RU2341800C1 - Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy - Google Patents
Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy Download PDFInfo
- Publication number
- RU2341800C1 RU2341800C1 RU2007132143/15A RU2007132143A RU2341800C1 RU 2341800 C1 RU2341800 C1 RU 2341800C1 RU 2007132143/15 A RU2007132143/15 A RU 2007132143/15A RU 2007132143 A RU2007132143 A RU 2007132143A RU 2341800 C1 RU2341800 C1 RU 2341800C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fno
- pregnancy
- substance
- miscarriage
- trimester
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования невынашивания беременности в первом триместре беременности.The invention relates to medicine, namely to obstetrics, and can be used to predict miscarriage in the first trimester of pregnancy.
Невынашивание беременности (НБ) до настоящего времени остается одной из наиболее сложных и социально значимых проблем в современном акушерстве. Удельный вес этой патологии стабильно высокий и составляет, по данным ВОЗ, 15-20% от исходов всех беременностей, причем в большинстве случаев в раннем эмбриональном периоде. Если принять общее число пренатальных потерь за 100%, то в первые 8-12 нед. внутриутробного развития погибают от 45 до 85% зародышей, гибель бластоцист до имплантации или вскоре после нее составляет 30-40%. Несмотря на многочисленные исследования в этой области в 25-57% случаев генез невынашивания остается невыясненным (Краснопольский В.И., и др. 2006).Miscarriage (NL) to date remains one of the most complex and socially significant problems in modern obstetrics. The specific gravity of this pathology is stably high and, according to WHO, amounts to 15-20% of the outcomes of all pregnancies, and in most cases in the early embryonic period. If we take the total number of prenatal losses as 100%, then in the first 8-12 weeks. from intrauterine development, 45 to 85% of the embryos die; blastocyst death before implantation or shortly after it is 30-40%. Despite numerous studies in this area, in 25-57% of cases, the genesis of miscarriage remains unclear (Krasnopolsky V.I. et al. 2006).
Невынашивание является полиэтиологичным осложнением беременности. Многочисленные исследования в этой области демонстрируют эволюционную смену доминирующих факторов в генезе НБ. Установленная роль факторов роста в процессах репродукции позволяет представить развитие системы плацента-плод как серию скоординированных реакций клеток различных типов, регулируемых локальными медиаторами - цитокинами (Орлов А.В., Круриер И.И, Друккер НА., Каушанская Л.Н., 2005).Miscarriage is a polyetiological complication of pregnancy. Numerous studies in this area demonstrate an evolutionary change in the dominant factors in the genesis of NB. The established role of growth factors in reproduction processes allows us to represent the development of the placenta-fetus system as a series of coordinated reactions of various types of cells regulated by local mediators - cytokines (Orlov A.V., Krurier I.I., Drucker NA., Kaushanskaya L.N., 2005 )
Поэтому исследования в этой области представляют, прежде всего, практический интерес с целью ранней доклинической диагностики и профилактики осложнений в первом триместре беременности.Therefore, research in this area is primarily of practical interest for the purpose of early preclinical diagnosis and prevention of complications in the first trimester of pregnancy.
На сегодняшний день ранней диагностике и прогнозированию невынашивания беременности посвящено значительное количество работ. При этом просматриваются два основных направления разрабатываемых методик: биохимические и иммунологические, с одной стороны, и инструментальные - с другой. К инструментальным в основном относятся методы УЗИ.To date, a significant amount of work has been devoted to the early diagnosis and prediction of miscarriage. At the same time, two main directions of the developed methods are viewed: biochemical and immunological, on the one hand, and instrumental - on the other. The instrumental methods mainly include ultrasound.
Из первой группы методов известен способ прогнозирования угрозы прерывания беременности в ранние сроки путем определения в периферической крови концентрации фактора, угнетающего миграцию лейкоцитов до и после однократной иммунизации донорскими лейкоцитами (патент РФ №2014598, 1994).From the first group of methods, a method is known for predicting the threat of termination of pregnancy in the early stages by determining in the peripheral blood the concentration of a factor that inhibits the migration of leukocytes before and after a single immunization with donor leukocytes (RF patent No. 201498, 1994).
Недостатками способа являются техническая сложность выполнения, а также невозможность динамического наблюдения за состоянием беременности с помощью этого метода.The disadvantages of the method are the technical complexity of the implementation, as well as the inability to dynamically monitor the state of pregnancy using this method.
Известен способ ранней диагностики невынашивания беременности путем определения в периферической крови относительного содержания нейтрофилов, имеющих на своей поверхности структуры, реагирующие с трофобластическим Х-гликопротеидом (патент РФ №2077729, 1997). К недостаткам метода относятся его трудоемкость и неспецифичность.There is a method of early diagnosis of miscarriage by determining in the peripheral blood the relative content of neutrophils having structures on their surface that react with trophoblastic X-glycoprotein (RF patent No. 2077729, 1997). The disadvantages of the method include its complexity and non-specificity.
Известен способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности путем определения содержания периферических Т-лимфоцитов до и после инкубации с АМГФ (патент №2077727, 1997).A known method for predicting the threat of miscarriage by determining the content of peripheral T-lymphocytes before and after incubation with AMHF (patent No. 2077727, 1997).
Известен способ доклинического прогнозирования невынашивания беременности путем определения в плазме крови содержания фибринмономерных комплексов. По их величине прогнозируют прерывание беременности в I, II или III триместрах (патент РФ №2123698, 1998). К недостаткам метода относится его неспецифичность.A known method for preclinical prediction of miscarriage by determining the content of fibrinmonomeric complexes in blood plasma. By their size, termination of pregnancy in I, II or III trimesters is predicted (RF patent No. 2123698, 1998). The disadvantages of the method include its non-specificity.
Известен способ прогнозирования угрозы прерывания беременности по определению концентрации эстриола, плацентарного лактогена и интерлейкина (ИЛ)-6 в сыворотке крови (патент РФ №2285926, 2006). Данный способ принят нами за прототип.A known method for predicting the threat of abortion by determining the concentration of estriol, placental lactogen and interleukin (IL) -6 in blood serum (RF patent No. 2285926, 2006). This method is accepted by us as a prototype.
Недостатком данных способов является их трудоемкость.The disadvantage of these methods is their complexity.
Известен способ прогнозирования невынашивания беременности путем ультразвукового исследования органов малого таза и определения в сыворотке крови прогестерона, хорионического гонадотропина и уровня альфа-2-микроглобулина в сыворотке крови (заявка РФ №2004135161, 2006). Недостатком данного способа является его трудоемкость и неспецифичность.A known method for predicting miscarriage by ultrasound examination of the pelvic organs and determination of serum progesterone, chorionic gonadotropin and serum alpha-2-microglobulin level (RF application No. 2004135161, 2006). The disadvantage of this method is its complexity and non-specificity.
Известен способ прогноза невынашивания беременности путем определения содержания цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиванием беременности инфекционного генеза по уровню ИФН-γ и ИЛ-8 в периферической крови и слизи цервикального канала, повышение которых служит маркерами неблагополучия на ранних этапах беременности (Т.Н.Сумеди, Л.В.Ганковская, Е.Н.Долгина и др. Содержание цитокинов в периферической крови и слизи цервикального канала у женщин с невынашиванием беременности инфекционного генеза // Российский журнал иммунологии, 2005 г. - т.9. - N2. - стр.93-102). Недостатком данного способа является то, что он не позволяет провести диагностику угрозы прерывания беременности во 2 триместре.There is a method for predicting miscarriage by determining the content of cytokines in the peripheral blood and mucus of the cervical canal in women with miscarriage of infectious origin by the level of IFN-γ and IL-8 in peripheral blood and mucus of the cervical canal, the increase of which serves as markers of distress in the early stages of pregnancy ( T.N.Sumedy, L.V. Gankovskaya, E.N.Dolgina, etc. The content of cytokines in the peripheral blood and mucus of the cervical canal in women with miscarriage of infectious origin / / Russian Journal of Immunology, 2005 - vol. 9. - N2. - pp. 93-102). The disadvantage of this method is that it does not allow the diagnosis of the threat of termination of pregnancy in the 2nd trimester.
Из вышеизложенного очевидно, что на сегодняшний день основными недостатками способов прогнозирования невынашивания беременности являются неспецифичность и трудоемкость.From the foregoing, it is obvious that today the main disadvantages of methods for predicting miscarriage are nonspecificity and complexity.
Задача заявляемого изобретения: разработка специфичного способа прогнозирования невынашивания в первом триместре беременности с целью назначения своевременных и адекватных лечебных мероприятий.The objective of the invention: the development of a specific method for predicting miscarriage in the first trimester of pregnancy in order to prescribe timely and adequate therapeutic measures.
Для решения поставленной задачи в сыворотке крови определяют методом ИФА уровни субстанции P(SP) и фактора некроза опухоли-α (FNO), значения которых подставляют в формулу и рассчитывают прогностический коэффициент К:To solve this problem, serum levels of substance P (SP) and tumor necrosis factor-α (FNO) are determined by ELISA, the values of which are substituted in the formula and the prognostic coefficient K is calculated:
K=(0,006*FNO*SP-0,065*FNO*SP2-0,00004*FNO)/(0,005-0,031*FNO),K = (0.006 * FNO * SP-0.065 * FNO * SP 2 -0.00004 * FNO) / (0.005-0.031 * FNO),
где SP - уровень субстанции Р в абсолютных величинах,where SP is the level of substance P in absolute terms,
FNO - уровень фактора некроза опухоли-α в в абсолютных величинах,FNO - level of tumor necrosis factor-α in absolute terms,
если значение прогностического коэффициента К больше, чем 0,48, то у данной беременной прогнозируют угрозу прерывания беременности.if the value of the prognostic coefficient K is greater than 0.48, then the threat of termination of pregnancy is predicted for this pregnant woman.
Если значение прогностического коэффициента К меньше, чем 0,48, то данную пациентку можно отнести в группу с физиологическим течением беременности.If the value of the prognostic coefficient K is less than 0.48, then this patient can be attributed to the group with the physiological course of pregnancy.
Чувствительность метода равна 100%The sensitivity of the method is 100%
Специфичность метода составляет 94,2%.The specificity of the method is 94.2%.
Точность равна 97,1%.Accuracy is 97.1%.
Достоверность - (р<0,001).Reliability - (p <0.001).
Новый технический результат состоит в том, что данный способ обладает высокой точностью, чувствительностью и специфичностью. Предложенный метод исследования позволяет с высокой точностью (97,1%) прогнозировать течение первого триместра беременности, т.е. с первых недель и до 12 нед. гестации.A new technical result is that this method has high accuracy, sensitivity and specificity. The proposed research method allows with high accuracy (97.1%) to predict the course of the first trimester of pregnancy, i.e. from the first weeks to 12 weeks. gestation.
Таким образом, патогенетически обоснованный прогноз невынашивания беременности еще на доклинической стадии позволит:Thus, a pathogenetically based prognosis of miscarriage even at the preclinical stage will allow:
- своевременно выявить группу беременных, угрожающих по развитию данной патологии;- timely identify a group of pregnant women threatening to develop this pathology;
- провести раннее профилактическое лечение, которое существенно снизит частоту невынашивания беременности;- conduct early preventive treatment, which will significantly reduce the frequency of miscarriage;
- благоприятно отразиться на течении беременности за счет снижения возможности формирования первичной плацентарной недостаточности;- favorably affect the course of pregnancy by reducing the possibility of the formation of primary placental insufficiency;
- улучшить показатели перинатальной заболеваемости и смертности в условиях обострившейся демографической ситуации.- to improve indicators of perinatal morbidity and mortality in the conditions of an aggravated demographic situation.
Установлено, что иммунные механизмы активируют клеточные и биохимические реакции, запускающие целый каскад патофизиологических процессов, приводящих к отторжению плода. Так, касаясь проблемы спонтанных повторных абортов, на сегодняшний день можно с уверенностью говорить о том, что потеря плода в ранние сроки беременности имеет преимущественно иммунную этиологию (Ширшев С.В. 1999, Айламазян Э.К., Павлов О.В., Сельков С.А, 2004). Одной из основных причин репродуктивных потерь являются нарушения иммунных механизмов, как на локальном, так и на системном уровнях, обеспечивающих нормальное оплодотворение яйцеклетки, имплантацию, инвазию трофобласта и дальнейшее прогрессирование беременности (Кирющенков П.А., Ходжаева З.С., Верясов В.Н, 2003). Несомненным является тот факт, что нервная система оказывает важное регуляторное влияние на органы иммунной системы. Физиологическая нейрорегуляция иммунного ответа необходима для его полноценного развития (Сотникова Н.Ю., Громова О.А., Новикова Е.А., 2004).It has been established that immune mechanisms activate cellular and biochemical reactions, triggering a cascade of pathophysiological processes leading to fetal rejection. So, regarding the problem of spontaneous repeated abortions, today it is safe to say that fetal loss in early pregnancy has a predominantly immune etiology (Shirshev S.V. 1999, Ailamazyan E.K., Pavlov O.V., Selkov S.A, 2004). One of the main causes of reproductive losses is impaired immune mechanisms, both at the local and systemic levels, ensuring normal egg fertilization, implantation, trophoblast invasion and further pregnancy progression (Kiryushchenkov P.A., Khodzhaeva Z.S., Veryasov V. H, 2003). Undoubtedly, the fact that the nervous system has an important regulatory effect on the organs of the immune system. Physiological neuroregulation of the immune response is necessary for its full development (Sotnikova N.Yu., Gromova OA, Novikova EA, 2004).
Субстанция Р - нейропептид, присутствует в немиелинизированных волокнах С-типа и маленьких миелинизированных А-дельта-типа и синтезируется клетками дорзальных рогов ганглиев, а затем транспортируется вдоль аксонов в нервные окончания, где они накапливаются в плотных везикулах. Как провоспалительный агент SP стимулирует Т-клеточную пролиферацию (Payany et al.,1985), увеличение синтеза иммуноглобулинов, вызывает хемотаксис моноцитов, нейтрофилов, фибробластов, индуцирует дегрануляцию мастоцитов и высвобождение гистамина, стимулирует фагоцитоз в макрофагах, секрецию интерлейкинов (IL-1, 6, фактора некроза опухоли-α) моноцитами (Goode et al., 1998).The substance P is a neuropeptide that is present in non-myelinated C-type fibers and small myelinated A-delta-type fibers and is synthesized by the cells of the dorsal horns of the ganglia, and then transported along the axons to the nerve endings, where they accumulate in dense vesicles. As a pro-inflammatory agent SP stimulates T-cell proliferation (Payany et al., 1985), increases the synthesis of immunoglobulins, induces chemotaxis of monocytes, neutrophils, fibroblasts, induces mast cell degranulation and histamine release, stimulates macrophage phagocytosis, and secretion of interleukins 6 (IL-1 (IL , tumor necrosis factor-α) by monocytes (Goode et al., 1998).
Таким образом, этот нейропептид действует не только как трансмиттеры для импульсов, направленных в ЦНС, но также служит локальным «контролером» микроокружения благодаря действию на эндотелиальные клетки, макрофаги, лимфоциты, синовиоциты, тучные клетки (Geppetti P.A., Holzer P., 1996; McDonald D.M. et al., 1996).Thus, this neuropeptide not only acts as a transmitter for impulses directed to the central nervous system, but also serves as a local “controller” of the microenvironment due to the action on endothelial cells, macrophages, lymphocytes, synoviocytes, mast cells (Geppetti PA, Holzer P., 1996; McDonald DM et al., 1996).
С точки зрения физиологической беременности неоправданным является деление цитокинов на "вредные" и "полезные". Оказалось, что повышение продукции некоторых цитокинов (в том числе и так называемых вредных) тканью плаценты сопровождает не только патологические процессы, такие как выкидыш и преждевременные роды, но и является характерным признаком нормальных своевременных родов. В экспериментах на грызунах убедительно доказано абортогенное действие субстанции Р за счет увеличения продукции фактора некроза опухоли-α, интерлейкина-1 макрофагами и снижения содержания трансформирующего фактора роста - β2, обладающего иммуносупрессивными свойствами (Arck P.C., 1997; Markert U.R., 1997), т.о. субстанция Р нарушает "цитокиновый баланс" в матке, существующий во время беременности. Нарушение этого равновесия в результате действия экзогенных или эндогенных факторов может привести к осложнениям беременности, крайним проявлением которых является спонтанное преждевременное ее прерывание (Павлов О.В., Сельков С.А., Лалаян Д.В., Аржанова О.Н., 2003).From the point of view of physiological pregnancy, the division of cytokines into "harmful" and "useful" is unjustified. It turned out that the increase in the production of certain cytokines (including the so-called harmful ones) by the placental tissue accompanies not only pathological processes, such as miscarriage and premature birth, but is also a characteristic sign of normal timely delivery. In experiments on rodents, the abortogenic effect of substance P was convincingly proved by increasing the production of tumor necrosis factor-α, interleukin-1 by macrophages and reducing the content of transforming growth factor β2, which has immunosuppressive properties (Arck PC, 1997; Markert UR, 1997), t. about. the substance P disrupts the “cytokine balance” in the uterus that exists during pregnancy. Violation of this balance as a result of exogenous or endogenous factors can lead to pregnancy complications, the extreme manifestation of which is its spontaneous premature termination (Pavlov O.V., Selkov S.A., Lalayan D.V., Arzhanova O.N., 2003 )
С целью изучения компонентов нейрогенного воспаления при угрозе невынашивания беременности в первом триместре нами были исследованы субстанция Р и фактор некроза опухоли-α в сыворотке крови 51 женщин в сроке от 6 до 12 недель беременности с верифицированным диагнозом угрожающего самоаборта, находившихся на стационарном лечении в отделении патологии беременности, составивших основную группу.In order to study the components of neurogenic inflammation in the threat of miscarriage in the first trimester, we examined the substance P and tumor necrosis factor-α in the blood serum of 51 women in the period from 6 to 12 weeks of pregnancy with a verified diagnosis of threatening self-abortion, who were hospitalized in the pathology department pregnancy constituting the main group.
Группу контроля составили 28 женщин с физиологическим течением беременности в те же гестационные сроки по данным ретроспективного анализа их наблюдения в рамках программы "Акушерский мониторинг", осуществляющей поликлинический этап ведения беременных. У всех женщин получено информированное согласие, помимо этого одобрение на проведение исследований было получено от локального этического комитета Ростовского НИИ акушерства и педиатрии. Всем пациенткам проведено клинико-лабораторное обследование, включающее динамическое клиническое, гормональное, биохимическое, генетическое, ультразвуковое и допплерометрическое исследование, а также определено содержание в сыворотке крови субстанции Р, фактора некроза опухоли-α. В основной клинической группе проводилось двукратное иммунологическое обследование, соответственно до и после курса стандартной терапии, направленной на пролонгирование беременности.The control group consisted of 28 women with a physiological pregnancy during the same gestational periods according to a retrospective analysis of their observation in the framework of the Obstetric Monitoring program, which carries out the outpatient stage of pregnant women. All women received informed consent, in addition, approval for research was obtained from the local ethics committee of the Rostov Research Institute of Obstetrics and Pediatrics. All patients underwent clinical and laboratory examination, including dynamic clinical, hormonal, biochemical, genetic, ultrasound and dopplerometric studies, and the content of substance P, tumor necrosis factor-α in the blood serum was determined. In the main clinical group, a double immunological examination was carried out, respectively, before and after a course of standard therapy aimed at prolonging pregnancy.
Полученные нами результаты позволяют по-новому взглянуть на процессы межклеточных взаимодействий, существующие в ранние сроки беременности.Our results allow us to take a fresh look at the processes of intercellular interactions that exist in the early stages of pregnancy.
Исследование фактора некроза опухоли-α (FNO-α) в обеих клинических группах выявило статистически значимые различия концентрации этого показателя. В контрольной группе он был почти в 3 раза выше, чем в основной и составил 17,34 (9,59-29,2) пг/мл и 6,03 (2,33-15,53) пг/мл соответственно (р<0,001), кроме того, после курса сохраняющей терапии отмечена тенденция к его увеличению до 9,06 (4,1-13,62) пг/мл.The study of tumor necrosis factor-α (FNO-α) in both clinical groups revealed statistically significant differences in the concentration of this indicator. In the control group, it was almost 3 times higher than in the main group and amounted to 17.34 (9.59-29.2) pg / ml and 6.03 (2.33-15.53) pg / ml, respectively (p <0.001), in addition, after a course of maintenance therapy, there was a tendency to increase it to 9.06 (4.1-13.62) pg / ml.
Исследование субстанции Р при физиологической гестации показало низкий уровень ее содержания, равный 0,19 (1,11-0,24) нг/мл. В сыворотке крови беременных с угрозой невынашивания этот показатель возрастал практически в 1,7 раза и составил 0,32 (0.22-0.4) нг/мл (р<0,001), и несколько увеличивался несмотря на проводимую терапию. При повторном обследовании концентрация субстанции Р была сравнима с первичным обследованием 0,33 (0,24-0,47) нг/мл и достоверно отличалась от контроля (р<0,001).The study of substance P during physiological gestation showed a low level of its content, equal to 0.19 (1.11-0.24) ng / ml. In the blood serum of pregnant women with a threat of miscarriage, this indicator increased almost 1.7 times and amounted to 0.32 (0.22-0.4) ng / ml (p <0.001), and increased slightly despite the therapy. Upon repeated examination, the concentration of substance P was comparable with the initial examination of 0.33 (0.24-0.47) ng / ml and significantly differed from the control (p <0.001).
Таким образом, на основании собственных исследований мы можем утверждать, что угроза прерывания беременности в первом триместре может развиваться при повышенном содержании субстанции Р в сыворотке крови. Разработанный нами метод позволяет в первом триместре беременности определять только 2 показателя, а именно уровни субстанции Р и FNO-α, что является достаточным для расчета диагностического критерия.Thus, on the basis of our own studies, we can argue that the threat of termination of pregnancy in the first trimester can develop with an increased content of the substance P in the blood serum. The method we developed allows us to determine only 2 indicators in the first trimester of pregnancy, namely, the levels of the substance P and FNO-α, which is sufficient to calculate the diagnostic criterion.
Субстанция Р является важным модулятором воспаления, т.к. индуцирует синтез «провоспалительных» медиаторов (интерлейкина 1, 6, фактора некроза опухоли и др.) макрофагами и активирует фагоцитоз, в то же время снижает содержание иммуносупрессивных факторов. В первом триместре беременности особенно велико влияние FNO-α в регуляции процессов апоптоза на самых ранних этапах беременности (S.L. Staszewski-Chavez et al., 2005). Поскольку плацента является развивающимся органом, ее ткани подвергаются постоянному обновлению (I.M.Mayhew, 2001). Апоптические клетки идентифицированы как в материнских, так и в плодовых компонентах плаценты на разных этапах физиологического течения беременности, что может быть связано с адгезией яйцеклетки и инвазией трофобласта (A. Galan et al.. 2000); трансформацией спиральных артерий (S.V. Ashton et al.., 2005), дифференцировкой трофобласта (G.Ivioretal., 2002).Substance P is an important modulator of inflammation, because induces the synthesis of "pro-inflammatory" mediators (interleukin 1, 6, tumor necrosis factor, etc.) by macrophages and activates phagocytosis, while at the same time reduces the content of immunosuppressive factors. In the first trimester of pregnancy, the influence of FNO-α in the regulation of apoptosis in the very early stages of pregnancy is especially great (S.L. Staszewski-Chavez et al., 2005). Since the placenta is a developing organ, its tissues undergo constant renewal (I.M. Mayhew, 2001). Apoptotic cells were identified both in the maternal and in the fetal components of the placenta at different stages of the physiological course of pregnancy, which may be associated with egg adhesion and trophoblast invasion (A. Galan et al .. 2000); transformation of spiral arteries (S.V. Ashton et al .., 2005), differentiation of trophoblast (G. Ivioretal., 2002).
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
У беременной женщины утром натощак из локтевой вены забирают кровь (желательно самотеком в пластиковую или силиконированную пробирку), затем стандартным методом получают сыворотку крови. Определяют методом ИФА субстанции Р, FNO-α и рассчитывают прогностический коэффициент К по формуле:Blood is taken from a pregnant woman in the morning on an empty stomach from the cubital vein (preferably by gravity into a plastic or silicone tube), then blood serum is obtained by the standard method. Determine the substance P, FNO-α by the ELISA method and calculate the prognostic coefficient K by the formula:
K=(0,006*FNO*SP-0,065*FNO*SP2-0,00004*FNO)/(0,005-0,031*FNO),K = (0.006 * FNO * SP-0.065 * FNO * SP 2 -0.00004 * FNO) / (0.005-0.031 * FNO),
где SP - уровень субстанции Р в абсолютных величинах,where SP is the level of substance P in absolute terms,
FNO - уровень фактора некроза опухоли-α в абсолютных величинах,FNO - level of tumor necrosis factor-α in absolute terms,
если значение прогностического коэффициента К больше, чем 0,48, то у данной беременной прогнозируют угрозу прерывания беременности.if the value of the prognostic coefficient K is greater than 0.48, then the threat of termination of pregnancy is predicted for this pregnant woman.
Если значение прогностического коэффициента К меньше, чем 0,48, то данную пациентку можно отнести в группу с физиологическим течением беременности.If the value of the prognostic coefficient K is less than 0.48, then this patient can be attributed to the group with the physiological course of pregnancy.
Уровень FNO-α в сыворотке крови определяют методом иммуноферментного анализа наборами фирмы BIOSOURCE (USA).The level of FNO-α in blood serum is determined by enzyme-linked immunosorbent assay kits from BIOSOURCE (USA).
Промывочный буфер, растворы стандартов, стрептавидин-пероксидазного конъюгата готовят согласно инструкции к набору. Во все лунки планшета, покрытые поликлональными антителами к FNO-α человека, вносят по 50 мкл инкубационного буфера. В лунку-бланк вносят 100 мкл раствора для разведения стандартов, в лунки для построения стандартной кривой вносили по 100 мкл приготовленных стандартных проб, в остальные лунки - по 100 мкл исследуемых проб. Накрывают планшет пленкой и инкубируют 2 часа при комнатной температуре.Wash buffer, standard solutions, streptavidin-peroxidase conjugate are prepared according to the instructions for the set. 50 μl of incubation buffer are added to all wells of the plate coated with polyclonal antibodies to human FNO-α. 100 μl of the standard dilution solution was added to the blank well, 100 μl of the prepared standard samples were added to the wells for constructing the standard curve, and 100 μl of the studied samples to the remaining wells. Cover the tablet with a film and incubate for 2 hours at room temperature.
По окончании инкубации промывают лунки планшета промывочным буфером 4 раза на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA).At the end of the incubation, wash the wells of the plate with wash buffer 4 times on an ELISA WASHER HUMAN microplate washer (USA).
Затем во все лунки вносят по 100 мкл раствора биотинилированных антител к FNO-α человека. Инкубируют планшет при комнатной температуре в течение 1 часа. Промывают планшет 4 раза промывочным буфером, как описано выше. Во все лунки вносят по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубируют планшет 30 минут при комнатной температуре. Затем проводят промывку по вышеописанной методике.Then, 100 μl of a solution of biotinylated antibodies to human FNO-α are added to all wells. Incubate the plate at room temperature for 1 hour. Wash the plate 4 times with wash buffer as described above. 100 μl of streptavidin-peroxidase conjugate solution are added to all wells and the plate is incubated for 30 minutes at room temperature. Then, washing is carried out according to the method described above.
Во все лунки вносят по 100 мкл раствора субстрата и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 минут. Останавливают цветную реакцию добавлением 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку. Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводят на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Дания).100 μl of substrate solution was added to all wells and incubated at room temperature for 30 minutes. Stop the color reaction by adding 100 μl stop reagent to each well. Measurement of optical density at 450 nm and calculation of the results are carried out on a MULTILABEL COUNTER 1420 photometer (Denmark).
В компьютерное обеспечение прибора вводят численные значения концентраций FNO-α в стандартных растворах и получают после измерения концентрацию FNO-α в опытных пробах в пг/мл. Для вычисления прогностического коэффициента используют значение FNO-α в абсолютных величинах.Numerical values of FNO-α concentrations in standard solutions are introduced into the computer software of the device, and after measurement, the concentration of FNO-α in experimental samples in pg / ml is obtained. To calculate the prognostic coefficient, the FNO-α value in absolute values is used.
Уровень субстанции Р в сыворотке крови пациентов определяют методом иммуноферментного анализа наборами фирмы ВАСНЕМ GROUP (USA).The level of substance P in the blood serum of patients is determined by enzyme-linked immunosorbent assay kits from VASNEM GROUP (USA).
Приготовление растворов стандартов, конъюгатов, промывочного и рабочего буфера проводят согласно инструкции к набору.Preparation of standard solutions, conjugates, washing and working buffer is carried out according to the instructions for the set.
Во все лунки планшета вносят по 25 мкл первичной антисыворотки и инкубируют планшет в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем в соответствующие лунки планшета вносят по 50 мкл растворов стандартов или исследуемых проб, инкубируют 2 часа при комнатной температуре. Во все лунки планшета вносят по 25 мкл раствора биотинилированного конъюгата, накрывают планшет пленкой и оставляют на ночь при температуре 2-8 С. По окончании инкубации 5 раз промывают лунки планшета промывочным буфером на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHER HUMAN (USA). Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора стрептавидин-пероксидазного конъюгата и инкубируют планшет в течение 1 часа при комнатной температуре. Промывают планшет, как описано выше.25 μl of primary antiserum are added to all wells of the plate and the plate is incubated for 1 hour at room temperature. Then, 50 μl of standard solutions or test samples are added to the corresponding wells of the plate, incubated for 2 hours at room temperature. 25 μl of a solution of biotinylated conjugate was added to all wells of the plate, covered with a film of film and left overnight at 2-8 ° C. After incubation, the wells were washed 5 times with washing buffer on an ELISA WASHER HUMAN microplate washer (USA). 100 μl of streptavidin-peroxidase conjugate solution are added to all wells of the plate and the plate is incubated for 1 hour at room temperature. Wash the plate as described above.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл раствора ТМБ, инкубируют в темноте в течение 15 минут, останавливают цветную реакцию добавлением в каждую лунку 100 мкл раствора 2N HCl.100 μl of TMB solution are added to all wells of the plate, incubated in the dark for 15 minutes, the color reaction is stopped by adding 100 μl of 2N HCl solution to each well.
Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводят на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Дания).Measurement of optical density at 450 nm and calculation of the results are carried out on a MULTILABEL COUNTER 1420 photometer (Denmark).
В компьютерное обеспечение прибора вводят численные значения концентраций субстанции Р в стандартных растворах и получают после измерения концентрацию субстанции Р в опытных пробах в нг/мл. Для вычисления прогностического коэффициента используют значение субстанции Р в абсолютных величинах.Numerical values of the concentrations of the substance P in standard solutions are introduced into the computer software of the device and, after measuring, the concentration of the substance P in the experimental samples in ng / ml is obtained. To calculate the prognostic coefficient, the value of the substance P in absolute values is used.
Работоспособность и промышленная применимость заявляемого метода подтверждается следующими клиническими примерами.The performance and industrial applicability of the proposed method is confirmed by the following clinical examples.
Пример 1. Беременная М-а Е.В., 28 лет. В анамнезе 2 нормальных срочных родов. На очередном приеме в женской консультации жалоб не предъявляет. Диагноз: беременность 6-7 недель.Example 1. Pregnant M-a E.V., 28 years old. A history of 2 normal term births. At the next appointment in the antenatal clinic, she has no complaints. Diagnosis: pregnancy 6-7 weeks.
По УЗИ: в матке лоцируется одно плодное яйцо, соответствующее 6-7 неделям беременности. Придатки без особенностей. Признаков угрозы невынашивания беременности нет.Ultrasound: in the uterus, one fetal egg is located, corresponding to 6-7 weeks of pregnancy. Appendages without features. There are no signs of a threat of miscarriage.
При влагалищном исследовании: шейка матки отклонена кзади, влагалищная часть шейка матки длиной 2,5-3 см, плотная, наружный зев закрыт. Матка увеличена соответственно сроку гестации, вне тонуса. Придатки с обеих сторон без особенностей.When a vaginal examination: the cervix is rejected posteriorly, the vaginal part of the cervix is 2.5-3 cm long, dense, the external pharynx is closed. The uterus is enlarged according to the gestational age, out of tone. Appendages on both sides without features.
Таким образом, клинических симптомов угрожающего самопроизвольного аборта не выявлено.Thus, there were no clinical symptoms of a threatening miscarriage.
С целью выбора дальнейшей тактики ведения беременной проведено исследование уровня субстанции Р, составивший 0,291 нг/мл, и FNO-α, равный 5,33 пг/мл, эти значения в абсолютных величинах подставляют в приведенную формулу и проводят расчет прогностического коэффициента К. Расчетная величина К равна 1,01368, (т.е. больше, чем 0,48), что позволяет отнести беременную в группу риска по невынашиванию. Принимая во внимание отсутствие отягощенного акушерско-гинекологического анамнеза, хорошее самочувствие, беременная от курса сохраняющей терапии отказалась. Через неделю больная поступает в гинекологическое отделение с жалобами на боли внизу живота, кровянистые выделения. Диагноз: Беременность 7-8 недель. Угрожающий самоаборт. По УЗИ: по гестации 7 нед. 4 дн. плодное яйцо - 31 мм соответствует 8 нед. 1 дн., КТР-13 мм-7 нед. 4 дн., сердцебиение ритмичное. Хорион по передней стенке матки. В нижнем полюсе плодного яйца визуализируется щелевидное эхо-негативное образование 12*3 мм - участок отслойки. Заключение: Беременность 7-8 нед. УЗ: признаки угрозы прерывания беременности. В зеркалах: шейка матки не изменена. Влагалищное исследование матки не проводилось в связи с явлениями угрозы прерывания беременности. Больной проведена терапия в условиях стационара, направленная на пролонгирование беременности. Беременность сохранена.In order to choose further tactics for pregnant management, a study was conducted of the level of substance P, which amounted to 0.291 ng / ml, and FNO-α equal to 5.33 pg / ml, these values in absolute values are substituted into the above formula and the prognostic coefficient K is calculated. The calculated value K is 1.01368, (i.e., greater than 0.48), which allows the pregnant woman to be at risk of miscarriage. Taking into account the absence of a burdened obstetric-gynecological history, well-being, the pregnant woman refused a course of preservation therapy. After a week, the patient enters the gynecological department with complaints of pain in the lower abdomen, spotting. Diagnosis: Pregnancy 7-8 weeks. Threatening self-abortion. Ultrasound: gestational 7 weeks. 4 days fetal egg - 31 mm corresponds to 8 weeks. 1 days, KTR-13 mm-7 weeks. 4 days. Rhythmic heartbeat. Chorion on the front wall of the uterus. In the lower pole of the fetal egg, a slit-like echo-negative formation of 12 * 3 mm is visualized - a detachment site. Conclusion: Pregnancy 7-8 weeks. KM: signs of threatened abortion. In the mirrors: the cervix is not changed. Vaginal examination of the uterus was not conducted in connection with the phenomena of threatened abortion. The patient underwent therapy in a hospital, aimed at prolonging pregnancy. Pregnancy saved.
Пример 2. Первобеременная С-а, 26 лет, проходила очередной прием в женской консультации. Жалоб нет. Диагноз: Беременность 10 нед. По УЗИ: по гестации 10 нед. Плодное яйцо 46 ммм - 10 нед., КТР-31 мм - 10 нед. 3 дн. Сердцебиение ритмичное. Хорион по передней стенке, толщина 11 мм. Заключение: Беременность 10 нед. При влагалищном исследовании: шейка матки отклонена кзади, влагалищная часть шейка матки длиной 2,5-3 см, плотная, наружный зев закрыт. Матка увеличена соответственно сроку гестации, вне тонуса. Придатки с обеих сторон без особенностей.Example 2. The first pregnant S., 26 years old, had another appointment at the antenatal clinic. There are no complaints. Diagnosis: Pregnancy 10 weeks. Ultrasound: gestational 10 weeks. Fetal egg 46 mmm - 10 weeks., KTR-31 mm - 10 weeks. 3 days The heartbeat is rhythmic. Chorion on the front wall, thickness 11 mm. Conclusion: Pregnancy 10 weeks. When a vaginal examination: the cervix is rejected posteriorly, the vaginal part of the cervix is 2.5-3 cm long, dense, the external pharynx is closed. The uterus is enlarged according to the gestational age, out of tone. Appendages on both sides without features.
С целью решения вопроса о целесообразности превентивной терапии, проведено обследование на определение в сыворотке крови уровней субстанции Р (равен 0,114 нг/мл) и FNO-α (равен 2,73 пг/мл). Эти значения в абсолютных величинах подставляют в приведенную формулу и проводят расчет прогностического коэффициента К. Полученное значение К равно 0,006975, (т.е. меньше, чем 0,48), что позволяет отнести больную в группу здоровых беременных, не требующих медикаментозной терапии. Данная беременность имела физиологическое течение.In order to solve the question of the appropriateness of preventive therapy, an examination was conducted to determine the levels of substance P in the blood serum (equal to 0.114 ng / ml) and FNO-α (equal to 2.73 pg / ml). These absolute values are substituted into the above formula and the prognostic coefficient K is calculated. The obtained K value is 0.006975, (i.e., less than 0.48), which allows the patient to be assigned to the group of healthy pregnant women who do not require drug therapy . This pregnancy had a physiological course.
Достоверность заявляемого способа подтверждена клинико-лабораторными исследованиями.The reliability of the proposed method is confirmed by clinical and laboratory studies.
Процедура статистической обработки полученных эмпирических данных предусматривала последовательное выполнение нескольких этапов. Проверялось распределение исходных переменных на нормальность. Далее проводилась процедура описательной статистики, с помощью которой находились медианы, моды и доверительные интервалы, а также проверялись выборочные средние у различных групп. Достоверность полученных результатов рассчитывалась при доверительной вероятности 0,95. Полученные результаты представлены в таблицах 1-3,The procedure for statistical processing of the obtained empirical data provided for the sequential execution of several stages. The distribution of the source variables was checked for normality. Further, a procedure of descriptive statistics was carried out, with the help of which medians, modes and confidence intervals were found, and sample means for various groups were checked. The reliability of the results was calculated with a confidence level of 0.95. The results are presented in tables 1-3,
*** - достоверность различий р<0,001 по сравнению с контрольной группой.*** - significance of differences p <0.001 compared with the control group.
Содержание компонентов нейрогенного воспаления в сыворотке крови у беременных контрольной группыTable 1.
The content of components of neurogenic inflammation in the blood serum of pregnant women in the control group
Содержание компонентов нейрогенного воспаления в сыворотке крови у беременных основной группы до терапииTable 2.
The content of components of neurogenic inflammation in the blood serum of pregnant women of the main group before therapy
Содержание компонентов нейрогенного воспаления в сыворотке крови у беременных основной группы после терапииTable 3.
The content of components of neurogenic inflammation in the blood serum of pregnant women of the main group after therapy
Обработка исходных рядов признаков осуществлялась с использованием пакета Poly Analyst 3.5 PRO и EXCEL 2003.Processing of the initial series of features was carried out using the Poly Analyst 3.5 PRO and EXCEL 2003 software.
Для сравнения межгрупповых различий использовали метод Вилкоксона для независимых групп с помощью пакета AtteStat 6.4. Для анализа многомерных нелинейных зависимостей использовали пакет PolyAnalist 3.5 Pro, одна из функций которого включает в себя технологию «эволюционного программирования».To compare the intergroup differences, the Wilcoxon method for independent groups was used using the AtteStat 6.4 package. To analyze multidimensional nonlinear dependencies, we used the PolyAnalist 3.5 Pro package, one of the functions of which includes the technology of “evolutionary programming”.
Специальный модуль непрерывно преобразует "лучшую" на данный момент программу с внутреннего представления во внешний язык PolyAnalyst - язык символьных правил (Symbolic Rule Language), понятный человеку: математические формулы, условные конструкции и так далее. Это позволяет пользователю понять суть полученной зависимости, контролировать процесс поиска, а также получать графическую визуализацию результатов.A special module continuously converts the “best” program at the moment from an internal representation into an external PolyAnalyst language - the language of symbolic rules (Symbolic Rule Language), understandable to humans: mathematical formulas, conditional constructions, and so on. This allows the user to understand the essence of the obtained dependence, to control the search process, and also to receive a graphical visualization of the results.
Преимущество заявляемого метода состоит в том, что у беременных во втором триместре на основании высокочувствительных современных лабораторных маркеров производится прогнозирование невынашивания беременности с целью раннего назначения адекватной терапии. В клинической практике это позволит снизить угрозу перинатальных потерь за счет своевременного выявления беременных группы риска по развитию данной патологии и провести раннее профилактическое лечение, которое существенно снизит частоту невынашивания беременности и благоприятно отразится на показателях перинатальной заболеваемости и смертности в условиях обострившейся демографической ситуации. Возможность одновременной подготовки к исследованию большого количества проб крови и небольшие затраты времени исследования позволят использовать способ в скрининговых исследованиях.The advantage of the proposed method is that in pregnant women in the second trimester, on the basis of highly sensitive modern laboratory markers, prediction of miscarriage is made with the aim of early appointment of adequate therapy. In clinical practice, this will reduce the risk of perinatal losses due to the timely identification of pregnant risk groups for the development of this pathology and conduct early preventive treatment that will significantly reduce the rate of miscarriage and will positively affect the rates of perinatal morbidity and mortality in the face of an exacerbated demographic situation. The ability to simultaneously prepare for the study of a large number of blood samples and the small investment of research time will allow the use of the method in screening studies.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007132143/15A RU2341800C1 (en) | 2007-08-24 | 2007-08-24 | Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007132143/15A RU2341800C1 (en) | 2007-08-24 | 2007-08-24 | Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2341800C1 true RU2341800C1 (en) | 2008-12-20 |
Family
ID=40375285
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007132143/15A RU2341800C1 (en) | 2007-08-24 | 2007-08-24 | Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2341800C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2469331C1 (en) * | 2011-08-18 | 2012-12-10 | Федеральное государственное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for prediction of threatened miscarriage in 1 trimester |
| RU2701109C1 (en) * | 2018-12-27 | 2019-09-24 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the risk of preterm delivery in women with habitual miscarriage |
| RU2735988C1 (en) * | 2020-03-25 | 2020-11-11 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for assessment of dynamics and completeness of contraction of blood clots for prediction of probability of spontaneous abortion |
-
2007
- 2007-08-24 RU RU2007132143/15A patent/RU2341800C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| FACCHINETTI F. et al. Биохимические посредники изменений шейки матки при преждевременных родах. G. ital. ostet. e ginecol, 2006, 28, № 1-2, с.11-15. реф. Найдено из БД VINITI.RU. [Найдено 11.04.2008] [он-лайн]. SCHMIDT Т. et al. Prognostic value of repeated serum CA 125 measurements in first trimester pregnancy. Eur J. Obstet Gvnecol Reprod Biol. 2001 Aug; 97(2): 168-73. реф. Найдено из БД PubMed, PMID 11451543. [Найдено 11.04.2008] [он-лайн]. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2469331C1 (en) * | 2011-08-18 | 2012-12-10 | Федеральное государственное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for prediction of threatened miscarriage in 1 trimester |
| RU2701109C1 (en) * | 2018-12-27 | 2019-09-24 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the risk of preterm delivery in women with habitual miscarriage |
| RU2735988C1 (en) * | 2020-03-25 | 2020-11-11 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Method for assessment of dynamics and completeness of contraction of blood clots for prediction of probability of spontaneous abortion |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yoneda et al. | Accurate prediction of the stage of histological chorioamnionitis before delivery by amniotic fluid IL‐8 level | |
| RU2340899C1 (en) | Method of predicting of miscarriage in second trimester of pregnancy | |
| Turgut et al. | Alteration of peripheral blood cells in tubal ectopic pregnancy | |
| RU2501017C1 (en) | Method for prediction of early miscarriage | |
| RU2691114C1 (en) | Method for forecasting development of pre-eclampsia in late pregnancy | |
| Diao et al. | New endometrial immune cell-based score (EI-score) for the prediction of implantation success for patients undergoing IVF/ICSI | |
| Abdelazim et al. | Relation between single serum progesterone assay and viability of the first trimester pregnancy | |
| RU2469331C1 (en) | Method for prediction of threatened miscarriage in 1 trimester | |
| CN107076752A (en) | The method for detecting ectopic pregnancy | |
| Livrinova et al. | Clinical importance of low level of PAPP-A in first trimester of pregnancy-an obstetrical dilemma in chromosomally normal fetus | |
| RU2341800C1 (en) | Method of miscarriage prediction in first trimester of pregnancy | |
| RU2695356C1 (en) | Method for prediction of fetus in premature rupture of fetal membranes from 24 to 33 weeks of pregnancy | |
| Lapides et al. | Uterine natural killer cells in the context of implantation: immunohistochemical analysis of endometrial samples from women with habitual abortion and recurrent implantation failure | |
| RU2444734C1 (en) | Method for prediction of early infectious miscarriage | |
| Li et al. | Predictive value of procalcitonin or c-reactive protein for subclinical intrauterine infection in patients with premature rupture of membranes (PROM) | |
| RU2341799C1 (en) | Method of miscarriage prediction associated with urogenital infection | |
| Abdelazim et al. | Relation between single serum progesterone assay and viability of the first trimester pregnancy | |
| Campbell et al. | Biomarkers of ovulation, endometrial receptivity, fertilisation, implantation and early pregnancy progression | |
| Kumar et al. | Dynamic alteration in the vaginal secretory proteome across the early and mid-trimesters of pregnancy | |
| Wong et al. | Do uterine natural killer cell numbers in peri-implantation endometrium predict hypertensive disorder in pregnancy in women with a history of reproductive failure? | |
| RU2560694C1 (en) | Method of predicting non-developing pregnancy | |
| RU2670451C1 (en) | Method of determining indications for urgent delivery in pregnant women with intrauterine growth restriction syndrome | |
| Aiub et al. | The Value Of Early Pregnancy Single Serum Progesterone Measurement In Relation To The First Trimester Viability | |
| Liu et al. | Single cell profiling at the maternal–fetal interface reveals a deficiency of PD-L1+ non-immune cells in human spontaneous preterm labor | |
| RU2537241C1 (en) | Method for prediction of dysthyroidism |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090825 |