RU2414926C1

RU2414926C1 - Hemostimulant and excitant and method for hemopoiesis stimulation

Info

Publication number: RU2414926C1
Application number: RU2009138629/15A
Authority: RU
Inventors: Андрей Владимирович Артамонов (RU); Андрей Владимирович Артамонов; Андрей Александрович Бекарев (RU); Андрей Александрович Бекарев; Евгений Иванович Верещагин (RU); Евгений Иванович Верещагин; Александр Михайлович Дыгай (RU); Александр Михайлович Дыгай; Вадим Вадимович Жданов (RU); Вадим Вадимович Жданов; Глеб Николаевич Зюзьков (RU); Глеб Николаевич Зюзьков; Владимир Васильевич Удут (RU); Владимир Васильевич Удут
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент")
Priority date: 2009-10-19
Filing date: 2009-10-19
Publication date: 2011-03-27

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to pharmacology and haematology. A hemostimulant represents hyaluronidase immobilised on low-molecular polyethylene glycol of molecular weight 400 to 4000 Da by directed accelerated electron flow 2.5 MeV with absorbed dose 2 to 10 kGy and dose setup rate 1.65 kGy/hour. For hemopoiesis stimulation, hyaluronidase immobilised as stated above is introduced either parenterally, or orally 1 time a day for 1-5 days in dose 10-1000 Unit/kg.

EFFECT: use of hyaluronidase immobilised with using an electron-beam synthesis technology enables higher safety and efficiency of hemopoiesis stimulation.

2 cl, 3 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии и гематологии.The invention relates to medicine, specifically to pharmacology and hematology.

Высокая частота встречаемости заболеваний системы крови и гематологических осложнений, в том числе ятрогенного характера, резистентных к современной медикаментозной терапии [1, 2], является основанием для разработки новых гемостимуляторов.The high incidence of blood system diseases and hematological complications, including iatrogenic in nature, resistant to modern drug therapy [1, 2], is the basis for the development of new hemostatic stimulants.

Известно большое количество гемостимулирующих средств [1, 2].A large number of hemostatic agents are known [1, 2].

Наиболее близким по природе происхождения к предлагаемому средству является препарат нативной гиалуронидазы, конъюгированной с полиоксидонием путем химического синтеза [3].The closest in nature of origin to the proposed tool is a preparation of native hyaluronidase conjugated with polyoxidonium by chemical synthesis [3].

Существует иммобилизированная с помощью ионизирующего излучения (нанотехнологии электронно-лучевого синтеза) гиалуронидаза, введение которой приводит к увеличению содержания прогениторных клеток в организме [4].There is immobilized using ionizing radiation (nanotechnology electron beam synthesis) hyaluronidase, the introduction of which leads to an increase in the content of progenitor cells in the body [4].

Авторами изобретения впервые выявлена выраженная гемостимулирующая активность иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы.The inventors for the first time revealed pronounced hemostimulating activity of electron-beam synthesis of hyaluronidase immobilized using nanotechnology.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату прототипом является способ стимуляции миелопоэза с помощью препарата нативной гиалуронидазы, который вводят парентерально в дозе 1000 ЕД/кг 1 раз в сутки, в течение 2 дней [5].The closest in technical essence and the achieved result of the prototype is a method of stimulating myelopoiesis using the drug of native hyaluronidase, which is administered parenterally at a dose of 1000 IU / kg 1 time per day for 2 days [5].

Недостатком данного способа является его эффективность только в случае применения препарата гиалуронидазы в указанной высокой/токсичной дозе [5]. При этом использование данного средства даже в терапевтическом режиме зачастую приводит к развитию целого ряда побочных эффектов и осложнений [6, 7], связанных, в первую очередь, с его иммуногенностью.The disadvantage of this method is its effectiveness only in the case of the use of the drug hyaluronidase in the specified high / toxic dose [5]. Moreover, the use of this drug even in a therapeutic regimen often leads to the development of a number of side effects and complications [6, 7], associated primarily with its immunogenicity.

Данный способ является наиболее близким к заявляемому по механизму действия и техническому результату и выбран в качестве прототипа.This method is the closest to the claimed by the mechanism of action and technical result and is selected as a prototype.

Задачей, решаемой данным изобретением, является расширение показаний к применению иммобилизированной гиалуронидазы и повышение безопасности и эффективности способа.The problem solved by this invention is to expand the indications for the use of immobilized hyaluronidase and increase the safety and effectiveness of the method.

Поставленная задача достигается применением иммобилизированной с помощью технологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы в качестве гемостимулирующего средства. Препарат назначают парентерально либо перорально в дозе 10-1000 ЕД/кг 1 раз в сутки в течение 1-5 дней.The task is achieved by using immobilized using the technology of electron-beam synthesis of hyaluronidase as a hemostatic agent. The drug is administered parenterally or orally at a dose of 10-1000 U / kg once a day for 1-5 days.

Новым в предлагаемом изобретении является применение иммобилизированной гиалуронидазы в качестве гемостимулирующего средства.New in the invention is the use of immobilized hyaluronidase as a hemostatic agent.

Используемое нами оригинальное средство иммобилизированной с помощью ионизирующего излучения гиалуронидазы [4] было разработано и получено НИИ фармакологии СО РАМН (г.Томск) совместно с ООО «Саентифик Фьючер Менеджмент» (г.Новосибирск). Иммобилизация гиалуронидазы осуществлялась на низкомолекулярном полиэтиленгликоле (400 до 4000 Да) направленным потоком ускоренных электронов с энергией электронов 2,5 МэВ, поглощенная доза от 2 до 10 кГр, скорость набора дозы 1,65 кГр/час.The original hyaluronidase immobilized by means of ionizing radiation [4] used by us was developed and obtained by the Scientific Research Institute of Pharmacology SB RAMS (Tomsk) in conjunction with Scientific Future Management LLC (Novosibirsk). Hyaluronidase was immobilized on low molecular weight polyethylene glycol (400 to 4000 Da) with a directed stream of accelerated electrons with an electron energy of 2.5 MeV, an absorbed dose of 2 to 10 kGy, and a dose rate of 1.65 kGy / hour.

На сегодняшний день показана возможность стимуляции миелопоэза с помощью высоких доз препарата нативной гиалуронидазы [5]. Кроме того, известно, что иммобилизизация гиалуронидазы с помощью ионизирующего излучения на низкомолекулярном носителе сопровождается появлением новых физико-химических свойств у данного фермента, что делает эффективным его применение в качестве средства, увеличивающего популяцию родоначальных клеток различных классов (в том числе гемопоэтических предшественников) в костном мозге, в низких дозах [4]. При этом согласно литературным сведениям пегилированные (конъюгированные с полиэтиленгликолем) белковые средства являются более безопасными, чем их неконъюгированные аналоги [8].To date, the possibility of stimulating myelopoiesis with high doses of the native hyaluronidase preparation has been shown [5]. In addition, it is known that the immobilization of hyaluronidase using ionizing radiation on a low molecular weight carrier is accompanied by the appearance of new physicochemical properties of this enzyme, which makes it effective to use it as an agent that increases the population of parent cells of various classes (including hematopoietic precursors) in bone brain, in low doses [4]. Moreover, according to the literature, pegylated (conjugated with polyethylene glycol) protein products are safer than their unconjugated analogues [8].

Тем не менее способность кроветворных стволовых клеток к реализации своего ростового потенциала, проявляющегося увеличением образования зрелых клеток крови за счет стимуляции процессов их дифференцировки под влиянием модифицированной (иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза) гиалуронидазы, остается неизученной. В то же время известно, что процесс манипуляции разнородными субстанциями на молекулярном уровне [8, 9], в том числе с использованием физических факторов, обладающих высокой энергией, может сопровождаться непредсказуемыми изменениями не только стереохимической структуры исходных веществ, но и их функциональными характеристиками.Nevertheless, the ability of hematopoietic stem cells to realize their growth potential, which is manifested by an increase in the formation of mature blood cells due to the stimulation of their differentiation processes under the influence of modified (immobilized using electron beam synthesis nanotechnology) hyaluronidase, remains unstudied. At the same time, it is known that the process of manipulating heterogeneous substances at the molecular level [8, 9], including using physical factors with high energy, can be accompanied by unpredictable changes not only in the stereochemical structure of the starting materials, but also in their functional characteristics.

Факт применения иммобилизированной гиалуронидазы (имГД) с достижением нового технического результата, заключающегося в эффективной стимуляции гемопоэза на фоне снижения риска развития осложнений и побочных эффектов за счет уменьшения лекарственной нагрузки на организм, для специалиста является неочевидным.The fact of the use of immobilized hyaluronidase (imGD) with the achievement of a new technical result, which consists in the effective stimulation of hematopoiesis while reducing the risk of complications and side effects by reducing the drug load on the body, is not obvious for a specialist.

Заявляемые существенные признаки проявили в совокупности новые свойства, не вытекающие явным образом из уровня техники в данной области. Предлагаемое изобретение может быть использовано в экспериментальной медицине с выходом в практическое здравоохранение. Идентичной совокупности признаков при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе не обнаружено.The claimed essential features in the aggregate showed new properties that are not explicitly derived from the prior art in this field. The present invention can be used in experimental medicine with access to practical health care. An identical set of features was not found in the study of the state of the art in patent and medical literature.

Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".

Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:

Лабораторному животному 1 раз в сутки в течение 1-5 дней парентерально либо перорально вводят иммобилизированную гиалуронидазу в дозе 10-1000 ЕД/кг.Immobilized hyaluronidase at a dose of 10-1000 U / kg is administered parenterally or orally to a laboratory animal once a day for 1-5 days.

Эксперименты были проведены на мышах-самцах линии CBA/CaLac в количестве 543 штук, массой 18-20 г. Животные получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии СО РАМН (сертификат имеется).The experiments were conducted on male CBA / CaLac mice in an amount of 543 pieces, weighing 18-20 g. Animals were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Research Institute of Pharmacology SB RAMS (certificate is available).

Эффективность стимуляции гемопоэза определялась на модели цитостатической миелосупрессии в соответствии с методическими указаниями по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ [10] с помощью стандартных и культуральных гематологических методов [11].The effectiveness of hematopoiesis stimulation was determined on the model of cytostatic myelosuppression in accordance with the guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances [10] using standard and cultural hematological methods [11].

Пример 1Example 1

Моделирование цитостатической миелосупрессии осуществляли путем однократного внутрибрюшинного введения циклофосфана в максимально переносимой дозе (250 мг/кг) в 0,3 мл физиологического раствора. Опытным животным на фоне моделирования миелосупрессии вводили внутрибрюшинно (парентерально) 1 раз в сутки в течение 2-х дней препарат нативной гиалуронидазы («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ) в дозах 1000 и 50 ЕД/кг (способ прототип) и препарат иммобилизированной гиалуронидазы внутрибрюшинно (парентарально) в дозе 50 ЕД/кг (1 раз в сутки в течение 2-х дней) и перорально в дозах 50 и 10 ЕД/кг (1 раз в сутки в течение 1 и 5 дней соответственно). При этом доза «Лидазы» в 1000 ЕД/кг в предварительных экспериментах была определена как максимально эффективная у препарата нативной гиалуронидазы.The modeling of cytostatic myelosuppression was carried out by a single intraperitoneal injection of cyclophosphamide in the maximum tolerated dose (250 mg / kg) in 0.3 ml of physiological saline. Against the background of myelosuppression modeling, experimental animals were injected intraperitoneally (parenterally) once a day for 2 days with a native hyaluronidase preparation (Lidaza, FSUE NPO Microgen of the Ministry of Health of the Russian Federation) at doses of 1000 and 50 U / kg (prototype method) and preparation of immobilized hyaluronidase intraperitoneally (parenterally) at a dose of 50 U / kg (1 time per day for 2 days) and orally at doses of 50 and 10 U / kg (1 time per day for 1 and 5 days, respectively). In this case, the dose of Lidase in 1000 IU / kg in preliminary experiments was determined to be the most effective for the preparation of native hyaluronidase.

Введение препарата нативной гиалуронидазы на фоне моделирования цитостатической миелосупрессии сопровождалось стимуляцией процессов регенерации эритроидного и гранулоцитарного ростков кроветворения, но только при использовании дозы 1000 ЕД/кг. В данном случае отмечалось существенное увеличение содержания кроветворных прекурсоров (КОЕ-Э, КОЕ-ГМ) и морфологически распознаваемых клеточных элементов эритроидного и грануломоноцитарного ростков кроветворения в гемопоэтической ткани (табл.1, 2). При этом указанные изменения сопровождались закономерным увеличением количества зрелых клеток эритроидного и гранулоцитарного ряда в периферической крови (табл.3).The introduction of the native hyaluronidase preparation on the background of modeling cytostatic myelosuppression was accompanied by stimulation of the regeneration of erythroid and granulocytic hematopoiesis, but only when using a dose of 1000 IU / kg In this case, there was a significant increase in the content of hematopoietic precursors (CFU-E, CFU-GM) and morphologically recognized cellular elements of erythroid and granulomonocytic hematopoietic germs in hematopoietic tissue (Tables 1, 2). Moreover, these changes were accompanied by a regular increase in the number of mature cells of the erythroid and granulocyte series in the peripheral blood (Table 3).

Вместе с тем эффективность применения иммобилизированной гиалуронидазы (имГД) наблюдалась при ее использовании во всех режимах и способах введения (табл.1, 2, 3). При этом парентеральное введение 50 ЕД/кг имГД приводило к значительно более выраженному увеличению показателей активности кроветворения, чем при использовании в качестве гемостимулятора препарата нативной гиалуронидазы в дозе 1000 ЕД/кг. Так, отмечалось более существенное увеличение содержания кроветворных прекурсоров, эритроидных клеток, незрелых и зрелых нейтрофильных гранулоцитов в костном мозге. Аналогичные изменения имели место в периферической крови. Количество нейтрофилов, ретикулоцитов и эритроцитов значительно превосходило значения соответствующих показателей у животных, которым вводили «Лидазу» (табл.3). Кроме того, в отличие от стандартного препарата фермента использование имГД сопровождалось значительным увеличением числа тромбоцитов в периферической крови.However, the effectiveness of the use of immobilized hyaluronidase (imGD) was observed with its use in all modes and methods of administration (Tables 1, 2, 3). At the same time, parenteral administration of 50 U / kg imGD led to a significantly more pronounced increase in hematopoiesis activity than when using a native hyaluronidase preparation at a dose of 1000 U / kg as a hemostatic stimulator. So, there was a more significant increase in the content of hematopoietic precursors, erythroid cells, immature and mature neutrophilic granulocytes in the bone marrow. Similar changes have occurred in peripheral blood. The number of neutrophils, reticulocytes and erythrocytes significantly exceeded the values of the corresponding indicators in animals that were injected with "Lidase" (table 3). In addition, unlike the standard enzyme preparation, the use of imGD was accompanied by a significant increase in the number of platelets in the peripheral blood.

Таким образом, иммобилизированная гиалуронидаза оказывала выраженный стимулирующий эффект в отношении эритроидного, гранулоцитарного и мегакариоцитарного (тромбоцитарного) ростков кроветворения. Причем, данное вещество приводило к максимально быстрому восстановлению показателей костного мозга и периферической крови при цитостатической миелосупрессии как при парентеральном, так и пероральном его использовании в низких дозах.Thus, immobilized hyaluronidase exerted a pronounced stimulating effect against erythroid, granulocytic and megakaryocytic (platelet) hematopoietic sprouts. Moreover, this substance led to the fastest recovery of bone marrow and peripheral blood parameters with cytostatic myelosuppression both with parenteral and oral use in low doses.

В целом, исходя из полученных данных следует, что средство, представляющее собой гиалуронидазу, иммобилизированную на водорастворимом носителе с помощью ионизирующего излучения, обладает выраженной гемостимулирующей активностью. При этом эффективность данного средства значительно превышает таковую у стандартных препаратов гиалуронидазы.In general, based on the data obtained, it follows that the agent, which is a hyaluronidase, immobilized on a water-soluble carrier using ionizing radiation, has a pronounced hemostatic activity. At the same time, the effectiveness of this drug significantly exceeds that of standard hyaluronidase preparations.

Цитируемая литература:References cited:

1. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1. // Myeloid growth factors Oncology (Huntingt). - 2003. - Vol.17. - №11. - P.1593-1603.1. Glaspy J.A. Hematopoietic management in oncology practice. Part 1. // Myeloid growth factors Oncology (Huntingt). - 2003. - Vol.17. - No. 11. - P.1593-1603.

2. Волкова M.A. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор граноцит и его клиническое применение // Тер. архив. - 1998. - №4. - С.80-84.2. Volkova M.A. Granulocyte colony-stimulating factor granocyte and its clinical use // Ter. archive. - 1998. - No. 4. - S.80-84.

3. Дубницкая Л.В., Назаренко Т.А. Возможности применения препарата Лонгидаза® в комплексной терапии патологических изменений эндометрия // Русский медицинский журнал. - 2008. - Т.16 - №19. - С.1248-1251.3. Dubnitskaya L.V., Nazarenko T.A. Possibilities of using the drug Longidaza® in the complex therapy of pathological changes in the endometrium // Russian Medical Journal. - 2008. - T.16 - No. 19. - S. 1248-1251.

4. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В. и др. Регуляция функций прогениторных клеток с помощью гиалуронидазы // Вестник РАМН. - 2009. - №11. - С.7-10.4. Digay A.M., Zyuzkov G.N., Zhdanov V.V. et al. Regulation of progenitor cell functions using hyaluronidase // Vestnik RAMS. - 2009. - No. 11. - S.7-10.

5. Патент (RU) на изобретение №2336899 «Способ стимуляции миелопоэза», 2008 г. Авторы: Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В.5. Patent (RU) for the invention No. 2336899 “Method of stimulation of myelopoiesis”, 2008. Authors: Goldberg ED, Dygay A.M., Zyuzkov GN, Zhdanov VV

6. Anderson J.A. Allergic reactions to drugs and biologic agents. JAMA. - 1992 - vol.268. - p.2845-2857.6. Anderson J.A. Allergic reactions to drugs and biologic agents. JAMA. - 1992 - vol. 268. - p. 2845-2857.

7. De Swarte R.D., Drug allergy. In: Patterson R. e.a. Allergic Diseases Diagnosis and Management, 4th ed. Philadelphia, Pa^ JB Lippincott. - 1993 - p.396-551.7. De Swarte R. D., Drug allergy. In: Patterson R. e.a. Allergic Diseases Diagnosis and Management, 4th ed. Philadelphia, Pa ^ JB Lippincott. - 1993 - p. 396-551.

8. Сейфулла Р.Д., Тимофеев А.Б., Орджоникидзе З.Г. и др. Проблемы использования нанотехнологии в фармакологии // Экспер. и клин. фарм. 2008. Том 71. №1. С.61-69.8. Seyfulla R.D., Timofeev A.B., Ordzhonikidze Z.G. and other Problems of the use of nanotechnology in pharmacology // Expert. and wedge. farm. 2008. Volume 71. No. 1. S.61-69.

9. Евдокимов Ю.М. Пространственно упорядоченные формы ДНК и ее комплексов - основа создания наноконструкций для медицины и биотехнологий // Российские нанотехнологии. - 2006. - №1-2. - С.256-264.9. Evdokimov Yu.M. Spatially ordered forms of DNA and its complexes - the basis for the creation of nanostructures for medicine and biotechnology // Russian Nanotechnology. - 2006. - No. 1-2. - S.256-264.

10. Дыгай A.M., Жданов В.В., Гольдберг В.Е. и др. Методические указания по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ // Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. - 2002. - №1(9). - С.29-32.10. Digay A.M., Zhdanov V.V., Goldberg V.E. and other guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances // Vedomosti Scientific Center for Expertise and State Control of Medicines. - 2002. - No. 1 (9). - S. 29-32.

11. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. - Томск: Изд-во ТГУ, 1992. - С.130-145.11. Goldberg E.D., Dygay A.M., Shakhov V.P. Methods of tissue culture in hematology. - Tomsk: Publishing house of TSU, 1992. - S.130-145.

Таблица 1Table 1 Динамика содержания КОЕ-Э и КОЕ-ГМ в костном мозге мышей линии CBA\CaLac (на 10⁵неприлипающих миелокариоцитов) после введения дистиллированной воды (1), 50 ЕД/кг (2) и 1000 ЕД/кг «Лидазы» (3), а также 50 ЕД/кг внутрибрюшинно (4), 50 ЕД/кг перорально (5) и 10 ЕД/кг перорально (6) иммобилизированной ГД на фоне введения циклофосфана в МПД, (X±m)Dynamics of the content of CFU-E and CFU-GM in the bone marrow of CBA \ CaLac mice (for 10 ⁵ non-adherent myelokaryocytes) after administration of distilled water (1), 50 U / kg (2) and 1000 U / kg of Lidase (3) and also 50 PIECES / kg intraperitoneally (4), 50 PIECES / kg orally (5) and 10 PIECES / kg orally (6) immobilized HD on the background of the introduction of cyclophosphamide in MTD, (X ± m) Сроки исследования, суткиStudy time, days КОЕ-ЭCFU-E КОЕ-ГМCFU-GM ФонBackground 6,75±0,736.75 ± 0.73 4,50±0,384.50 ± 0.38 1one 9,50±0,50*9.50 ± 0.50 * 8,38±0,63*8.38 ± 0.63 * 3-е3rd 22 8,88±0,818.88 ± 0.81 8,00±0,87*8.00 ± 0.87 * 33 9,13±1,13*9.13 ± 1.13 * 12,38±0,82*#12.38 ± 0.82 * # 4four 18,50±0,50*#$18.50 ± 0.50 * # $ 17,00±0,53*#$17.00 ± 0.53 * # $ 55 14,38±1,00*#$14.38 ± 1.00 * # $ 14,63±0,51*#$14.63 ± 0.51 * # $ 66 15,25±0,33*#$15.25 ± 0.33 * # $ 16,25±0,86*#$16.25 ± 0.86 * # $ 1one 7,25±0,707.25 ± 0.70 6,63±0,73*6.63 ± 0.73 * 5-е5th 22 7,50±0,537.50 ± 0.53 5,75±0,755.75 ± 0.75 33 10,13±0,44*#10.13 ± 0.44 * # 7,88±0,55*7.88 ± 0.55 * 4four 14,88±0,44*#$14.88 ± 0.44 * # $ 10,75±0,45*#$10.75 ± 0.45 * # $ 55 9,38±0,42*#9.38 ± 0.42 * # 8,75±0,49*#8.75 ± 0.49 * # 66 12,25±0,65*#$12.25 ± 0.65 * # $ 9,5±0,70*#9.5 ± 0.70 * # 1one 6,38±0,686.38 ± 0.68 4,25±0,564.25 ± 0.56 10-е10th 22 5,75±0,375.75 ± 0.37 5,50±0,425.50 ± 0.42 33 7,88±0,837.88 ± 0.83 7,14±0,70*7.14 ± 0.70 * 4four 10,00±0,71*#10.00 ± 0.71 * # 9,2±0,2*#$9.2 ± 0.2 * # $ 55 7,50±0,537.50 ± 0.53 6,50±0,63*6.50 ± 0.63 * 66 12,1±0,33*#$12.1 ± 0.33 * # $ 9,88±0,72*#$9.88 ± 0.72 * # $ Примечание: * - различия достоверны по отношению к фону,Note: * - differences are significant in relation to the background, # - различия достоверны по отношению к группе, получавшей дистиллированную воду на фоне введения циклофосфана.# - the differences are significant in relation to the group receiving distilled water against the background of cyclophosphamide administration. $ - различия достоверны с группой животных, получавших стандартный препарат гиалуронидазы в дозе 1000 ЕД/кг$ - differences are significant with a group of animals treated with a standard preparation of hyaluronidase at a dose of 1000 PIECES / kg

ТаблицаTable Динамика костномозгового кроветворения у мышей линии CBA\CaLac (×10⁶/бедро) после введения дистиллированной воды (1), 50 ЕД/кг (2) и 1000 ЕД/кг «Лидазы» (3), а также 50 ЕД/кг внутрибрюшинно (4), 50 ЕД/кг перорально (5) и 10 ЕД/кг перорально (6) иммобилизированной ГД на фоне введения циклофосфана в МПД, (X±m)Dynamics of bone marrow hematopoiesis in CBA \ CaLac mice (× 10 ⁶ / thigh) after administration of distilled water (1), 50 IU / kg (2) and 1000 IU / kg Lidase (3), as well as 50 IU / kg intraperitoneally (4), 50 IU / kg orally (5) and 10 IU / kg orally (6) immobilized HD with the introduction of cyclophosphamide in MTD, (X ± m) Сроки исследования, суткиStudy time, days Незрелые нейтрофильные гранулоцитыImmature neutrophilic granulocytes Зрелые нейтрофильные гранулоцитыMature neutrophilic granulocytes Эозинофильные гранулоцитыEosinophilic granulocytes Лимфоидные клеткиLymphoid cells МоноцитыMonocytes Эритроидные клеткиErythroid cells фонbackground 1,10±0,101.10 ± 0.10 3,72±0,313.72 ± 0.31 0,47±0,090.47 ± 0.09 3,38±0,303.38 ± 0.30 0,48±0,060.48 ± 0.06 1,77±0,321.77 ± 0.32 3-е3rd 1one 0,04±0,01*0.04 ± 0.01 * 0,11±0,04*0.11 ± 0.04 * 00 1,87±0,15*1.87 ± 0.15 * 0,55±0,040.55 ± 0.04 0,18±0,05*0.18 ± 0.05 * 22 0,05±0,02*0.05 ± 0.02 * 0,16±0,03*0.16 ± 0.03 * 00 1,57±0,13*1.57 ± 0.13 * 0,60±0,110.60 ± 0.11 0,13±0,03*0.13 ± 0.03 * 33 0,13±0,03*#0.13 ± 0.03 * # 0,15±0,04*0.15 ± 0.04 * 00 1,36±0,10*#1.36 ± 0.10 * # 0,42±0,090.42 ± 0.09 0,31±0,02*#0.31 ± 0.02 * # 4four 0,14±0,05*#0.14 ± 0.05 * # 0,17±0,04*0.17 ± 0.04 * 00 1,29±0,12*#1.29 ± 0.12 * # 0,61±0,060.61 ± 0.06 0,28±0,02*#0.28 ± 0.02 * # 55 0,15±0,02*#0.15 ± 0.02 * # 0,11±0,02*0.11 ± 0.02 * 0,01±0,01*0.01 ± 0.01 * 1,36±0,07*#1.36 ± 0.07 * # 0,36±0,04#0.36 ± 0.04 # 0,30±0,01*#0.30 ± 0.01 * # 66 0,17±0,11*#0.17 ± 0.11 * # 0,10±0,01*0.10 ± 0.01 * 0,01±0,01*0.01 ± 0.01 * 1,35±0,14*#1.35 ± 0.14 * # 0,39±0,110.39 ± 0.11 0,45±0,02*#0.45 ± 0.02 * # 5-е5th 1one 4,22±0,26*4.22 ± 0.26 * 1,45±0,26*1.45 ± 0.26 * 0,30±0,080.30 ± 0.08 2,03±0,21*2.03 ± 0.21 * 0,86±0,08*0.86 ± 0.08 * 1,04±0,161.04 ± 0.16 22 4,82±0,46*4.82 ± 0.46 * 1,69±0,23*1.69 ± 0.23 * 0,07±0,07*0.07 ± 0.07 * 2,66±0,262.66 ± 0.26 0,98±0,20*0.98 ± 0.20 * 1,27±0,281.27 ± 0.28 33 6,31±0,52*#6.31 ± 0.52 * # 2,2±0,11*#2.2 ± 0.11 * # 0,12±0,080.12 ± 0.08 2,28±0,362.28 ± 0.36 1,29±0,15*1.29 ± 0.15 * 1,98±0,30#1.98 ± 0.30 # 4four 8,49±0,50*#8.49 ± 0.50 * # 3,98±0,33#3.98 ± 0.33 # 0,17±0,100.17 ± 0.10 2,62±0,232.62 ± 0.23 2,14±0,22*#$2.14 ± 0.22 * # $ 2,78±0,19#$2.78 ± 0.19 # $ 55 5,77±0,44*#5.77 ± 0.44 * # 3,26±0,29#3.26 ± 0.29 # 0,31±0,080.31 ± 0.08 2,88±0,092.88 ± 0.09 0,90±0,12*0.90 ± 0.12 * 1,74±0,08#1.74 ± 0.08 # 66 6,01±0,46*#6.01 ± 0.46 * # 2,26±0,26#2.26 ± 0.26 # 0,15±0,08*0.15 ± 0.08 * 2,15±0,182.15 ± 0.18 1,07±0,15*1.07 ± 0.15 * 2,09±0,29#2.09 ± 0.29 # 10-е10th 1one 1,00±0,181.00 ± 0.18 6,65±0,45*6.65 ± 0.45 * 0,76±0,450.76 ± 0.45 1,82±0,25*1.82 ± 0.25 * 0,60±0,090.60 ± 0.09 0,35±0,06*0.35 ± 0.06 * 22 0,80±0,110.80 ± 0.11 6,57±0,53*6.57 ± 0.53 * 0,51±0,100.51 ± 0.10 1,87±0,17*1.87 ± 0.17 * 0,66±0,140.66 ± 0.14 0,39±0,03*0.39 ± 0.03 * 33 0,99±0,060.99 ± 0.06 6,11±0,57*6.11 ± 0.57 * 0,33±0,100.33 ± 0.10 2,39±0,502.39 ± 0.50 0,94±0,210.94 ± 0.21 1,29±0,19#1.29 ± 0.19 # 4four 0,97±0,130.97 ± 0.13 6,32±0,48*6.32 ± 0.48 * 0,53±0,120.53 ± 0.12 3,35±0,65#3.35 ± 0.65 # 1,00±0,09*#1.00 ± 0.09 * # 3,71±0,02*#$3.71 ± 0.02 * # $ 55 0,74±0,050.74 ± 0.05 6,13±0,68*6.13 ± 0.68 * 0,29±0,100.29 ± 0.10 2,49±0,562.49 ± 0.56 1,39±0,26*#1.39 ± 0.26 * # 2,63±0,22*#$2.63 ± 0.22 * # $ 66 0,86±0,130.86 ± 0.13 5,78±0,34*5.78 ± 0.34 * 0,21±0,060.21 ± 0.06 2,45±0,322.45 ± 0.32 1,49±0,16*#1.49 ± 0.16 * # 3,1±0,15*#$3.1 ± 0.15 * # $ Примечание: * - различия достоверны по отношению к фону,Note: * - differences are significant in relation to the background, # - различия достоверны по отношению к группе, получавшей дистиллированную воду на фоне введения циклофосфана# - the differences are significant in relation to the group receiving distilled water on the background of the introduction of cyclophosphamide $ - различия достоверны с группой животных, получавших стандартный препарат гиалупонидазы в дозе 1000 ЕД/кг$ - differences are significant with a group of animals treated with a standard preparation of hyaluponidase at a dose of 1000 PIECES / kg

Таблица 3Table 3 Показатели периферической крови у мышей линии CBA\CaLac после введения дистиллированной воды (1), 50 ЕД/кг (2) и 1000 ЕД/кг «Лидазы» (3), а также 50 ЕД/кг внутрибрюшинно (4), 50 ЕД/кг перорально (5) и 10 ЕД/кг перорально (6) иммобилизированной ГД на фоне введения циклофосфана в МПД, (X±m)Peripheral blood counts in CBA \ CaLac mice after administration of distilled water (1), 50 U / kg (2) and 1000 U / kg of Lidase (3), as well as 50 U / kg intraperitoneally (4), 50 U / kg orally (5) and 10 IU / kg orally (6) of immobilized HD on the background of the introduction of cyclophosphamide in MTD, (X ± m) Сроки исследования, суткиStudy time, days Эритроциты, Т/лRed blood cells, T / L Ретикулоциты, в промилляхReticulocytes, in ppm Палочкоядерные нейтрофилы, Г/лBand neutrophils, g / l Сегментоядерные нейтрофилы, Г/лSegmented neutrophils, g / l Тромбоциты, Т/лPlatelets, T / L ФонBackground 8,61±0,188.61 ± 0.18 14,1±0,314.1 ± 0.3 0,40±0,060.40 ± 0.06 2,26±0,022.26 ± 0.02 796,57±77,49796.57 ± 77.49 1one 7,89±0,28*7.89 ± 0.28 * 10,7±0,24*10.7 ± 0.24 * 0,01±0,01*0.01 ± 0.01 * 0,12±0,03*0.12 ± 0.03 * 503,80±25,97*503.80 ± 25.97 * 3-е3rd 22 7,19±0,21*7.19 ± 0.21 * 9,89±0,37*9.89 ± 0.37 * 0,01±0,01*0.01 ± 0.01 * 0,13±0,03*0.13 ± 0.03 * 557,83±46,69*557.83 ± 46.69 * 33 7,84±0,25*7.84 ± 0.25 * 12,8±0,6*#12.8 ± 0.6 * # 0,02±0,01*0.02 ± 0.01 * 0,17±0,02*0.17 ± 0.02 * 505,67±24,25 *505.67 ± 24.25 * 4four 7,69±0,14*7.69 ± 0.14 * 14,7±0,52#$14.7 ± 0.52 # $ 0,02±0,01*0.02 ± 0.01 * 0,15±0,01*0.15 ± 0.01 * 568,17±22,60*568.17 ± 22.60 * 55 7,59±0,18*7.59 ± 0.18 * 12,3±0,41*#12.3 ± 0.41 * # 0,04±0,02*0.04 ± 0.02 * 0,14±0,06*0.14 ± 0.06 * 560,67±36,33*560.67 ± 36.33 * 66 7,54±0,45*7.54 ± 0.45 * 12,7±0,38*#12.7 ± 0.38 * # 0,02±0,01*0.02 ± 0.01 * 0,15±0,01*0.15 ± 0.01 * 509,83±58,60*509.83 ± 58.60 * 1one 7,53±0,15*7.53 ± 0.15 * 28,4±1,3*28.4 ± 1.3 * 0,16±0,04*0.16 ± 0.04 * 0,75±0,23*0.75 ± 0.23 * 349,40±36,84*349.40 ± 36.84 * 5-е5th 22 7,85±0,27*7.85 ± 0.27 * 27,6±2,4*27.6 ± 2.4 * 0,13±0,05*0.13 ± 0.05 * 0,65±0,10*0.65 ± 0.10 * 393,33±33,96*393.33 ± 33.96 * 33 8,59±0,12#8.59 ± 0.12 # 37,5±1,89*#37.5 ± 1.89 * # 0,41±0,08#0.41 ± 0.08 # 1,7±0,16#1.7 ± 0.16 # 321,60±23,22*321.60 ± 23.22 * 4four 9,53±0,35*#$9.53 ± 0.35 * # $ 41,2±1,3*#41.2 ± 1.3 * # 0,83±0,25*#$0.83 ± 0.25 * # $ 2,47±0,16#$2.47 ± 0.16 # $ 672,83±22,69#$672.83 ± 22.69 # $ 55 8,06±0,308.06 ± 0.30 34,5±0,96*#34.5 ± 0.96 * # 0,99±0,31*#$0.99 ± 0.31 * # $ 1,69±1,12#1.69 ± 1.12 # 450,83±11,12*#450.83 ± 11.12 * # 66 9,13±0,08*#9.13 ± 0.08 * # 32,7±2,3*#32.7 ± 2.3 * # 1,03±0,21*#$1.03 ± 0.21 * # $ 1,79±0,14#1.79 ± 0.14 # 727,67±74,10#727.67 ± 74.10 # 1one 7,29±0,18*7.29 ± 0.18 * 15,6±1,415.6 ± 1.4 1,31±0,32*1.31 ± 0.32 * 5,13±0,63*5.13 ± 0.63 * 977,33±27,66977.33 ± 27.66 10-е10th 22 7,18±0,15*7.18 ± 0.15 * 16,7±0,78*16.7 ± 0.78 * 1,71±0,42*1.71 ± 0.42 * 5,36±1,15*5.36 ± 1.15 * 843,33±100,51843.33 ± 100.51 33 7,33±0,15*7.33 ± 0.15 * 16,4±0,97*16.4 ± 0.97 * 1,17±0,23*1.17 ± 0.23 * 7,42±0,18*#7.42 ± 0.18 * # 884,17±33,78884.17 ± 33.78 4four 8,14±0,17$$ 8.14 ± 0.17 24,3±1,7*#$24.3 ± 1.7 * # $ 1,25±0,14*1.25 ± 0.14 * 8,50±0,37*#$8.50 ± 0.37 * # $ 1143,17±38,51*#$1143.17 ± 38.51 * # $ 55 7,36±0,29*7.36 ± 0.29 * 19,4±0,45*#$19.4 ± 0.45 * # $ 1,18±0,24*1.18 ± 0.24 * 7,93±0,65*#7.93 ± 0.65 * # 1367,80±101,30*#1367.80 ± 101.30 * # 66 8,53±0,188.53 ± 0.18 26,7±1,84*#$26.7 ± 1.84 * # $ 1,48±0,26*1.48 ± 0.26 * 8,67±0,42*#$8.67 ± 0.42 * # $ 803,83±98,77803.83 ± 98.77 Примечание: * - различия достоверны по отношению к фону,Note: * - differences are significant in relation to the background, # - различия достоверны по отношению к группе, получавшей дистиллированную воду на фоне введения циклофосфана,# - the differences are significant in relation to the group receiving distilled water on the background of the introduction of cyclophosphamide, $ - различия достоверны с группой животных, получавших стандартный препарат гиалуронидазы в дозе 1000 ЕД/кг$ - differences are significant with a group of animals treated with a standard preparation of hyaluronidase at a dose of 1000 PIECES / kg

Claims

1. A means for stimulating hematopoiesis, which is a hyaluronidase immobilized on a low molecular weight polyethylene glycol with a molecular weight of 400 to 4000 Da with a directed stream of accelerated electrons of 2.5 MeV with an absorbed dose of 2 to 10 kGy and a dose rate of 1.65 kGy / h.

2. A method of stimulating hematopoiesis, including the introduction of the drug, characterized in that the drug used is the immobilized hyaluronidase according to claim 1, which is administered parenterally or orally 1 time per day for 1-5 days at a dose of 10-1000ED / kg.