RU2343485C1 - Method of diagnostics of uteri cervix cancer - Google Patents
Method of diagnostics of uteri cervix cancer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2343485C1 RU2343485C1 RU2007123039/15A RU2007123039A RU2343485C1 RU 2343485 C1 RU2343485 C1 RU 2343485C1 RU 2007123039/15 A RU2007123039/15 A RU 2007123039/15A RU 2007123039 A RU2007123039 A RU 2007123039A RU 2343485 C1 RU2343485 C1 RU 2343485C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cea
- lectin
- cancer
- cervix uteri
- cervical cancer
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике злокачественных новообразований и клинической биохимии.The invention relates to medicine, namely to the diagnosis of malignant neoplasms and clinical biochemistry.
Диагностика рака шейки матки (РШМ) в начальных стадиях представляет большие трудности. Как правило, на ранних стадиях заболевания клинических симптомов нет или они связаны с сопутствующими воспалительными, фоновыми заболеваниями [Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. - СПб.: Фолиант, 2002. - 539 с.]. Для диагностики рака шейки матки применяют следующие методы: кольпоскопческий, цитологический, гистологический.Diagnosis of cervical cancer (cervical cancer) in the initial stages is very difficult. As a rule, in the early stages of the disease there are no clinical symptoms or they are associated with concomitant inflammatory, background diseases [Y. Bohman Guide to Oncogynecology. - St. Petersburg: Tome, 2002. - 539 p.]. The following methods are used to diagnose cervical cancer: colposcopic, cytological, histological.
Кольпоскопия относится к методам визуальной оценки состояния эктоцервикса с выявлением очагов поражения для осуществления прицельной биопсии. Чувствительность и специфичность кольпоскопического метода варьирует в пределах 41,8%-87.8% и 78,8%-93,2%, соответственно [Evangelos P. Agnantis expanded cytological referral criteria for colposcopy in cervical screening: Comparison with human Papillomavirus testing / Gynecologic Oncology. - 2001. - Vol.82, N 2. - P.355-359]. Метод простой, легко доступный, не требует больших материальных затрат. Существенными недостатками этого метода являются: субъективность в оценке результатов, требуется высокая квалификация врача, а также невозможность диагностики злокачественных поражений, локализованных в области цервикального канала, составляющих большинство патологий шейки матки [Шуваева Н.И., Коротких И.Н. Клиника, диагностика рака цервикального канала: методические рекомендации. - М., 1984. - 10 с.].Colposcopy refers to methods for visual assessment of the state of the ectocervix with the identification of lesions for the implementation of targeted biopsy. The sensitivity and specificity of the colposcopic method varies between 41.8% -87.8% and 78.8% -93.2%, respectively [Evangelos P. Agnantis expanded cytological referral criteria for colposcopy in cervical screening: Comparison with human Papillomavirus testing / Gynecologic Oncology . - 2001. - Vol.82, N 2. - P.355-359]. The method is simple, easily accessible, does not require large material costs. Significant disadvantages of this method are: subjectivity in evaluating the results, high qualification of the doctor is required, as well as the impossibility of diagnosing malignant lesions localized in the cervical canal, which make up the majority of cervical pathologies [Shuvaeva N.I., Korotkikh I.N. Clinic, diagnosis of cervical canal cancer: guidelines. - M., 1984. - 10 p.].
Для ранней диагностики рака шейки матки широко используется цитологический метод исследования мазков, полученных с поверхности шейки матки и цервикального канала. Метод прост, легко доступен. Вместе с тем, цитологический метод не является совершенным. Согласно обобщенным данным, чувствительность рутинного цитологического метода колеблется от 5% до 83,3%, а специфичность 36-76,9% [Подистов Ю.И. Сопоставление результатов цитологического исследования и данных молекулярно-биологического метода HYBRID CAPTURE II у больных предраком шейки матки / Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - №8. - С.43-45]. К недостаткам цитологического метода относятся: технические ошибки, связанные с нарушением техники получения мазков, субъективность в оценке цитологических результатов, инвазивность метода.For the early diagnosis of cervical cancer, the cytological method of examining smears obtained from the surface of the cervix and cervical canal is widely used. The method is simple, easily accessible. However, the cytological method is not perfect. According to generalized data, the sensitivity of the routine cytological method ranges from 5% to 83.3%, and the specificity is 36-76.9% [Podistov Yu.I. Comparison of the results of a cytological study and the data of the molecular biological method HYBRID CAPTURE II in patients with cervical precancer / Clinical laboratory diagnosis. - 2005. - No. 8. - S. 43-45]. The disadvantages of the cytological method include: technical errors associated with a violation of the technique for obtaining smears, subjectivity in the assessment of cytological results, invasiveness of the method.
Решающим методом диагностики рака шейки матки является биопсия с последующим гистологическим исследованием [Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии. - СПб.: Фолиант, 2002. - 539 с.]. С целью получения материала для гистологического исследования применяют прицельную биопсию и конизацию шейки матки. При отрицательных результатах биопсии наиболее эффективным методом является конизация шейки матки. Метод является инвазивным и не может быть использовн при массовых обследованиях населения. Недостатком гистологического исследования является также невозможность многократного применения данного метода диагностики при обследовании одной и той же пациентки [Хмельницкий O.K. Цитологическая и гистологическая диагностика заболеваний шейки и тела матки. - СПб.: Sotis, 2000. - 332 с.].A decisive method for diagnosing cervical cancer is a biopsy followed by histological examination [Bohman Ya.V. Guide to Oncogynecology. - St. Petersburg: Tome, 2002. - 539 p.]. In order to obtain material for histological examination, an aim biopsy and conization of the cervix are used. With negative biopsy results, the most effective method is cervical conization. The method is invasive and cannot be used in mass surveys of the population. The disadvantage of histological examination is the impossibility of repeated use of this diagnostic method in the examination of the same patient [Khmelnitsky O.K. Cytological and histological diagnosis of diseases of the cervix and body of the uterus. - St. Petersburg: Sotis, 2000. - 332 p.].
В последние годы в скрининге рака шейки матки все большее внимание уделяется использованию определения уровня маркеров опухолевого роста в крови. Наиболее информативными опухолевыми маркерами в диагностике рака шейки матки в настоящее время признаны антигены SCC (антиген плоскоклеточного рака) и РЭА (раково-эмбриональный антиген). Определение этих антигенов основано на взаимодействии специфических моно- или поликлональных антител с антигенными детерминантами белковой природы.In recent years, in the screening of cervical cancer, increasing attention has been paid to the use of determining the level of tumor growth markers in the blood. The most informative tumor markers in the diagnosis of cervical cancer are currently recognized as antigens SCC (squamous cell carcinoma antigen) and CEA (cancer-embryonic antigen). The determination of these antigens is based on the interaction of specific mono- or polyclonal antibodies with antigenic determinants of a protein nature.
Для мониторинга течения заболевания, прогноза и эффективности проводимого лечения применяется антиген плоскоклеточного карциномы (SCC). Диагностическая чувствительность SCC при плоскоклеточном РШМ составляет 60-87%, специфичность 41-91% [Gaarenstroom, K.N. Can initial serum Cyfra 21-1, SCC antigen, and TPA levels in squamous cell cervical cancer predict lymph node metastases or prognosis // Gynecol Oncol. - 2000. - Vol.77. - P.164-170]. Многочисленные исследования показывают повышение уровня SCC в зависимости от стадии процесса, размеров опухоли, глубины инвазии. Считается, что повышение уровня SCC связано со стадией заболевания, но не прогнозирует метастазирование в лимфоузлы, и не является маркерами раннего выявления РШМ [Can initial serum cyfra 21-1, SCC antigen, and TPA levels in squamous cell cervical cancer predict lymph node metastases or prognosis? / Katja N. et.al. // Gynecol. Oncology. - 2000. - Vol.77, N 1. - P.164-170].Squamous cell carcinoma antigen (SCC) is used to monitor the course of the disease, prognosis and effectiveness of the treatment. The diagnostic sensitivity of SCC in squamous cervical cancer is 60-87%, specificity 41-91% [Gaarenstroom, K.N. Can initial serum Cyfra 21-1, SCC antigen, and TPA levels in squamous cell cervical cancer predict lymph node metastases or prognosis // Gynecol Oncol. - 2000. - Vol. 77. - P.164-170]. Numerous studies show an increase in SCC depending on the stage of the process, tumor size, depth of invasion. It is believed that an increase in SCC level is associated with the stage of the disease, but does not predict metastasis to the lymph nodes, and is not a marker for the early detection of cervical cancer [Can initial serum cyfra 21-1, SCC antigen, and TPA levels in squamous cell cervical cancer predict lymph node metastases or prognosis? / Katja N. et.al. // Gynecol. Oncology. - 2000. - Vol.77, N 1. - P.164-170].
РЭА является универсальным опухолевым маркером [СЕА, СА 50 and CA 242 in patients surviving colorectal cancer without recurrent disease / B. Engaras, et. al. // Eur. J. Surgi. Oncology. - 2001. - Vol.27, N 1. - P.43-48]. Широкое использование определения РЭА в диагностике РШМ ограничивается низкой чувствительностью. При высокой специфичности определения РЭА - 98% чувствительность составляет около 33%. Повышение уровня РЭА отмечается при дисплазии тяжелой степени, плоскоклеточном раке шейки матки, при прогрессии опухоли или метастазах [Baaron Т. Increased carcinoembryonic antigen expression in cervical intraepithelial neoplasia grade 3 and in cervical squamous cell carcinoma // Hum. Pathol. - 2000. - Vol.31, N 11. - P.1357-1362]. Использование РЭА в классическом определении (из сыворотки крови) актуально лишь в качестве мониторинга излеченности заболевания.CEA is a universal tumor marker [CEA, CA 50 and CA 242 in patients surviving colorectal cancer without recurrent disease / B. Engaras, et. al. // Eur. J. Surgi. Oncology. - 2001. - Vol.27, N 1. - P. 43-48]. The widespread use of CEA in the diagnosis of cervical cancer is limited by low sensitivity. With high specificity for the determination of CEA - 98% sensitivity is about 33%. An increase in CEA levels is noted with severe dysplasia, squamous cell carcinoma of the cervix, with tumor progression or metastases [Baaron T. Increased carcinoembryonic antigen expression in cervical intraepithelial neoplasia grade 3 and in cervical squamous cell carcinoma // Hum. Pathol. - 2000. - Vol.31, N 11. - P.1357-1362]. The use of CEA in the classical definition (from blood serum) is relevant only as a monitoring of the cure of the disease.
В настоящее время с целью диагностики РШМ изучаются вирусные и тканевые биомаркеры. К таковым относятся: онкобелки Е6 и Е7, белок p 53, пролиферативные маркеры (Ki 67), плоидность ядер, генные исследования, HPV типирующие методы. Но определение этих маркеров в практическом здравоохранении на сегодняшний день не нашло широкого применения, а используется преимущественно в лабораторной практике [Автандилов Г.Г. Плоидометрическая диагностика предраковых процессов и рака шейки матки по цитологическим препаратам // Клиническая лаб. диагностика. - 2004. - №11. - С.45-47].Currently, with the aim of diagnosing cervical cancer, viral and tissue biomarkers are being studied. These include: E6 and E7 oncoproteins, p 53 protein, proliferative markers (Ki 67), ploidy of nuclei, gene studies, HPV typing methods. But the definition of these markers in practical public health today has not found wide application, but is used mainly in laboratory practice [G. Avtandilov Ploidometric diagnosis of precancerous processes and cervical cancer by cytological preparations // Clinical Lab. diagnostics. - 2004. - No. 11. - S. 45-47].
Известно использование лектинов для диагностики рака, которое реализуется по двум основным направлениям. Первое направление осуществляется при выявлении лектинами углеводных детерминант в сыворотке крови на твердой фазе (лектин-ферментные и лектин-иммуноферментные методы) или геле, и второе направление заключается во взаимодействии лектинов с соответствующими лигандами, экспрессированными на поверхности клеток, получаемых путем смывов, выделением из крови, а также на срезах биопсийного материала.The use of lectins for the diagnosis of cancer is known, which is implemented in two main directions. The first direction is carried out when lectins detect carbohydrate determinants in serum on the solid phase (lectin-enzyme and lectin-enzyme immunoassay) or gel, and the second direction is the interaction of lectins with the corresponding ligands expressed on the surface of cells obtained by swabs, isolation from the blood as well as on sections of biopsy material.
Так, определение индекса фукозилирования альфа-фетопротеина сыворотки крови рекомендовано для ранней диагностики рака печени при патологиях этого органа [The fucosylation of alfa-fetoprotein and its usefulness in the early diagnosis of hepatocellular carcinoma / Yutaka Aoyagi, et. al. // Cancer, 1988. - Vol.61. - N.4. P.769-774]. Индекс фукозилирования рассчитывался как соотношение лектин-реактивных видов альфа-фетопротеина к его общей концентрации, определенной иммуно-ферментным методом. Чувствительность анализа, основанного на определении индекса фукозилирования для пациентов с диагнозом рака печени, составила 69%, специфичность анализа для доброкачественных заболеваний составила 96%. Определение индекса фукозилирования альфа-фетопротеина в сыворотке крови является полезным маркером для ранней диагностики рака печени, особенно на ранних стадиях у пациентах с хроническим циррозом печени. Вместе с тем необходимо отметить инвазивность метода и сравнительно низкую чувствительность анализа для пациентов с диагнозом рака печени.Thus, the determination of the serum alpha-fetoprotein fucosylation index is recommended for the early diagnosis of liver cancer in the pathologies of this organ [The fucosylation of alfa-fetoprotein and its usefulness in the early diagnosis of hepatocellular carcinoma / Yutaka Aoyagi, et. al. // Cancer, 1988 .-- Vol. 61. - N.4. P.769-774]. The fucosylation index was calculated as the ratio of lectin-reactive alpha-fetoprotein species to its total concentration determined by the enzyme immunoassay. The sensitivity of the analysis based on the determination of the fucosylation index for patients diagnosed with liver cancer was 69%, the specificity of the analysis for benign diseases was 96%. The determination of serum alpha-fetoprotein fucosylation index is a useful marker for the early diagnosis of liver cancer, especially in the early stages in patients with chronic liver cirrhosis. However, it is necessary to note the invasiveness of the method and the relatively low sensitivity of the analysis for patients diagnosed with liver cancer.
Известен способ диагностики рака шейки матки, в котором используют конъюгат манноз-связывающего лектина конковалина А с пероксидазой хрена для дифференцировки нормальных и опухолевых плоских слущенных эпителиальных клеток [Concanavalin А-Peroxidase labeling in cervical exfoliative cytopathology / J. Hans M. Davina, et. al. // Gynecologic Oncology, 1985. - Vol.22. - I.2. - P.212-223]. Оба типа клеток метились конъюгатом, но существенные различия наблюдались по интенсивности связывания. Статистический анализ показал, что у 99% здоровых пациентов процент мечения клеток составлял 45%, тогда как только для 1% пациентов с диагнозом рака шейки матки процент составлял свыше 30%. При этом у здоровых пациентов процент мечения клеток в среднем составлял 73% (от 54 до 94%), у пациентов с гистологически подтвержденным диагнозом рака шейки матки процент мечения клеток в среднем составлял 15% (от 10 до 22%) К недостаткам метода можно отнести инвазивность, а также трудности в получении информативного материала, так как его получение в значительной степени зависит от опыта и квалификации исследователя, от способности клеток к эксфолиации и гистологической структуры опухоли.A known method for the diagnosis of cervical cancer, which uses a conjugate of mannose-binding lectin Konkovalin A with horseradish peroxidase to differentiate normal and tumor flat desquamated epithelial cells [Concanavalin A-Peroxidase labeling in cervical exfoliative cytopathology / J. Hans M. Davina, et. al. // Gynecologic Oncology, 1985 .-- Vol.22. - I.2. - P.212-223]. Both types of cells were labeled with a conjugate, but significant differences were observed in binding intensity. Statistical analysis showed that in 99% of healthy patients the percentage of cell labeling was 45%, while for only 1% of patients with a diagnosis of cervical cancer, the percentage was over 30%. At the same time, in healthy patients, the percentage of labeling of cells was on average 73% (from 54 to 94%), in patients with a histologically confirmed diagnosis of cervical cancer, the percentage of labeling of cells was on average 15% (from 10 to 22%). The disadvantages of the method include invasiveness, as well as difficulties in obtaining informative material, since its receipt largely depends on the experience and qualification of the researcher, on the ability of cells to exfoliate and the histological structure of the tumor.
Наиболее близким к заявляемому способу является лектин-иммуноферментный метод диагностики рака шейки матки, основанный на определении TN - А антигена (Tomsen-Frienderich antigen) в сыворотке крови пациентов с помощью лектина арахиса (PNA lectin, ЛА) [Alagarsamy L.M. et. al. Enzyme-linked PNA lectin-binding assay of serum T-antigen in patients with SCC of the uterine cervix / J. Cancer Letters, 149 (2000) 207-211]. Лектин взаимодействует с терминальным дисахаридом Gal(β-1,3)NAcGalN. Чувствительность этого метода составляет 80%, а специфичность - 82%. При высоких значениях положительных предсказаний (93%) определение TN - А антигена лектином арахиса имеет низкие значения отрицательных предсказаний (59%). Кроме того, эти данные статистически достоверны только для 3 и 4 стадии рака. Метод не может быть использован для дифференциальной диагностики РШМ и может быть отнесен как вспомогательный анализ. К недостаткам метода можно отнести инвазивность.Closest to the claimed method is a lectin-enzyme immunoassay for the diagnosis of cervical cancer, based on the determination of TN - A antigen (Tomsen-Frienderich antigen) in the blood serum of patients using peanut lectin (PNA lectin, LA) [Alagarsamy L.M. et. al. Enzyme-linked PNA lectin-binding assay of serum T-antigen in patients with SCC of the uterine cervix / J. Cancer Letters, 149 (2000) 207-211]. Lectin interacts with the terminal disaccharide Gal (β-1,3) NAcGalN. The sensitivity of this method is 80%, and the specificity is 82%. At high values of positive predictions (93%), the determination of TN - A antigen by peanut lectin has low values of negative predictions (59%). In addition, these data are statistically significant only for stages 3 and 4 of cancer. The method cannot be used for differential diagnosis of cervical cancer and can be referred as an auxiliary analysis. The disadvantages of the method include invasiveness.
Задача изобретения - усовершенствование методов диагностики рака шейки матки, разработка высокочувствительного и высокоспецифичного метода диагностики, мониторинга эффективности лечения и выявления рецидивов рака шейки матки.The objective of the invention is the improvement of methods for diagnosing cervical cancer, the development of a highly sensitive and highly specific diagnostic method, monitoring the effectiveness of treatment and identifying recurrences of cervical cancer.
Задача решена тем, что в известном способе диагностики рака шейки матки путем лектин-иммуноферментного метода согласно изобретению исследуют вагинальный секрет, в котором определяют уровень лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов, а в качестве лектина используют маннан-связывающий лектин, полученный из целомической жидкости дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus.The problem is solved in that in the known method for diagnosing cervical cancer by the lectin immunoenzyme method according to the invention, a vaginal secretion is examined, in which the level of lectin-bound CEA / CEA-like antigens is determined, and mannan-binding lectin obtained from coelomic is used as a lectin liquids of the Far Eastern trepang Apostichopus japonicus.
В основе заявляемого способа заложена способность лектина, выделенного из целомической жидкости дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus (МСЛ-Т), выявлять биохимические изменения в структурах углеводных цепей, сопровождающих злокачественную трансформацию, и, как следствие этого, по-разному взаимодействовать с углеводными цепями РЭА/РЭА-подобных антигенов, продуцируемых здоровыми клетками, клетками доброкачественных и злокачественных опухолей шейки матки.The basis of the proposed method is the ability of lectin isolated from the coelomic fluid of the Far Eastern trepang Apostichopus japonicus (MSL-T) to detect biochemical changes in the structures of carbohydrate chains accompanying malignant transformation, and, as a result, interact differently with carbohydrate chains of CEA / CEA -like antigens produced by healthy cells, cells of benign and malignant tumors of the cervix.
Метод основан на выявлении двух типов антигенных детерминант, один из которых является белковым и специфически распознается антителами против РЭА, сорбирующим молекулы РЭА/РЭА-подобных антигенов из экстрактов вагинальных секретов. Второй тип антигенных детерминант имеет углеводную природу и распознается МСЛ-Т. Результат этих взаимодействий позволяет рассчитать в условных единицах количество лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальных секретах пациентов.The method is based on the identification of two types of antigenic determinants, one of which is protein and is specifically recognized by antibodies against CEA, which sorb molecules of CEA / CEA-like antigens from extracts of vaginal secretions. The second type of antigenic determinant is carbohydrate in nature and is recognized by MSL-T. The result of these interactions allows us to calculate in arbitrary units the number of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens in the vaginal secretions of patients.
МСЛ-Т получен из целомической жидкости дальневосточного трепанга Apostichopus japonicus и относится к лектинам С-типа. Он обладает гомоолигомерной структурой с молекулярной массой субъединицы 17 кДа. Активность лектина эффективно ингибируется разветвленными дрожжеподобными D-маннанами, построенными из α(1-2), α(1-6) - связанных остатков D-маннозы, гликопротеинами, содержащими углеводные цепи O-типа (раково-эмбриональный антиген, эмбриональный α1 кислый гликопротеин).MSL-T is obtained from the coelomic fluid of the Far Eastern trepang Apostichopus japonicus and refers to C-type lectins. It has a homo-oligomeric structure with a molecular weight of 17 kDa subunit. Lectin activity is effectively inhibited by branched yeast-like D-mannans, constructed from α (1-2), α (1-6) - linked D-mannose residues, glycoproteins containing O-type carbohydrate chains (cancer-embryonic antigen, embryonic α 1 acid glycoprotein).
Характерной особенностью МСЛ-Т является то, что он не ингибируется моносахаридами, входящими в состав углеводных цепей нормальных гликоконъюгатов человека, и не взаимодействует с компонентами сыворотки крови человека, что существенно влияет на специфичность выявления качественных изменений в структуре углеводных цепей, сопровождающих злокачественное перерождение клеток.A characteristic feature of MSL-T is that it is not inhibited by monosaccharides that are part of the carbohydrate chains of normal human glycoconjugates, and does not interact with components of human blood serum, which significantly affects the specificity of detecting qualitative changes in the structure of carbohydrate chains that accompany malignant cell degeneration.
К МСЛ-Т получены высокоспецифические антитела. Схема постановки метода состоит из нескольких этапов, включающих селективную сорбцию РЭА/РЭА-подобных антигенов антителами и взаимодействие их углеводных структур с МСЛ-Т. Определение концентрации лектин-связанных структур РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете является принципиально новым подходом при выявлении злокачественных новообразований у женщин.Highly specific antibodies were obtained for MSL-T. The method setup scheme consists of several stages, including selective sorption of CEA / CEA-like antigens by antibodies and the interaction of their carbohydrate structures with MSL-T. Determining the concentration of lectin-bound structures of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretion is a fundamentally new approach in the detection of malignant neoplasms in women.
Заявляемый способ диагностики рака шейки матки включает следующие стадии:The inventive method for the diagnosis of cervical cancer includes the following stages:
1. Адсорбция поликлональных антител против РЭА в лунках полистирольного микропланшета (Ат-РЭА).1. Adsorption of polyclonal antibodies against CEA in the wells of a polystyrene microplate (At-CEA).
2. Стадия блокировки свободных центров связывания.2. The stage of blocking free binding sites.
3. Инкубация адсорбированных антител Ат-РЭА с антигенами (Аг):3. Incubation of adsorbed antibodies At-REA with antigens (Ag):
а) с раствором РЭА, используемого в качестве положительного контроля и для построения калибровочной кривой;a) with a solution of CEA, used as a positive control and to build a calibration curve;
б) с экстрактами вагинальных секретов.b) with extracts of vaginal secretions.
4. Инкубация МСЛ-Т с полученными ранее комплексами Ат-РЭА-Аг.4. Incubation of MSL-T with previously obtained At-REA-Ag complexes.
5. Иммунодетекция комплексов Ат-РЭА-Аг-(МСЛ-Т) антителами против МСЛ-Т, меченных пероксидазой хрена.5. Immunodetection of At-REA-Ag- (MSL-T) complexes with antibodies against MSL-T labeled with horseradish peroxidase.
6. Цветная визуализация конечного комплекса субстратом.6. Color visualization of the final complex with a substrate.
7. Определение в условных единицах концентрации (уровня) лектин-связанных структур РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете относительно калибровочной кривой.7. Determination in arbitrary units of the concentration (level) of lectin-bound structures of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretion relative to the calibration curve.
Были исследованы вагинальные секреты, полученные у 90 женщин, средний возраст которых составил 46,4±0,6 года. В экспериментах, проведенных с вагинальными секретами 3 групп женщин - здоровых (30), с доброкачественными поражениями шейки матки (30) и при раке шейки матки (30), были показаны существенные различия в связывании МСЛ-Т с углеводными компонентами секретов в этих группах.Vaginal secrets obtained in 90 women were studied, the average age of which was 46.4 ± 0.6 years. In experiments conducted with vaginal secrets of 3 groups of healthy women (30), with benign lesions of the cervix (30), and with cervical cancer (30), significant differences in the binding of MSL-T to the carbohydrate components of the secrets in these groups were shown.
Согласно результатам проведенного исследования концентрации лектин-связанных РЭА/РЭА-подобных антигенов (ЛСА), выраженные в условных единицах, в вагинальном секрете здоровых женщин и с доброкачественными изменениями близки по своим значениям и в среднем составляют 48.5±11.8 U/ml. Среднее значение концентраций ЛСА в секретах женщин с диагностированным раком шейки матки составляет 11.4±7.5 U/ml. Установлены статистически достоверные различия значений ЛСА между здоровыми женщинами и пациентками с диагнозом рака шейки матки (p<0,001), а также между пациентками с доброкачественными и злокачественными заболеваниями (p<0,001).According to the results of the study, the concentrations of lectin-bound CEA / CEA-like antigens (LSA), expressed in arbitrary units, in the vaginal secretion of healthy women and with benign changes are close in value and average 48.5 ± 11.8 U / ml. The average concentration of LSA in the secrets of women with diagnosed cervical cancer is 11.4 ± 7.5 U / ml. There were statistically significant differences in the LSA values between healthy women and patients with a diagnosis of cervical cancer (p <0.001), as well as between patients with benign and malignant diseases (p <0.001).
Разработанный лектин-иммуноферментный метод диагностики РШМ, основанный на определении РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете, является перспективным и представляет интерес для практической онкологии.The developed lectin-enzyme immunoassay for the diagnosis of cervical cancer based on the determination of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretions is promising and is of interest for practical oncology.
Технический результат заявляемого способа диагностики рака шейки матки заключается в следующем.The technical result of the proposed method for the diagnosis of cervical cancer is as follows.
По своим основным параметрам (чувствительность, специфичность) он превосходит известные методы определения опухолевых маркеров РЭА и SCC в сыворотке крови.In its main parameters (sensitivity, specificity), it surpasses the known methods for the determination of tumor markers CEA and SCC in blood serum.
При специфичности 93,6% (против 82% способа-прототипа) его чувствительность составляет 87,8%, что превышает аналогичный показатель способа-прототипа (80%). Предсказательная ценность положительного диагноза в исследовании составляет 87%, а предсказательная ценность отрицательного диагноза имеет очень высокое значение и составляет 95,2% (против 59% способа-прототипа). В способе-прототипе углеводная детерминанта определяется в пуле антигенов сыворотки. В случаях, связанных с биосинтезом TN - А антигена опухолями другой локализации, возможно получение ложноположительных результатов. В заявляемом способе взятие образца происходит непосредственно в районе локализации вероятной опухоли и исследуемый антиген избирательно сорбируется специфическими антителами, что способствует получению достоверных и воспроизводимых результатов.With a specificity of 93.6% (versus 82% of the prototype method), its sensitivity is 87.8%, which exceeds the similar indicator of the prototype method (80%). The predictive value of a positive diagnosis in the study is 87%, and the predictive value of a negative diagnosis is very high and amounts to 95.2% (against 59% of the prototype method). In the prototype method, the carbohydrate determinant is determined in a pool of serum antigens. In cases related to the biosynthesis of TN - A antigen by tumors of a different localization, false positive results are possible. In the claimed method, the sampling takes place directly in the area of localization of the probable tumor and the studied antigen is selectively sorbed by specific antibodies, which helps to obtain reliable and reproducible results.
Заявляемый способ в отличие от известного не является инвазивным. Другое его достоинство то, что получаемые результаты не зависят от возраста и физиологического состояния женщин. Он может быть использован для массового обследования (на одном микропланшете одновременно анализируется 40 образцов). Значительное, достоверное снижение уровня лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов выявляется для всех стадий злокачественной трансформации Т0-1-T4.The inventive method, in contrast to the known, is not invasive. Another advantage is that the results obtained do not depend on the age and physiological condition of women. It can be used for mass examination (40 samples are simultaneously analyzed on one microplate). A significant, significant decrease in the level of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens is detected for all stages of the malignant transformation of T 0-1 -T 4 .
Примеры диагностики.Diagnostic examples.
Пример 1. Пациентка Ж., 46 лет, 17 день овариально-менструального цикла. Клинический диагноз: здорова, профилактический осмотр. Получен материал на цитологическое исследование и вагинальный секрет. Цитологическое исследование мазков: из эндоцервикса - клетки железистого эпителия, небольшие скопления клеток плоского эпителия без атипии; эктоцервикс - клетки преимущественно промежуточного эпителия без атипии. Цитологическое заключение соответствует физиологическому состоянию женщины.Example 1. Patient J., 46 years old, 17th day of the ovarian-menstrual cycle. Clinical diagnosis: healthy, routine examination. Received material for cytological examination and vaginal secretion. Cytological examination of smears: from endocervix - cells of the glandular epithelium, small clusters of squamous cells without atypia; ectocervix - cells of predominantly intermediate epithelium without atypia. The cytological conclusion corresponds to the physiological state of the woman.
Уровень лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете составил 45,24 U/ml, что позволило отнести данную пациентку в группу здоровых женщин. Этот вывод совпадает с клиническим и цитологическим диагнозами.The level of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens in the vaginal secretion was 45.24 U / ml, which allowed this patient to be assigned to the group of healthy women. This conclusion coincides with the clinical and cytological diagnoses.
Пример 2. Пациентка Т., 43 года, 12 день овариально-менструального цикла. Выявлена при проведении профилактического осмотра. Из анамнеза: на протяжении пяти лет ежегодно проходила профилактический осмотр у гинеколога, активных жалоб не предъявляла. Кольпоскопическая диагностика была затруднена в связи с отсутствием визуализации зоны перехода за счет рубцовой деформации наружного зева после диатермокоагуляции.Example 2. Patient T., 43 years old, 12th day of the ovarian-menstrual cycle. Identified during a routine inspection. From the anamnesis: for five years, a gynecologist underwent a routine examination annually, did not present active complaints. Colposcopic diagnosis was difficult due to the lack of visualization of the transition zone due to cicatricial deformity of the external pharynx after diathermocoagulation.
На исследование были взяты вагинальный секрет, материал на цитологическое исследование и биопсия. Материал на цитологическое исследование был получен из эктоцервикса. Цитологическое заключение: клетки поверхностного, промежуточного эпителия без атипии, что соответствует физиологической норме. Гистологическое заключение от 05.12.05 №32519 (биопсия) - стационарный эндоцервикоз с образованием сосочковых структур и очагов эпидермизации. Эндоцервикс - участки многослойного плоского эпителия обычного строения, железы выстланы как кубическим эпителием, так и уплощенным эпителием, слизь, фибрин.The study was taken vaginal secretion, material for cytological examination and biopsy. Material for cytological examination was obtained from ectocervix. Cytological conclusion: cells of the superficial, intermediate epithelium without atypia, which corresponds to the physiological norm. The histological conclusion of 05.12.05 No. 32519 (biopsy) is stationary endocervicosis with the formation of papillary structures and foci of epidermis. Endocervix - plots of the stratified squamous epithelium of the usual structure, the glands are lined with both cubic epithelium and flattened epithelium, mucus, fibrin.
Уровень лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете составил 10,45 U/ml. Учитывая данные обследования, больной была проведена конизация шейки матки. При гистологическом исследовании операционного материала было установлено: на фоне стационарного эндоцервикоза обнаружены структуры плоскоклеточного рака без ороговения.The level of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretion was 10.45 U / ml. Given the survey data, the patient was held conization of the cervix. A histological examination of the surgical material revealed: against the background of stationary endocervicosis, squamous cell structures without keratinization were found.
Больной был выставлен диагноз: рак шейки матки T2N×M0, что совпадает с предварительным диагнозом, выставленным по данным, полученным при исследовании вагинального секрета.The patient was diagnosed with cervical cancer T 2 N × M 0 , which coincides with the preliminary diagnosis made according to the data obtained in the study of vaginal secretion.
Пример 3. Пациентка Т., 41 год, 9 день овариально-менструального цикла. Выявлена при проведении профилактического осмотра. Из анамнеза: жалобы на сукровичные выделения из половых органов на протяжении четырех месяцев. При осмотре установлен предварительный диагноз: псевдоэрозия шейки матки, подозрение на рак. Был взят на исследование вагинальный секрет, материал на цитологическое исследование и биопсия.Example 3. Patient T., 41 years old, 9th day of the ovarian-menstrual cycle. Identified during a routine inspection. From the anamnesis: complaints of successive discharge from the genitals for four months. On examination, a preliminary diagnosis was established: pseudo-erosion of the cervix, suspected cancer. A vaginal secret was taken for examination, material for a cytological examination and a biopsy.
Уровень лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете составил 60,2 U/ml. Цитологическое заключение: материал, полученный из эндоцервикса и эктоцервикса, соответствует пролиферации клеток железистого эпителия, дисплазии умеренной степени, что соответствует предопухолевому состоянию эпителия шейки матки. Гистологическое заключение от 01.06.05 №24623-24 (биопсия) - стационарный эндоцервикоз с образованием сосочковых структур и очагов эпидермизации. В цервикальном канале обнаружены участки многослойного плоского эпителия обычного строения, слизь, фибрин, железы выстланы кубическим эпителием.The level of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretion was 60.2 U / ml. Cytological conclusion: material obtained from endocervix and ectocervix corresponds to proliferation of glandular epithelial cells, moderate dysplasia, which corresponds to the pre-tumor state of the cervical epithelium. The histological report dated 01.06.05 No. 24623-24 (biopsy) is a stationary endocervicosis with the formation of papillary structures and foci of epidermis. In the cervical canal, sections of a stratified squamous epithelium of a usual structure were found, mucus, fibrin, and glands were lined with cubic epithelium.
Заключение: псевдоэрозия шейки матки, что совпадает с предварительным диагнозом, выставленным по данным, полученным при исследовании вагинального секрета.Conclusion: pseudo-erosion of the cervix, which coincides with the preliminary diagnosis, made according to the data obtained in the study of vaginal secretion.
Таким образом, заявляемый способ диагностики, основанный на определении уровня лектин-связанных форм РЭА/РЭА-подобных антигенов в вагинальном секрете, позволяет:Thus, the claimed diagnostic method, based on determining the level of lectin-associated forms of CEA / CEA-like antigens in vaginal secretion, allows you to:
1. Выявлять злокачественные заболевания шейки матки на доклинических этапах при отрицательных результатах других видов обследования (цитологического, гистологического).1. To identify malignant diseases of the cervix at the preclinical stages with negative results of other types of examination (cytological, histological).
2. При проведении массовых профилактических осмотров увеличить количество обследованных женщин, снизить кадровые и технические затраты.2. During mass preventive examinations, increase the number of women examined, reduce staff and technical costs.
3. Формировать группы риска по развитию рака шейки матки.3. To form risk groups for the development of cervical cancer.
4. Осуществлять динамический мониторинг состояния эпителия шейки матки у женщин, входящих в группы риска.4. To carry out dynamic monitoring of the state of cervical epithelium in women at risk.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007123039/15A RU2343485C1 (en) | 2007-06-14 | 2007-06-14 | Method of diagnostics of uteri cervix cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007123039/15A RU2343485C1 (en) | 2007-06-14 | 2007-06-14 | Method of diagnostics of uteri cervix cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2343485C1 true RU2343485C1 (en) | 2009-01-10 |
Family
ID=40374311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007123039/15A RU2343485C1 (en) | 2007-06-14 | 2007-06-14 | Method of diagnostics of uteri cervix cancer |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2343485C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488823C1 (en) * | 2012-03-01 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновский государственный университет" | Differential diagnostic technique for uterine cancer |
| RU2582979C1 (en) * | 2015-03-19 | 2016-04-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновский государственный университет" | Method of updating stage of advanced cervical cancer |
| EA026708B1 (en) * | 2012-01-25 | 2017-05-31 | Государственное Научное Учреждение "Объединенный Институт Энергетических И Ядерных Исследований - Сосны" Национальной Академии Наук Беларуси | Screening method for risk groups of urine bladder cancer disease |
| RU2800328C1 (en) * | 2022-09-21 | 2023-07-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU). | Method of diagnosing cervical cancer based on the level of e-cadherin in blood plasma in non-linear rats |
-
2007
- 2007-06-14 RU RU2007123039/15A patent/RU2343485C1/en active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MOLINA R et al. Prospective evaluation of squamous cell carcinoma and carcinoembryonic antigen as prognostic factors in patients with cervical cancer, Tumour Biol. 2003 May-Jun; 24(3): 156-64. PMID: 14610320 [PubMed - indexed for MEDLINE]. MARKOWSKA J. Tumor makrers in cervical cancer, Ginekol Pol. 2007 Sep; 78(9): 715-8. PMID: 18159826 [PubMed - indexed for MEDLINE]. * |
| REDDI AL et al. Enzyme-linked PNA lectin-binding assay of serum T-antigen in patients with SCC of the uterine cervix., Cancer Lett. 2000 Fob 28; 149(1-2): 207-11, PMID: 10737726 [PubMed - indexed for MEDLINE]. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA026708B1 (en) * | 2012-01-25 | 2017-05-31 | Государственное Научное Учреждение "Объединенный Институт Энергетических И Ядерных Исследований - Сосны" Национальной Академии Наук Беларуси | Screening method for risk groups of urine bladder cancer disease |
| RU2488823C1 (en) * | 2012-03-01 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновский государственный университет" | Differential diagnostic technique for uterine cancer |
| RU2582979C1 (en) * | 2015-03-19 | 2016-04-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ульяновский государственный университет" | Method of updating stage of advanced cervical cancer |
| RU2800328C1 (en) * | 2022-09-21 | 2023-07-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU). | Method of diagnosing cervical cancer based on the level of e-cadherin in blood plasma in non-linear rats |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2315312C2 (en) | Diagnosis method for using a solution | |
| Ozaki et al. | Biomarker expression in cervical intraepithelial neoplasia: potential progression predictive factors for low-grade lesions | |
| IT201800007264A1 (en) | METHOD FOR IN VITRO DIAGNOSIS OF PROSTATE CARCINOMA USING URINARY BIOMARCATORS | |
| CN110187113A (en) | A kind of autoantibody joint-detection ELISA kit for esophageal squamous cell carcinoma early screening | |
| RU2506892C1 (en) | Method of differential diagnostics of cervical intraepithelial neoplasia of iii degree and pre-invasive cervical cancer, associated with human papilloma virus | |
| CN109061165A (en) | A kind of immune chromatography test paper, detection method and the application of nipple discharge CEA detection | |
| KR20140034124A (en) | Method for the diagnosis of a carcinoma and uses thereof | |
| RU2343485C1 (en) | Method of diagnostics of uteri cervix cancer | |
| CN110187111A (en) | One kind being used for early cardiac cancer screening ELISA kit | |
| RU2800328C1 (en) | Method of diagnosing cervical cancer based on the level of e-cadherin in blood plasma in non-linear rats | |
| RU2730952C1 (en) | Method for early diagnosis of neoplastic transformation of endometrioid ovarian cysts | |
| RU2430365C1 (en) | Method of estimating microbiocoenosis of uterus cavity in women with endometrium polyps in postmenopausal period | |
| Ibrahim et al. | Comparison between phenol red chromo-endoscopy and a stool rapid immunoassay for the diagnosis of Helicobacter pylori in patients with gastritis | |
| Mandić et al. | Histopathological correlation of cervical biopsy and tissue after excision in patients with precancerous lesions of the cervix | |
| Thompson et al. | Sensor detection in gynaecological medicine | |
| Bittencourt et al. | Risk Factors for Persistence or Recurrence of High-Grade Cervical Squamous Intraepithelial Lesions | |
| Ding et al. | ELISA Test to Detect CDKN2A (p16 INK4a) Expression in Exfoliative Cells: A New Screening Tool for Cervical Cancer | |
| Muntean et al. | Cytological and histopathological aspects concerning preinvasive squamous cervical lesions | |
| Aslani et al. | Re-evaluation of Negative Cone Biopsy Results with Ki-67 and p16 Immunostaining following Positive Cervical Biopsy | |
| Micu et al. | The added value of CA125, HE4, and CA72-4 as markers for ovarian endometriosis diagnosis | |
| Wang et al. | HPV16 E7 oncoprotein test as a triage strategy for HPV16-positive women in cervical cancer screening: long-term follow-up outcome | |
| US20230384312A1 (en) | Circulating microvesicles expressing carbonic anhydrase 9 for the prognosis of renal cell carcinoma | |
| Köse et al. | Point-of-care diagnosis of cervical cancer: potential protein biomarkersin cervicovaginal fluid | |
| RU2802395C2 (en) | Method of prediction of probability of cervical cancer detection based on routine blood parameters | |
| RU2735660C1 (en) | Method for differential diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia of grade iii and microinvasive cervical cancer associated with human papilloma virus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |