RU2392003C2

RU2392003C2 - Salmonella vaccine manufacture method

Info

Publication number: RU2392003C2
Application number: RU2008112803/13A
Authority: RU
Inventors: Анатолий Алексеевич Евглевский (RU); Анатолий Алексеевич Евглевский; Дмитрий Анатольевич Евглевский (RU); Дмитрий Анатольевич Евглевский; Ирина Александровна Разинькова (RU); Ирина Александровна Разинькова
Original assignee: ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова
Priority date: 2008-04-02
Filing date: 2008-04-02
Publication date: 2010-06-20
Also published as: RU2008112803A

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention belongs to vaccine manufacture for infectious diseases prophylaxis. Salmonella vaccine manufacture includes detoxication of exo- and endotoxins in suspention of autoclaved salmonells consecuently with two detoxicants - 0.2% formalin solution at 40±1 C° during 6-7 days and 0.5±0.1% aethonium solution at 41±1 C° during 7-8 days, followed by sterilisation at 1.0 atm during 20 minutes. Derived anatoxins are sorbed on aluminium hydroxide and sterilised at 1 atm during 20 minutes.

EFFECT: anatoxin-vaccine with enhanced effectivity and safety is used for specific prevention of salmonellosis in piglets, calves, carnivorous and poultry.

3 ex

Description

Изобретение относится к микробиологии, в частности к изготовлению анатоксин-вакцины для профилактики сальмонеллеза телят, поросят, плотоядных и птиц.The invention relates to microbiology, in particular the manufacture of an toxoid vaccine for the prevention of salmonellosis of calves, piglets, carnivores and birds.

Известные способы получения инактивированных бактерийных и вирусных вакцин, анатоксинов основаны на использовании 0,8±0,2% раствора формалина (Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. - М.: Медицина, 1999. - С.256-268).Known methods for producing inactivated bacterial and viral vaccines, toxoids are based on the use of 0.8 ± 0.2% formalin solution (Vorobyov AA Microbiology and immunology. - M .: Medicine, 1999. - P.256-268).

Получение сальмонеллезной вакцины включает выращивание сальмонелл на питательной среде, стерилизацию, детоксикацию токсинов 0,8±0,2% раствором формалина, сорбцию на гидроксиде алюминия и внесение мертиолята. Из-за канцерогенных свойств формалина, мертиолята и неполноты детоксикации энтеротоксинов с определенным успехом были испытаны перекись водорода, тирозин, антибиотики, фенол, УФЛ, фотоокисление, однако в отношении инактивированных сальмонеллезной и колибактериозной вакцин они были неэффективны.The preparation of the salmonella vaccine includes the cultivation of salmonella in a nutrient medium, sterilization, detoxification of toxins with 0.8 ± 0.2% formalin solution, sorption on aluminum hydroxide, and the application of merthiolate. Due to the carcinogenic properties of formalin, merthiolate, and incomplete detoxification of enterotoxins, hydrogen peroxide, tyrosine, antibiotics, phenol, UVL, and photooxidation were tested with some success, however, they were ineffective for inactivated salmonella and colibacteriosis vaccines.

За прототип взят способ получения сальмонеллезной вакцины, включающий выращивание сальмонелл на питательной среде, стерилизацию и детоксикацию токсинов 0,8±0,2% раствором формалина, сорбцию на гидроксиде алюминия с последующим внесением консерванта-мертиолята (Осидзе Д.Ф., Борисович Ю.Ф., Кириллов Л.В. Ветеринарные препараты. - М.: Колос, 1981. - С.217-227).The prototype is a method of producing a salmonella vaccine, including the cultivation of salmonella in a nutrient medium, sterilization and detoxification of toxins with 0.8 ± 0.2% formalin solution, sorption on aluminum hydroxide, followed by the addition of a preservative-merthiolate (Osidze D.F., Yu. Borisovich F., Kirillov L.V. Veterinary preparations. - M .: Kolos, 1981. - S.217-227).

Недостатком известного способа является проведение детоксикации 0,8±0,2% раствором формалина, так как формалин проявляет канцерогенные свойства, вследствие чего использование его в такой концентрации небезопасно. В вакцину также вводится токсичный консервант - мертиолят.The disadvantage of this method is the detoxification of 0.8 ± 0.2% formalin solution, since formalin exhibits carcinogenic properties, as a result of which it is unsafe to use it. A toxic preservative, merthiolate, is also introduced into the vaccine.

Один из путей решения проблемы - уменьшение концентрации формалина. Но при этом снижается его эффективность, что приводит к неполной детоксикации сальмонеллезной вакцины.One way to solve the problem is to reduce the concentration of formalin. But at the same time, its effectiveness decreases, which leads to incomplete detoxification of salmonella vaccine.

Изучение ряда детоксикаторов выявило эффективность бисчетвертичных аммониевых соединений, в частности, этония (1,2-этилен-бис-(N-диметилкарбдецилоксиметил) аммония дихлорид). Безвредность и эффективность этония подтверждена применением его в гуманной медицине в качестве мазей, паст и растворов при дерматитах, кератитах, стоматите для ускоренного заживления ран и пр.A study of a number of detoxifiers revealed the effectiveness of bis-quaternary ammonium compounds, in particular, ethonia (1,2-ethylene-bis- (N-dimethylcarbdecyloxymethyl) ammonium dichloride). The safety and effectiveness of etonium is confirmed by its use in humane medicine as ointments, pastes and solutions for dermatitis, keratitis, stomatitis for accelerated wound healing, etc.

Целью предлагаемого изобретения является повышение эффективности и безопасности сальмонеллезной анатоксин-вакцины.The aim of the invention is to increase the efficiency and safety of salmonella toxoid vaccine.

Поставленная цель достигается посредством необратимой и полной детоксикации комплекса сальмонеллезных токсинов последовательно двумя детоксикаторами, уменьшения концентрации формалина до 0,2% путем внесения второго детоксикатора этония в концентрации 0,5±0,1% для заключительной детоксикации при 40±1°С в течение 6-7 суток, изъятием мертиолята.The goal is achieved by irreversible and complete detoxification of the complex of salmonella toxins sequentially with two detoxifiers, reducing the formalin concentration to 0.2% by introducing a second ethonium detoxifier at a concentration of 0.5 ± 0.1% for final detoxification at 40 ± 1 ° C for 6 -7 days, with the removal of thiol.

При этом исходные концентрации формалина снижаются до 0,003-0,05%, а этония - с 0,5% до 0,2-0,3% из-за связывания их с белковыми молекулами токсинов и микроорганизмов.In this case, the initial concentrations of formalin are reduced to 0.003-0.05%, and ethonia from 0.5% to 0.2-0.3% due to their binding to protein molecules of toxins and microorganisms.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому с использованием этония, что свидетельствует о новизне предлагаемого решения.In the patent and scientific and technical literature, no technical solutions were found that are similar to those claimed using etonia, which indicates the novelty of the proposed solution.

Использование 0,5±0,1% этония при уменьшении концентрации формалина с 0,8±0,2% до 0,2% в предложенном способе позволяет достичь стабильной детоксикации и полимеризации всего комплекса сальмонеллезных токсинов и получения безвредной и эффективной сальмонеллезной анатоксин-вакцины.The use of 0.5 ± 0.1% etonium with a decrease in the concentration of formalin from 0.8 ± 0.2% to 0.2% in the proposed method allows to achieve stable detoxification and polymerization of the entire complex of salmonella toxins and to obtain a harmless and effective salmonella toxoid vaccine .

Установленная возможность полной и необратимой детоксикации всех видов сальмонеллезных токсинов, в том числе энтеротоксинов, путем использования на первой стадии детоксикации 0,2% раствора формалина вместо 0,8±0,2% и во второй стадии 0,5±0,1% этония, обладающего не только детоксицирующим, но и консервирующими, бактерицидными и фунгицидными свойствами, позволила предложить рациональную технологию изготовления эффективной и безвредной сальмонеллезной анатоксин-вакцины без ртутьсодержащего консерванта-мертиолята.The established possibility of complete and irreversible detoxification of all types of salmonella toxins, including enterotoxins, by using 0.2% formalin in the first stage of detoxification instead of 0.8 ± 0.2% and 0.5 ± 0.1% ethonium in the second stage , possessing not only detoxifying, but also preserving, bactericidal and fungicidal properties, has allowed us to propose a rational technology for the manufacture of an effective and harmless salmonella toxoid vaccine without mercury-containing preservative-merthiolate.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. Получение сальмонеллезной анатоксин-вакцины (CAB). К полученной суспензии автоклавированных сальмонелл с концентрацией 60±10 млрд/мл микроорганизмов и растворимых токсинов с концентрацией 1,2±0,2 мг/мл был внесен формалин 0,2% концентрации для детоксикации при 40±1°С в течение 7 суток, а затем добавлен этоний 0,5% концентрации для завершения детоксикации при 41±1°С в течение 7 суток всех видов сальмонеллезных токсинов, в том числе и энтеротоксинов, которые формалин не способен детоксицировать. После сорбции анатоксин-вакцины на гидроксиде алюминия (3 мг/см³) проведена расфасовка препарата в 20,0 и 100,0 мл флаконы и его стерилизация при 1,0 атм в течение 20 минут.Example 1. Obtaining salmonella toxoid vaccine (CAB). To the resulting suspension of autoclaved salmonella with a concentration of 60 ± 10 billion / ml of microorganisms and soluble toxins with a concentration of 1.2 ± 0.2 mg / ml, formalin 0.2% concentration was added for detoxification at 40 ± 1 ° C for 7 days, and then added etonium 0.5% concentration to complete detoxification at 41 ± 1 ° C for 7 days of all types of salmonella toxins, including enterotoxins, which formalin is not able to detoxify. After sorption of the toxoid vaccine on aluminum hydroxide (3 mg / cm ³ ), the drug was packaged in 20.0 and 100.0 ml vials and sterilized at 1.0 atm for 20 minutes.

Полученная анатоксин-вакцина испытана на безвредность и эффективность.The resulting toxoid vaccine has been tested for safety and efficacy.

Пример 2. Испытание сальмонеллезной анатоксин-вакцины на безвредность проводили на 10 белых мышах, 20-60 дневного возраста телятах и поросятах, 12 бройлерах и 6 голубях путем подкожного введения препарата - мышам в объеме 0,3 мл, телятам и поросятам - 6-7 мл, бройлерам и голубям - 0,5 мл. При наблюдении в течение 12 суток все животные оставались клинически здоровыми, без видимых изменений в месте введения.Example 2. The test of salmonella toxoid vaccine for harmlessness was carried out on 10 white mice, 20-60 day old calves and piglets, 12 broilers and 6 pigeons by subcutaneous injection of the drug to mice in a volume of 0.3 ml, calves and piglets - 6-7 ml, broilers and pigeons - 0.5 ml. When observed for 12 days, all animals remained clinically healthy, with no visible changes at the injection site.

Пример 3. Испытание сальмонеллезной анатоксин-вакцины на активность проводили с использованием 14 голов поросят, 12 телят 20-3-дневного возраста и 8 голубей путем внутримышечного введения анатоксин-вакцины поросятам и телятам в дозе 4-5 мл, голубям в дозе 1 мл двукратно с интервалом 7 суток. Через 15 суток после второй вакцинации всем вакцинированным животным и невакцинированным трем поросятам, трем телятам, четырем голубям введена живая вирулентная культура S.cholerosius суточного выращивания в МПБ в дозе 200-300 тысяч микробных тел. Наблюдение за животными проводили в течение 20 суток. При этом установлено, что вакцинированные телята, поросята и шесть голубей из восьми не заболели сальмонеллезом, а все контрольные невакцинированные телята, поросята и голуби заболели в период 7-12 суток после заражения вирулентными сальмонеллами.Example 3. The test of salmonella toxoid vaccine for activity was carried out using 14 goals of piglets, 12 calves of 20-3 days of age and 8 pigeons by intramuscular injection of toxoid vaccine to piglets and calves at a dose of 4-5 ml, pigeons at a dose of 1 ml twice with an interval of 7 days. Fifteen days after the second vaccination, all vaccinated animals and unvaccinated three piglets, three calves, four pigeons were introduced live virulent culture of S. cholerosius daily cultivation in MPB at a dose of 200-300 thousand microbial bodies. Observation of animals was carried out for 20 days. It was found that vaccinated calves, pigs, and six out of eight pigeons did not develop salmonellosis, and all control unvaccinated calves, pigs, and pigeons fell ill 7-12 days after infection with virulent salmonella.

Всем заболевшим телятам и поросятам назначено специфическое лечение с помощью иммунной сыворотки с антибиотиками и солевые растворы.All sick calves and piglets are given specific treatment with the help of immune serum with antibiotics and saline solutions.

Зараженные сальмонеллами голуби погибли в течение 10-15 суток.Pigeons infected with salmonella died within 10-15 days.

Claims

A method of producing a salmonella vaccine, including detoxification of exo- and endotoxins in suspension with autoclaved salmonella, sorption of the obtained toxoids on aluminum hydroxide, characterized in that the detoxification of toxins is carried out sequentially with two detoxifiers - 0.2% formalin solution at 40 ± 1 ° C in for 6-7 days and a 0.5 ± 0.1% solution of ethonium at 41 ± 1 ° C for 7-8 days and after sorption on aluminum hydroxide, the target product is sterilized at 1.0 atm for 20 minutes.