RU2418066C1 - Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток - Google Patents
Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2418066C1 RU2418066C1 RU2010116355/10A RU2010116355A RU2418066C1 RU 2418066 C1 RU2418066 C1 RU 2418066C1 RU 2010116355/10 A RU2010116355/10 A RU 2010116355/10A RU 2010116355 A RU2010116355 A RU 2010116355A RU 2418066 C1 RU2418066 C1 RU 2418066C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lmsc
- cells
- lmscs
- cell
- nur
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/02—Atmosphere, e.g. low oxygen conditions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. лМСК предкультивируют в условиях гипоксии 5% O2. Затем культивируют в условиях гипоксии: 1-3% при необходимости получить большое количество клеток за 1-2 пассажей или при 5% O2 при возможности более длительного культивирования. Изобретение позволяет получить большое количество МСК за короткий промежуток времени. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении культур прогениторных клеток для различных целей.
С учетом возрастания области применения прогениторных клеток перед цитологами достаточно остро стоит проблема получения в короткий временной период требуемого количества мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток с низкой гетерогенностью и высокой жизнеспособностью, поскольку именно такие клетки необходимы для решения практических задач регенеративной медицины.
Мезенхимальные стромальные клетки-предшественники (МСК) могут быть выделены из различных тканей. Они представляют собой малочисленную популяцию клеток, характеризующихся большим пролиферативным потенциалом, способных к самоподдержанию с сохранением недифференцированного состояния, а также обладающих возможностью дифференцироваться в различные клеточные типы под действием определенных стимулов. Способность МСК дифференцироваться, по крайней мере, в клетки тканей мезенхимального происхождения лежит в основе их репаративного потенциала.
До настоящего времени костный мозг рассматривался как главный источник стволовых клеток взрослого организма. Костный мозг содержит гемопоэтические стволовые клетки и их более коммитированные потомки, строму, а также так называемые мезенхимальные стромальные клетки или клетки-предшественники взрослого организма (МСК) (Caplan AI. Mesenchymal stem cells. J Orthop Res. 1991 #9 Vol.5, p.641-650; Friedenstein AJ. Precursor cells of mechanocytes. Int. Rev. Cytol. 1976 #47, p.327-359).
В настоящее время доказано существование МСК не только в костном мозге, но и практически во всех тканях организма, например в коже, жировой ткани, эпителии тонкого кишечника и др. (Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., et al. Multiliniage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. // Tissue Eng. - 2001. - Vol.7. - P.211-226; Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H. et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. // Molecular biology of the cell. - 2002. - Vol.13. - P.4279-4295 и др.).
Жировая ткань рассматривается как одна из альтернатив костному мозгу для получения МСК и последующего их применения в терапевтических целях. Подкожная жировая клетчатка, как и костный мозг, является производным мезенхимы и содержит строму, которая может быть легко изолирована. К тому же процедура взятия жировой ткани является значительно менее травматичной и переносится пациентами значительно легче, чем пункция костного мозга. Многими исследователями, независимо друг от друга, показано, что клетки, выделяемые при ферментативной обработке жировой ткани и последующем культивировании in vitro, способны дифференцироваться в различные клеточные типы под воздействием соответствующих индукторов (Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H. et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. // Molecular biology of the cell. - 2002. - Vol.13. - P.4279-4295; Katz A.J., Tholpady A, Tholpady S.S., Shang H., Ogle R.C. Cell surface and transcriptional characterization of human adipose-derived adherent stromal (hADAS) cells. Stem Cells. 2005 # 23 Vol.3, p.412-423). Полученные данные свидетельствуют о том, что МСК, выделенные из жировой ткани и культивируемые in vitro, могут быть использованы в регенеративной медицине. В то же время методы выделения МСК во многих лабораториях различаются. Большинство исследователей для выделения МСК из жировой ткани используют методику, предложенную в работе Ryden (Rydén M., Dicker A., Götherström C., Aström G., Tammik C., Amer P., Le Blanc K. Functional characterization of human mesenchymal stem cell-derived adipocytes. Biochem Biophys Res Commun. 2003 #311, Vol.2. p391-397), которая заключается в измельчении ткани, обработке ее коллагеназой, нескольких последовательных центрифугированиях и адгезии полученного клеточного осадка на пластике. Получаемые при выделении из жира клетки называют мультипотентными мезенхимальными стромальными клетками-предшественниками, выделенными из липоаспирата или жировой ткани (далее - лМСК).
Возможное использование лМСК в регенеративной медицине ставит перед исследователями серьезные проблемы - как за меньший период времени культивирования МСК вне организма человека нарастить достаточную для использования клеточную массу с высоким уровнем прогениторных свойств.
Целью изобретения является ускорение получения низкодифференцированных лМСК путем модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции этих клеток за счет предкультивирования лМСК в условиях гипоксии.
Состав газовой среды является одним из наиболее значимых факторов, определяющих жизнедеятельность клеток. В современной исследовательской практике культивирование клеток проводится обычно с использованием среды, содержание кислорода в которой соответствует содержанию кислорода в воздухе. Снижение уровня кислорода в среде позволяет приблизить условия культивирования к физиологическим.
Техническим результатом является ускорение наращивания массы лМСК за счет более высокой пролиферативной активности, без потери жизнеспособности клеток.
Способ осуществлялся следующим образом.
МСК выделяли из липоаспирата человека. Липоаспират можно получить после процедуры липосакции у пациентов, обратившихся в специализированную клинику. Материал до выделения хранили в холодильнике при 4°С.
Выделение лМСК из липоаспирата и получение первичной культуры проводили с помощью следующих средств.
Материалы:
Пробирки стерильные, 50 мл (Nunc, Дания)
Пипетки стерильные, 10 и 25 мл (Nunc, Дания)
Клеточный фильтр, стерильный, 100 нм (Nunc, Дания)
Чашки Петри, 60 и 90 мм, стерильные, (Nunc, Дания)
Флаконы культуральные, 25 см2 и 75 см2 (Nunc, Дания)
Пробирки нестерильные для проточного цитофлуориметра
Наконечники стерильные на 200-1000 мкл (Eppendorf, Германия)
Ростовая среда: DMEM с низким содержанием глюкозы, пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл
Амфотерицин В 50 мкг/мл, L-глютамин 2 мМ, натрия бикарбонат 1 г/л
Сыворотка фетальная телячья (FBS) (Hyclone, США)
Трипсин-EDTA 0,25-0,04% (Gibco, UK)
D-PBS (Gibco, UK)
Коллагеназа IА (Sigma-Aldrich, США)
Полная среда: ростовая среда +10% FBS
Оборудование:
Центрифуга Eppendorf 5804R
Ламинарный шкаф (Сампо, Россия)
Водяная баня (Elmi, Латвия)
Весы (Ohaus, Германия)
Электрическая пипетка
Пипетки автоматические, набор (Eppendorf, Германия)
Микроскоп инвертированный, фазово-контрастный (Leica, Германия)
Проточный цитофлуориметр BeckmanCoulter Epix XL (BeckmanCoulter, США)
СО2-инкубатор (Sanyo, Япония)
Стандартные условия культивирования: 5% CO2+95% воздуха, 37°С, 100% влажность.
В 50 мл пробирку помещали липоаспират (примерно 1/3 от объема пробирки) и, долив до 50 мл D-PBS, аккуратно встряхивали 5 раз.
Центрифугировали 5 минут при 1500 оборотов в минуту, при 18°С. На дне пробирки находится осадок из эритроцитов, над осадком - слой буфера и затем липоаспират. Липоаспират сверху покрыт слоем жира из разрушенных адипоцитов.
Осторожно переносили липоаспират в чистую стерильную пробирку (50 мл) и повторно отмывали ткань при следующих условиях - 10 минут, 1000 об/мин, 18°С.
Осторожно переносили липоаспират в предварительно взвешенную стерильную пробирку (50 мл), взвешивали и добавляли раствор коллагеназы IA. Приготовляли 0,15% раствор коллагеназы.
В пробирку с предварительно взвешенным липоаспиратом добавляли раствор фермента до конечной концентрации 0,075%.
Инкубировали на водяной бане 30 минут при 37°С, периодически встряхивали - 1 раз в 5 минут.
Инактивировали коллагеназу IA добавлением полной среды до 50 мл.
Центрифугировали 5 минут, 1500 об/мин, при 18°С.
Супернатант сливали и осадок ресуспендировали в 10 мл полной среды, доведя до 50 мл ростовой средой.
Центрифугировали 5 минут, 1500 об/мин, при 18°С.
Супернатант сливали и осадок ресуспендировали в 10 мл полной среды.
Клеточный фильтр помещали на пробирку 50 мл и суспензию клеток и остатков ткани пропускали через него. В пробирку добавляли ростовую среду до 50 мл.
Центрифугировали 10 минут, 1000 об/мин, при 18°С.
Супернатант сливали, осадок ресуспендировали в 10 мл ростовой среды.
Отбирали аликвоту среды с клетками и подсчитывали количество ядросодержащих клеток в гемацитометре.
Разводили клеточную суспензию из расчета, чтобы плотность посадки составляла 2×105-3×105 см2.
Размещали клетки в культуральные флаконы, оставляли в СО2-инкубаторе на 24 часа.
Отбирали надосадочную жидкость с неприкрепившимися клетками и 2 раза промывали D-PBS.
Добавляли нужное количество полной среды.
Меняли среду через 2 дня на 3.
Контролировали рост клеток под микроскопом.
Пассировали клетки при достижении 70-80% конфлуентности.
Создание условий культивирования с пониженным содержанием кислорода в среде проводили следующим образом. Часть клеток сразу после выделения помещали в мультигазовый инкубатор Sanyo (Япония), где поддерживалась соответствующая концентрация кислорода (5%). Культура клеток постоянно находилась в условиях пониженного содержания кислорода, и период нормоксии составлял не более 30 минут при замене среды.
Сразу после выделения все клетки были разделены на 2 части и помещены в условия нормоксии (95% воздуха, 5% СО2, N-клетки, N-лМСК) или гипоксии (5% O2, 5% CO2, 90% N2, Hyp-клетки, Нур-лМСК). Адгезию клеток после выделения, культивирование и последующее субкультивирование постоянно проводили в указанных газовых средах.
Далее было проведено сравнительное изучение пролиферативной активности, жизнеспособности и иммунофенотипа лМСК, перемещенных в среду культивирования с содержанием кислорода, пониженным до 5%, 3%, 1% и 3%,1% после постоянного предкультивирования клеток при 20% и 5% O2 соответственно. Сравнительную оценку пролиферативной активности проводили в течение 4-х пассажей (с 1-го по 4-й).
Предкультивирование проводится для обогащения клеточной популяции малодифференцированными клетками-предшественниками сразу после выделения МСК до достижения клетками монослоя.
Пример 1.
Таблица 1 | ||||
Влияние различных концентраций О2 в среде культивирования на морфо-функциональные характеристики лМСК. | ||||
Условия предкультивирования | Условия культивирования | |||
20% | 5% | 3% | 1% | |
N-лМСК | N-лМСК 20% | N-лМСК 5% | N-лМСК 3% | N-лМСК 1% |
Нур-лМСК | - | Нур-лМСК 5% | Нур-лМСК 3% | Нур-лМСК 1% |
лМСК выделяли согласно описанной выше методике. Выделенные клетки предкультивировали в соответствующих условиях (20% или 5% О2) и получали соответственно N-лМСК и Нур-лМСК. На первом пассаже часть клеток оставляли в исходных условиях (20% или 5% О2), а часть перемещали в условия пониженного содержания О2 согласно табл.1.
В течение 4-х пассажей при всех вариантах культивирования лМСК определяли клеточный прирост, рассчитывая количество клеточных удвоений в течение каждого пассажа и затем суммировали эти данные для определения количества клеточных удвоений за все время культивирования.
При сравнении клеточного прироста в культурах М-лМСК 20% и культурах этих же клеток, помещенных в гипоксические условия (фиг.1А), оказалось, что при понижении содержания О2 пролиферативная активность лМСК увеличивалась в 1,5-2 раза по сравнению с лМСК в нормоксии. Клеточный прирост Нур-лМСК 5%, Нур-лМСК 3% и Нур-лМСК 1% был примерно одинаков и превышал таковой для N-лМСК 20% более чем в 2 раза (фиг.1В). В целом клеточный прирост в Нур-лМСК был выше, чем в N-лМСК, переведенных в гипоксические условия.
Количество клеточных удвоений определяли по окончании каждого пассажа и затем данные суммировали. На фиг.2 приведены результаты сравнения клеточных приростов М-лМСК 20%, Нур-лМСК 5% и этих же клеток, переставленных в условия пониженного О2, в течение каждого из исследованных пассажей.
Как можно видеть на диаграммах, приведенных на фиг.2, прирост N-лМСК 20% был невелик и не отличался на 1-3-м пассажах. На 2-3-м пассажах в культурах Нур-лМСК 5%, а также в культурах N-лМСК 20% и Нур-лМСК 5%, перемещенных в условия пониженного O2, наблюдалось значительное увеличение клеточного прироста. При 3% и 1% O2 на 1-3-м пассажах количество клеточных удвоений превышало этот показатель в культурах лМСК при 5% O2, а на 4-м пассаже - было в 1,5-2 раза меньше, чем при 5% O2.
Результаты оценки жизнеспособности лМСК, культивируемых при различных концентрациях О2 в газовой фазе, приведены в табл.2, 3.
Таблица 2 | |||||||
Жизнеспособность лМСК, культивируемых при различных концентрациях O2, после первого пассажа. | |||||||
N-лМСК 20% | N-лМСК 5% | N-лМСК 3% | N-лМСК 1% | Нур-лМСК 5% | Нур-лМСК 3% | Нур-лМСК 1% | |
апоптоз | 0,75 | 0,59 | 0,47 | 1,39 | 1,49 | 0,6 | 0,6 |
некроз | 7,18 | 5,04 | 4,83 | 19,68 | 6,41 | 2,8 | 2,5 |
живые | 92,07 | 94,37 | 94,7 | 78,93 | 92,1 | 96,6 | 96,9 |
Таблица 3 | |||||||
Жизнеспособность лМСК, культивируемых при различных концентрациях О2, после второго пассажа. | |||||||
N-лМСК 20% | N-лМСК 5% | N-лМСК 3% | N-лМСК 1% | Нур-лМСК 5% | Нур-лМСК 3% | Нур-лМСК 1% | |
апоптоз | 0,79 | 7,3 | 6,02 | 10,5 | 1,82 | 0,47 | 0,72 |
некроз | 2,39 | 10,2 | 34,08 | 14,39 | 3,54 | 2,56 | 3,36 |
живые | 96,82 | 82,5 | 59,9 | 75,11 | 94,64 | 96,8 | 95,92 |
Заметное снижение доли живых клеток было отмечено после первого пассажа в N-лМСК 1% и после второго пассажа в N-лМСК 3% и N-лМСК 1%.
Иммунофенотипирование лМСК, культивируемых при различной концентрации О2 в среде, не выявило существенных различий по экспрессии CD73 антигена МСК (фиг.3), во всех случаях от 90 до 100% клеток были CD73-положительные клетки. Экспрессия CD54-антигена значительно варьировала на лМСК, и какой-либо зависимости от концентрации О2 или номера пассажа обнаружить не удалось. Доля СD90-положительных клеток среди лМСК, культивируемых при 5% О2 в течение 2-4-го пассажей, была достоверно выше, чем среди Нур-лМСК 3% и Нур-лМСК 1%.
Выводы.
Сравнение морфо-функциональных особенностей лМСК, культивируемых при 3% и 1% O2 после предкультивирования при 20% и 5% O2, показало следующее:
- При культивировании в условиях пониженного до 5%, 3% и 1% О2 пролиферативная активность лМСК превышает таковую при 20% О2. Наиболее значительный прирост наблюдается на 2-3-м пассажах культивирования. Пролиферативная активность лМСК, предкультивированных в нормоксии, при перемещении в гипоксию (1-3-5% О2) ниже, чем пролиферативная активность лМСК, предкультивированных в гипоксии.
- Сравнение прироста лМСК при культивировании их при различных пониженных концентрациях О2 показало, что количество клеточных удвоений в течение 4-х пассажей при 1-3-5% О2 практически одинаково, но, при 1% и 3% O2 после всплеска пролиферативной активности на 1-3-м пассажах, клеточный прирост на 4-м пассаже резко уменьшался, тогда как при 5% O2 лМСК сохраняли достаточно высокую пролиферативную активность и на последующих пассажах.
- лМСК, перемещенные в условия пониженного содержания О2, имели высокую жизнеспособность (90% и более). Заметное снижение доли живых клеток было отмечено при N-лМСК 3% и N-лМСК 1%. Можно предположить, что лМСК, которые предкультивировали в условиях нормоксии, оказались менее устойчивы к значительному снижению концентрации О2 в среде, чем лМСК, предкультивированные в условиях гипоксии.
- Большая часть лМСК в исследованных клеточных популяциях экспрессировала маркер мезенхимальных стромальных клеток CD73, а доля СD90-положительных клеток была самой большой среди Нур-лМСК 5%.
Таким образом, снижение концентрации кислорода в среде культивирования лМСК ниже 5% не оказывает повреждающего действия на них. Однако полученные данные позволяют предположить, что эффекты понижения О2 до 5% и 1-3% несколько отличаются. лМСК реагировали на снижение концентрации О2 в среде культивирования до 5% плавным увеличением клеточного прироста в течение 1-3-го пассажей с сохранением достаточно высокой пролиферативной активности в дальнейшем. При 5% О2 больше всего лМСК демонстрировали мезенхимальный маркер CD90. Кроме того, при общей высокой жизнеспособности лМСК, при перемещении N-лМСК в 3% и 1% O2 значительно увеличивалась доля мертвых клеток в популяции.
На основании полученных результатов можно предложить две возможные схемы культивирования.
Для создания условий культивирования, близких к физиологическим, которые бы обеспечивали устойчивый прирост лМСК с выраженным мезенхимальным фенотипом и высокой жизнеспособностью, необходимо использовать мягкое гипоксическое воздействие за счет снижения концентрации О2 до 5%.
В тех случаях, когда необходимо быстрое наращивание клеточной массы, в течение 1-2 пассажей могут быть использованы более жесткие гипоксические условия - снижение О2 до 3% и 1%. При этом необходимо учитывать, что лМСК, предкультивированные в нормоксических условиях перед помещением в гипоксию, имеют пониженную жизнеспособность, поэтому предпочтительно использовать лМСК, постоянно культивируемые при 5% О2.
Исследования показали, что лМСК, культивируемые при стандартном (20% O2) и пониженном до 5% содержании кислорода в среде, отличаются по своим морфо-функциональным характеристикам. В частности, лМСК, постоянно культивируемые в среде с пониженным содержанием O2, обладают более высокой пролиферативной активностью, что делает методику выращивания клеток при пониженном О2 весьма привлекательной с точки зрения подготовки значительного количества клеток для нужд клеточной терапии и регенеративной медицины.
Описание чертежей.
На Фиг.1 показан Прирост N-лМСК и Нур-лМСК, перемещенных для культивирования в среду с пониженным содержанием О2, где
А. Количество клеточных удвоений в течение 4-х пассажей в культурах N-лМСК 20% и N-лМСК при пониженном содержании О2.
В. Количество клеточных удвоений в течение 4-х пассажей в культурах Нур-лМСК 5% и Нур-лМСК при пониженном содержании О2.
Количество клеточных удвоений определяли по окончании каждого пассажа и затем данные суммировали.
На Фиг.2 показан клеточный прирост лМСК, культивируемых в газовой среде различного состава, на 1-4-м пассажах.
На Фиг.3 показан иммунофенотип лМСК, культивируемых при пониженном содержании кислорода в среде.
Claims (2)
1. Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток in vitro, включающий:
предкультивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5%;
культивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием O2 в количестве 1-3% в течение 1-2 пассажей.
предкультивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5%;
культивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием O2 в количестве 1-3% в течение 1-2 пассажей.
2. Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток in vitro, включающий:
предкультивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5%;
культивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5% в течение 3 и более пассажей.
предкультивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5%;
культивирование лМСК в условиях гипоксии с содержанием О2 в количестве 5% в течение 3 и более пассажей.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010116355/10A RU2418066C1 (ru) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток |
PCT/EP2011/053368 WO2011134707A1 (en) | 2010-04-26 | 2011-03-07 | Method for modifying the proliferative activity and differentiation capacity of multipotent mesenchymal stromal cells |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010116355/10A RU2418066C1 (ru) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2418066C1 true RU2418066C1 (ru) | 2011-05-10 |
Family
ID=44141211
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010116355/10A RU2418066C1 (ru) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2418066C1 (ru) |
WO (1) | WO2011134707A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2525143C1 (ru) * | 2013-03-22 | 2014-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр Российской Федерации-Институт медико-биологических проблем Российской академии наук | СПОСОБ ЭКСПАНСИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ (пкМНК) ex vivo В ПРИСУТСТВИИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ КЛЕТОК (ММСК) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3000875A1 (en) * | 2014-09-25 | 2016-03-30 | Philipps-Universität Marburg | Method for manufacturing of a composition comprising ex vivo expanded human mesenchymal stromal cells |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009097559A1 (en) * | 2008-01-30 | 2009-08-06 | Histogen, Inc. | Extracellular matrix compositions |
EP2446024A1 (en) * | 2009-06-26 | 2012-05-02 | Life&Light Limited | Mesenchymal stem cells grown under hypoxic conditions: compositions, methods and uses therefor |
-
2010
- 2010-04-26 RU RU2010116355/10A patent/RU2418066C1/ru not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-03-07 WO PCT/EP2011/053368 patent/WO2011134707A1/en active Application Filing
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЖАМБАЛОВА А.П. и др. Влияние пониженного содержания кислорода на дифференцировку мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга человека in vitro, оригинальные исследования. - Клеточная трансплантология, 2009, т.4, №3, с.47-51. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2525143C1 (ru) * | 2013-03-22 | 2014-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр Российской Федерации-Институт медико-биологических проблем Российской академии наук | СПОСОБ ЭКСПАНСИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ (пкМНК) ex vivo В ПРИСУТСТВИИ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ КЛЕТОК (ММСК) |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2011134707A1 (en) | 2011-11-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ponnaiyan et al. | Comparison of phenotype and differentiation marker gene expression profiles in human dental pulp and bone marrow mesenchymal stem cells | |
Baksh et al. | Adult human bone marrow–derived mesenchymal progenitor cells are capable of adhesion-independent survival and expansion | |
Zhu et al. | The comparition of biological characteristics and multilineage differentiation of bone marrow and adipose derived Mesenchymal stem cells | |
KR101211913B1 (ko) | 양막유래 중간엽 줄기세포 배양을 위한 배지조성물 및 이를 이용한 양막유래 중간엽 줄기세포의 배양방법 | |
Li et al. | Evaluation of isolation methods and culture conditions for rat bone marrow mesenchymal stem cells | |
Montemurro et al. | Angiogenic and anti-inflammatory properties of mesenchymal stem cells from cord blood: soluble factors and extracellular vesicles for cell regeneration | |
JP6921249B2 (ja) | 向上された臍帯由来付着型幹細胞、その製造方法及びその用途 | |
Naderi et al. | Adipogenic differentiation of adipose-derived stem cells in 3-dimensional spheroid cultures (microtissue): implications for the reconstructive surgeon | |
Hanson et al. | Comparative analysis of adipose-derived mesenchymal stem cells isolated from abdominal and breast tissue | |
Castegnaro et al. | Effect of platelet lysate on the functional and molecular characteristics of mesenchymal stem cells isolated from adipose tissue | |
CN103502437B (zh) | 高端粒酶活性的骨髓间充质干细胞、其制造方法和基于其的药物和治疗方法 | |
CN111826348B (zh) | 一种人诱导性多能干细胞来源的间充质干细胞体外高效制备方法和应用 | |
Yustianingsih et al. | Hypoxia enhances self-renewal properties and markers of mesenchymal stem cells | |
Tumangelova-Yuzeir et al. | Mesenchymal stem cells derived and cultured from glioblastoma multiforme increase Tregs, downregulate Th17, and induce the tolerogenic phenotype of monocyte‐derived cells | |
CN104762259A (zh) | 一种间充质干细胞的培养基及其大规模培养方法 | |
Yang et al. | Effect of peripheral blood-derived mesenchymal stem cells on macrophage polarization and Th17/Treg balance in vitro | |
Carvalho et al. | Characterization of mesenchymal stem cells derived from equine adipose tissue | |
Liu et al. | Comparison of the biological characteristics of mesenchymal stem cells derived from bone marrow and skin | |
El Atat et al. | An evaluation of the stemness, paracrine, and tumorigenic characteristics of highly expanded, minimally passaged adipose-derived stem cells | |
CN101821383A (zh) | 一种用于人成体原始间充质干细胞体外规模化培养的培养基、方法及获得的原始间充质干细胞及其应用 | |
CN110872574A (zh) | 一种高效可靠的hESC-MSC制备方法 | |
Aussel et al. | Quality assessment of a serum and xenofree medium for the expansion of human GMP-grade mesenchymal stromal cells | |
Wang et al. | GM-CSF accelerates proliferation of endothelial progenitor cells from murine bone marrow mononuclear cells in vitro | |
RU2418066C1 (ru) | Способ модификации пролиферативной активности и дифференцировочной потенции мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток | |
CN109674818A (zh) | hAMSCs在制备治疗急性移植物抗宿主病药物中的用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180427 |