RU2385460C1 - Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck - Google Patents
Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck Download PDFInfo
- Publication number
- RU2385460C1 RU2385460C1 RU2009109179/15A RU2009109179A RU2385460C1 RU 2385460 C1 RU2385460 C1 RU 2385460C1 RU 2009109179/15 A RU2009109179/15 A RU 2009109179/15A RU 2009109179 A RU2009109179 A RU 2009109179A RU 2385460 C1 RU2385460 C1 RU 2385460C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cervix
- concentration
- analysed
- interferon
- local inflammation
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины - к практической и экспериментальной - и может быть использовано в гинекологии, в клинической лабораторной диагностике для изучения активности локального воспаления слизистой оболочки шейки матки для выбора адекватного метода лечения.The invention relates to medicine - to practical and experimental - and can be used in gynecology, in clinical laboratory diagnostics to study the activity of local inflammation of the cervical mucosa to select an appropriate treatment method.
Известно, что возрастание частоты предраковых и злокачественных новообразований шейки матки, особенно у молодых женщин, обусловлено сочетанием фоновой патологии с хроническим цервицитом [Этиология, патогенетические аспекты, оптимизация диагностики и терапии хронических цервицитов. / Э.А.Казачкова, Е.Л.Казачков, Б.И.Медведев. // Материалы VI Всероссийского форума «Мать и дитя». Москва, 2004. - С.367-368].It is known that an increase in the frequency of precancerous and malignant neoplasms of the cervix, especially in young women, is due to a combination of background pathology with chronic cervicitis [Etiology, pathogenetic aspects, optimization of diagnosis and treatment of chronic cervicitis. / E.A. Kazachkova, E.L. Kazachkov, B.I. Medvedev. // Materials of the VI All-Russian Forum "Mother and Child". Moscow, 2004. - S.367-368].
Частота цервицитов, обусловленных бактериальным инфицированием, составляет 40-50%. В последнее десятилетие для воспаления шейки матки характерно отсутствие четко выраженной клинической картины, склонность к длительному течению, рецидивированию, что приводит к формированию морфологических изменений как на поверхности шейки матки, так и в ее толще [Влияние инфекций на репродуктивную систему женщин. / В.И.Краснопольский, О.Ф.Серова, В.А.Туманова и др. // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - №5. - С.39-41]. Воспаление в ответ на хроническую инфекцию приводит к продукции неспецифических защитных противомикробных оксидантов, вызывающих окислительное повреждение ДНК клеток хозяина. [Микробиоценоз влагалища и патология шейки матки. Возможности коррекции дисбиотических состояний. / И.Б.Манухин, Г.Н.Минкина, B.C.Калинина // Поликлиническая гинекология. Клинические лекции. / Под ред. проф. В.Н.Прилепской. - 2-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2005. - С.37-46.] Параллельно с воспалением развивается вторичный местный иммунодефицит клеточных и гуморальных иммунных реакций [Роль воспаления в диагностике и лечении патологии шейки матки. / М.Н.Костава. // Гинеколог. - 2005. - №12. - С.27-30]. Эктопия шейки матки также относится к фоновой патологии и занимает одно из первых мест в структуре гинекологической заболеваемости [Рудакова Е.Б. Псевдоэрозия шейки матки. / Практическая гинекология. Клинические лекции. / Под ред. акад. РАМН В.И.Кулакова, проф. В.Н.Прилепской. - 3-е изд., доп. - М.: МЕДпресс-информ, 2006. - С.40-48].The frequency of cervicitis due to bacterial infection is 40-50%. In the last decade, cervical inflammation is characterized by the absence of a clearly defined clinical picture, a tendency to a long course, and relapse, which leads to the formation of morphological changes both on the surface of the cervix and in its thickness [Influence of infections on the reproductive system of women. / V.I.Krasnopolsky, O.F. Serov, V.A. Tumanov and others // Russian Bulletin of the Obstetrician-Gynecologist. - 2004. - No. 5. - S. 39-41]. Inflammation in response to a chronic infection results in the production of nonspecific protective antimicrobial oxidants, which cause oxidative damage to the DNA of the host cells. [Vaginal microbiocenosis and cervical pathology. Possibilities of correction of dysbiotic conditions. / I.B. Manukhin, G.N. Minkina, B.C. Kalinina // Outpatient gynecology. Clinical lectures. / Ed. prof. V.N. Prilepsky. - 2nd ed., Ext. - M .: MEDpress-inform, 2005. - P.37-46.] In parallel with inflammation, secondary local immunodeficiency of cellular and humoral immune reactions develops [The role of inflammation in the diagnosis and treatment of cervical pathology. / M.N. Kostava. // Gynecologist. - 2005. - No. 12. - S.27-30]. Ectopy of the cervix also refers to background pathology and occupies one of the first places in the structure of gynecological morbidity [Rudakova EB Pseudo-erosion of the cervix. / Practical gynecology. Clinical lectures. / Ed. Acad. RAMS V.I.Kulakova, prof. V.N. Prilepsky. - 3rd ed., Ext. - M .: MEDpress-inform, 2006. - P.40-48].
Известны разные способы диагностики, оценки, исследования фоновых заболеваний шейки матки в виде запатентованных медицинских технологий: патент RU на изобретение №2134535 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки» основан на воздействии знакопеременным током на клетки исследуемого органа в фоновой среде - молочной кислоте, разведенной в дистиллированной воде, при полном прекращении биокинетики спустя 20 минут диагностируют воспалительное заболевания шейки матки; патент RU на изобретение №2240040 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки» основан на цветовом допплеровском картировании маточных и влагалищных артерий;There are different methods for diagnosing, evaluating, researching background diseases of the cervix in the form of patented medical technologies: RU patent for invention No. 2134535 "Method for the diagnosis of inflammatory diseases of the cervix" is based on the action of alternating current on the cells of the organ under study in the background - lactic acid diluted in distilled water, with the complete cessation of biokinetics after 20 minutes, an inflammatory disease of the cervix is diagnosed; RU patent for invention No. 2244040 “A method for the diagnosis of inflammatory diseases of the cervix uteri” is based on color Doppler mapping of the uterine and vaginal arteries;
патент RU на изобретение №2240041 «Способ диагностики воспалительных заболеваний шейки матки» основан на дополнительной расширенной кольпоскопии при выявлении объемных включений в толще шейки при двухмерной сонографии и выявлении в них капсулы при трехмерной сонографии.RU patent for invention No. 2240041 “A method for the diagnosis of inflammatory diseases of the cervix uteri” is based on an additional extended colposcopy to detect volume inclusions in the thickness of the cervix with two-dimensional sonography and identify capsules in them with three-dimensional sonography.
Однако по всем описанным выше способам по установлению воспалительного заболевания шейки матки нельзя судить о степени его активности и состоянии местного иммунитета шейки матки.However, for all the methods described above to establish an inflammatory disease of the cervix, one cannot judge the degree of its activity and the state of local immunity of the cervix.
Недостатками всех названных способов является отсутствие информации о степени активности диагностируемого воспаления.The disadvantages of all these methods is the lack of information about the degree of activity of the diagnosed inflammation.
Известен также способ диагностики эктопии шейки матки у женщин репродуктивного возраста [патент RU на изобретение №2306569], основанный на исследовании фолликулостимулирующего гормона, лютеинизирующего гормона, эстрадиола, прогестерона в сыворотке крови иммуноферментным методом.There is also known a method for the diagnosis of cervical ectopy in women of reproductive age [RU patent No. 2256569] based on the study of follicle-stimulating hormone, luteinizing hormone, estradiol, progesterone in the blood serum by the enzyme immunoassay.
Однако данным методом иммуноферментного анализа ИФА исследуют содержание гормонов в крови, данный способ позволяет диагностировать только неосложненную гормонзависимую эктопию.However, this method of enzyme-linked immunosorbent assay ELISA investigate the content of hormones in the blood, this method allows you to diagnose only uncomplicated hormone-dependent ectopy.
Известен способ определения содержания цитокинов «суммарного интерферона, включающего ИНФα и ИНФγ, ИЛ1β, ИЛ8, ФНОα в вагинальных смывах» при генитальном кандидозе [Альтернативные подходы к терапии урогенитальных заболеваний с целью сохранения репродуктивного здоровья. / С.Б.Рыбалкин, А.К.Мирзабаева. // Методические рекомендации для врачей-клиницистов. - Спб., 2000 г - С.37].A known method for determining the content of cytokines "total interferon, including INFα and INFγ, IL1β, IL8, TNFα in vaginal swabs" with genital candidiasis [Alternative approaches to the treatment of urogenital diseases in order to maintain reproductive health. / S.B. Rybalkin, A.K. Mirzabaeva. // Guidelines for clinicians. - St. Petersburg, 2000 - p. 37].
Однако исследование цитокинов в вагинальных смывах не дает достоверной информации о состоянии локального иммунитета шейки матки, т.к. забор биоматериала производят достаточно далеко от патологического очага. Цитокины являются локальными медиаторами, поэтому целесообразно измерять их уровни в соответствующих тканях.However, the study of cytokines in vaginal swabs does not provide reliable information about the state of local immunity of the cervix, because biomaterial is taken far enough from the pathological focus. Cytokines are local mediators, so it is advisable to measure their levels in the corresponding tissues.
Известен также способ исследования содержания интерферона-γ - ИНФγ в слизи цервикального канала методом твердофазного ИФА у больных кандидозным цервицитом, забор осуществляли с помощью универсального зонда [Хронический рецидивирующий вульвовагинальный кандидоз: возможности терапии. / В.Н.Прилепская, А.С.Анкирская, Г.Р.Байрамова и др. // Журнал «Гинекология» Т.9, №3. - 2007. - http:// www.consilium medicum.].There is also a method of studying the content of interferon-γ - INFγ in the mucus of the cervical canal by the method of solid-phase ELISA in patients with candidal cervicitis, sampling was carried out using a universal probe [Chronic recurrent vulvovaginal candidiasis: treatment options. / V.N. Prilepskaya, A.S. Ankirskaya, G.R. Bayramova and others // Journal "Gynecology" T.9, No. 3. - 2007. - http: // www.consilium medicum.].
Однако при данном исследовании цитокинов в цервикальном содержимом данные могут быть искажены при наличии воспалительных заболеваний верхнего отдела гениталий.However, in this study of cytokines in cervical contents, the data may be distorted in the presence of inflammatory diseases of the upper genital area.
Наиболее близким по технической сущности к предложенному является метод диагностики патологических состояний шейки матки, описанный в публикации Грибовой С.Н. и Хрипуновой Г.И. [Грибова С.Н. и др. Современные представления об этиологии, патогенезе, методах диагностики и лечения фоновых и предраковых заболеваний шейки матки.// Саратовский научно-медицинский Журнал, №2(20) - 2008. - С.18-23].Closest to the technical nature of the proposed is a method for the diagnosis of pathological conditions of the cervix, described in the publication Gribova SN and Khripunova G.I. [Gribova S.N. and other Modern ideas about the etiology, pathogenesis, diagnostic methods and treatment of background and precancerous diseases of the cervix. // Saratov Journal of Medical Scientific Research, No. 2 (20) - 2008. - P.18-23].
Задачей заявляемого изобретения является повышение простоты осуществления способа при сохранении высокой точности результата.The task of the invention is to increase the simplicity of the method while maintaining high accuracy of the result.
Сущность заявляемого способа оценки активности локального воспаления при фоновых заболеваниях шейки матки характеризуется тем, что после клинического обследования и верификации диагноза больных производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала, затем помещают собранный материал до полного погружения в плотно закрывающуюся пробирку, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, смесь встряхивают в центрифуге вортекс в течение 10 мин, исследуют полученные материалы методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА, спектрофотометрически осуществляют определение концентрации цитокина интерферон-γ в исследуемых пробах, судят об активности локального воспаления по полученной концентрации интерферон-γ в сравнении с нормальной его концентрацией, равной значениям до 3,2 пг/мл у здоровых лиц из эталонной группы, и при значении выше 3,2 пг/мл до 8 пг/мл судят о наличии хронически протекающего воспалительного процесса, при значении выше 8 пг/мл - судят о наличии активно протекающего воспалительного процесса и выраженном иммунном ответе.The essence of the proposed method for assessing the activity of local inflammation in the background diseases of the cervix is characterized in that after clinical examination and verification of the diagnosis of patients, the studied product is collected with maximum completeness and atraumatic, bringing the means for removing native material to the external pharynx of the cervix directly to the surface of the cervical transformation zone the uterus and the pathological focus, without introducing the drug into the cervical canal, then put the collected material until it is completely submerged filled into a tightly closed tube filled with 1.0 ml of 0.155 M sodium chloride solution, the mixture is shaken in a vortex centrifuge for 10 min, the obtained materials are examined by enzyme-linked immunosorbent assay ELISA, spectrophotometrically determine the concentration of interferon-γ cytokine in the studied samples, judge about the activity of local inflammation according to the obtained concentration of interferon-γ in comparison with its normal concentration, equal to values up to 3.2 pg / ml in healthy individuals from the reference group, and with a value higher 3.2 pg / ml to 8 pg / ml judges the presence of a chronically occurring inflammatory process, with a value above 8 pg / ml - judges the presence of an actively occurring inflammatory process and a pronounced immune response.
Заявляется также способ с вышеуказанными признаками, в котором в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки сбор исследуемого материала осуществляют с поверхности зоны трансформации с помощью полосок фильтровальной бумаги-аппликатора размером 1×0,4 см.A method with the above features is also claimed in which, in the case of cicatricial changes on the surface of the cervix, the test material is collected from the surface of the transformation zone using 1 × 0.4 cm filter paper applicator strips.
Кроме того, заявляется также способ с вышеуказанными признаками, в котором сбор нативного материала с зоны патологического очага с максимальной полнотой и атравматично осуществляют с помощью средства, имеющего съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик, который перемещают по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева шейки матки, причем валик также выполнен съемным и крепящимся с дистальной стороны держателя, с проксимальной стороны которого выполнена ручка для манипуляций.In addition, there is also claimed a method with the above features, in which the collection of native material from the area of the pathological lesion with maximum completeness and atraumatic using a means having a removable coating of highly hygroscopic material placed on a rotating roller that is moved along the surface of the end side in the outer area pharynx of the cervix, and the roller is also made removable and fastened on the distal side of the holder, on the proximal side of which is made a handle for manipulation.
Технический результат заявляемого изобретения заключается в том, что повышение точности в оценке активности воспаления шейки матки производят с учетом информации с нативной пробы, получаемой непосредственно с участка патологии, которая дает большую достоверность исследования. Это отсутствовало в наиболее близком аналоге. Достигается результат способа технически: проба встряхивается с использованием центрифуги вортекс, процесс исследуют ИФА с применением технических средств. Фильтровальная бумага-аппликатор - средство сбора нативного материала, а также другие используемые в способе средства - технические атрибуты заявляемого способа.The technical result of the claimed invention lies in the fact that increasing the accuracy in assessing the activity of inflammation of the cervix uteri is made taking into account information from a native sample obtained directly from the site of pathology, which gives greater reliability of the study. This was absent in the closest analogue. The result of the method is achieved technically: the sample is shaken using a vortex centrifuge, the process is examined by ELISA using technical means. Filter paper applicator - a means of collecting native material, as well as other means used in the method - the technical attributes of the proposed method.
Особенности сбора исследуемого материала также имеют техническую сущность - сколько собрать и как материал для исследования, а также как его обработать до проведения исследования, а главное какую естественную жидкость выбрать для исследования. В подавляющем большинстве для исследования данного органа - шейки матки при данной патологии - используют исследование крови, реже содержимое цервикального канала, в заявляемом решении исследуется отделяемое цервикальных желез с поверхности зоны трансформации шейки матки.Features of the collection of the studied material also have a technical essence - how much to collect and how the material for the study, as well as how to process it before the study, and most importantly what natural liquid to choose for the study. The vast majority for the study of this organ - the cervix with this pathology - use a blood test, less often the contents of the cervical canal, in the claimed solution, the detachable cervical glands from the surface of the cervical transformation zone are examined.
Поскольку способ основан на использовании цитокина интерферона-γ, который является локальным показателем, целесообразно измерять его уровень непосредственно в изучаемых тканях, в данном случае шейки матки.Since the method is based on the use of the interferon-γ cytokine, which is a local indicator, it is advisable to measure its level directly in the studied tissues, in this case, the cervix.
Измененное количество цитокина интерферона-γ служит признаком иммунодефицитного состояния и показателем течения заболевания. В данной заявке изучалась иммуноактивность конкретного органа, конкретной патологической зоны органа - очаге воспаления шейки матки - методом иммуноферментного анализа, который осуществлялся на заранее произведенных планшетах ЗАО «Вектор-Бест» г.Новосибирск - Россия. Учет результатов - спектрофотометрический на длине волны 450 нм. Для выяснения значений нормальной концентрации интерферона-γ был проведен анализ практически здоровых доноров - женщин репродуктивного возраста от 25-44 лет, представительниц различных социальных групп без любых заболеваний гениталий в настоящем времени и в прошлом, в первую очередь, шейки матки. Все названные до данной фазы способа признаки, входящие в приемы осуществления способа, носят технический характер, например как сам ИФА, так и особенности его осуществления.An altered amount of interferon-γ cytokine is a sign of an immunodeficiency state and an indicator of the course of the disease. In this application, the immunoactivity of a specific organ, a specific pathological area of an organ — the site of inflammation of the cervix uteri — was studied by enzyme-linked immunosorbent assay, which was carried out on pre-manufactured tablets of Vector-Best CJSC, Novosibirsk, Russia. Accounting for the results is spectrophotometric at a wavelength of 450 nm. To find out the values of the normal concentration of interferon-γ, an analysis was made of practically healthy donors - women of reproductive age from 25-44 years old, representatives of various social groups without any genital diseases in the present time and in the past, primarily, the cervix. All the characteristics mentioned before this phase of the method that are part of the method implementation are of a technical nature, for example, both the ELISA itself and the features of its implementation.
Активность и точность локализации воспалительного процесса шейки матки подтверждается неоспоримо, например, при наличии нескольких воспалительных процессов вяло и/или активно текущих одновременно в одном организме. Например, наличие осложненной эктопии и отита или флегмонозного заболевания одновременно в одном организме другими методами, например, анализом крови даже на цитокины, не позволяет оценить активность воспалительного заболевания шейки матки отдельно от других сопутствующих заболеваний.The activity and accuracy of localization of the inflammatory process of the cervix is indisputably confirmed, for example, in the presence of several inflammatory processes, sluggish and / or actively ongoing simultaneously in one organism. For example, the presence of complicated ectopia and otitis media or phlegmonous disease simultaneously in one organism by other methods, for example, by a blood test even for cytokines, does not allow to evaluate the activity of an inflammatory disease of the cervix separately from other concomitant diseases.
Подробное описание способаDetailed description of the method
Первоначально осуществляют клиническое обследование больной с помощью стандартных методов, т.е. с оценкой жалоб и соматического статуса, детальным сбором анамнеза с выявлением факторов, влияющих на иммунный статус, гинекологическое обследование с осмотром шейки матки с помощью зеркал, бимануальным исследованием, расширенной кольпоскопией, цитологическим исследованием соскоба с шейки матки. Затем дополнительно обследуют на наличие инфекций гениталий, т.е. осуществляют микроскопию окрашенных мазков из урогенитального тракта, бактериологическое исследование содержимого цервикального канала. Методом полимеразной цепной реакции обследуют на инфекции, передающиеся преимущественно половым путем. Проводят верификацию диагноза, критериями исключения из исследования являлись: беременность и лактация, воспалительные заболевания органов малого таза в стадии обострения, наличие инфекций, передающихся половым путем, в т.ч. папилломавирусной инфекции, наличие также цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки, наличие тяжелой экстрагенитальной патологии и признаков острых инфекционных заболеваний.Initially, a clinical examination of the patient is carried out using standard methods, i.e. with the assessment of complaints and somatic status, a detailed history taking with identification of factors affecting the immune status, gynecological examination with examination of the cervix using mirrors, bimanual examination, advanced colposcopy, cytological examination of scraping from the cervix. It is then further examined for genital infections, i.e. carry out microscopy of stained smears from the urogenital tract, bacteriological examination of the contents of the cervical canal. The method of polymerase chain reaction is examined for infections transmitted primarily through sexual contact. The diagnosis is verified, the exclusion criteria from the study were: pregnancy and lactation, inflammatory diseases of the pelvic organs in the acute stage, the presence of sexually transmitted infections, including human papillomavirus infection, the presence of cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer, the presence of severe extragenital pathology and signs of acute infectious diseases.
После клинического обследования больных и подтверждения наличия неспецифического воспаления шейки матки производят сбор биоматериала с поверхности патологического очага и зоны трансформации. Сбор биоматериала осуществляют следующим образом: больную располагают на гинекологическом кресле, шейку матки обнажают в зеркалах Куско. Стерильным сухим ватным тампоном удаляют влагалищное отделяемое с поверхности шейки матки. Затем производят с максимальной полнотой и атравматично сбор исследуемого продукта, подводя средство для снятия нативного материала к наружному зеву шейки матки непосредственно к поверхности зоны трансформации шейки матки и патологического очага, не вводя средство внутрь цервикального канала. Таким средством может быть цитощетка, шпатель, а также другие технические устройства для забора исследуемого материала, в том числе описанное в подаваемой заявке в п.3 формулы данного изобретения средство. С помощью данного средства осуществляют сбор нативного материала с зоны патологического очага с максимальной полнотой и атравматично. Оно имеет съемное покрытие из высокогигроскопического материала, помещенного на вращающийся валик, который перемещают по поверхности торцевой стороны в зоне наружного зева шейки матки. Валик также выполнен съемным и крепящимся с дистальной стороны держателя, с проксимальной стороны которого выполнена ручка для манипуляций. Длина держателя, по крайней мере, превосходит длину влагалища и, как правило, составляет 20-22 см.After a clinical examination of patients and confirmation of the presence of non-specific inflammation of the cervix, biomaterial is collected from the surface of the pathological focus and the transformation zone. The collection of biomaterial is as follows: the patient is placed on a gynecological chair, the cervix is exposed in the mirrors of Cuzco. A sterile dry cotton swab removes the vaginal discharge from the surface of the cervix. Then, the test product is collected with maximum completeness and atraumatic, bringing the means for removing the native material to the external pharynx of the cervix directly to the surface of the transformation zone of the cervix and the pathological focus, without introducing the agent into the cervical canal. Such a tool can be a cytobrush, a spatula, as well as other technical devices for sampling the test material, including the tool described in the application filed in paragraph 3 of the claims of this invention. Using this tool, the collection of native material from the area of the pathological focus is carried out with maximum completeness and atraumatic. It has a removable coating of highly hygroscopic material placed on a rotating roller, which is moved along the surface of the end side in the area of the external pharynx of the cervix. The roller is also removable and fastened on the distal side of the holder, on the proximal side of which a handle for manipulations is made. The length of the holder, at least, exceeds the length of the vagina and, as a rule, is 20-22 cm.
Средством для сбора исследуемого материала может также быть фильтровальная бумага-аппликатор соответствующих размеров. Сорбирующую способность фильтровального материала на максимальное его впитывание предварительно оценивают в контрольных исследованиях. Полоску фильтровального материала взвешивают до и после пропитывания на аналитических весах. Средство для сбора исследуемого продукта - полоску мягкого фильтровального материала, размером 1,0×0,4 см с помощью пинцета плотно фиксируют к поверхности патологического очага, деликатным нежным надавливанием пинцетом дают возможность фильтровальному материалу впитать в себя воспалительный секрет цервикальных желез и компоненты поврежденных тканей в течение 15-20 секунд, а такой размер фильтровального материала, как правило, позволяет получить до 5,0±0,5 мг нативного материала. Это средство применяется в случае наличия рубцовых изменений на поверхности шейки матки, с помощью него осуществляют сбор исследуемого материала в виде отделяемого цервикальных желез с поверхности зоны трансформации.The means for collecting the test material may also be filter paper applicator of appropriate sizes. The sorbing ability of the filter material to its maximum absorption is preliminarily evaluated in control studies. A strip of filter material is weighed before and after soaking on an analytical balance. The means for collecting the test product - a strip of soft filter material, 1.0 × 0.4 cm in size, is tightly fixed with tweezers to the surface of the pathological focus, with delicate gentle pressure of the tweezers allow the filter material to absorb the inflammatory secretion of the cervical glands and components of damaged tissues into within 15-20 seconds, and such a size of filter material, as a rule, allows to obtain up to 5.0 ± 0.5 mg of native material. This tool is used in the case of cicatricial changes on the surface of the cervix, with the help of which they collect the studied material in the form of detachable cervical glands from the surface of the transformation zone.
Описанные в данной заявке приемы снятия нативного материала обеспечивают максимальную полноту сбора и атравматичность в отличие от наиболее близкого аналога, когда цервикальный секрет берут из цервикального канала, а не с зоны патологического очага и с зоны трансформации, как в заявляемом способе.The techniques for removing native material described in this application provide maximum collection and atraumaticity, in contrast to the closest analogue, when the cervical secret is taken from the cervical canal, and not from the area of the pathological focus and from the transformation zone, as in the claimed method.
Затем пробу помещают в пронумерованную пробирку до полного погружения, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия, закрывают крышкой. Смыв биоматериала с поверхности фильтровального материала осуществляют в центрифуге вортекс CM 70М-07, Elmi в течение 10 мин в режиме встряхивания. Затем пробирку помещают в штатив. Исследуемым тестируемым материалом является отделяемое со слизистой оболочки шейки матки, разведенное 1:200 в 0,155М растворе хлорида натрия.Then the sample is placed in a numbered tube until completely immersed, filled with 1.0 ml of 0.155 M sodium chloride solution, closed with a lid. The biomaterial is washed off the surface of the filter material in a vortex CM 70M-07, Elmi centrifuge for 10 min in the mode of shaking. Then the tube is placed in a tripod. The studied test material is detachable from the mucous membrane of the cervix, diluted 1: 200 in a 0.155 M sodium chloride solution.
Образцы тестируют методом твердофазного иммуноферментного анализа ИФА. Исследуемый образец в количестве 100 мкл вносят в лунку планшета с помощью автоматической пипетки. На первой стадии анализа ИНФγ, содержащийся в калибровочных и исследуемых образцах, связывается с первыми антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок планшета. На второй стадии анализа иммобилизованный ИНФγ взаимодействует с коньюгатом вторых антител с биотином. Количество связавшегося коньюгата прямо пропорционально количеству ИНФγ в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу. Во время инкубации с субстратной смесью - раствором хромогена тетраметилбензидина происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках с помощью иммуноферментного анализатора «Stat Fax-2100» на длине волны 450 нм на основании калибровочного графика, полученного при исследовании калибровочных проб, имеющихся в наборе реактивов, рассчитывают концентрацию ИНФγ в анализируемых образцах. Результаты выражают в пг/мл. Общее время проведения анализа 90-100 мин.Samples are tested by enzyme-linked immunosorbent assay ELISA. The test sample in an amount of 100 μl is added to the well of the tablet using an automatic pipette. At the first stage of the analysis, the IFNγ contained in the calibration and test samples binds to the first antibodies immobilized on the inner surface of the plate wells. In the second stage of the analysis, the immobilized INFγ interacts with the conjugate of the second antibodies with biotin. The amount of conjugate bound is directly proportional to the amount of INFγ in the test sample. At the last stage of the analysis, avidin peroxidase is added to the wells. During incubation with the substrate mixture - tetramethylbenzidine chromogen solution, the solution stains in the wells. The degree of color is directly proportional to the amount of bound labeled antibodies. After measuring the optical density of the solution in the wells using an enzyme-linked immunosorbent analyzer "Stat Fax-2100" at a wavelength of 450 nm, based on the calibration graph obtained in the study of calibration samples available in the reagent kit, the concentration of INF in the analyzed samples is calculated. Results are expressed in pg / ml. The total analysis time is 90-100 minutes.
Методом твердофазного ИФА тестируют свежеприготовленные образцы. Если это невозможно, то для исключения бактериального пророста пробирки с образцами помещают в морозильную камеру и осуществляют хранение при t -20°С. При этом не допускают даже однократного оттаивания образцов.The method of solid-phase ELISA test freshly prepared samples. If this is not possible, then to exclude bacterial growth, test tubes with samples are placed in the freezer and stored at t -20 ° C. In this case, even a single thawing of the samples is not allowed.
Для получения количественного значения эталонной нормы концентрацию интерферона-γ заблаговременно определяли в отделяемом со слизистой шейки матки у 20 практически здоровых лиц - женщин активного репродуктивного возраста с 25-44 лет и осуществляли построение градуировочной кривой. Диапазон полученных значений концентраций составил до 3,2 пг/мл. У большей части здоровых лиц величина составила в пределах значения 1,6-3,2 пг/мл.To obtain a quantitative value of the reference norm, the concentration of interferon-γ was determined in advance in 20 practically healthy individuals, women of active reproductive age from 25-44 years old, that were separated from the cervical mucosa and the calibration curve was constructed. The range of concentrations obtained was up to 3.2 pg / ml. In most healthy individuals, the value was in the range of 1.6-3.2 pg / ml.
У 20 пациенток с острым воспалением или обострением хронического воспалительного процесса возраста с 24 по 44 года диапазон полученных измеренных значений концентрации ИНФγ составил выше 8 пг/мл. У большей части больных величина укладывалась в пределах значения 12,6 пг/мл.In 20 patients with acute inflammation or exacerbation of a chronic inflammatory process of age from 24 to 44 years, the range of the obtained measured values of the concentration of IFNγ was above 8 pg / ml. In most patients, the value was within the range of 12.6 pg / ml.
У 20 пациенток с длительным и вялотекущим хроническим воспалительным процессом того же репродуктивного возраста от 25 до 44 лет диапазон полученных измеренных концентраций ИНФγ составил 3,2 - 8 пг/мл.In 20 patients with a long and sluggish chronic inflammatory process of the same reproductive age from 25 to 44 years, the range of measured concentrations of IFNγ was 3.2–8 pg / ml.
На основании полученных данных можно сделать обобщения, с помощью которых можно определять активность течения воспаления шейки матки или хронически вялотекущее воспаление у больных. В зависимости от сделанной оценки больным назначается разное лечение. Опыт показывает, что и при правильной оценке состояния воспаления шейки матки и адекватном лечении наступает выздоровление больных как с остропротекающим воспалением, так и с длительно затянувшемся хроническим процессом воспаления.Based on the obtained data, generalizations can be made with the help of which it is possible to determine the activity of the course of inflammation of the cervix or chronically sluggish inflammation in patients. Depending on the assessment made, patients are prescribed different treatment. Experience shows that with a correct assessment of the state of cervical inflammation and adequate treatment, patients recover with acute inflammation and with a long-lasting chronic inflammation process.
Предложенный способ проиллюстрирован следующими клиническими примерами.The proposed method is illustrated by the following clinical examples.
Пример 1. Пациентка И-ва Е.В., 30 лет. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне бактериального неспецифического цервицита. Умеренная рубцовая деформация шейки матки. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец материала в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИНФγ-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИНФγ - 10,6 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: активно протекающий воспалительный процесс, выраженный иммунный ответ.Example 1. Patient I-va E.V., 30 years old. I turned to a consultation with a diagnosis of Complicated ectopia of the cervix against a background of bacterial non-specific cervicitis. Moderate cicatricial deformity of the cervix. After a clinical examination and verification of the diagnosis, the patient produced a filter paper applicator to remove the native material directly from the surface of the ectopia with maximum completeness and atraumatic. The collected material was completely immersed in an Eppendorf tube filled with 1.0 ml of 0.155 M sodium chloride solution. The test tube was placed in a vortex CM 70M-07 centrifuge, Elmi, shaking mode was set for 10 minutes. The paper was removed from the test tube with tweezers, the studied sample of the material in an amount of 100 μl using an automatic single-channel pipette was introduced into the well of the tablet from the set "INFγ-IFA-BEST", the sample was studied by the method of solid-phase ELISA. The concentration of INF-γ was calculated - 10.6 pg / ml, its comparison was made with the values: for the norm, actively and chronically occurring inflammatory processes. Conclusion: an active inflammatory process, a pronounced immune response.
Пример 2. Пациентка М-ва Е.В., 31 год. Обратилась на консультативный прием с диагнозом: Осложненная эктопия шейки матки на фоне хронического неспецифического цервицита. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено фильтровальной бумагой-аппликатором снятие нативного материала непосредственно с поверхности эктопии с максимальной полнотой и атравматично. Собранный материал до полного погружения был помещен в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс СМ 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Бумага извлечена из пробирки с помощью пинцета, исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИНФγ-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИНФγ - 7,5 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс.Назначено адекватное лечение с включением иммуномодуляторов локально в виде свечей на первом этапе, далее лечение по стандартной схеме.Example 2. Patient M-va E.V., 31 years old. I turned to a consultation with a diagnosis of Complicated ectopia of the cervix against chronic nonspecific cervicitis. After a clinical examination and verification of the diagnosis, the patient produced a filter paper applicator to remove the native material directly from the surface of the ectopia with maximum completeness and atraumatic. The collected material was completely immersed in an Eppendorf tube filled with 1.0 ml of 0.155 M sodium chloride solution. The test tube was placed in a centrifuge vortex SM 70M-07, Elmi, set the shaking mode for 10 minutes The paper was removed from the test tube using tweezers, the test sample in an amount of 100 μl was pipetted into the well of the INFIF-IFA-BEST kit using an automatic single-channel pipette, and the sample was studied by the solid-phase ELISA method. The concentration of INF-γ was calculated - 7.5 pg / ml, its comparison was made with the values: for the norm, actively and chronically occurring inflammatory processes. Conclusion: a chronic inflammatory process is given. Adequate treatment is prescribed with the inclusion of immunomodulators locally in the form of suppositories in the first stage, then treatment according to the standard scheme.
Пример 3. Пациентка К-ва Е.О., 33 года. Обратилась на прием с целью профосмотра. После клинического обследования и верификации диагноза больной произведено средством для забора исследуемого биологического материала с поверхности шейки матки снятие нативного материала непосредственно с поверхности зоны трансформации с максимальной полнотой и атравматично путем прокатывания валика рабочей частью по поверхности экзоцервикса. Средство извлекли из влагалища, избегая касания стенок. Произвели снятие покрытия валика с помощью пинцета и поместили его до полного погружения в пробирку Эппендорф, заполненную 1,0 мл 0,155М раствором хлорида натрия. Пробирка помещена в центрифугу вортекс CM 70М-07, Elmi, установлен режим встряхивания на 10 мин. Покрытие валика извлечено из пробирки с помощью пинцета, с отжатием избытка жидкости путем прижимания к стенке пробирки. Исследуемый образец в количестве 100 мкл с помощью автоматической одноканальной пипетки внесен в лунку планшета из набора «ИНФγ-ИФА-БЕСТ», произведено исследование образца методом твердофазного ИФА. Рассчитана концентрация ИНФγ - 5,9 пг/мл, произведено ее сравнение со значениями: для нормы, активно и хронически протекающими воспалительными процессами. Дано заключение: хронически протекающий воспалительный процесс шейки матки.Example 3. Patient K-va E.O., 33 years old. Appealed for the purpose of a physical examination. After a clinical examination and verification of the diagnosis, the patient was carried out with a means for collecting the biological material under study from the surface of the cervix, removing the native material directly from the surface of the transformation zone with maximum completeness and atraumatic by rolling the roller with the working part on the surface of the exocervix. The tool was removed from the vagina, avoiding touching the walls. They removed the coating of the roller with tweezers and placed it until it was completely immersed in an Eppendorf tube filled with 1.0 ml of 0.155 M sodium chloride solution. The test tube was placed in a vortex CM 70M-07 centrifuge, Elmi, shaking mode was set for 10 minutes. The coating of the roller was removed from the test tube with tweezers, squeezing the excess liquid by pressing it against the wall of the test tube. The investigated sample in an amount of 100 μl using an automatic single-channel pipette was introduced into the well of the tablet from the set "INFγ-IFA-BEST", the sample was studied by the method of solid-phase ELISA. The concentration of INF-γ was calculated - 5.9 pg / ml, its comparison was made with the values: for the norm, actively and chronically occurring inflammatory processes. Conclusion is given: a chronic inflammatory process of the cervix.
Способ апробирован в клинике акушерства и гинекологии педиатрического факультета Саратовского государственного медицинского университета на базе женской консультации ММУ «10 Городская клиническая больница» г.Саратова и Центральной научно-исследовательской лаборатории Саратовского государственного медицинского университета.The method was tested in the clinic of obstetrics and gynecology of the pediatric faculty of the Saratov State Medical University on the basis of women's consultation MMU "10 City Clinical Hospital" of Saratov and the Central Research Laboratory of the Saratov State Medical University.
Таким образом, заявляемый способ оценки активности локального воспаления слизистой шейки матки при фоновых заболеваниях, основанный на определении уровня ИНФγ в отделяемом с поверхности патологического очага, позволяет:Thus, the claimed method of assessing the activity of local inflammation of the cervical mucosa in background diseases, based on the determination of the level of INF in the discharge from the surface of the pathological focus, allows you to:
- на основании полученных данных оценить активность локального воспаления;- based on the data obtained, evaluate the activity of local inflammation;
- на основании полученных результатов осуществить своевременное адекватное патогенетическое лечение.- on the basis of the results obtained, carry out timely adequate pathogenetic treatment.
Данный способ обладает следующими преимуществами: высокой чувствительностью, позволяющей выявлять концентрации до 0,05 нг/мл; возможностью использовать минимальные объемы исследуемого материала; стабильностью при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (до года и более); простотой проведения реакции; наличием как инструментального, так и визуального учета; возможностью автоматизации всех этапов реакции; относительно низкой стоимостью диагностических наборов.This method has the following advantages: high sensitivity, which allows detecting concentrations up to 0.05 ng / ml; the ability to use the minimum volumes of the studied material; storage stability of all the ingredients required for an ELISA (up to a year or more); simplicity of the reaction; the presence of both instrumental and visual accounting; the ability to automate all stages of the reaction; relatively low cost of diagnostic kits.
Отличия в достигаемом результате - достоинства заявляемого изобретения.The differences in the achieved result are the merits of the claimed invention.
Для проверки достоверности результатов в оценке активности воспаления шейки матки осуществляют параллельно подсчет числа лейкоцитов в поле зрения мазка с поверхности экзоцервикса. Была произведена микроскопия окрашенного мазка с подсчетом количества лейкоцитов. Для нормы количество лейкоцитов составляет до 10 клеток в поле зрения. 15-20-25 клеток в поле зрения свидетельствует о бессимптомно протекающем хроническом воспалительном процессе, 30-35-40 клеток в поле зрения - о хронически протекающем воспалительном процессе, 45-50-55 клеток в поле зрения - об активно остропротекающем воспалительном процессе. Эти данные совпали с выводами, сделанными по заявляемому способу, о наличии хронически протекающего воспаления.To check the reliability of the results in assessing the activity of inflammation of the cervix, the number of leukocytes in the field of view of the smear from the surface of exocervix is simultaneously calculated. Microscopy of the stained smear was performed with the count of the number of leukocytes. For normal, the number of white blood cells is up to 10 cells in the field of view. 15-20-25 cells in the field of view indicates an asymptomatic chronic inflammatory process, 30-35-40 cells in the field of view - a chronically inflammatory process, 45-50-55 cells in the field of view - an actively acute inflammatory process. These data coincided with the conclusions made by the claimed method, the presence of a chronic inflammation.
Увеличение числа лейкоцитов в мазке было характерно для картины активно протекающего острого процесса и наоборот - уменьшение числа лейкоцитов характеризовало наличие хронического воспалительного процесса.An increase in the number of leukocytes in the smear was characteristic of a picture of an active acute process and vice versa - a decrease in the number of leukocytes characterized the presence of a chronic inflammatory process.
На основании этих проверочных данных подтверждается вывод на деление больных с активно и хронически протекающим воспалением шейки матки при условии значения концентрации цитокина, полученного изложенным способом с известным набором реактивов ИФА, с учетом особенностей взятия пробы на начальном этапе и обработки проб на последующих этапах.Based on these verification data, the conclusion on the division of patients with actively and chronically inflamed cervical inflammation is confirmed, provided that the concentration of the cytokine obtained by the described method with a known set of ELISA reagents, taking into account the peculiarities of sampling at the initial stage and processing of samples at subsequent stages.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009109179/15A RU2385460C1 (en) | 2009-03-16 | 2009-03-16 | Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009109179/15A RU2385460C1 (en) | 2009-03-16 | 2009-03-16 | Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2385460C1 true RU2385460C1 (en) | 2010-03-27 |
Family
ID=42138457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009109179/15A RU2385460C1 (en) | 2009-03-16 | 2009-03-16 | Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2385460C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624855C1 (en) * | 2016-01-11 | 2017-07-07 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for microbial factor diagnostics in case of chronic nonspecific endometritis |
-
2009
- 2009-03-16 RU RU2009109179/15A patent/RU2385460C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HEATLEY M.K. What is the value of proliferation markers in the normal and neoplastic cervix?. - Histol. Histopatol., 1998, Jan; 13(1):249-54, реф. [найдено в БД PubMed] PMID: 9476654. * |
| ГРИБОВА С.Н. и др. Особенности изменения иммунорегуляторной системы у женщин с фоновой патологией шейки матки. - Саратовский научно-медицинский журнал, 2009, т.5, №1, с.49-51. ГРИБОВА С.Н. и др. Современные представления об этиологии, патогенезе, методах диагностики и лечения фоновых и предраковых заболеваний шейки матки. - Саратовский научно-медицинский журнал, 2008, №2(20), с.18-23. АНДРЕЕВА Е.Н. и др. Современные аспекты этиологии и патогенеза фоновых, предраковых процессов и рака шейки матки (обзор литературы). - Проблемы репродукции, 2006, №5 [найдено в Internet: www.mediasphera.ru]. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2624855C1 (en) * | 2016-01-11 | 2017-07-07 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for microbial factor diagnostics in case of chronic nonspecific endometritis |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Domeika et al. | Guidelines for the laboratory diagnosis of trichomoniasis in East European countries | |
| CN114190990A (en) | System and method for monitoring health based on collected bodily fluids | |
| Kremer | The in vitro spermatozoal penetration test in fertility investigations | |
| Holanda Jr et al. | Primary screening for cervical cancer through self sampling | |
| RU2405145C1 (en) | Method of assessment of local inflammation activity with underlying uterine cervical diseases | |
| RU2385460C1 (en) | Method of estimating activity of local inflammation in background diseases of uterine neck | |
| RU2704966C1 (en) | Diagnostic technique for degree of cervical dysplasia | |
| RU2402779C1 (en) | Method of estimating local inflammation activity in case of background neck of uterus diseases and device for removal of native material from neck of uterus surface | |
| RU2572340C1 (en) | Method of predicting progression of mild intraepithelial neoplasia in women of young and first period of mature age | |
| US20050215924A1 (en) | Noninvasive device for collecting bio-specimen on gynaecology | |
| Savicheva et al. | Guidelines for laboratory diagnosis of Neisseria gonorrhoeae in East-European countries Part 1. Gonorrhoea, sampling and microscopy for diagnosis. | |
| US20050020937A1 (en) | Method for detecting pathogenic agents | |
| RU2517541C1 (en) | Method for prediction of recurrent vulvar cancer | |
| RU2310195C2 (en) | Method for predicting the flow of atopic dermatitis | |
| JP4534388B2 (en) | Menstrual or vaginal secretion collection device, kit and method | |
| Teixeira-Soares et al. | Comparison between gynecological examination methods and sample collection techniques for the diagnosis of endometritis in subfertile mares | |
| Mårdh et al. | Leukocyte esterase activity in vaginal fluid of pregnant and non-pregnant women with vaginitis/vaginosis and in controls | |
| RU2236684C2 (en) | Method for predicting leiomyomatosis uteri growth | |
| Novikova et al. | Microscopy of stained smears of vaginal secretion in the diagnosis of recurrent vulvovaginal candidosis | |
| Eckert et al. | Histologic endometritis in asymptomatic human immunodeficiency virus–infected women: characterization and effect of antimicrobial therapy | |
| RU2291438C1 (en) | Method for diagnosing clinical course stages of uterine appendages inflammation diseases | |
| RU2768491C1 (en) | Method for diagnosing human papillomavirus by the concentration of molecular markers | |
| Apolikhina et al. | Evaluation of human papillomavirus infection in women in the Lipetsk Region, by using a diagnostic self-sampling test | |
| Brown et al. | Human papillomavirus detection by hybrid capture in paired cervicovaginal lavage and cervical biopsy specimens | |
| KUBOTA et al. | Prevalence of human papillomavirus infection in women attending a sexually transmitted disease clinic |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110317 |