RU2352947C1 - Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses - Google Patents
Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses Download PDFInfo
- Publication number
- RU2352947C1 RU2352947C1 RU2008108389/15A RU2008108389A RU2352947C1 RU 2352947 C1 RU2352947 C1 RU 2352947C1 RU 2008108389/15 A RU2008108389/15 A RU 2008108389/15A RU 2008108389 A RU2008108389 A RU 2008108389A RU 2352947 C1 RU2352947 C1 RU 2352947C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- autoimmune
- bullous
- diagnosed
- skin
- cadherin complex
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области лабораторных исследований и может быть использовано в дерматологии.The invention relates to the field of laboratory research and can be used in dermatology.
Известен способ диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов, включающий метод прямой иммунофлюоресценции, исследование иммуноглобулинов в биоптате кожи больного, по отложениям которых осуществляют дифференциальную диагностику аутоиммунных буллезных дерматозов (Mihai S., Sitaru С.Immunopathology and molecular diagnosis of autoimmune bullous diseases. J.Cell.Mol.Med.Vol 11, № 3, 2007 pp.462-481).A known method for the diagnosis of autoimmune bullous dermatoses, including the direct immunofluorescence method, the study of immunoglobulins in a biopsy sample of the patient’s skin, the deposits of which carry out the differential diagnosis of autoimmune bullous dermatoses (Mihai S., Sitaru C. Immunopathology and molecular measurement of autoimmune bull. .Med.Vol 11, No. 3, 2007 pp. 462-481).
Недостатком этого способа является то, что возможно получить как ложноположительные, так и ложноотрицательные иммуноморфологические реакции. Ложноположительные реакции при прямой иммунофлюоресценции встречаются при некоторых других заболеваниях, таких, например, которые могут быть вызваны действием лекарственных препаратов (токсидермии), болезни Гроувера, афтозном стоматите, красном плоском лишае. Ложноотрицательные и слабые реакции, не позволяющие с уверенностью поставить диагноз аутоиммунного буллезного дерматоза, отмечаются либо в начале заболевания, либо в период ремиссии и на фоне глюкокортикостероидной терапии. Отрицательные реакции иммунофлюоресценции в срезах биопсии в этих случаях могут быть связаны с синтезом небольших трудноуловимых аутоантител к антигенам десмосомального аппарата при аутоиммунной пузырчатке и базальной мембраны эпидермиса при аутоиммунных буллезных дерматозах с поражением дермо-эпидермального соединения (буллезный пемфигоид, линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз и приобретенный буллезный эпидермолиз). Наличие ложноотрицательных реакций в этом способе снижает его точность до 77%.The disadvantage of this method is that it is possible to obtain both false positive and false negative immunomorphological reactions. False positive reactions with direct immunofluorescence are found in some other diseases, such as, for example, that can be caused by the action of drugs (toxidermia), Grover’s disease, aphthous stomatitis, lichen planus. False negative and mild reactions that do not allow a confident diagnosis of autoimmune bullous dermatosis are noted either at the onset of the disease, or during remission and during glucocorticosteroid therapy. Negative immunofluorescence reactions in biopsy sections in these cases can be associated with the synthesis of small elusive autoantibodies to antigens of the desmosomal apparatus in autoimmune pemphigus and the basement membrane of the epidermis in autoimmune bullous dermatoses with a dermo-epidermal epidermal conjunctival lesion ( bullous epidermolysis). The presence of false negative reactions in this method reduces its accuracy to 77%.
Наиболее близким является способ диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов (Белецкая Л.В., Махнева Н.В. Меченые антитела в нормальной и патологической морфологии (атлас). Москва, МНПИ, 2000, с.7-21), включающий проведение непрямой иммунофлюоресценции биоптата кожи, анализ полученных результатов.The closest is a method for the diagnosis of autoimmune bullous dermatoses (Beletskaya L.V., Makhneva N.V. Labeled antibodies in normal and pathological morphology (atlas). Moscow, MNPI, 2000, pp. 7-21), including indirect immunofluorescence of skin biopsy , analysis of the results.
Ткань биоптата кожи замораживают при низкой температуре (-20°С). Серийные срезы толщиной 5 мкм готовят в криостате (-20°С), помещают на предметное стекло и фиксируют в 100% холодном ацетоне. Затем срезы промывают в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS), рН 7,0-7,4 с целью удаления не связанных с тканями растворимых белков и обрабатывают моноклональными антителами к определенной детерминанте исследуемого антигена. При нанесении 50-70 мкл моноклональных антител в разведении 1:500 на срезы препараты выдерживают в течение 18 ч при 4°С во влажной камере. После промывки PBS на срезы наносят меченую сыворотку, инкубируют в течение 45 мин (во влажной камере, при комнатной температуре) с 50-70 мкл меченой сывороткой в разведении 1:10 срезы, промывают PBS и заключают под покровное стекло в 60%-ный нейтральный глицерин. Для контроля одновременно проводят исследование криостатных срезов, окрашенных гематоксилином и эозином в световом микроскопе.Skin biopsy tissue is frozen at low temperature (-20 ° C). Serial sections with a thickness of 5 μm are prepared in a cryostat (-20 ° C), placed on a glass slide and fixed in 100% cold acetone. Then the sections are washed in physiological saline with phosphate buffer (PBS), pH 7.0-7.4 in order to remove non-tissue soluble proteins and treated with monoclonal antibodies to a specific determinant of the studied antigen. When applying 50-70 μl of monoclonal antibodies at a dilution of 1: 500 on sections, the preparations were incubated for 18 h at 4 ° C in a humid chamber. After washing with PBS, labeled serum was applied to the sections, incubated for 45 minutes (in a humid chamber, at room temperature) with 50-70 μl of labeled serum at a 1:10 dilution, washed with PBS and placed under coverslip in 60% neutral glycerol. For control, a study of cryostat sections stained with hematoxylin and eosin under a light microscope is simultaneously carried out.
Недостатком этого способа является то, что при исследовании после обработки указанным методом можно получить отрицательные реакции. Это может быть связано или с особым состоянием (маскировка) того или иного антигена в ткани или с недостаточной его антигенной активностью. Поэтому чувствительность данного способа недостаточна, что осложняет диагностику аутоиммунных буллезных дерматозов и не позволяет провести адекватную терапию в оптимально ранние сроки.The disadvantage of this method is that in the study after processing the specified method, you can get negative reactions. This may be due either to the special state (masking) of a particular antigen in the tissue or to its insufficient antigenic activity. Therefore, the sensitivity of this method is insufficient, which complicates the diagnosis of autoimmune bullous dermatoses and does not allow for adequate therapy in the optimal early stages.
Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, повышение чувствительность метода и точности дифференциальной диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов. Это достигается за счет создания условий, способствующих связыванию антигена с антителом и выявлению четкой специфической иммунной реакции с тканевым антигеном и минимальной затратой времени.The task of the invention is to remedy these disadvantages, increasing the sensitivity of the method and the accuracy of the differential diagnosis of autoimmune bullous dermatoses. This is achieved by creating conditions conducive to the binding of the antigen to the antibody and the identification of a clear specific immune response with tissue antigen and minimal time consumption.
Для этого в способе диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов, включающем проведение непрямой иммунофлюоресценции биоптата кожи, анализ полученных результатов, предложено при проведении непрямой иммунофлюоресценции инкубацию криостатных срезов исследуемой кожи осуществлять в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2°С в течение 50-60 минут. Осуществляют оценку иммуногистохимической картины по локализации кадгеринового комплекса в ткани. При выявлении его в виде равномерного распределения в межклеточных пространствах эпидермиса диагностируют нормальную экспрессию кадгеринов, а при выявлении нарушения экспрессии кадгеринового комплекса вплоть до его исчезновения из структур диагностируют аутоиммунный буллезный дерматоз, в частности аутоиммунную пузырчатку.For this, in a method for diagnosing autoimmune bullous dermatoses, including indirect immunofluorescence of a skin biopsy, analysis of the results, it is proposed that, when conducting indirect immunofluorescence, incubation of cryostatic sections of the skin under study is carried out in a thermostat in a humid chamber at a temperature of 37.0-37.2 ° C for 50 -60 minutes. An immunohistochemical picture is assessed by the localization of the cadherin complex in the tissue. If it is detected in the form of a uniform distribution in the intercellular spaces of the epidermis, normal expression of cadherins is diagnosed, and if a violation of the expression of the cadherin complex is detected until it disappears from the structures, autoimmune bullous dermatosis, in particular autoimmune pemphigus, is diagnosed.
При выявлении экспрессии кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны эпидермиса диагностируют аутоиммунный буллезный дерматоз с поражением дермо-эпидермального соединения. При выявлении кадгеринового комплекса на покрышке подэпидермального пузыря диагностируют буллезный пемфигоид, а на дне подэпидермального пузыря - приобретенный буллезный эпидермолиз.When detecting the expression of the cadherin complex in the area of the basement membrane of the epidermis, autoimmune bullous dermatosis is diagnosed with damage to the dermo-epidermal compound. If a cadherin complex is detected on the cover of the subepidermal bladder, bullous pemphigoid is diagnosed, and acquired bullous epidermolysis is diagnosed at the bottom of the subepidermal bladder.
За последние десятилетия сделаны серьезные успехи в изучении патогенеза аутоиммунных буллезных дерматозов. На молекулярно-биологическом уровне изучены составы десмосомального аппарата и базальной мембраны эпидермиса и определены структуры, разрушение которых приводит к клиническим проявлениям того или иного аутоиммунного буллезного дерматоза.Over the past decades, serious progress has been made in the study of the pathogenesis of autoimmune bullous dermatoses. At the molecular biological level, the compositions of the desmosomal apparatus and the basement membrane of the epidermis were studied and the structures whose destruction leads to the clinical manifestations of one or another autoimmune bullous dermatosis were determined.
Так, кадгерины - большая и разнообразная группа кальцийзависимых молекул клеточной адгезии. Они участвуют главным образом в межклеточных взаимодействиях, допускающих адгезию между двумя идентичными молекулами, которые экспрессированы на поверхности двух клеток одного и того же типа. Цитоплазматический домен этих молекул играет важную роль в связи с протеинами цитоскелета, способствуя сохранению формы клеток. Кроме физического контакта, который обеспечивают кадгерины между двумя клетками, они способствуют передаче сигналов через структуры цитоскелета, контролируя рост и дифференцировку клеток. В коже молекулы адгезии обеспечивают сложную организацию, вовлекая эпителий, дерму, сосуды, нервы, железы, и в норме экспрессируются в межклеточных пространствах и на поверхности кератиноцитов эпидермиса. И любые изменения, связанные с аномалией экспрессии или дисфункцией этих молекул, могут привести к серьезным деструктивным последствиям. Так, молекулярно-биологические исследования по изучению патогенеза аутоиммунных буллезных дерматозов позволили идентифицировать и определить принадлежность антигенов-мишеней к семейству кадгеринов (десмоглеины 1 и 3) при аутоиммунной пузырчатке и полудесмосом - при буллезном пемфигоиде. Полученные данные позволили расширить знания по механизму образования внутриэпидермальных надбазальных и субкорнеальных пузырей при вульгарной и листовидной пузырчатке соответственно, а также субэпидермальных пузырей при буллезном пемфигоиде.So, cadherins are a large and diverse group of calcium-dependent cell adhesion molecules. They participate mainly in intercellular interactions that allow adhesion between two identical molecules, which are expressed on the surface of two cells of the same type. The cytoplasmic domain of these molecules plays an important role in connection with cytoskeletal proteins, helping to maintain cell shape. In addition to the physical contact that cadherins provide between the two cells, they contribute to the transmission of signals through the structures of the cytoskeleton, controlling the growth and differentiation of cells. In the skin, adhesion molecules provide complex organization, involving the epithelium, dermis, blood vessels, nerves, glands, and are normally expressed in the intercellular spaces and on the surface of epidermal keratinocytes. And any changes associated with an abnormality of expression or dysfunction of these molecules can lead to serious destructive consequences. Thus, molecular biological studies on the pathogenesis of autoimmune bullous dermatoses made it possible to identify and determine the affiliation of target antigens to the cadherin family (desmogleins 1 and 3) with autoimmune pemphigus and semidesmosos with bullous pemphigoid. The data obtained made it possible to expand knowledge of the mechanism of the formation of intraepidermal supra-basal and subcorneal vesicles with vulgar and leaf pemphigus, respectively, as well as subepidermal vesicles with bullous pemphigoid.
При проведении иммуногистохимической реакции предложенным способом с инкубацией криостатных срезов мечеными антителами в термостате при 37,0-37,2°С во влажной камере в течение 50-60 мин достигается чувствительность специфической реакции, способствующая оценке результатов и диагностике аутоиммунных буллезных дерматозов.When carrying out an immunohistochemical reaction by the proposed method with incubation of cryostatic sections with labeled antibodies in a thermostat at 37.0-37.2 ° C in a humid chamber for 50-60 minutes, a sensitivity of a specific reaction is achieved, which helps to evaluate the results and diagnose autoimmune bullous dermatoses.
Во всех случаях аутоиммунных буллезных дерматозов (аутоиммунная пузырчатка, буллезный пемфигоид, линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз, приобретенный буллезный эпидермолиз) выявлено нарушение экспрессии кадгеринового комплекса вплоть до его исчезновения из структур, где он локализован в норме, и проявления в тех структурах эпидермиса, где в норме он отсутствует. Отсутствие экспрессии кадгеринового комплекса в межклеточных пространствах эпидермиса свидетельствует о вовлечении его в общий иммунопатологический процесс при аутоиммунных буллезных дерматозах. При этом кадгериновый комплекс при аутоиммунной пузырчатке является непосредственно антигеном-мишенью для аутоантител. При аутоиммунных буллезных дерматозах с поражением дермо-эпидермального соединения кадгерины вовлекаются опосредованно с одновременно извращенной их экспрессией в зоне базальной мембраны эпидермиса. Последнее явление было выявлено в большинстве случаев аутоиммунных буллезных дерматозов с поражением дермо-эпидермального соединения, включая буллезный пемфигоид, линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз и приобретенный буллезный эпидермолиз. Объяснить это можно тем, что под действием этиологических и патогенетических факторов происходит переключение экспрессии генов одних клеток на гены других, т.е. при подавлении одних и активации других. При этом в месте образования подпидермального пузыря иммунофлюоресцентная реакция обнаружена как на покрышке, так и на дне пузыря, но разной степени интенсивности ее свечения. Так, в случаях буллезного пемфигоида наиболее выраженная экспрессия кадгеринового комплекса отмечена на покрышке, а в случаях приобретенного буллезного эпидермолиза - на дне подэпидермального пузыря.In all cases of autoimmune bullous dermatoses (autoimmune pemphigus, bullous pemphigoid, linear IgA-dependent bullous dermatosis, acquired bullous epidermolysis), expression of the cadherin complex is disturbed up to its disappearance from structures where it is normal and normal normally it is absent. The lack of expression of the cadherin complex in the intercellular spaces of the epidermis indicates its involvement in the general immunopathological process in autoimmune bullous dermatoses. In this case, the cadherin complex in autoimmune pemphigus is directly an antigen target for autoantibodies. In autoimmune bullous dermatoses with damage to the dermo-epidermal compound, cadherins are involved indirectly with their expression simultaneously distorted in the area of the basement membrane of the epidermis. The latter phenomenon was detected in most cases of autoimmune bullous dermatoses with lesions of the dermo-epidermal compound, including bullous pemphigoid, linear IgA-dependent bullous dermatosis and acquired bullous epidermolysis. This can be explained by the fact that under the influence of etiological and pathogenetic factors, the expression of the genes of some cells switches to the genes of others, i.e. while suppressing some and activating others. At the same time, at the site of the formation of the sub-epidermal bladder, an immunofluorescence reaction was found both on the tire and on the bottom of the bladder, but with varying degrees of intensity of its glow. So, in cases of bullous pemphigoid, the most pronounced expression of the cadherin complex is noted on the tire, and in cases of acquired bullous epidermolysis, on the bottom of the subepidermal bladder.
На фиг.1 показана нормальная экспрессия кадгеринового комплекса в межклеточных пространствах эпидермиса; на фиг.2 показано нарушение экспрессии кадгеринового комплекса при аутоиммунной пузырчатке; на фиг.3 представлена иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны эпидермиса при линейном IgA-зависимом буллезном дерматозе.; на фиг.4 - иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса на покрышке подэпидермального пузыря при буллезном пемфигоиде; на фиг.5 - иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса на дне подэпидермального пузыря при приобретенном буллезном эпидермолизе.Figure 1 shows the normal expression of the cadherin complex in the intercellular spaces of the epidermis; figure 2 shows the violation of the expression of cadherin complex with autoimmune pemphigus; figure 3 presents the immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex in the area of the basement membrane of the epidermis with linear IgA-dependent bullous dermatosis .; figure 4 - immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex on the cover of the subepidermal bladder with bullous pemphigoid; figure 5 - immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex at the bottom of the subepidermal bladder with acquired bullous epidermolysis.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
На криостатные срезы, предварительно фиксированные ацетоном и инкубированные с первыми моноклональными антителами мыши против кадгеринового комплекса в течение 18 ч при 4°С во влажной камере, наносят меченые антитела против иммуноглобулинов мыши. Инкубация осуществляется во влажной камере в термостате при 37,0-37,2 С в течение 50-60 мин. Установлено, что при использовании температуры термостата повышается чувствительность иммунной реакции, что выражается в четкой реакции в контрольном опыте по межклеточным соединениям кожи доноров. Экспериментальным путем установлено, что оптимальное время для инкубации с целью проявления четкой иммуногистохимической картины является 55 мин, но возможно использовать время в параметрах от 50 мин до 60 мин. Использование времени менее 50 мин нецелесообразно в виду слабой реакции, более длительное время (более 60 минут) - эффект к усилению реакции не приводит. При инкубации при температуре ниже 37,0°С полного эффекта не достигается, более высокая температура (выше 37,2°С) полученный эффект не усиливает.Labeled antibodies against mouse immunoglobulins are applied to cryostat sections pre-fixed with acetone and incubated with the first mouse anti-cadherin complex monoclonal antibodies for 18 hours at 4 ° C in a humid chamber. Incubation is carried out in a humid chamber in a thermostat at 37.0-37.2 C for 50-60 minutes. It was found that when using the temperature of the thermostat, the sensitivity of the immune reaction increases, which is expressed in a clear reaction in the control experiment on the intercellular compounds of the skin of donors. It was established experimentally that the optimal time for incubation in order to manifest a clear immunohistochemical picture is 55 minutes, but it is possible to use the time in the parameters from 50 minutes to 60 minutes. Using a time of less than 50 minutes is impractical due to a weak reaction, a longer time (more than 60 minutes) - the effect does not lead to an increase in the reaction. When incubated at a temperature below 37.0 ° C, the full effect is not achieved, a higher temperature (above 37.2 ° C) does not enhance the effect.
В том случае, если люминесцентное свечение недостаточно интенсивно, следует усилить реакцию следующим способом: 1) с помощью использования более концентрированной люминесцентной сыворотки к иммуноглобулину мыши или 2) с помощью использования еще одних меченых антител, направленных к иммуноглобулину животного, с помощью которого приготовлены антитела к иммуноглобулину мыши (тройной сендвич).In the event that the luminescent glow is not intense enough, the reaction should be intensified in the following way: 1) using more concentrated luminescent serum to mouse immunoglobulin, or 2) using another labeled antibody directed to the animal’s immunoglobulin, with which antibodies to mouse immunoglobulin (triple sandwich).
К настоящему времени предлагаемым методом обследовано 45 больных аутоиммунными буллезными дерматозами, из них 23 больных различными формами аутоиммунной пузырчатки, 16 больных буллезным пемфигоидом, 2 - линейным IgA-зависимым буллезным дерматозом, 4 - приобретенным буллезным эпидермолизом. Всем больным в качестве контроля была проведена диагностика известным методом прямой иммунофлюоресценции обнаружения фиксированного иммуноглобулина в межклеточных пространствах и в зоне базальной мембраны эпидермиса при аутоиммунной пузырчатке и аутоиммунных буллезных дерматозах с поражением дермо-эпидермального соединения соответственно. При этом только в 77,8% случаев удалось диагностировать четко аутоиммунный буллезный дерматоз. При дальнейшем исследовании срезов кожи больных аутоиммунными буллезными дерматозами с использованием предлагаемой методики непрямой иммунофлюоресценции во всех исследуемых случаях удалось уточнить диагноз и провести дифференциальную диагностику аутоиммунной пузырчатки, буллезного пемфигоида, линейного IgA-зависимого буллезного дерматоза и приобретенного буллезного эпидермолиза. Полученные сведения могут служить дополнительным диагностическим маркером в дифференциальной диагностике этих аутоиммунных буллезных дерматозов.To date, the proposed method has examined 45 patients with autoimmune bullous dermatoses, of which 23 patients with various forms of autoimmune pemphigus, 16 patients with bullous pemphigoid, 2 - linear IgA-dependent bullous dermatosis, 4 - acquired bullous epidermolysis. As a control, all patients were diagnosed with the known direct immunofluorescence method for detecting fixed immunoglobulin in the intercellular spaces and in the area of the epidermal basement membrane with autoimmune pemphigus and autoimmune bullous dermatoses with damage to the dermo-epidermal compound, respectively. Moreover, only in 77.8% of cases it was possible to diagnose clearly autoimmune bullous dermatosis. In a further study of skin sections of patients with autoimmune bullous dermatoses using the proposed method of indirect immunofluorescence in all the studied cases, it was possible to clarify the diagnosis and differential diagnosis of autoimmune pemphigus, bullous pemphigoid, linear IgA-dependent epidermal bullous dermatosis and. The information obtained can serve as an additional diagnostic marker in the differential diagnosis of these autoimmune bullous dermatoses.
Осуществление способа показано на конкретных клинических примерах.The implementation of the method shown in specific clinical examples.
Пример 1Example 1
Обследована больная Щ., 42 лет (и/б 18402, 2005). Больна в течение полугода, когда впервые появились эрозии в области десен. Стоматологом диагностирован гингивит, по поводу которого проведено лечение (трихопол, хлоргексидин, мирамистин, солкосерил гель, целестодерм, облепиховая мазь) - без эффекта. Количество эрозий в области десен увеличивалось, появились пузыри на коже под молочными железами и верхней трети грудной клетки. Заподозрена пузырчатка.Patient S., 42 years old, was examined (b / w 18402, 2005). Sick for six months, when erosion in the gum region first appeared. The dentist diagnosed gingivitis, which was treated (trichopolum, chlorhexidine, miramistin, solcoseryl gel, celestoderm, sea buckthorn ointment) - without effect. The amount of erosion in the gum area increased, blisters appeared on the skin under the mammary glands and the upper third of the chest. Pemphigus is suspected.
При поступлении в кожную клинику общее состояние больной удовлетворительное. Ведущие жалобы: высыпания на слизистой оболочке полости рта и коже, незначительный зуд в местах высыпаний; болезненность при глотании. При осмотре: патологический процесс распространенный, симметричный, локализуется на коже грудной клетки, под молочными железами и слизистой оболочке полости рта. На коже имеются эрозийные дефекты, покрытые плотной серозно-геморрагической корочкой. На слизистой оболочке полости рта (твердое небо, у основания зубов) - эрозии ярко-розового цвета.Upon admission to the skin clinic, the general condition of the patient is satisfactory. Leading complaints: rashes on the mucous membrane of the oral cavity and skin, slight itching in the places of the rashes; soreness when swallowing. On examination: the pathological process is widespread, symmetrical, localized on the skin of the chest, under the mammary glands and the mucous membrane of the oral cavity. On the skin there are erosive defects covered with a dense serous-hemorrhagic crust. On the mucous membrane of the oral cavity (hard palate, at the base of the teeth) - erosion of a bright pink color.
При исследовании криостатных срезов клинически интактных участков кожи больной прямым методом иммунофлюоресценции обнаружена слабая очаговая фиксация иммуноглобулина класса G в межклеточной субстанции эпидермиса, что не позволило подтвердить или опровергнуть диагноз аутоиммунной пузырчатки.In the study of cryostatic sections of clinically intact skin areas of a patient using a direct immunofluorescence method, weak focal fixation of class G immunoglobulin in the intercellular substance of the epidermis was found, which did not allow confirming or refuting the diagnosis of autoimmune pemphigus.
В дальнейшем был использован предлагаемый нами способ с моноклональными антителами против кадгеринового комплекса 1 (на фиг.1 состояние в норме) и инкубацией криостатных срезов исследуемой кожи в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2°С в течение 50 мин. Выявлена картина нарушения экспрессии кадгеринового комплекса: наряду с участками нормальной экспрессии 1 кадгеринового комплекса в межклеточных пространствах эпидермиса выявлены участки подавления 2 их экспрессии, что характерно для аутоиммунной пузырчатки.Subsequently, our method was used with monoclonal antibodies against cadherin complex 1 (the state is normal in Fig. 1) and incubation of cryostat sections of the studied skin in a thermostat in a humid chamber at a temperature of 37.0-37.2 ° С for 50 min. The pattern of expression violation of the cadherin complex was revealed: along with the areas of normal expression of 1 cadherin complex in the intercellular spaces of the epidermis, the areas of suppression of their
На основании полученных данных больной выставлен диагноз: аутоиммунная пузырчатка.Based on the obtained data, the patient was diagnosed with autoimmune pemphigus.
Проведена глюкокортикостероидная терапия в максимальной дозе преднизолона 100 мг per os в сочетании с плазмаферезом (3 сеанса). На фоне проводимой терапии отмечена полная эпителизация эрозий на коже и слизистой твердого неба и активная эпителизация эрозий у основания зубов. Больная выписана в удовлетворительном состоянии на 40 мг преднизолона per os. Даны рекомендации о дальнейшем снижении дозы преднизолона до поддерживающей под контролем дерматолога по месту жительства. В настоящее время пациентка находится в клинической ремиссии на поддерживающей дозе преднизолона 15 мг/сут.Glucocorticosteroid therapy was carried out in a maximum dose of prednisolone 100 mg per os in combination with plasmapheresis (3 sessions). Against the background of the therapy, complete epithelization of erosion on the skin and mucosa of the hard palate and active epithelization of erosion at the base of the teeth were noted. The patient was discharged in satisfactory condition at 40 mg of prednisolone per os. Recommendations are given on further reducing the dose of prednisone to a supportive dermatologist in the community. Currently, the patient is in clinical remission at a maintenance dose of prednisone of 15 mg / day.
Пример 2Example 2
Обследована больная Л., 65 лет (и/б 23619, 2004). Больна около 8 месяцев, когда на фоне стресса на коже туловища появились зудящие элементы в виде ярко-красных пятен до 1 см в диаметре. Десенсибилизирующая терапия дала кратковременный положительный эффект. Процесс распространился на кожу верхних и нижних конечностей, задней поверхности шеи; появились чувство дискомфорта при глотании и пузыри на фоне пятнистых высыпаний. Заподозрен герпетиформный дерматит Дюринга.Patient L., 65 years old, was examined (and / b 23619, 2004). It was sick for about 8 months, when itchy elements appeared in the form of bright red spots up to 1 cm in diameter against the background of stress on the skin of the body. Desensitizing therapy gave a short-term positive effect. The process spread to the skin of the upper and lower extremities, the back of the neck; there was a feeling of discomfort when swallowing and blisters on the background of spotted rashes. Herpetiform dermatitis of Dühring is suspected.
При поступлении в кожную клинику общее состояние больной удовлетворительное. Ведущие жалобы: высыпания на коже туловища и конечностей, интенсивный зуд в местах высыпаний, дискомфорт при глотании. При осмотре: процесс распространенный, симметричный, локализован на коже груди, живота, спины, верхних и нижних конечностей, паховых складках, задней поверхности шеи и слизистой оболочке полости рта. На коже патологический процесс представлен пятнами ярко-розового цвета с образованием кольцевидных очертаний с нечеткими границами от 5 до 20 см в диаметре. На их поверхности располагаются везикуло-буллезные элементы с серозным или гнойным содержимым плотной покрышкой от 0,5 до 2,0 см в диаметре, склонные к группировке, образуя картину «нити жемчуга», преимущественно на коже задней поверхности шеи. На месте вскрывшихся пузырей - эрозии, геморрагические и гнойные корочки. На слизистой оболочке полости рта (слизистая щек) - эрозии ярко-красного цвета с четкими границами до 0,5 см в диаметре.Upon admission to the skin clinic, the general condition of the patient is satisfactory. Leading complaints: rashes on the skin of the trunk and limbs, intense itching in the places of the rashes, discomfort when swallowing. On examination: the process is common, symmetrical, localized on the skin of the chest, abdomen, back, upper and lower extremities, inguinal folds, the back of the neck and the mucous membrane of the oral cavity. On the skin, the pathological process is represented by bright pink spots with the formation of ring-shaped outlines with fuzzy borders from 5 to 20 cm in diameter. On their surface are vesicle-bullous elements with serous or purulent contents with a dense tire from 0.5 to 2.0 cm in diameter, prone to grouping, forming a picture of a “pearl strand”, mainly on the skin of the back of the neck. In place of the opened bubbles - erosion, hemorrhagic and purulent crusts. On the mucous membrane of the oral cavity (mucous membrane of the cheeks) - erosion of bright red color with clear boundaries up to 0.5 cm in diameter.
Проводилась дифференциальная диагностика между герпетиформным дерматитом Дюринга и буллезным пемфигоидом.Differential diagnosis was performed between herpetiform dermatitis of Dühring and bullous pemphigoid.
По предлагаемому способу были проведены исследования путем непрямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами против кадгеринового комплекса и инкубацией криостатных срезов исследуемой кожи в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2°С в течение 55 минут. Выявлена иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны 3 эпидермиса с секвестрацией специфического материала на поверхность кожи, что позволило подтвердить наличие у больной аутоиммунного буллезного дерматоза с поражением дермо-эпидермального соединения, в частности линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз.According to the proposed method, studies were carried out by indirect immunofluorescence with monoclonal antibodies against the cadherin complex and incubation of cryostatic sections of the studied skin in a thermostat in a humid chamber at a temperature of 37.0-37.2 ° C for 55 minutes. An immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex in the area of the
На основании клинико-морфологической картины, данных иммуноморфологического исследования больной выставлен диагноз: линейный IgA-зависимый буллезный дерматоз.Based on the clinical and morphological picture, data of immunomorphological studies, the patient was diagnosed with a linear IgA-dependent bullous dermatosis.
Назначена глюкокортикостероидная терапия (преднизолон в дозе 60 мг per os с постепенным снижением дозы до 20 мг в день). На фоне проводимой терапии отмечена активная эпителизация эрозий, отсутствие свежих высыпаний и наличие гиперпигментации на месте бывших высыпаний. Больная выписана с рекомендациями продолжить снижение дозы преднизолона под наблюдением дерматолога по месту жительства.Glucocorticosteroid therapy was prescribed (prednisone at a dose of 60 mg per os with a gradual decrease in dose to 20 mg per day). Against the background of the therapy, active epithelialization of erosion, the absence of fresh rashes and the presence of hyperpigmentation at the site of the former rashes were noted. The patient was discharged with recommendations to continue lowering the dose of prednisolone under the supervision of a dermatologist at the place of residence.
В настоящее время у больной в течение последних 1,5 лет наблюдается клиническая ремиссия без поддерживающей дозы преднизолона.Currently, the patient has experienced clinical remission over the past 1.5 years without a maintenance dose of prednisolone.
Пример 3Example 3
Обследован больной К., 67 лет (и/б 11710, 2006). Болен около 4-х месяцев, когда впервые на коже туловища и конечностей появились высыпания, сопровождающиеся зудом. По месту жительства проведено противоскабиозное лечение без эффекта. Далее проводимая глюкокортикостероидная терапия (преднизолон 60 мг) по поводу герпетиформного дерматита Дюринга также не дала положительного эффекта. Появлялись свежие буллезные элементы. Больной госпитализирован для уточнения диагноза, обследования и лечения.Patient K., 67 years old, was examined (I / B 11710, 2006). Sick for about 4 months, when for the first time rashes appeared on the skin of the trunk and limbs, accompanied by itching. At the place of residence, anti-sciotic treatment was performed without effect. Further, glucocorticosteroid therapy (prednisone 60 mg) for herpetiform dermatitis Dühring also did not give a positive effect. Fresh bullous elements appeared. The patient was hospitalized to clarify the diagnosis, examination and treatment.
При поступлении в кожную клинику общее состояние больного было удовлетворительным. Ведущие жалобы: высыпания на коже туловища, конечностей, слизистой оболочке полости рта, умеренный зуд. При осмотре: процесс распространенный, симметричный, локализуется на коже туловища, верхних и нижних конечностях, слизистой оболочке полости рта. На коже патологический процесс отличается полиморфизмом и представлен эритемой, уртикарными и папулезными элементами, склонными к слиянию и образованию бляшек, везикулами и пузырями с твердой покрышкой прозрачным содержимым. На слизистой оболочке полости рта (твердое небо, слизистая щек у смыкания зубов) - эрозийные дефекты с четкими границами, ярко-красным дном до 0,7-0,9 см в диаметре. На красной кайме верхней губы - геморрагическая корочка.Upon admission to the skin clinic, the general condition of the patient was satisfactory. Leading complaints: rashes on the skin of the trunk, limbs, oral mucosa, moderate itching. On examination: the process is common, symmetrical, localized on the skin of the trunk, upper and lower extremities, the mucous membrane of the oral cavity. On the skin, the pathological process is characterized by polymorphism and is represented by erythema, urticarial and papular elements, prone to fusion and plaque formation, vesicles and blisters with a solid cover with transparent contents. On the mucous membrane of the oral cavity (hard palate, mucosa of the cheeks at the closing of the teeth) - erosion defects with clear boundaries, a bright red bottom up to 0.7-0.9 cm in diameter. On the red border of the upper lip is a hemorrhagic crust.
Проводилась дифференциальная диагностика между герпетиформным дерматитом Дюринга и буллезным пемфигоидом.Differential diagnosis was performed between herpetiform dermatitis of Dühring and bullous pemphigoid.
При исследовании криостатных срезов клинически интактных участков кожи больного методом непрямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами против кадгеринового комплекса и инкубацией криостатных срезов исследуемой кожи в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2°С в течение 55 минут выявлена иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны эпидермиса, а в месте образования подэпидермального пузыря - на покрышке 4 подэпидермального пузыря, что является диагностическим признаком буллезного пемфигоида.When studying cryostatic sections of clinically intact areas of the patient’s skin by indirect immunofluorescence with monoclonal antibodies against the cadherin complex and incubating cryostatic sections of the studied skin in a thermostat in a humid chamber at a temperature of 37.0-37.2 ° C for 55 minutes, an immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex was revealed in the area of the basement membrane of the epidermis, and in the place of the formation of the subepidermal bladder - on the cover of 4 subepidermal bladders, which is a diagnostic prize ACOM bullous pemphigoid.
На основании клинико-морфологической картины, данных иммуноморфологического исследования больному выставлен диагноз: буллезный пемфигоид и проведена глюкокортикостероидная терапия в дозе 60 мг преднизолона per os с однократным введением 1 ампулы дипроспана.Based on the clinical and morphological picture, data of an immunomorphological study, the patient was diagnosed with bullous pemphigoid and glucocorticosteroid therapy at a dose of 60 mg per os prednisolone with a single injection of 1 diprospan ampoule was performed.
На фоне проводимой терапии наступила клиническая ремиссия: отсутствие свежих высыпаний с полной эпителизацией эрозий на коже и слизистой оболочке полости рта и красной каймы губ. Больной выписан в удовлетворительном состоянии под наблюдение дерматолога по месту жительства, даны рекомендации по поводу снижения дозы преднизолона.Against the background of the therapy, clinical remission began: the absence of fresh rashes with complete epithelization of erosion on the skin and mucous membrane of the oral cavity and red border of the lips. The patient was discharged in satisfactory condition under the supervision of a dermatologist at the place of residence, recommendations are given on reducing the dose of prednisolone.
Пример 4Example 4
Обследована больная И.,77 лет (и/б 22253, 2004). Больна около 6 месяцев, когда появились единичные пузырьки на коже туловища, верхних и нижних конечностей, сопровождающиеся зудом. Лечение десенсибилизирующими препаратами эффекта не дало. Процесс прогрессировал с вовлечением слизистой оболочки полости рта в виде пузырей. Заподозрена: аутоиммунная пузырчатка.Patient I., 77 years old, was examined (i / b 22253, 2004). Sick about 6 months, when there were single vesicles on the skin of the trunk, upper and lower extremities, accompanied by itching. Treatment with desensitizing drugs did not work. The process progressed with the involvement of the mucous membrane of the oral cavity in the form of blisters. Suspected: autoimmune pemphigus.
При поступлении в кожную клинику общее состояние больной средней степени тяжести. Ведущие жалобы: высыпания на коже конечностей, туловища, слизистой оболочке полости рта, интенсивный зуд в местах высыпаний, болезненность при глотании, дисфагию, слабость, отсутствие аппетита. Больная отмечала появление пузырей и эрозий непосредственно в местах ушиба или давления. В течение полугода потеря веса составила 8 кг. При осмотре: процесс носит распространенный, симметричный и полиморфный характер. Локализуется на коже верхних и нижних конечностей, преимущественно в местах локтевых и коленных сгибов, туловище, волосистой части головы, шеи и слизистой оболочке полости рта. На коже спины, задней поверхности шеи патологический процесс представлен папулами, пятнами, геморрагическими корочками. На коже волосистой части головы и заушной области - множественными милиумами. На коже локтевых сгибов - папулами, бляшками с гиперкератотическими наслоениями; в местах трения, в области предплечий, запястьев - пузырями размером до 5 см в диаметре с серозным содержимым плотной покрышкой, располагающиеся на неизменном фоне. На своде стоп - пузыри размером до 10 см с серозно-геморрагическим содержимым и плотной покрышкой. На слизистой оболочке полости рта (слизистой щек, боковой поверхности языка), красной кайме нижней губы патологический процесс представлен эрозиями с ярко-красным дном до 2,5 см в диаметре, на боковой поверхности языка - буллезные элементы до 0,5 см в диаметре с прозрачным содержимым и плотной покрышкой. Все ногтевые пластины на кистях и пальцев стоп изменены: утолщены, желто-грязного цвета, продольно исчерчены, крошатся. Видимо, это подногтевой гиперкератоз.Upon admission to the skin clinic, the general condition of the patient is moderate. Leading complaints: rashes on the skin of the limbs, trunk, oral mucosa, intense itching in the rash, soreness when swallowing, dysphagia, weakness, lack of appetite. The patient noted the appearance of blisters and erosion directly in places of bruise or pressure. Within six months, weight loss was 8 kg. On examination: the process is widespread, symmetrical and polymorphic in nature. It is localized on the skin of the upper and lower extremities, mainly in places of the elbow and knee bends, trunk, scalp, neck and oral mucosa. On the skin of the back, back of the neck, the pathological process is represented by papules, spots, hemorrhagic crusts. On the skin of the scalp and behind the ear - with multiple milia. On the skin of the elbow folds - papules, plaques with hyperkeratotic layers; in places of friction, in the region of the forearms, wrists - by bubbles up to 5 cm in diameter with a serous content of a dense tire, located on an unchanged background. On the arch of the feet are blisters up to 10 cm in size with serous-hemorrhagic contents and a dense tire. On the mucous membrane of the oral cavity (cheek mucosa, lateral surface of the tongue), red border of the lower lip, the pathological process is represented by erosion with a bright red bottom up to 2.5 cm in diameter, on the lateral surface of the tongue there are bullous elements up to 0.5 cm in diameter with transparent contents and dense tire. All nail plates on the hands and toes are changed: thickened, yellow-dirty, streaked longitudinally, crumble. Apparently, this is subungual hyperkeratosis.
Проводилась дифференциальная диагностика между аутоиммунной пузырчаткой и буллезным пемфигоидом. При исследовании криостатных срезов клинически интактных участков кожи больной непрямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами против кадгеринового комплекса и инкубацией криостатных срезов исследуемой кожи в термостате во влажной камере при температуре 37,0-37,2°С в течение 55 мин выявлена иммуногистохимическая картина экспрессии кадгеринового комплекса в зоне базальной мембраны эпидермиса, а в месте образования подэпидермального пузыря - на его дне 5, что является диагностическим признаком приобретенного буллезного эпидермолиза.Differential diagnosis was performed between autoimmune pemphigus and bullous pemphigoid. When studying cryostatic sections of clinically intact skin areas of a patient with indirect immunofluorescence with monoclonal antibodies against the cadherin complex and incubating cryostatic sections of the studied skin in a thermostat in a humid chamber at a temperature of 37.0-37.2 ° C for 55 min, an immunohistochemical picture of the expression of the cadherin complex in the area of the basement membrane of the epidermis, and at the site of the formation of the subepidermal bladder - at its
На основании полученных данных больной диагностирован приобретенный буллезный эпидермолиз и проведена глюкокортикостероидная терапия (дипроспан в/м 2 инъекции с интервалом 12 дней). На фоне проводимой терапии отмечены полная эпителизация эрозий на коже и слизистой оболочке полости рта, исчезновение зуда. У больной восстановились аппетит и способность безболезненно проглатывать пищу. Пациентка выписана с рекомендациями продолжить глюкокортикостероидную терапию под наблюдением дерматолога по месту жительства.Based on the obtained data, the patient was diagnosed with acquired epidermolysis bullosa and glucocorticosteroid therapy was carried out (diprospan /
Таким образом, предлагаемая методика позволяет установить не только состояние кадгеринового комплекса при аутоиммунных буллезных дерматозах, но и может быть использована в качестве дополнительного диагностического маркера для дифференциальной диагностики аутоиммунных буллезных дерматозов с поражением дермо-эпидермального соединения, в частности буллезного пемфигоида и приобретенного буллезного эпидермолиза. Такая достоверная диагностика аутоиммунных буллезных дерматозов в ранние сроки заболевания позволяет провести адекватную терапию, уменьшить риск развития осложнений и сократить сроки пребывания больных, страдающих аутоиммунным буллезным дерматозом, в стационаре.Thus, the proposed method allows us to establish not only the state of the cadherin complex in autoimmune bullous dermatoses, but can also be used as an additional diagnostic marker for the differential diagnosis of autoimmune bullous dermatoses with lesions of the dermo-epidermal compound, in particular, bullous pemphigoid and acquired bullosa. Such reliable diagnosis of autoimmune bullous dermatoses in the early stages of the disease allows for adequate therapy, a reduced risk of complications and a shortened hospital stay for patients suffering from autoimmune bullous dermatosis.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008108389/15A RU2352947C1 (en) | 2008-03-06 | 2008-03-06 | Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008108389/15A RU2352947C1 (en) | 2008-03-06 | 2008-03-06 | Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2352947C1 true RU2352947C1 (en) | 2009-04-20 |
Family
ID=41017893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008108389/15A RU2352947C1 (en) | 2008-03-06 | 2008-03-06 | Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2352947C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613718C1 (en) * | 2015-11-24 | 2017-03-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии" Минздрава России (ФГБУ ГНЦДК Минздрава России) | Pemphigus simulation method for mice by immunoglobulin g administration |
| RU2777086C1 (en) * | 2021-04-27 | 2022-08-01 | Акционерное общество "Центр Генетики и Репродуктивной Медицины "ГЕНЕТИКО" | Method for pre-implantation genetic testing of epidermolysis bullosa |
-
2008
- 2008-03-06 RU RU2008108389/15A patent/RU2352947C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БЕЛЕЦКАЯ Л.В., МАХНЕВА Н.В. Меченые антитела в нормальной и патологической морфологии (атлас). - М.: МНИПИ, 2000, с.7-21. * |
| МАХНЕВА Н.В., БЕЛЕЦКАЯ Л.В. Случай приобретенного буллезного эпидермолиза (клиническое и иммунопатологическое наблюдение). Вестн. Дерматол. Венерол. 2006, №2. CAMPOS DOMINGUEZ М. et al. Diagnostic methods in autoimmune subepidermal bullous diseases. Actas. Dermosifiliogr. 2006, Oct; 97(8):485-502. MIHAI S. et al. Immunopathology and molecular diagnosis of autoimmune bullous diseases.J Cell Mol Med. 2007 May-Jun; l 1(3):462-81. RYE B. et al. Autoimmune bullous diseases. Am Fam Physician. 1997 Jun; 55(8):2709-18. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613718C1 (en) * | 2015-11-24 | 2017-03-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии" Минздрава России (ФГБУ ГНЦДК Минздрава России) | Pemphigus simulation method for mice by immunoglobulin g administration |
| RU2777086C1 (en) * | 2021-04-27 | 2022-08-01 | Акционерное общество "Центр Генетики и Репродуктивной Медицины "ГЕНЕТИКО" | Method for pre-implantation genetic testing of epidermolysis bullosa |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aihara et al. | Epithelial regeneration after gastric ulceration causes prolonged cell-type alterations | |
| Zimmermann et al. | Localization of the putative precursor of Alzheimer's disease‐specific amyloid at nuclear envelopes of adult human muscle. | |
| Husain et al. | Bi-allelic HPDL variants cause a neurodegenerative disease ranging from neonatal encephalopathy to adolescent-onset spastic paraplegia | |
| JP5522717B2 (en) | Atopic dermatitis detection method and prophylactic / therapeutic agent screening method | |
| JP6281873B2 (en) | Novel cancer markers and their use | |
| Yoon et al. | Amino acid transport system L is differently expressed in human normal oral keratinocytes and human oral cancer cells | |
| US10837958B2 (en) | Method for evaluating the harmful effects of urine on children's skin | |
| US20220195524A1 (en) | Methods and compositions for diagnosis and management of neurodegerative diseases | |
| KR20140083999A (en) | Substance for restoring normal co-expression and interaction between lox and nrage proteins | |
| RU2352947C1 (en) | Method of diagnostics of autoimmune violent dermatoses | |
| CN105899528A (en) | Identification of a new polypeptide hormone for maintenance of optimal body weight and blood glucose | |
| Alkahtani et al. | Changes in the expression of smooth muscle contractile proteins in TNBS-and DSS-induced colitis in mice | |
| Yang et al. | Cardioprotective effect of NRG-4 gene expression on spontaneous hypertension rats and its mechanism through mediating the activation of ErbB signaling pathway | |
| CA3045080A1 (en) | Placental growth factor for the treatment of fetal alcohol syndrome disorders (fasd) | |
| EP2085783A1 (en) | Use of NGF inhibitors in breast cancer therapy | |
| CN112094268B (en) | Compound WEZ series, preparation method thereof and application of compound WEZ series in preparation of medicines | |
| RU2429482C1 (en) | Method for prediction of clinical course of autoimmune pemphigus | |
| US20160256419A1 (en) | Application of fluoxetine to treatment of depigmentation diseases | |
| Bubser et al. | Modulatory role of catecholamines in the transsynaptic expression of c-fos in the rat medial prefrontal cortex induced by disinhibition of the mediodorsal thalamus: a study employing microdialysis and immunohistochemistry | |
| Shan et al. | Effect of celecoxib on protein expression of FAK and Cx43 in DMBA induced rat tongue carcinoma cells. | |
| CN109745314A (en) | Application of the iron chelating agent Deferasirox (DFX) in the drug for the treatment of cervical carcinoma | |
| US11175289B2 (en) | Application of TRPM8 protein, related peptide fragment and their antibodies | |
| RU2386400C1 (en) | Method for prediction of variability of pemphigus clinical form | |
| CN107385100A (en) | Purposes of the MCM8 as sdenocarcinoma of stomach Metastatic Marker | |
| Pasricha et al. | Titers of passive cutaneous anaphylaxis antibody and clinical activity in pemphigus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100307 |