RU2339951C1 - Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children - Google Patents

Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children Download PDF

Info

Publication number
RU2339951C1
RU2339951C1 RU2007122088/15A RU2007122088A RU2339951C1 RU 2339951 C1 RU2339951 C1 RU 2339951C1 RU 2007122088/15 A RU2007122088/15 A RU 2007122088/15A RU 2007122088 A RU2007122088 A RU 2007122088A RU 2339951 C1 RU2339951 C1 RU 2339951C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bronchial asthma
lymphocytes
cells
index
allergic
Prior art date
Application number
RU2007122088/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Иван Александрович Громов (RU)
Иван Александрович Громов
Лейла Сеймуровна Намазова (RU)
Лейла Сеймуровна Намазова
Елена Леонидовна Семикина (RU)
Елена Леонидовна Семикина
Наталь Игоревна Вознесенска (RU)
Наталья Игоревна Вознесенская
Original Assignee
Государственное учреждение научный центр здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное учреждение научный центр здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН) filed Critical Государственное учреждение научный центр здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН)
Priority to RU2007122088/15A priority Critical patent/RU2339951C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2339951C1 publication Critical patent/RU2339951C1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, immunology and allergology.
SUBSTANCE: separate lymphocytes from the test of venous blood, simultaneously add monoclonal antibodies CD23 and CD 19 to them, incubate a mix at a room temperature, calculate quantity of cells with a label (CD19) and cells with a double label (CD19 CD23) on flowing cytometer, calculate an index of an allergic inflammation under the formula: ((CD19 CD23) / (CD19)) x100%, and at an index more than 70% - diagnose the allergic form of bronchial asthma.
EFFECT: authentic diagnostics of allergic forms of bronchial asthma at children already at the initial stage when clinical signs are expressed slightly.
3 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики бронхиальной астмы.The invention relates to medicine, namely to clinical immunology, and can be used to diagnose bronchial asthma.

Известен способ диагностики тяжелой формы бронхиальной астмы (БА) (патент РФ №2120635, опубл. в 1998 г.) по клиническим признакам и определению вентиляционной функции легких, в котором производят исследование венозной крови больного с определением количества теофиллинрезистентных лимфоцитов, соотношения количества теофиллинрезистентных лимфоцитов к количеству теофиллинчувствительных лимфоцитов в нагрузочном тесте с теофиллином и концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов М, А и G в реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини, после чего вычисляют индекс аллергического воспаления по формулеA known method for the diagnosis of severe bronchial asthma (BA) (RF patent No. 2120635, published in 1998) by clinical features and determination of ventilation function of the lungs, in which the patient's venous blood is examined to determine the number of theophylline-resistant lymphocytes, the ratio of theophylline-resistant lymphocytes to the number of theophylline-sensitive lymphocytes in the load test with theophylline and the concentration of serum immunoglobulins of classes M, A and G in the reaction of radial immunodiffusion according to Mancini, p What follows is calculated by the formula index of allergic inflammation

Figure 00000001
Figure 00000001

где И - индекс аллергического воспаления;where And - an index of allergic inflammation;

0,06, 10, 4, 10 - показатели, нормирующие величины учитываемых признаков;0,06, 10, 4, 10 - indicators that normalize the values of the considered signs;

IgG, IgA, IgM - концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов G, А, М, г/л;IgG, IgA, IgM - concentration of serum immunoglobulins of classes G, A, M, g / l;

ТФР - абсолютное значение величины теофиллинрезистентных лимфоцитов в 1 мкл венозной крови;TGF - the absolute value of theophylline-resistant lymphocytes in 1 μl of venous blood;

ИРИ - соотношение количества теофиллинрезистентных лимфоцитов к количеству теофиллинчувствительных лимфоцитов, и при наличии соответствующей клинической картины повторяющихся приступов бронхиальной астмы и превышении индекса аллергического воспаления порогового значения, установленного для атопической бронхиальной астмы на уровне 0,130, для инфекционно-зависимой бронхиальной астмы - на уровне 0,80, а при затруднении дифференциальной диагностики атопической и инфекционно-зависимой бронхиальной астмы - на уровне 0,10, диагностируют тяжелую бронхиальную астму.IRI - the ratio of theophylline-resistant lymphocytes to the number of theophylline-sensitive lymphocytes, and if there is a corresponding clinical picture of repeated attacks of bronchial asthma and the allergic inflammation index exceeds the threshold value set for atopic bronchial asthma at 0.130, for infectious-dependent bronchial asthma - at 0.80 and with difficulty in differential diagnosis of atopic and infection-dependent bronchial asthma - at a level of 0.10, they diagnose more th bronchial asthma.

Недостатком способа является то, что с его помощью можно определять только тяжелую форму астмы.The disadvantage of this method is that it can be used to determine only severe asthma.

Известен способ диагностики обострения бронхиальной астмы, заключающийся в определении цитокинов (ИЛ-5) в сыворотке крови и при значении его более 92 пг/мл диагностируют обострение, менее 92 пг/мл - ремиссию, менее 60 пг/мл - норму (патент РФ №2202111, опубл. в 2003 г.).A known method for the diagnosis of exacerbation of bronchial asthma, which consists in the determination of cytokines (IL-5) in blood serum and with a value of more than 92 pg / ml, exacerbation is diagnosed, less than 92 pg / ml - remission, less than 60 pg / ml - normal (RF patent No. 2202111, published in 2003).

Недостатком способа является то, что способ не является достаточно достоверным для диагностики бронхиальной астмы в периоде ремиссии.The disadvantage of this method is that the method is not reliable enough for the diagnosis of bronchial asthma in the period of remission.

Известно, что иммуноглобулин (IgE) ассоциируется с аллергическими болезнями и макро-паразитарными инвазиями.Immunoglobulin (IgE) is known to be associated with allergic diseases and macro-parasitic infestations.

У детей с аллергическими заболеваниями отмечается в периоде обострения повышение не только IgE в плазме крови, но и повышение экспрессии низкоафинной субъединицы рецептора к IgE CD23 (FcepsilonRII).In children with allergic diseases, not only an increase in plasma IgE in the blood plasma, but also an increase in the expression of the low affinity IgE CD23 receptor subunit (FcepsilonRII) is noted in the period of exacerbation.

Известен способ диагностики бронхиальной астмы у детей (авт. свид. SU №1413532, БИ №28 от 30.07.88 г.), который заключается в определении уровня общего сывороточного иммуноглобулина Е, путем определения титра комлементсвязующих антител к вирусам парагриппа и респираторно-синцитальному, при его значении 1/40 и более диагностируют неатопическую форму бронхиальной астмы, а при титре 1/10-1/20 диагностируют атопическую форму.A known method for the diagnosis of bronchial asthma in children (author certificate. SU No. 1413532, BI No. 28 of 07.30.88), which consists in determining the level of total serum immunoglobulin E, by determining the titer of complement-binding antibodies to parainfluenza viruses and respiratory syncytial, with its value of 1/40 or more, a non-atopic form of bronchial asthma is diagnosed, and with a titer of 1 / 10-1 / 20, an atopic form is diagnosed.

Этот способ выбран нами за прототип, как сходный по назначению и имеющий признаки, общие с признаками заявляемого изобретения.This method we have chosen for the prototype, as similar in purpose and having features common with the features of the claimed invention.

Недостатком способа является то, что он подходит для диагностики бронхиальной астмы в период обострения и не дает точной оценки заболевания в период ремиссии, тогда как повышение концентрации рецептора к IgE отмечается только в периоде обострения, а в период ремиссии данный показатель не повышается.The disadvantage of this method is that it is suitable for the diagnosis of bronchial asthma during the period of exacerbation and does not give an accurate assessment of the disease during remission, while an increase in the concentration of the receptor for IgE is noted only in the period of exacerbation, and during remission this indicator does not increase.

Задачей данного изобретения является разработка достоверного и более точного способа диагностики бронхиальной астмы.The objective of the invention is to develop a reliable and more accurate method for the diagnosis of bronchial asthma.

Поставленная задача решается тем, что разработан способ диагностики атопической формы бронхиальной астмы, включающий исследование крови, для чего из пробы венозной крови выделяют лимфоциты, добавляют к ним одновременно моноклональные антитела CD23 и CD 19, инкубируют смесь при комнатной температуре, подсчитывают на проточном цитометре количество клеток с меткой (CD 19) и клеток с двойной меткой (CD 19 CD23), рассчитывают индекс аллергического воспаления по формуле:The problem is solved by the fact that a method for diagnosing atopic forms of bronchial asthma has been developed, including blood testing, for which lymphocytes are isolated from venous blood samples, monoclonal antibodies CD23 and CD 19 are added to them, the mixture is incubated at room temperature, the number of cells is counted on a flow cytometer with a label (CD 19) and cells with a double label (CD 19 CD23), calculate the index of allergic inflammation according to the formula:

((CD19 CD23)/(CD19))×100%,((CD19 CD23) / (CD19)) × 100%,

при индексе, большем 70%, диагностируют атопическую форму бронхиальной астмы.with an index greater than 70%, an atopic form of bronchial asthma is diagnosed.

Существенным отличием заявляемого способа является то, что добавление моноклональных антител CD23 и CD19 проводят одновременно.A significant difference of the proposed method is that the addition of monoclonal antibodies CD23 and CD19 is carried out simultaneously.

Кроме этого проводят подсчет количества клеток с меткой CD19 и клеток с двойной меткой CD19 и CD23.In addition, counting the number of cells labeled CD19 and double-labeled cells CD19 and CD23 is performed.

Затем рассчитывают индекс аллергического воспаления по формуле:Then calculate the index of allergic inflammation according to the formula:

((CD19 CD23)/(CD19))×100%,((CD19 CD23) / (CD19)) × 100%,

при индексе, большем 70%, диагностируют атопическую форму бронхиальной астмы.with an index greater than 70%, an atopic form of bronchial asthma is diagnosed.

Эти признаки не известны из уровня техники до даты приоритета изобретения, т.е. изобретение соответствует критерию «новизна». Расчет индекса аллергического воспаления по предлагаемой формуле и определение нормативных показателей индекса аллергического воспаления явным образом не следует из уровня техники, т.е. новое решение не является производным прежних решений, что соответствует критерию «изобретательский уровень». Кроме того, предлагаемое изобретение может быть успешно использовано в медицине для диагностики бронхиальной астмы, т.е. соответствует критерию «промышленная применимость».These features are not known from the prior art prior to the priority date of the invention, i.e. the invention meets the criterion of "novelty." The calculation of the index of allergic inflammation according to the proposed formula and the determination of normative indicators of the index of allergic inflammation does not explicitly follow from the prior art, i.e. the new solution is not a derivative of the previous solutions, which meets the criterion of "inventive step". In addition, the present invention can be successfully used in medicine for the diagnosis of bronchial asthma, i.e. meets the criterion of "industrial applicability".

Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.

Производят забор крови из вены в количестве 5-8 мл и помещают в пробирку с антикоагулянтом. Содержимое пробирок разводят буферным раствором в 2 раза. Выделение лимфоцитов осуществляют центрифугированием на градиенте плотности фиколл-урографина 1,077 г/см3 (ПанЭко) при 1500 об/мин в течение 30 мин при t 4°C. Выделенные лимфоциты дважды отмывают в буферном растворе при 1200 об/мин при t 4°С в течение 10 мин. После этого к 100 мкл взвеси лимфоцитов добавляют 5 мкл моноклональных антител CD 23, как рецептор к Ig E красного цвета (РЕ), и CD 19, как маркер В лимфоцитов зеленого цвета (FITS). Клетки инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут, затем отмывают центрифугированием с 2 мл буферного раствора и ресуспензируют в 0.5 мл буферного раствора. Анализ образцов проводят на проточном цитометре.5-8 ml of blood are drawn from a vein and placed in a test tube with an anticoagulant. The contents of the tubes are diluted with a buffer solution in 2 times. The selection of lymphocytes is carried out by centrifugation on a density gradient of ficoll-urografin 1,077 g / cm 3 (PanEco) at 1500 rpm for 30 min at t 4 ° C. The isolated lymphocytes are washed twice in a buffer solution at 1200 rpm at t 4 ° C for 10 minutes. Thereafter, 5 μl of monoclonal antibodies CD 23 as a receptor for red Ig E (PE) and CD 19 as a marker for green lymphocytes B (FITS) are added to 100 μl of a suspension of lymphocytes. Cells are incubated in the dark at room temperature for 15 minutes, then washed by centrifugation with 2 ml of buffer solution and resuspended in 0.5 ml of buffer solution. Analysis of the samples is carried out on a flow cytometer.

Для подсчета положительных меток используют программу Cell Quest. Затем исследовали лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяций лимфоцитов, выявленной по светорассеянию и флюоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14).Cell Quest is used to count positive marks. The lymphocyte window was then examined according to a typical location of lymphocyte populations identified by light scattering and the LeukoGate fluorescent label (CD 45/14).

Подсчитывают количество клеток с меткой CD 19 и клеток с двойной меткой CD 19 CD 23. Затем рассчитывают индекс аллергического воспаления по формуле:Count the number of cells labeled CD 19 and cells with a double label CD 19 CD 23. Then calculate the index of allergic inflammation according to the formula:

((CD19 CD23)/(CD19))×100%,((CD19 CD23) / (CD19)) × 100%,

и при индексе, большем 70%, диагностируют атопическую форму бронхиальной астмы.and with an index greater than 70%, an atopic form of bronchial asthma is diagnosed.

Примеры конкретного осуществления способа.Examples of specific implementation of the method.

Пример 1.Example 1

Девочка К., 8 лет, поступила в отделение впервые, с жалобами на сухой кашель, одышку при физической нагрузке.Girl K., 8 years old, was admitted to the department for the first time, complaining of a dry cough, shortness of breath during physical exertion.

Наследственность по аллергическим заболеваниям отягощена: у ближайших родственников: атопический дерматит, поллиноз (риноконъюнктивальный синдром), бронхиальная астма. С 5 лет ежегодно в апреле-мае у ребенка отмечаются приступы затрудненного дыхания с периодичностью до 2-3 раз в месяц, купирующиеся ингаляцией вентолина. С 7 лет у девочки отмечались приступы затрудненного дыхания до 1 раза в месяц и при физической нагрузке, был выставлен диагноз «бронхиальная астма». В течение последних 3-х месяцев девочка получала противовоспалительную терапию кромонами (тайледом). На этом фоне отмечалось 2 эпизода бронхообструкции при физической нагрузке, симптомы купировались ингаляциями вентолина.Heredity for allergic diseases is burdened: in the next of kin: atopic dermatitis, hay fever (rhinoconjunctival syndrome), bronchial asthma. From the age of 5, every year in April-May, the child has bouts of difficulty breathing with a frequency of up to 2-3 times a month, stopped by inhalation of ventolin. From the age of 7, the girl had attacks of labored breathing up to 1 time per month and with physical exertion, she was diagnosed with bronchial asthma. Over the past 3 months, the girl received anti-inflammatory therapy with cromones (tiled). Against this background, 2 episodes of bronchial obstruction were observed during physical exertion, the symptoms were stopped by inhalation of ventolin.

Определение в составе В лимфоцитов популяции клеток с рецептором к Ig E проводили следующим образом.The determination in the composition of lymphocytes of a population of cells with a receptor for Ig E was carried out as follows.

Для получения взвеси лимфоцитов из вены бралось 5-8 мл крови в пробирку с антикоагулянтом. Содержимое пробирок разводили буферным раствором в 2 раза. Выделение лимфоцитов проводили с помощью центрифугирования на градиенте плотности фиколл-урографина 1,077 г/см3 при 1500 об/мин в течение 30 мин при t 4°C. Выделенные лимфоциты дважды отмывали в буферном растворе при 1200 об/мин при t=4°C в течение 10 мин. После этого к 100 мкл взвеси лимфоцитов добавлялось 5 мкл моноклональных антител (CD 23 (РЕ) и CD 19 (FITS)). Клетки инкубировались в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут, затем отмывались центрифугированием с 2 мл буферного раствора и ресуспензировались в 0,5 мл буферного раствора. Анализ образцов проводился на проточном цитометре. Для подсчета положительных меток использовалась программа Cell Quest. Исследовалось лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяции лимфоцитов, выявленной по светорассеянию и флюоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14).To obtain a suspension of lymphocytes from a vein, 5-8 ml of blood was taken into a test tube with an anticoagulant. The contents of the tubes were diluted with a buffer solution in 2 times. The selection of lymphocytes was carried out by centrifugation on a density gradient of ficoll-urografin 1,077 g / cm 3 at 1500 rpm for 30 min at t 4 ° C. The isolated lymphocytes were washed twice in a buffer solution at 1200 rpm at t = 4 ° C for 10 min. Thereafter, 5 μl of monoclonal antibodies (CD 23 (PE) and CD 19 (FITS)) were added to 100 μl of the suspension of lymphocytes. Cells were incubated in the dark at room temperature for 15 minutes, then washed by centrifugation with 2 ml of buffer solution and resuspended in 0.5 ml of buffer solution. Analysis of the samples was carried out on a flow cytometer. Cell Quest was used to count positive marks. The lymphocyte window was examined according to the typical location of the lymphocyte population identified by light scattering and the fluorescent label LeukoGate (CD 45/14).

Таблица 1Table 1 В лимфоциты - CD 19In lymphocytes - CD 19 CD 19 и CD 23CD 19 and CD 23 14fourteen 1212

Расчет в составе В лимфоцитов популяции клеток с рецептором к Ig E по формулеThe calculation in the composition of B lymphocytes of a population of cells with a receptor for Ig E according to the formula

((CD19 CD23)/(CD19))×100%=12/14×100%=86%.((CD19 CD23) / (CD19)) × 100% = 12/14 × 100% = 86%.

Данный клинический пример показывает, что у ребенка отмечается повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток с рецептором к Ig E. Диагноз: Атопическая форма бронхиальной астма.This clinical example shows that a child has an increase in the composition of B lymphocytes in a population of cells with a receptor for Ig E. Diagnosis: Atopic form of bronchial asthma.

Пример 2.Example 2

Мальчик С., 10 лет, поступил в отделении впервые для обследования. Наследственность по аллергическим заболеваниям отягощена: у отца бронхиальная астма. Первый приступ затрудненного дыхания развился в 6 лет, в апреле-месяце купирован эуфиллином. В момент поступления в стационар наблюдались приступы затрудненного дыхания до 1 раза в неделю, которые купировались вентолином.Boy S., 10 years old, was admitted to the department for the first time for examination. Heredity for allergic diseases is burdened: the father has bronchial asthma. The first attack of labored breathing developed at the age of 6, in the month of April it was stopped by euphyllin. At the time of admission to the hospital, attacks of labored breathing were observed up to 1 time per week, which were stopped by ventolin.

Для получения взвеси лимфоцитов из вены бралось 5-8 мл крови в пробирку с антикоагулянтом. Содержимое пробирок разводили буферным раствором в 2 раза. Выделение лимфоцитов проводили с помощью центрифугирования на градиенте плотности фиколл-урографина 1,077 г/см3 (ПанЭко) при 1500 об/мин в течение 30 мин при t 4°C. Выделенные лимфоциты дважды отмывали в буферном растворе при 1200 об/мин при t 4°С в течение 10 мин. После этого к 100 мкл взвеси лимфоцитов добавлялось 5 мкл моноклональных антител CD 23 (РЕ) и CD 19 (FITS). Клетки инкубировались в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут, затем отмывались центрифугированием с 2 мл буферного раствора и ресуспензировались в 0,5 мл буферного раствора. Анализ образцов проводился на проточном цитометре. Для подсчета положительных меток использовалась программа Cell Quest. Исследовалось лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяции лимфоцитов, выявленной по светорассеянию и флюоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14).To obtain a suspension of lymphocytes from a vein, 5-8 ml of blood was taken into a test tube with an anticoagulant. The contents of the tubes were diluted with a buffer solution in 2 times. The selection of lymphocytes was carried out by centrifugation on a density gradient of ficoll-urografin 1,077 g / cm 3 (PanEco) at 1500 rpm for 30 min at t 4 ° C. The isolated lymphocytes were washed twice in a buffer solution at 1200 rpm at t 4 ° C for 10 min. Thereafter, 5 μl of monoclonal antibodies CD 23 (PE) and CD 19 (FITS) were added to 100 μl of a suspension of lymphocytes. Cells were incubated in the dark at room temperature for 15 minutes, then washed by centrifugation with 2 ml of buffer solution and resuspended in 0.5 ml of buffer solution. Analysis of the samples was carried out on a flow cytometer. Cell Quest was used to count positive marks. The lymphocyte window was examined according to the typical location of the lymphocyte population identified by light scattering and the fluorescent label LeukoGate (CD 45/14).

Таблица 2table 2 В лимфоциты CD 19In lymphocytes CD 19 CD 19 и CD 23CD 19 and CD 23 1717 15,515,5

Расчет в составе В лимфоцитов популяции клеток с рецептором к Ig E по формуле:Calculation in the composition of B lymphocytes of a population of cells with a receptor for Ig E according to the formula:

((CD19 CD23)/(CD19))×100%=15,5/17×100%=91%((CD19 CD23) / (CD19)) × 100% = 15.5 / 17 × 100% = 91%

Диагноз: Сезонная бронхиальная астма.Diagnosis: Seasonal bronchial asthma.

Данный клинический пример показывает, что несмотря на то, что ребенок поступил вне периода цветения, в состоянии клинической ремиссии, у него сохраняется повышение в составе В лимфоцитов клеток, несущих на своей поверхности рецептор к IgE, что говорит об атопической природе заболевания.This clinical example shows that despite the fact that the child entered outside the flowering period, in a state of clinical remission, he still has an increase in the composition of B lymphocytes of cells that carry an IgE receptor on their surface, which indicates the atopic nature of the disease.

Пример 3.Example 3

Мальчик Н., 12 лет, проходил диспансеризацию.Boy N., 12 years old, underwent medical examination.

Наследственность по аллергическим заболеваниям не отягощена.Heredity for allergic diseases is not burdened.

У ребенка никогда не отмечается клинических проявлений атопических заболеваний.The child never has clinical manifestations of atopic diseases.

Для получения взвеси лимфоцитов из вены бралось 5-8 мл крови в пробирку с антикоагулянтом. Содержимое пробирок разводили буферным раствором в 2 раза. Выделение лимфоцитов проводили с помощью центрифугирования на градиенте плотности фиколл-урографина 1,077 г/см3 (ПанЭко) при 1500 об/мин в течение 30 мин при t 4°C. Выделенные лимфоциты дважды отмывали в буферном растворе при 1200 об/мин при t 4°С в течение 10 мин. После этого к 100 мкл взвеси лимфоцитов добавлялось 5 мкл моноклональных антител (CD 23 (РЕ) и CD 19 (FITS)). Клетки инкубировались в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут, затем отмывались центрифугированием с 2 мл буферного раствора и ресуспензировались в 0,5 мл буферного раствора. Анализ образцов проводился на проточном цитометре. Для подсчета положительных меток использовалась программа Cell Quest. Исследовалось лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяции лимфоцитов, выявленной по светорассеянию и флюоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14).To obtain a suspension of lymphocytes from a vein, 5-8 ml of blood was taken into a test tube with an anticoagulant. The contents of the tubes were diluted with a buffer solution in 2 times. The selection of lymphocytes was carried out by centrifugation on a density gradient of ficoll-urografin 1,077 g / cm 3 (PanEco) at 1500 rpm for 30 min at t 4 ° C. The isolated lymphocytes were washed twice in a buffer solution at 1200 rpm at t 4 ° C for 10 min. Thereafter, 5 μl of monoclonal antibodies (CD 23 (PE) and CD 19 (FITS)) were added to 100 μl of the suspension of lymphocytes. Cells were incubated in the dark at room temperature for 15 minutes, then washed by centrifugation with 2 ml of buffer solution and resuspended in 0.5 ml of buffer solution. Analysis of the samples was carried out on a flow cytometer. Cell Quest was used to count positive marks. The lymphocyte window was examined according to the typical location of the lymphocyte population identified by light scattering and the fluorescent label LeukoGate (CD 45/14).

Таблица 3Table 3 В лимфоциты CD 19In lymphocytes CD 19 CD 19 и CD 23CD 19 and CD 23 11eleven 7,77.7

Расчет в составе В лимфоцитов популяции клеток с рецептором к Ig E по формуле:Calculation in the composition of B lymphocytes of a population of cells with a receptor for Ig E according to the formula:

((CD19 CD23)/(CD19))×100%=7,7/11×100%=70%((CD19 CD23) / (CD19)) × 100% = 7.7 / 11 × 100% = 70%

Данный клинический пример показывает, что у детей, не склонных к атопии органов дыхания, в составе В лимфоцитов меньше клеток, несущих рецептор к IgE по сравнению с детьми, у которых в основе заболевания лежит атопический процесс.This clinical example shows that in children who are not prone to atopy of the respiratory system, B lymphocytes contain fewer cells that carry the IgE receptor compared to children who have the atopic process at the heart of the disease.

Заявленное изобретение позволяет произвести достоверную диагностику атопической формы бронхиальной астмы в более короткий срок в связи с тем, что проточную цитометрию проводят с одновременным вводом двух моноклональных антител CD 23 и CD 19, что сокращает время проведения анализа. Кроме этого заявляемый способ позволяет определять наличие атопической формы бронхиальной астмы в самом начале заболевания, когда клинические признаки выражены незначительно.The claimed invention allows for reliable diagnosis of atopic forms of bronchial asthma in a shorter time due to the fact that flow cytometry is performed with the simultaneous introduction of two monoclonal antibodies CD 23 and CD 19, which reduces the analysis time. In addition, the claimed method allows to determine the presence of atopic forms of bronchial asthma at the very beginning of the disease, when the clinical signs are slightly expressed.

Claims (1)

Способ диагностики атопической формы бронхиальной астмы у детей, включающий исследование крови, отличающийся тем, что из пробы венозной крови выделяют лимфоциты, добавляют к ним одновременно моноклональные антитела CD23 и CD19, инкубируют смесь при комнатной температуре, подсчитывают на проточном цитометре количество клеток с меткой (CD19) и клеток с двойной меткой (CD19 CD23), рассчитывают индекс аллергического воспаления по формулеA method for diagnosing atopic forms of bronchial asthma in children, including a blood test, characterized in that lymphocytes are isolated from a venous blood sample, monoclonal antibodies CD23 and CD19 are added to them, the mixture is incubated at room temperature, the number of cells with a label is counted on a flow cytometer (CD19 ) and double-labeled cells (CD19 CD23), calculate the index of allergic inflammation according to the formula ((CD19 CD23)/(CD19))·100%,((CD19 CD23) / (CD19)) 100%, при индексе большем 70% диагностируют атопическую форму бронхиальной астмы.with an index greater than 70%, an atopic form of bronchial asthma is diagnosed.
RU2007122088/15A 2007-06-15 2007-06-15 Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children RU2339951C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007122088/15A RU2339951C1 (en) 2007-06-15 2007-06-15 Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007122088/15A RU2339951C1 (en) 2007-06-15 2007-06-15 Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2339951C1 true RU2339951C1 (en) 2008-11-27

Family

ID=40193287

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007122088/15A RU2339951C1 (en) 2007-06-15 2007-06-15 Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2339951C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2780687C1 (en) * 2021-06-07 2022-09-29 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" Method for diagnosing allergic bronchial asthma

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SEARS M.R. и др. Relation between airway responsiveness and serum IgE in children with asthma and in apparently normal children. N. Engl. J. Med., 1991, Oct., 10, V.325, №15, рр.1067-1071. ABERIE N. и др. Expression of CD23 antigen and its ligands in children with intrinsic and extrinsic asthma., 1997, Des., v 52, №12, pp.1238-1242. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2780687C1 (en) * 2021-06-07 2022-09-29 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" Method for diagnosing allergic bronchial asthma
RU2786010C1 (en) * 2022-01-11 2022-12-15 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО УГМУ Минздрава России) Method for diagnosis of allergic severe bronchial asthma

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Vieira et al. COVID-19: laboratory diagnosis for clinicians. An updating article
Rakes et al. Rhinovirus and respiratory syncytial virus in wheezing children requiring emergency care: IgE and eosinophil analyses
JP2002515974A (en) Rapid assay for neonatal infection
Jing et al. Passive smoking induces pediatric asthma by affecting the balance of Treg/Th17 cells
Kim et al. Bronchoalveolar lavage cellular composition in acute asthma and acute bronchiolitis
Raimondi et al. Automated determination of neutrophil volume as screening test for late-onset sepsis in very low birth infants
Chawes Low-grade disease activity in early life precedes childhood asthma and allergy
Ruan et al. Frequencies of abnormal humoral and cellular immune component levels in peripheral blood of patients with recurrent aphthous ulceration
Motghare et al. Efficacy and accuracy of ABO blood group determination from saliva
US20100209950A1 (en) Granulocyte-based methods for detecting and monitoring immune system disorders
Sanz et al. Serum eosinophil peroxidase (EPO) levels in asthmatic patients
Shibasaki et al. Relation between frequency of asthma and IgE antibody levels against Dermatophagoides farinae and total serum IgE levels in schoolchildren
RU2407451C1 (en) Method of diagnosing bronchial asthma in children of early age using data of induces sputum cytology
RU2339951C1 (en) Method for diagnostics of allergic form of bronchial asthma at children
Okazaki et al. Prostglandin E in the secretions of allergic rhinitis
Strope et al. Risk factors associated with the development of chronic lung disease in children
CN110488012A (en) A kind of auxiliary diagnostic box of pneumonia of newborn and application
Fuse et al. Children with Kawasaki disease are not infected with Epstein-Barr virus
Hassan et al. T-helper2/T-helper1 imbalance in respiratory syncytial virus bronchiolitis in relation to disease severity and outcome
Liao et al. Evaluation of the Diagnostic Value of Peripheral Blood Parameters for Neonatal Pneumonia.
JP2009210554A (en) Examination method and diagnosis kit for various diseases
RU2305838C1 (en) Method for predicting repeated respiratory diseases occurrence in early age children subjected to frequent and prolonged acute respiratory diseases
RU2780687C1 (en) Method for diagnosing allergic bronchial asthma
Ojo et al. C-reactive protein in tuberculosis and human immunodeficiency virus infections in Abeokuta, Nigeria
RU2008687C1 (en) Method for diagnosing delayed allergic reaction

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20110616