен способ экспресс-диагностики чумы в полимеразной цепной реакции (ПЦР) (см. «Ген Пест» ТУ 8895-005-0189), включающей праймеры, выявляющие фрагменты генов cafl и pla, расположенные на плазмидах чумного микроба, отвечающих за синтез фракции 1 и пестицина.
Применяемая тест-система предназначена исключительно для детекции типичных штаммов со специфическими плазмидами и не способна выявлять штаммы возбудителя чумы с атипичной структурой генома (в т.ч. с дефицитом плазмид или с дефектами отдельных плазмидных генов), что сужает ее диагностические возможности.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ идентификации бактерий рода Yersinia и дифференциация патогенных видов Yersinia pestis, Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica (см. A.M.Стенкова, М.П.Исаев, В.А.Рассказов «Разработка многопраймеровой ПЦР для идентификации бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica», журнал «Молекулярная генетика, микробиология и вирусология», М.: Медицина, №3, 2008, стр.18), заключающийся в том, что используют шесть различных праймеров, два из которых - родоспецифические, а четыре - видоспецифические.
Однако известный способ требует много времени и затрат, что повышает его стоимость и срок выполнения, а кроме того, диагностическая достоверность требует доработки на большом числе образцов, что в итоге позволяет сделать вывод о низкой эффективности способа.
Технической задачей предлагаемого изобретения является разработка нового эффективного способа, позволяющего с высокой степенью достоверности проводить идентификацию всех штаммов видов Y.pestis и Y.pseudotuberculosis.
Поставленная задача достигается тем, что в известном способе идентификации видов Yersinia pestis и Yersinia pseudotuberculosis путем обнаружения капсульного диагностического антигена F1 и поверхностного белка PFV в серологической реакции с исследуемой пробой и выделения ДНК из бактерий с последующим тестированием в ПЦР, исследуемую пробу изучают параллельно двумя методами, путем постановки реакции непрямой иммунофлуоресценции (НИМФ) и (ПЦР), причем НИМФ проводят с моноклональными антителами ВСКК (П-384Д и 434Д), последние взаимодействуют со специфическим для вида Y.pestis капсульным антигеном F1 или плазмидо-температуро-независимым поверхностным белком PFV, который имеется у всех штаммов Y.pestis и редких штаммов в R-форме Y. pseudotuberculosis, при этом по свечению бактерий определяют присутствие в пробе полноценных или бесфракционных бактерий Y. pestis или типичных и PFV-атипичных штаммов Y.pseudotuberculosis, а ПЦР выполняют с помощью двух пар праймеров: vlm33rev/ISfor1754 - специфических для вида Y. pestis и JS - специфических для вида Y.pseudotuberculosis, причем синтез специфических фрагментов ДНК, направленный парой праймеров vlm33rev/ISfor1754, подтверждает наличие в пробе штаммов возбудителя чумы, а синтез специфических фрагментов ДНК, направленный парой праймеров JS, подтверждает наличие в пробе ДНК штаммов возбудителя псевдотуберкулеза, причем полученные с первой парой праймеров результаты оценивают как положительные при наличии ампликонов в 400 п.н., а второй пары при наличии ампликонов в 223 п.н., идентификацию исследуемой пробы проводят путем совмещения результатов НИМФ и ПЦР с контрольными штаммами.
Способ осуществляется следующим образом.
Идентификацию штаммов видов Y.pestis и Y.pseudotuberculosis в исследуемой пробе проводят параллельно двумя приемами экспрессной диагностики, а именно:
- один представляет собой реакцию непрямой иммунофлуоресценции (НИМФ), (I метод);
- второй полимеразную реакции (ПЦР), (II метод).
Для осуществления НИМФ необходимы моноклональные антитела (МКА), продуцируемые гибридомами Г4-В8/Е5 (NN ВСКК(П) 384Д) и Г4-Е6/Н8(ВСКК (П)-434Д), последние получены в Ростовском научно-исследовательском противочумном институте и депонированы в Российской коллекции перевиваемых культур.
МКА, (продуцируемые гибридомой Г4-В8/Е5), видоспецифичны к капсульному антигену F1 возбудителя чумы, который продуцируется большинством, но не всеми штаммами чумного микроба, под контролем одной из его плазмид при 28-37°С.
МКА, (продуцируемые гибридомой Г4-Е6/Н8), специфичны к поверхностному белку чумного микроба (PFV), который синтезируется у всех штаммов Y.pestis независимо от температуры выращивания и плазмидного состава бактерий (входит в состав ранее описанного антигенного комплекса фракция V) и может включать бесфракционные штаммы, у которых при диагностике не обнаруживают F1, с помощью МКА (продуцируемые гибридомой Г4-В8/Н5). Кроме того, упомянутые МКА максимально сокращают перекрестную реактивность с Y.pseudotuberculosis до уровня редких единичных атипичных штаммов.
МЕТОД 1.
По инструкции для осуществления НИМФ на предметном стекле готовят парные мазки из взвеси исследуемых бактерий из имеющейся музейной культуры, или культуры из первичных посевов пробы, или из культуры, выделенной после экспериментального заражения животных взвесями исследуемых бактерий. Для обнаружения искомых бактерий в поле зрения при визуальном обследовании мазков необходимо содержание бактерий в исследуемой пробе не менее 106 м.к. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют в течение 2 часов в 70% этиловом спирте, просушивают на воздухе и наносят на один мазок мышиные МКА к F1, на другой мазок мышиные МКА к PEV с титром 1:10, затем мазки выдерживают 1 час во влажной камере при 37°С, промывают ПБС буфером, затем наносят на мазки ФИТЦ против мышиных иммуноглобулинов в титре 1:16, снова выдерживают их во влажной камере 1 час при 37°С и промывают тем же буфером. Опять высушивают на воздухе, наносят минеральное масло и просматривают в люминесцентном микроскопе в поиске ярко светящихся бактерий (++++, +++) для большинства клеток или (+++) - для единичных, подтверждая наличие специфической реакции МКА с F1 и PFV. Свечение бактерий в мазках, обработанных МКА к F1 и МКА к PEV, свидетельствует о наличии бактерий Y.pestis, наличие свечения только в мазке, обработанном МКА к PEV при отсутствии свечения в мазке, обработанном МКА к F1, свидетельствует о наличии в мазке бактерий Y.pestis, не продуцирующих F1 или бактерий редких R-штаммов Y.pseudotuberculosis, отсутствие свечения в обоих мазках свидетельствует о наличии в них типичных бактерий Y.pseudotuberculosis или других бактерий. Для подтверждения этих результатов проводят метод II.
МЕТОД 2 (ПЦР)
Перед постановкой ПЦР проводят предварительную подготовку материала. Массу бактерий, сформировавших колонию или газон, в каждой из проб стерильной стеклянной палочкой перемещают в бактериологическую стеклянную пробирку, содержащую 200 мкл физиологического раствора, после чего выделяют ДНК как принято (Методические указания МУ 1.3.1794-03 «Организация работы при исследовании методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I и II группы патогенности» - М., 2003, - 38 с.).
Полученную тотальную ДНК исследуют в ПЦР парой праймеров, которые характеризуются как:
- vlm33for/ISrev1754 - праймеры, специфические для вида Y.pestis, направляющие синтез специфической последовательности (ампликона) длиной 400 пар нуклеотидов (п.н.);
- JS - праймеры, специфически реагирующие с ДНК Y.pseudotuberculosis, направляющие синтез специфической последовательности (ампликона) длиной 223 п.н.
| Условия постановки ПЦР | |||
| Праймеры | Условия реакции | ||
| Температура (°С) | Время реакции | Количество циклов | |
| JS, vlm33for/ISrev 1754 | 94 | 5 мин | 1 |
| 94 | 15 сек | 30 | |
| 65 | 15 сек | ||
| 72 | 30 сек | ||
| 72 | 5 мин | 1 | |
Учет результатов проводят по каждой паре праймеров. Все результаты с использованными праймерами оцениваются как положительные при наличии в ПЦР ампликонов известной длины, а именно: JS - 223 п.н., vlm33for/ISrev 1754 - 400 п.н. Отрицательными считают результаты при отсутствии ампликонов или при их наличии, но с нехарактерным числом пар нуклеотидов.
Во время проведения этапов специфической индикации с целью определения штаммов возбудителя чумы можно применять праймеры в различных вариантах:
а) при идентификации по виду бактерий из отдельных колоний в посевах проб при положительных результатах НИМФ при проведении ПЦР используют две пары праймеров - vlm33for/ISrev1754 и JS отдельно;
б) при идентификации Y.pseudotuberculosis из отдельных колоний в посевах проб при отрицательных результатах НИМФ при проведении ПЦР используют только пару праймеров JS.
Анализ суммарных результатов НИМФ и ПЦР-тестирования проводят, руководствуясь таблицей 1.
Предлагаемое изобретение иллюстрируется примерами проведения идентификации и межвидовой дифференциации штаммов видов Yersinia pestis и Yersinia pseudotuberculosis.
Пример 1.
На исследование поступила культура, полученная после высева из органов белой мышки, зараженной материалом, подозрительным на наличие возбудителя чумы, из ее взвеси делают мазки на обезжиренном предметном стекле для НИМФ, часть оставшейся культуры обеззараживают и выделяют ДНК, как описано ранее для проведения ПЦР.
Затем первоначально мазки обеззараживают и исследуют в НИМФ, как описано выше, а с ДНК производят постановку ПЦР с праймерами: vlm33for/ISrev l754 и JS. Для каждой пары праймеров применяют отдельную пробирку. Реакция проходит в объеме 25 мкл реакционной смеси, содержащей 60 mM Трис HCl, рН 8,5, 25 mM KCl, 1,5 mM MgCl2, по 200 mkM каждого дНТФ, 0,1% ТритонХ-100, 10mM 2-меркаптоэтанол, 1 ед Taq-полимеразы и по 5 рмоль каждого праймера. Реакцию амплификации проводят в программируемом термостате «Терцик». Условия амплификации включали стадии денатурации, отжига и элонгации, как описано выше. Продукты амплификации анализируют в 2% агарозном геле. В качестве контролей используют: а) отрицательный контроль - в пробирки с реакционной смесью вносят по 5 мкл дистиллированой воды; б) положительный контроль в виде ДНК штамма возбудителя чумы Yersinia pestis EV76 - в пробирки с реакционной смесью вносят по 5 мкл выделенной ДНК; в) положительный контроль для праймеров, «узнающих» только последовательности возбудителя псевдотуберкулеза, - JS. В пробирки с реакционной смесью вносят по 5 мкл выделенной ДНК любого ранее идентифицированного штамма Yersinia pseudotuberculosis. Результаты идентификации представлены в таблице 2.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, проба №1 содержит ДНК, взаимодействующую с vlm33for/ISrev1754, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов (400 п.н.), характерных для возбудителя чумы, и содержит бактерии, на поверхности которых имеется специфический капсульный антиген F1, синтезируемый популяцией бактерий при 28°С и связанный с Fra-плазмидой, а также обязательный и специфический для чумного микроба белок (PFV), синтез которого не требует повышения температуры культивирования и характерных для возбудителя чумы плазмид. Это свидетельствовало о том (см. таблицу 1), что обнаруженные бактерии представляют штамм вида Y.pestis.
Пример 2.
На исследование поступили колонии из посева на агаровую чашку крови больной крысы, подозрительной на заболевание чумой или псевдотуберкулезом. Из них сделана взвесь для приготовления мазков на обезжиренном предметном стекле для НИМФ, часть оставшейся культуры обеззаражена и выделена ДНК, как описано ранее для проведения ПЦР. Этапы постановки проб описаны в примере 1. Учет результатов приведен в таблице 3.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, что проба №2 содержит ДНК, взаимодействующую с JS парой праймеров, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов 223 п.н., характерных для возбудителя псевдотуберкулеза, и содержит бактерии, на поверхности которых нет специфического F1-антигена и обязательного для чумного микроба белка PFV, синтез которого не требует повышения температуры культивирования и характерных для возбудителя чумы плазмид. Это свидетельствует о том (см. таблицу 1), что выявленная ДНК и обнаруженные бактерии принадлежат виду Y.pseudotuberculosis.
Пример 3.
На исследование поступила культура неизвестного возбудителя (проба №3), выделенная из органов лесной мыши, труп которой обнаружен в одном из сельских районов. После приготовления взвеси и выделения ДНК, как это описано выше, выполнены НИМФ и ПЦР. Результаты приведены в таблице 4.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, что проба №3 содержит ДНК, взаимодействующую с двумя парами праймеров vlm33for/ISrev1754 и JS, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов 400 п.н. и 223 п.н., характерных соответственно для возбудителей чумы и псевдотуберкулеза, и содержит бактерии, на поверхности которых нет специфического F1-антигена, но есть обязательный для чумного микроба белок PFV, синтез которого не требует повышения температуры культивирования и плазмид, характерных для возбудителя чумы. Это свидетельствует о том (см. таблицу 1), что в пробе обнаружены бактерии, принадлежащие к двум видам - Y.pestis и Y.pseudotuberculosis, что имеет место при микс-инфекции. Проба нуждается в дополнительном исследовании по разделению бактерий двух видов специальными методами с последующим их исследованием предлагаемым способом.
Пример 4.
Из порта, принимающего корабли из длительных зарубежных рейсов, на исследование поступили крысы, выловленные с признаками инфекционного заражения. Из крыс высеяны однотипные чистые культуры возбудителя, которые не идентифицированы и обозначены как проба №4. После приготовления взвеси бактерий, а из нее мазков и ДНК были выполнены НИМФ и ПЦР. Результаты исследований представлены в таблице 5.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, что проба №4 содержит ДНК, взаимодействующую с парой праймеров JS, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов 223 п.н., характерных для возбудителя псевдотуберкулеза, и содержит бактерии, на поверхности которых нет специфического F1-антигена, но присутствует обязательный для чумного микроба белок PFV, синтез которого не требует повышения температуры культивирования и характерных для возбудителя чумы плазмид. Это свидетельствует о том (см. таблицу 1), что обнаруженные бактерии принадлежат виду Y.pseudotuberculosis и являются атипичными для этого вида по PFV-белку, имея определенное сходство с бактериями Y.pestis.
Пример 5.
На исследование поступила культура возбудителя (проба 5), полученная из музея живых культур противочумного института, идентифицированная ранее как возбудитель псевдотуберкулеза, но имеющая некоторые свойства, похожие на Y.pestis. После приготовления из этой культуры взвеси, а из нее мазков и ДНК были выполнены НИМФ и ПЦР. Результаты исследования представлены в таблице 6.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, что проба №5 содержит ДНК, взаимодействующую с парой праймеров, vlm33for/ISrev1754, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов 400 п.н., характерных для возбудителя чумы, и содержит бактерии, на поверхности которых нет специфического F1-антигена, однако присутствует обязательный для чумного микроба белок PFV, синтез которого не требует повышения температуры культивирования и характерных для возбудителя чумы плазмид. Это свидетельствует о том (см. таблицу 1), что обнаруженные в пробе №5 бактерии принадлежат виду Y.pestis, но не способны продуцировать F1 антиген.
Пример 6.
На исследование поступила культура возбудителя, полученная при 28°С после высева из органов белой мышки, зараженной материалом, подозрительным на наличие возбудителя чумы (проба №6). После приготовления взвеси и выделения ДНК были выполнены НИМФ и ПЦР. Результаты тестов представлены в таблице 7.
Таким образом, ПЦР и НИМФ показали, что проба №6 содержит ДНК, взаимодействующую с парой праймеров vlm33for/ISrev1754, итогом чего стала амплификация специфических фрагментов 400 п.н., характерных для возбудителя чумы, и содержит бактерии, на поверхности большинства из них нет специфического F1-антигена, который у этого штамма при 28°С или очень слабо продуцируется, или вообще не синтезируется, и только отдельные клетки продуцируют его, однако присутствует обязательный для чумного микроба белок PFV, синтез которого не требует повышения температуры культивирования и характерных для возбудителя чумы плазмид. Это свидетельствует о том (см. таблицу 1), что обнаруженные в пробе №6 бактерии принадлежат виду Y.pestis и являются атипичными, для этого вида по регуляции синтеза F1 антигена и с неоднородным составом по данному признаку.
Использование предложенного способа позволяет эффективно с высокой степенью достоверности проводить идентификацию двух иерсиний: Y.pestis и Y.pseudotuberculosis благодаря применению комплекса более специфических праймеров (JS, vlm33for/ISrev1754) в сочетании с НИМФ на специфический для чумного микроба F1-антиген и обязательный поверхностный антигенный белок PFV, синтез которого не зависит от температуры культивирования микроба, наличия в бактериях чумы характерных для вида Y.pestis плазмид, и который продуцируется всеми штаммами чумного микроба даже в отсутствие других диагностических антигенов, позволяет:
- с высокой степенью достоверности ускоренно проводить идентификацию бактерий штаммов видов Y.pestis и Y.pseudotuberculosis независимо от их сходства и формы изменчивости;
- ускоренно выявлять случаи смешанной инфекции двумя иерсиниями и факты циркуляции их в одном очаге;
- проводить экспресс-детекцию микс-культур Y.pestis и Y.pseudotuberculosis;
- обнаруживать штаммы Y.pestis с популяциями, которые отличаются по характеру терморегуляции F1-антигена и клеточному составу, необходимые для выяснения механизма температурозависимости синтеза этого антигена.
- выявлять редкие штаммы Y. pseudotuberculosis, способные продуцировать обязательный для Y.pestis PFV-антиген, и перспективные в качестве модели для изучения биологии и эволюции иерсиний.
Claims (1)
- Способ идентификации штаммов видов Y.pestis и Y.pseudotuberculosis путем обнаружения капсульного диагностического антигена FI и поверхностного антигенного белка PFV в серологической реакции с исследуемой пробой и выделения ДНК из бактерий с последующим тестированием в ПЦР, отличающийся тем, что исследуемую пробу изучают параллельно двумя методами путем постановки реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИМФ) и ПЦР, причем НИМФ проводят с моноклональными антителами ВСКК (П-384Д и 434Д), последние взаимодействуют со специфическим для вида Y.pestis капсульным антигеном FI или плазмидо-температуро-независимым поверхностным белком PFV, который имеется у всех штаммов Y.pestis и редких штаммов в R-форме Y.pseudotuberculosis, при этом по свечению бактерий определяют присутствие в пробе полноценных или бесфракционных бактерий Y.pestis или типичных и PFV-атипичных штаммов Y.pseudotuberculosis, а ПЦР выполняют с помощью 2 пар праймеров: vlm33for/ISrevl754 - специфичных для вида Y.pestis и JS - специфичных для вида Y.pseudotuberculosis, причем синтез специфических фрагментов ДНК, направленный парой праймеров vlm33for/ISrevl754, подтверждает наличие в пробе штаммов возбудителя чумы, а синтез специфических фрагментов ДНК, направленный парой праймеров JS, подтверждает наличие в пробе штаммов возбудителя псевдотуберкулеза, причем полученные с первой парой праймеров результаты оценивают как положительные при наличии ампликонов в 400 п.н., а второй пары при наличии ампликонов в 223 п.н., идентификацию исследуемой пробы проводят путем совмещения результатов НИМФ и ПЦР с контрольными штаммами.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010100622/10A RU2422535C1 (ru) | 2010-01-11 | 2010-01-11 | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010100622/10A RU2422535C1 (ru) | 2010-01-11 | 2010-01-11 | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2422535C1 true RU2422535C1 (ru) | 2011-06-27 |
Family
ID=44739183
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010100622/10A RU2422535C1 (ru) | 2010-01-11 | 2010-01-11 | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2422535C1 (ru) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2465319C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы i |
| RU2465321C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы ia |
| RU2465317C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы ii |
| RU2465318C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы iia |
| RU2478704C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 2B8 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| RU2478703C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 5G6 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| RU2486252C1 (ru) * | 2012-05-12 | 2013-06-27 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | СПОСОБ ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ Yersinia pseudotuberculosis ОТ Yersinia pestis И Yersinia enterocolitica |
| RU2736649C1 (ru) * | 2019-12-30 | 2020-11-19 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования |
-
2010
- 2010-01-11 RU RU2010100622/10A patent/RU2422535C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| СТЕНКОВА А.Н. с соавт. Разработка многопраймеровой ПЦР для идентификации бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y.pestis, Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - М.: Мед., №3, 2008, с.18. * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2465319C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы i |
| RU2465321C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы ia |
| RU2465317C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы ii |
| RU2465318C1 (ru) * | 2011-09-16 | 2012-10-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" | Тест-штамм yersinia pseudotuberculosis для дифференциации бактерий yersinia pseudotuberculosis генетической группы iia |
| RU2478704C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 2B8 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| RU2478703C1 (ru) * | 2011-12-20 | 2013-04-10 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 5G6 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К V АНТИГЕНУ Yersinia pestis |
| RU2486252C1 (ru) * | 2012-05-12 | 2013-06-27 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | СПОСОБ ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ Yersinia pseudotuberculosis ОТ Yersinia pestis И Yersinia enterocolitica |
| RU2736649C1 (ru) * | 2019-12-30 | 2020-11-19 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ генетической дифференциации штаммов Yersinia pseudotuberculosis путем молекулярно-генетического типирования |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2422535C1 (ru) | СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ШТАММОВ ВИДА Yersinia pestis И Yersinia pseudotuberculosis | |
| Fenollar et al. | Molecular diagnosis of bloodstream infections caused by non-cultivable bacteria | |
| Cooper et al. | Detection of Coxiella burnetii DNA in wildlife and ticks in northern Queensland, Australia | |
| Tan et al. | Phenotypic and genotypic characterisation of Blastocystis hominis isolates implicates subtype 3 as a subtype with pathogenic potential | |
| Klingspor et al. | Aspergillus PCR formidable challenges and progress | |
| Mori et al. | Critical aspects for detection of Coxiella burnetii | |
| Frey et al. | Intestinal Tritrichomonas foetus infection in cats in Switzerland detected by in vitro cultivation and PCR | |
| Frickmann et al. | Detection of tropical fungi in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue: still an indication for microscopy in times of sequence-based diagnosis? | |
| Zweifel et al. | Prevalence of Chlamydophila psittaci in wild birds—potential risk for domestic poultry, pet birds, and public health? | |
| CN110564880A (zh) | 检测布鲁氏菌减毒活疫苗株和野毒株的方法及应用 | |
| Guimaraes et al. | Detection of Bartonella spp. in neotropical felids and evaluation of risk factors and hematological abnormalities associated with infection | |
| Chang et al. | Cat-scratch disease in veterinary-associated populations and in its cat reservoir in Taiwan | |
| Çelebi et al. | A comparative study of detecting Chlamydophila psittaci in pet birds using isolation in embryonated egg and polymerase chain reaction | |
| El Kholy et al. | Diagnosis of human brucellosis in Egypt by polymerase chain reaction | |
| Eriksson et al. | Diagnosis of cytomegalovirus in bronchoalveolar lavage by polymerase chain reaction, in comparison with virus isolation and detection of viral antigen | |
| Asgharzade et al. | Detection of Mycoplasma gallisepticum in experimentally infected broiler chickens using culture, SPA, ELISA, and PCR methods | |
| Źródłowski et al. | Fluorescent in situ hybridization and Gram-stained smears of whole blood as complementary screening tools in the diagnosis of sepsis | |
| CN102146468B (zh) | 辅助鉴定猪链球菌2型与猪链球菌7型的专用引物及其应用 | |
| Xian | A molecular survey of tick-borne pathogens (Anaplasma and Ehrlichia spp.) in animal and tick samples in Malaysia | |
| RU2354691C1 (ru) | Штамм риккетсий генотипа "candidatus rickettsia tarasevichiae" - кандидат в новый вид, используемый для идентификации риккетсий и получения диагностических препаратов | |
| Ahari et al. | DNA extraction using liquid nitrogen in Staphylococcus aureus | |
| KR20160075943A (ko) | 장수풍뎅이 병원성 바이러스 AdV(Allomyrina dichotoma Virus)의 감염 진단용 프라이머 세트 및 그 진단방법 | |
| Năsoiu et al. | Advanced diagnostic methods as tools to investigate the exposure to bartonella infections in cats | |
| RU2730658C1 (ru) | Набор для выявления патогенных микроорганизмов вида Listeria monocytogenes и способ их выявления в пробах биоматериала, в пробах кормов, в объектах внешней среды | |
| CN105063188B (zh) | 结核杆菌感染检测的荧光原位杂交检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180112 |