RU2330674C1 - Method of intensification of stem cells mobilisation - Google Patents
Method of intensification of stem cells mobilisation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2330674C1 RU2330674C1 RU2006140032/14A RU2006140032A RU2330674C1 RU 2330674 C1 RU2330674 C1 RU 2330674C1 RU 2006140032/14 A RU2006140032/14 A RU 2006140032/14A RU 2006140032 A RU2006140032 A RU 2006140032A RU 2330674 C1 RU2330674 C1 RU 2330674C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyaluronidase
- peripheral blood
- bone marrow
- background
- stem cells
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области экспериментальной биологии и медицине, конкретно к клеточным технологиям и фармакологии.The invention relates to the field of experimental biology and medicine, specifically to cellular technologies and pharmacology.
Известно, что экстремальные воздействия и развитие определенных заболеваний сопровождаются активацией механизмов адаптации «глубокого» резерва, связанных со стволовыми клетками (СК) [1, 2, 3, 4, 5]. При этом зачастую может происходить мобилизация в кровь тех или иных клеток-предшественников, способных в дальнейшем участвовать в регенерации пораженных органов-мишеней. Причем активация указанных механизмов в ряде случаев оказывается недостаточной для «успешной» адаптации организма [1, 4, 5].It is known that extreme effects and the development of certain diseases are accompanied by activation of adaptation mechanisms of the “deep” reserve associated with stem cells (SC) [1, 2, 3, 4, 5]. In this case, mobilization of certain progenitor cells into the blood can often take place, which can subsequently participate in the regeneration of affected target organs. Moreover, the activation of these mechanisms in some cases is insufficient for the "successful" adaptation of the body [1, 4, 5].
Известны способы фармакологической мобилизации различных типов стволовых клеток, применяемые в эксперименте с целью разработки перспективных методов лечения заболеваний, с помощью различных цитокинов: гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) [1, 3, 6], фактора стволовой клетки (ФСК) [7], пептида-аналога SDF-1-фактора (СТСЕ-0214) [8] и пр. факторов (ГМ-ГСФ, ИЛ-2, ИЛ-8, ИЛ-11, MIP-1, 2, эритропоэтин, тромбопоэтин [6]). При этом самым распространенным (в связи с его эффективностью и безопасностью) является способ мобилизации СК с помощью Г-КСФ. В то же время для достижения более значимого мобилизирующего эффекта исследователи применяют и комбинации различных цитокинов [9]. Однако даже комплексное использование факторов, входящих в когорту, стимулирующих мобилизацию СК, дает весьма неоднозначные результаты [6].Known methods of pharmacological mobilization of various types of stem cells used in the experiment to develop promising methods of treating diseases using various cytokines: granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) [1, 3, 6], stem cell factor (FSK) [7] peptide analogue of SDF-1 factor (CCE-0214) [8] and other factors (GM-GSF, IL-2, IL-8, IL-11, MIP-1, 2, erythropoietin, thrombopoietin [6] ) In this case, the most common (due to its effectiveness and safety) is the way to mobilize SC using G-CSF. At the same time, to achieve a more significant mobilizing effect, researchers also use combinations of various cytokines [9]. However, even the complex use of the factors included in the cohort, stimulating the mobilization of SC, gives very mixed results [6].
Адекватный прототип авторами не обнаружен.An adequate prototype was not found by the authors.
В связи с вышеизложенным усиление мобилизации СК при экстремальных воздействиях и определенных заболеваниях, а также при воздействиях различных фармакологических модификаторов функциональной активности СК представляется актуальной задачей, решение которой, в свою очередь, может стать важным этапом в повышении эффективности терапии различных заболеваний.In connection with the foregoing, enhancing the mobilization of SC in extreme conditions and certain diseases, as well as under the influence of various pharmacological modifiers of the functional activity of SC, is an urgent task, the solution of which, in turn, can be an important step in improving the effectiveness of treatment of various diseases.
Задачей, решаемой данным изобретением, является повышение уровня мобилизации стволовых клеток при экстремальных воздействиях, патологических состояниях и при введении в организм факторов, вызывающих мобилизацию стволовых клеток.The problem solved by this invention is to increase the level of stem cell mobilization under extreme conditions, pathological conditions and with the introduction into the body of factors that cause stem cell mobilization.
Поставленная задача достигается тем, что при экстремальных воздействиях и патологических состояниях, сопровождающихся мобилизацией стволовых клеток, либо при введении в организм факторов, вызывающих мобилизацию стволовых клеток, внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2 дней вводят гиалуронидазу в дозе 500-1500 УЕ/кг.The task is achieved by the fact that in extreme conditions and pathological conditions accompanied by mobilization of stem cells, or when factors causing mobilization of stem cells are introduced into the body, hyaluronidase is administered intraperitoneally once a day for 2 days at a dose of 500-1500 U / kg.
Новым в предлагаемом способе является введение 1 раз в сутки в течение 2 дней гиалуронидазы в дозе 500-1500 УЕ/кг.New in the proposed method is the introduction of 1 time per day for 2 days of hyaluronidase at a dose of 500-1500 UE / kg
В настоящее время весьма перспективными для лечения различных заболеваний представляются способы клеточной терапии, в том числе и с помощью фармакологических агентов, способных регулировать функции стволовых клеток. Вместе с тем на сегодняшний день известна важная роль гиалуроновой кислоты (ГК) в регуляции функционального состояния различных типов стволовых клеток. ГК является наиболее распространенным гликозаминогликаном (ГАГ), участвующим в образовании межклеточного матрикса различных тканей, в том числе и костного мозга [10, 11, 12]. При этом стволовые клетки и клетки-предшественники различной степени зрелости in situ связаны с гиалуронатом через CD44 и RHAMM-рецепторы [13, 14]. Участие гиалуроновой кислоты в реализации процесса мобилизации СК до сих пор остается не изученным. Известен фермент, расщепляющий ГК - гиалуронидаза, введение которого способно нарушать энграфтинг экзогенных СК в костный мозг [13], но абсолютно не известна возможность гиалуронидазы влиять на выход клеточных элементов из органов гемопоэза в кровь.At present, methods of cell therapy seem to be very promising for the treatment of various diseases, including with the help of pharmacological agents capable of regulating stem cell functions. At the same time, the important role of hyaluronic acid (HA) in the regulation of the functional state of various types of stem cells is known today. HA is the most common glycosaminoglycan (GAG) involved in the formation of the intercellular matrix of various tissues, including bone marrow [10, 11, 12]. In this case, stem cells and progenitor cells of varying degrees of maturity in situ are associated with hyaluronate via CD44 and RHAMM receptors [13, 14]. The participation of hyaluronic acid in the implementation of the process of mobilization of SC is still not studied. A known enzyme that breaks down HA is hyaluronidase, the introduction of which can disrupt the engrafting of exogenous SCs in the bone marrow [13], but the possibility of hyaluronidase to influence the output of cellular elements from hematopoietic organs into the blood is absolutely not known.
Диапазон доз гиалуронидазы, предлагаемых в заявленном изобретении, был определен как эффективный и выявлен в отдельных сериях экспериментов. Отсутствие самостоятельного мобилизирующего эффекта гиалуронидазы в отношении СК было показано в предварительных экспериментах.The range of doses of hyaluronidase proposed in the claimed invention was determined to be effective and identified in separate series of experiments. The lack of an independent mobilizing effect of hyaluronidase in relation to SC was shown in preliminary experiments.
Факт применения гиалуронидазы с целью усиления мобилизации СК при экстремальных воздействиях и патологических состояниях, а также при воздействиях различных фармакологических модификаторов функциональной активности СК для специалиста не является очевидным и не вытекает явным образом из уровня техники в данной области. Новые признаки позволяют повысить эффективность способа мобилизации стволовых клеток, и предлагаемое изобретение может быть использовано в экспериментальной биологии и медицине с выходом в практическое здравоохранение для создания новых эффективных способов клеточной терапии. Идентичной совокупности признаков при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе не обнаружено.The fact of the use of hyaluronidase in order to enhance the mobilization of SC in extreme conditions and pathological conditions, as well as under the influence of various pharmacological modifiers of the functional activity of SC for a specialist is not obvious and does not follow explicitly from the prior art in this field. New signs can improve the efficiency of the method of mobilization of stem cells, and the present invention can be used in experimental biology and medicine with access to practical health care to create new effective methods of cell therapy. An identical set of features was not found in the study of the state of the art in patent and medical literature.
Исходя из вышеизложенного следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Лабораторному животному (мыши) при экстремальном воздействии, либо при патологическом состоянии, сопровождающемся мобилизацией стволовых клеток, либо при введении в организм факторов, вызывающих мобилизацию стволовых клеток, внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2 дней вводят гиалуронидазу в дозе 500-1500 УЕ/кг.In an extreme exposure, or in a pathological condition accompanied by stem cell mobilization, or when factors causing stem cell mobilization are introduced into a laboratory animal (mouse), hyaluronidase is administered intraperitoneally once a day for 2 days at a dose of 500-1500 UE / kg .
Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на мышах линии CBA/CaLac в количестве 678 штук, массой 18-20 г. Мыши 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется).The proposed method was studied in experiments on CBA / CaLac mice in the amount of 678 pieces, weighing 18-20 g. Category 1 mice (conventional linear mice) were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Scientific Research Institute of Pharmacology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences (certificate is available).
В качестве экстремальных воздействий были выбраны модели, абсолютно отличающиеся по вызывающим их причинам, различные по механизмам развивающихся изменений на разных уровнях организации, а также эффектам и исходам: иммобилизационный стресс (ИС), представляющий собой «ярко» выраженное гемопоэзстимулирующее воздействие, - 12-часовая иммобилизация мягкими вязками в положении лежа на спине [15] и цитостатическая миелосупрессия, вызванная однократным внутрибрюшинным введением максимально переносимой дозы циклофосфана (250 мг/кг) [16].As extreme impacts, models were selected that are completely different for the reasons that cause them, different in the mechanisms of developing changes at different levels of the organization, as well as effects and outcomes: immobilization stress (IS), which is a “pronounced” hematopoietic stimulating effect, - 12-hour soft binding immobilization in the supine position [15] and cytostatic myelosuppression caused by a single intraperitoneal injection of the maximum tolerated dose of cyclophosphamide (250 mg / kg) [16].
При этом в костном мозге и периферической крови на 3-и сутки при ИС и на 5-е сут при цитостатическом воздействии методом клонирования в полувязкой среде определяли содержание коммитированных мезенхимальных клеток-предшественников - фибробластных колониеобразующих единиц (КОЕ-Ф) и стволовых кроветворных клеток (СКК) - гранулоцитарно-эритро-макрофагально-мегакариоцитарных единиц (КОЕ-ГЭММ) [17], а также на 3-и сутки опыта с помощью метода лимитирующих разведений - количество мезенхимальных (истинных) стволовых клеток (МСК) [3, 18].At the same time, in the bone marrow and peripheral blood on the 3rd day with IP and on the 5th day with cytostatic exposure, the content of committed mesenchymal progenitor cells — fibroblast colony forming units (CFU-F) and hematopoietic stem cells ( CCM) - granulocyte-erythro-macrophage-megakaryocytic units (CFU-HEMM) [17], as well as on the 3rd day of the experiment using the method of limiting dilutions — the number of mesenchymal (true) stem cells (MSCs) [3, 18].
В качестве моделей патологических состояний были выбраны заболевания, занимающие основное место в структуре общей заболеваемости и социальной значимости. При этом выбранные модели заболеваний: постгипоксическая энцефалопатия [1], инфаркт миокарда [3] и хронический токсический гепатит [2] существенно отличаются между собой по этиологии и патогенезу. Указанное обстоятельство (в связи со схожестью многих звеньев патогенеза при различных заболеваниях и наличием единых регуляторных и адаптивных механизмов макроорганизма) дает возможность во многом экстраполировать получаемые на данных моделях результаты на большинство известных патологических состояний.As models of pathological conditions, diseases were selected that occupy a major place in the structure of general morbidity and social significance. Moreover, the selected disease models: posthypoxic encephalopathy [1], myocardial infarction [3] and chronic toxic hepatitis [2] differ significantly in etiology and pathogenesis. This circumstance (due to the similarity of many links of pathogenesis in various diseases and the presence of uniform regulatory and adaptive mechanisms of the macroorganism) makes it possible to extrapolate the results obtained on these models to the majority of known pathological conditions.
На данных моделях патологии в костном мозге и периферической крови в каждом случае в определенные сроки (указанные в конкретных примерах) при инфаркте миокарда с помощью метода лимитирующих разведений определяли количество МСК [3, 18], при экспериментальном гепатите оценивали содержание МСК и КОЕ-Ф [9], а при энцефалопатии определяли число МСК, СКК (КОЕ-ГЭММ) и КОЕ-Ф [3, 9, 18].In these models of pathology in the bone marrow and peripheral blood, in each case, at certain times (indicated in specific examples), the number of MSCs was determined using myocardial infarction with the method of limiting dilutions [3, 18], and the content of MSCs and CFU-F were evaluated in experimental hepatitis [ 9], and in encephalopathy the number of MSCs, CCMs (CFU-HEMM) and CFU-F were determined [3, 9, 18].
Для фармакологической мобилизации СК использовали: Г-КСФ в дозе 125 мкг/кг [1, 3], ФСК в дозе 50 мкг/кг [7], пептид-аналог SDF-1-фактора - СТСЕ-0214 в дозе 10 мг/кг [8] и совместное назначение Г-КСФ и ФСК в указанных дозах. Выбор цитокинов был основан на различных спектрах их специфической активности, механизмов действия, биологическом назначении и способности вызывать мобилизацию различных типов СК.For pharmacological mobilization of SC, we used: G-CSF at a dose of 125 μg / kg [1, 3], FSK at a dose of 50 μg / kg [7], peptide-analogue of SDF-1 factor — STCE-0214 at a dose of 10 mg / kg [8] and co-administration of G-CSF and FSK in the indicated doses. The choice of cytokines was based on various spectra of their specific activity, mechanisms of action, biological purpose and ability to cause the mobilization of various types of SC.
При этом при введении Г-КСФ, ФСК и при их совместном введении определяли количество МСК, КОЕ-Ф и СКК (КОЕ-ГЭММ) в костном мозге и периферической крови, а при введении СТСЕ-0214 только содержание СКК (КОЕ-ГЭММ).In this case, with the introduction of G-CSF, FSK and with their combined administration, the amount of MSC, CFU-F and CCM (CFU-HEMM) in the bone marrow and peripheral blood was determined, and with the introduction of CTC-0214 only the content of CCM (CFU-GEMM) was determined.
Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Вил-коксона-Манна-Уитни.The results were processed by the method of variation statistics using the Student t-test and the nonparametric Wil-Coxon-Mann-Whitney U-test.
Пример 1.Example 1
Иммобилизационный стресс (ИС) у животных вызывали путем 12-часовой иммобилизации на спине с помощью мягких вязок. При этом опытным животным сразу после воздействия 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Immobilization stress (IS) in animals was induced by 12-hour immobilization on the back using soft bindings. At the same time, experimental animals immediately after exposure 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
В ходе эксперимента иммобилизационный стресс на 3-и сутки после воздействия приводил к повышению в костном мозге количества КОЕ-Ф и СКК. При этом в периферической крови наблюдалось увеличение содержания стволовых кроветворных клеток до 191,7% от фона. В то же время введение гиалуронидазы в дозе 500 УЕ/кг достоверно увеличивало по отношению к контролю как КОЕ-Ф, так и СКК в периферической крови, а также приводило к возрастанию числа циркулирующих МСК до 200% от фона (табл.1).During the experiment, immobilization stress on the 3rd day after exposure led to an increase in the number of CFU-F and CCM in the bone marrow. Moreover, an increase in the content of stem hematopoietic cells to 191.7% of the background was observed in peripheral blood. At the same time, the administration of hyaluronidase at a dose of 500 UE / kg significantly increased both CFU-F and CCM in the peripheral blood relative to the control, and also led to an increase in the number of circulating MSCs to 200% of the background (Table 1).
Таким образом, двукратное введение гиалуронидазы в дозе 500 УЕ/кг на фоне моделирования иммобилизационного стресса приводило к возрастанию в периферической крови как мезенхимальных клеток-предшественников различной степени зрелости (в том числе МСК), так и стволовых кроветворных клеток.Thus, the double administration of hyaluronidase at a dose of 500 U / kg against the background of simulating immobilization stress led to an increase in the peripheral blood of both mesenchymal progenitor cells of various maturity levels (including MSCs) and hematopoietic stem cells.
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при иммобилизационном стрессе и при введении 500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне иммобилизационного стресса (М±m)Table 1
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with immobilization stress and with the introduction of 500 U / kg of hyaluronidase against immobilization stress (M ± m)
Пример 2.Example 2
Иммобилизационный стресс у животных вызывали путем 12-часовой иммобилизации на спине с помощью мягких вязок. При этом опытным животным сразу после воздействия 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Immobilization stress in animals was induced by 12-hour immobilization on the back using soft bindings. At the same time, experimental animals immediately after exposure 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
Введение гиалуронидазы в дозе 1500 УЕ/кг при моделировании иммобилизационного стресса сопровождалось достоверным увеличением содержания КОЕ-Ф и СКК в периферической крови относительно контроля (до 253,5% и 130,7% соответственно) (табл.2).The introduction of a dose of 1500 UE / kg of hyaluronidase when modeling immobilization stress was accompanied by a significant increase in the content of CFU-F and CCM in the peripheral blood relative to the control (up to 253.5% and 130.7%, respectively) (Table 2).
Пример 3.Example 3
Миелосупрессию вызывали однократным внутрибрюшинным введением циклофосфана (ЦФ) в МПД. При этом опытным животным на фоне введения цитостатика 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Myelosuppression was caused by a single intraperitoneal injection of cyclophosphamide (CF) into the MTD. At the same time, against the background of the introduction of cytostatic 1 time per day for 2 days, hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Mikrogen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) was administered intraperitoneally at a dose of 500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
Введение циклофосфана приводило к снижению содержания в костном мозге коммитированных мезенхимальных клеток-предшественников и, напротив, увеличению количества в гемопоэтической ткани СКК и МКС на 5-е сутки эксперимента. В периферической крови наблюдалось увеличение содержания КОЕ-Ф и стволовых кроветворных клеток. При этом назначение гиалуронидазы сопровождалось выраженным увеличением выхода коммитированных мезенхимальных клеток-предшественников и СКК (табл.3).The introduction of cyclophosphamide led to a decrease in the content of committed mesenchymal progenitor cells in the bone marrow and, on the contrary, an increase in the number of HSCs and ISS in the hematopoietic tissue on the 5th day of the experiment. In the peripheral blood, an increase in the content of CFU-F and hematopoietic stem cells was observed. In this case, the appointment of hyaluronidase was accompanied by a pronounced increase in the yield of committed mesenchymal progenitor cells and SSCs (Table 3).
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при иммобилизационном стрессе и при введении 1500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне иммобилизационного стресса (М±m)table 2
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with immobilization stress and with the introduction of 1500 UE / kg of hyaluronidase against immobilization stress (M ± m)
Таким образом, двукратное введение гиалуронидазы в дозе 500 УЕ/кг на фоне цитостатического воздействия приводило к возрастанию в периферической крови определенных типов стволовых клеток.Thus, a twofold administration of hyaluronidase at a dose of 500 U / kg against a background of cytostatic exposure led to an increase in certain types of stem cells in the peripheral blood.
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при цитостатическом воздействии и при введении 500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне миелосупрессии (М±m)Table 3
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with cytostatic effects and with the introduction of 500 UE / kg of hyaluronidase against the background of myelosuppression (M ± m)
Пример 4.Example 4
Миелосупрессию вызывали однократным внутрибрюшинным введением циклофосфана (ЦФ) в МПД. При этом опытным животным на фоне введения цитостатика 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Myelosuppression was caused by a single intraperitoneal injection of cyclophosphamide (CF) into the MTD. At the same time, against the background of cytostatic administration, once a day for 2 days, hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Mikrogen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) was administered intraperitoneally at a dose of 1500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
Введение гиалуронидазы в дозе 1500 УЕ/кг приводило к увеличению количества КОЕ-Ф и СКК в костном мозге. При этом, однако, имела место мобилизация в периферическую кровь лишь СКК (до 194,9% от контроля), но на аналогичном уровне таковой при введении гиалуронидазы в дозе 500 УЕ/кг (табл.4).The introduction of a dose of 1500 UE / kg of hyaluronidase led to an increase in the number of CFU-F and CCM in the bone marrow. In this case, however, only CCM was mobilized into the peripheral blood (up to 194.9% of the control), but at a similar level with the introduction of hyaluronidase at a dose of 500 U / kg (Table 4).
Таким образом, двукратное введение гиалуронидазы в дозе 1500 УЕ/кг на фоне цитостатического воздействия приводило к возрастанию в периферической крови стволовых кроветворных клеток.Thus, a twofold administration of hyaluronidase at a dose of 1500 U / kg against a background of cytostatic exposure led to an increase in hematopoietic stem cells in the peripheral blood.
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при цитостатическом воздействии и при введении 1500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне миелосупрессии (М±m)Table 4
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with cytostatic effects and with the introduction of 1500 UE / kg of hyaluronidase against myelosuppression (M ± m)
Пример 5.Example 5
Постгипоксическую энцефалопатию моделировали с помощью гермокамеры объемом 500 мл. Мыши помещались в гермокамеру, крышка закрывалась, и мыши оставались там до агонального судорожного припадка или остановки дыхания, определяемой визуально, в течение 10-15 секунд. После извлечения из гермокамеры и восстановления самостоятельного дыхания, через 5-10 минут, мыши вновь помещались в гермокамеру также до наступления агонального состояния (генерализованного судорожного припадка или остановки дыхания). При этом опытным животным сразу после моделирования энцефалопатии 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Posthypoxic encephalopathy was modeled using a 500 ml pressure chamber. The mice were placed in a pressure chamber, the lid was closed, and the mice remained there until an agonal seizure or respiratory arrest, as determined visually, for 10-15 seconds. After extracting from the pressure chamber and restoring spontaneous breathing, after 5-10 minutes, the mice were again placed in the pressure chamber also before the onset of the agonal state (generalized seizure or respiratory arrest). At the same time, experimental animals immediately after encephalopathy modeling 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
Развитие энцефалопатии на 5-е сутки опыта приводило к увеличению числа в костном мозге как мезенхимальных клеток-предшественников различной степени зрелости, так и еще в большей степени количества СКК. При этом статистически значимая мобилизация происходила только в отношении стволовых кроветворных клеток (до 327,5% от фона). Отмечалась и четкая тенденция к увеличению содержания МСК в периферической крови (до 166,7% от фона), однако статистической достоверности данные изменения не достигали. Введение гиалуронидазы увеличивало содержание КОЕ-Ф в гемопоэтической ткани, а также способствовало их усиленному выходу в кровь. Кроме того, фермент значительно повышал количество СКК в периферической крови и приводил к развитию феномена мобилизации МСК (табл.5).The development of encephalopathy on the 5th day of the experiment led to an increase in the number in the bone marrow of mesenchymal progenitor cells of varying degrees of maturity, and even more of the number of CCMs. Moreover, statistically significant mobilization occurred only in relation to stem hematopoietic cells (up to 327.5% of the background). There was also a clear tendency towards an increase in the content of MSCs in peripheral blood (up to 166.7% of the background), however, these changes did not reach statistical significance. The introduction of hyaluronidase increased the content of CFU-F in the hematopoietic tissue, and also contributed to their enhanced release into the blood. In addition, the enzyme significantly increased the amount of CCM in peripheral blood and led to the development of the phenomenon of mobilization of MSCs (Table 5).
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при развитии энцефалопатии и при введении 500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне моделирования энцефалопатии (М±m)Table 5
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with the development of encephalopathy and with the introduction of 500 UE / kg of hyaluronidase against the background of modeling encephalopathy (M ± m)
Пример 6.Example 6
Постгипоксическую энцефалопатию моделировали с помощью гермокамеры объемом 500 мл. Мыши помещались в гермокамеру, крышка закрывалась, и мыши оставались там до агонального судорожного припадка или остановки дыхания, определяемой визуально, в течение 10-15 секунд. После извлечения из гермокамеры и восстановления самостоятельного дыхания, через 5-10 минут, мыши вновь помещались в гермокамеру также до наступления агонального состояния (генерализованного судорожного припадка или остановки дыхания). При этом опытным животным сразу после моделирования энцефалопатии 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора. Введение гиалуронидазы в дозе 1500 УЕ/кг сопровождалось увеличением в гемопоэтической ткани на 5-е сутки не только КОЕ-Ф, но и МСК, и также как при применении более низкой дозы способствовало их усиленному выходу в кровь (табл.6).Posthypoxic encephalopathy was modeled using a 500 ml pressure chamber. The mice were placed in a pressure chamber, the lid was closed, and the mice remained there until an agonal seizure or respiratory arrest, as determined visually, for 10-15 seconds. After extracting from the pressure chamber and restoring spontaneous breathing, after 5-10 minutes, the mice were again placed in the pressure chamber also before the onset of the agonal state (generalized seizure or respiratory arrest). At the same time, experimental animals immediately after encephalopathy modeling 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Mikrogen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline. The introduction of hyaluronidase at a dose of 1500 UE / kg was accompanied by an increase in hematopoietic tissue on the 5th day, not only CFU-F, but also MSCs, and, as with a lower dose, contributed to their enhanced release into the blood (Table 6).
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при развитии энцефалопатии и при введении 1500 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне моделирования энцефалопатии (М±m)Table 6
The content of various types of stem cells in the bone marrow and peripheral blood during the development of encephalopathy and with the introduction of 1500 UE / kg of hyaluronidase against the background of modeling encephalopathy (M ± m)
Таким образом, гиалуронидаза приводила к увеличению степени мобилизации всех изучаемых типов стволовых клеток на фоне развития неоднозначных изменений их содержания в костном мозге.Thus, hyaluronidase led to an increase in the degree of mobilization of all the studied types of stem cells against the background of the development of ambiguous changes in their content in the bone marrow.
Пример 7.Example 7
Инфаркт миокарда моделировали внутривенным введением адреналина в дозе 0,25 мг/кг [3] в собственной модификации. При этом опытным животным сразу после моделирования энцефалопатии 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1000 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Myocardial infarction was modeled by the intravenous administration of adrenaline at a dose of 0.25 mg / kg [3] in its own modification. At the same time, experimental animals immediately after encephalopathy modeling 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1000 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
Моделирование инфаркта миокарда приводило к увеличению количества МСК в костном мозге и периферической крови. При этом, однако, введение гиалуронидазы более значительно усиливало выход МСК в периферическую кровь на фоне отсутствия изменений со стороны костномозгового пула МСК (табл.7).Simulation of myocardial infarction led to an increase in the number of MSCs in bone marrow and peripheral blood. However, the introduction of hyaluronidase more significantly increased the release of MSCs in the peripheral blood against the background of the absence of changes in the bone marrow pool of MSCs (Table 7).
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при инфаркте миокарда и при введении 1000 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне моделирования инфаркта миокарда (М±m)Table 7
The content of various types of stem cells in bone marrow and peripheral blood with myocardial infarction and with the introduction of 1000 UE / kg of hyaluronidase against the background of modeling myocardial infarction (M ± m)
Таким образом, введение гиалуронидазы усиливало мобилизацию мезенхимальных стволовых клеток в периферическую кровь.Thus, the introduction of hyaluronidase enhanced the mobilization of mesenchymal stem cells in peripheral blood.
Пример 8.Example 8
У мышей хронический гепатит (ХГ) моделировали внутрижелудочным введением тетрахлоруглерода (ТХУ) в виде 20% раствора на оливковом масле в объеме 0,2 мл/мышь живого веса в течение трех недель дважды в неделю [2]. При этом опытным животным сразу после моделирования ХГ 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1000 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным внутрибрюшинно вводили 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.In mice, chronic hepatitis (CG) was modeled by intragastric administration of tetrachlorocarbon (TCA) in the form of a 20% solution in olive oil in a volume of 0.2 ml / mouse live weight for three weeks twice a week [2]. At the same time, experimental animals immediately after HG modeling 1 time per day for 2 days were injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Mikrogen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1000 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were intraperitoneally injected 1 time per day for 2 days with 0.5 ml of physiological saline.
В контрольной группе было обнаружено увеличение количества в костномозговой ткани КОЕ-Ф на 7-е сутки после последнего введения ТХУ, в состав которых входят как предшественники стромальных элементов, так и истинные СК, что подтверждалось возрастанием числа МСК в гемопоэтической ткани в те же сроки наблюдения. Кроме того, отмечалось увеличение содержания клеток-предшественников фибробластов и МСК в периферической крови, свидетельствующее о мобилизации стволовых клеток различной степени зрелости при данном виде воздействия, представляющем по своей сути экстремальное воздействие. При этом введение гиалуронидазы сопровождалось увеличением в гемопоэтической ткани в исследуемые сроки КОЕ-Ф на фоне резкого возрастания числа КОЕ-Ф и МСК в периферической крови (табл.8).In the control group, an increase in the number of CFU-F in bone marrow tissue was detected on the 7th day after the last TCA administration, which included both precursors of stromal elements and true SC, which was confirmed by an increase in the number of MSCs in hematopoietic tissue at the same observation time . In addition, there was an increase in the content of fibroblast and MSC progenitor cells in peripheral blood, indicating mobilization of stem cells of varying degrees of maturity with this type of exposure, which is essentially an extreme effect. In this case, the introduction of hyaluronidase was accompanied by an increase in hematopoietic tissue in the studied period of CFU-F against the background of a sharp increase in the number of CFU-F and MSC in peripheral blood (Table 8).
Содержание различных типов стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при развитии хронического гепатита и при введении 1000 УЕ/кг гиалуронидазы на фоне моделирования гепатита (М±m)Table 8
The content of various types of stem cells in the bone marrow and peripheral blood during the development of chronic hepatitis and with the introduction of 1000 UE / kg of hyaluronidase against the background of hepatitis modeling (M ± m)
Таким образом, введение гиалуронидазы при экспериментальном гепатите приводило к увеличению выхода в кровь мезенхимальных клеток-предшественников различной степени зрелости.Thus, the introduction of hyaluronidase in experimental hepatitis led to an increase in the release into the blood of mesenchymal progenitor cells of varying degrees of maturity.
Пример 9.Example 9
Опытным экспериментальным интактным животным на фоне введения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора («Нейпоген», Hoffman-la-Roche, Щвейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 3 дней дополнительно 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным вводили подкожно гранулоцитарный колониестимулирующий фактор («Нейпоген», Hoffman-la-Roche, Щвейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 3 дней в эквивалентном объеме (0,2 мл) и внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Hyaluronidase was administered intraperitoneally to experimental experimental intact animals on the background of the introduction of granulocyte colony stimulating factor (Neupogen, Hoffman-la-Roche, Switzerland) at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 3 days an additional 1 time per day for 2 days ( “Lidaza”, FSUE “NPO Microgen” of the Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). The control animals were injected subcutaneously with a granulocyte colony stimulating factor (Neupogen, Hoffman-la-Roche, Switzerland) at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 3 days in an equivalent volume (0.2 ml) and intraperitoneally 1 time per day for 2 days, 0.5 ml of saline.
В ходе эксперимента введение рчГ-КСФ приводило к снижению числа коммитированных клеток-предшественников в костном мозге на 4-е сутки после начала воздействия. При этом содержание МСК в костном мозге оставалось на уровне фоновых значений. Указанные изменения сопровождались достоверным увеличением в периферической крови числа МСК до 311,1% от фона, СКК до 201,6% от фона и КОЕ-Ф до 152,4% от фона. Дополнительное введение гиалуронидазы приводило к значительному накоплению МСК и КОЕ-Ф в костном мозге. Вместе с тем совместное применение рчГ-КСФ и гиалуронидазы сопровождалось существенно более выраженным возрастанием числа МСК (до 1000,0% от фона), СКК (до 386,6% от фона) и КОЕ-Ф (до 211,9% от фона) в периферической крови (табл.9).During the experiment, the administration of rhG-CSF led to a decrease in the number of committed progenitor cells in the bone marrow on the 4th day after the start of exposure. At the same time, the content of MSCs in the bone marrow remained at the level of background values. These changes were accompanied by a significant increase in the number of MSCs in peripheral blood to 311.1% of the background, CCM to 201.6% of the background, and CFU-F to 152.4% of the background. Additional administration of hyaluronidase led to a significant accumulation of MSCs and CFU-F in the bone marrow. However, the combined use of rhG-CSF and hyaluronidase was accompanied by a significantly more pronounced increase in the number of MSCs (up to 1000.0% of the background), CCM (up to 386.6% of the background) and CFU-F (up to 211.9% of the background) in peripheral blood (table 9).
Пример 10.Example 10
Опытным экспериментальным животным на фоне введения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора («Нейпоген», Hoffman-la-Roche, Щвейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней дополнительно 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1500 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным вводили подкожно гранулоцитарный колониестимулирующий фактор («Нейпоген», Hoffman-la-Roche, Щвейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней в эквивалентном объеме (0,2 мл) и внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 2 дней 0,5 мл физиологического раствора.Hyaluronidase was administered intraperitoneally to experimental experimental animals on the background of the introduction of a granulocyte colony-stimulating factor (Neupogen, Hoffman-la-Roche, Switzerland) at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 5 days for an additional 1 time per day for 2 days ( Lidaza ”, Federal State Unitary Enterprise“ NPO Microgen ”of the Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1500 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals were injected subcutaneously with a granulocyte colony-stimulating factor (Neupogen, Hoffman-la-Roche, Switzerland) at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 5 days in an equivalent volume (0.2 ml) and intraperitoneally 1 time per day for 2 days, 0.5 ml of saline.
Совместное применение рчГ-КСФ и 1500 УЕ/кг гиалуронидазы сопровождалось более выраженным возрастанием числа МСК, СКК и КОЕ-Ф в периферической крови относительно контрольных животных, получавших только рчГ-КСФ (но менее значимым по сравнению с группой мышей, которым дополнительно вводили 500 УЕ/кг гиалуронидазы) (см. табл.9).The combined use of rhG-CSF and 1,500 UE / kg of hyaluronidase was accompanied by a more pronounced increase in the number of MSCs, CCMs and CFU-F in peripheral blood relative to control animals receiving only rhG-CSF (but less significant compared to the group of mice that were additionally administered 500 UE / kg hyaluronidase) (see table 9).
Таким образом, введение гиалуронидазы на фоне назначения рчГ-КСФ интактным животным значительно повышает степень мобилизации различных типов стволовых клеток костного мозга в периферическую кровь.Thus, the introduction of hyaluronidase against the background of the administration of rhG-CSF to intact animals significantly increases the degree of mobilization of various types of bone marrow stem cells in peripheral blood.
Динамика содержания стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при введении рчГ-КСФ (1) и совместном назначении рчГ-КСФ с 500 УЕ/кг (2) и 1500 УЕ/кг (3) гиалуронидазы (М±m)Table 9
Dynamics of stem cell content in bone marrow and peripheral blood upon administration of rhG-CSF (1) and co-administration of rhG-CSF with 500 UE / kg (2) and 1500 UE / kg (3) hyaluronidase (M ± m)
Пример 10.Example 10
Интактным животным на фоне введения гранулоцитарного колониестимулирующего фактора («Нейпоген», Hofrman-la-Roche, Щвейцария) в дозе 125 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 3 дней совместно с внутрибрюшинным введением фактора стволовой клетки («Sigma», США) в дозе 50 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 2 дней дополнительно 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1000 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным вводили по аналогичным схемам только рчГ-КСФ и ФСК.Intact animals on the background of the introduction of granulocyte colony stimulating factor (Neupogen, Hofrman-la-Roche, Switzerland) at a dose of 125 μg / kg 1 time per day for 3 days in conjunction with intraperitoneal injection of stem cell factor (Sigma, USA) in a dose of 50 μg / kg 1 time per day for 2 days an additional 1 time per day for 2 days was injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1000 UE / kg (at 0, 5 ml of physiological saline). Only rhG-CSF and FSK were introduced into control animals according to similar schemes.
В ходе эксперимента на 4-е сутки после введения рчГ-КСФ и ФСК наблюдалось закономерное возрастание количества СК в периферической крови при изменениях неоднозначного характера со стороны их костномозговых пулов. При этом в большей степени отмечалось повышение числа циркулирующих коммитированных клеток-предшественников (КОЕ-Ф до 344,5% и СКК до 347% от фона), чем истинных (мезенхимальных) стволовых клеток (до 266,7% от фона). Дополнительное введение животным гиалуронидазы практически не оказывало влияния на содержание различных типов СК в гемопоэтической ткани по сравнению с контролем. Однако при этом имело место еще более выраженное возрастание числа родоначальных клеток в периферической крови. При этом максимальный уровень подъема отмечался, напротив, у наиболее примитивных - МСК (до 1088,2% от фона), чем у КОЕ-Ф (до 401,4% от фона) и СКК (до 502,0% от фона) (табл.10).During the experiment, on the 4th day after the administration of rhG-CSF and FSK, a regular increase in the number of SCs in the peripheral blood was observed with changes in the ambiguous nature of their bone marrow pools. Moreover, an increase in the number of circulating committed progenitor cells (CFU-F to 344.5% and CCM to 347% of the background) was observed to a greater extent than true (mesenchymal) stem cells (to 266.7% of the background). The additional administration of hyaluronidase to the animals had practically no effect on the content of various types of SC in the hematopoietic tissue compared to the control. However, there was an even more pronounced increase in the number of parent cells in peripheral blood. At the same time, the maximum level of rise was observed, on the contrary, for the most primitive ones - MSC (up to 1088.2% of the background) than CFU-F (up to 401.4% of the background) and CCM (up to 502.0% of the background) ( table 10).
Динамика содержания стволовых клеток в костном мозге и периферической крови при введении рчГ-КСФ совместно с ФСК (1) и дополнительном введении 1000 УЕ/кг гиалуронидазы (2) (M±m)Table 10
Dynamics of stem cells in bone marrow and peripheral blood with the introduction of rhG-CSF together with FSK (1) and the additional introduction of 1000 UE / kg of hyaluronidase (2) (M ± m)
Таким образом, введение гиалуронидазы при ее совместном назначении с рчГ-КСФ и ФСК приводило к усилению мобилизации СК, причем в большей степени наиболее низкодифференцированных.Thus, the introduction of hyaluronidase when used together with rhG-CSF and FSK led to increased mobilization of SC, and to a greater extent the most differentiated ones.
Пример 11.Example 11
Интактным животным на фоне однократного внутривенного введения белка СТСЕ-0214 (пептида-аналога SDF-1-фактора) в дозе 10 мг/кг («Sigma», США) дополнительно 1 раз в сутки в течение 2 дней внутрибрюшинно вводили гиалуронидазу («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ, Россия) в дозе 1000 УЕ/кг (в 0,5 мл физиологического раствора). Контрольным животным в эквивалентном объеме (0,2 мл) внутривенно и 0,5 мл внутрибрюшинно вводили физиологический раствор.Intact animals on the background of a single intravenous administration of CTCE-0214 protein (peptide analogue of SDF-1 factor) at a dose of 10 mg / kg (Sigma, USA) an additional 1 time per day for 2 days was injected intraperitoneally with hyaluronidase (Lidase) , FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation, Russia) at a dose of 1000 UE / kg (in 0.5 ml of physiological saline). Control animals in an equivalent volume (0.2 ml) intravenously and 0.5 ml were injected intraperitoneally with saline.
На 3-и сутки после начала эксперимента в костном мозге регистрировалось увеличение числа стволовых кроветворных клеток (КОЕ-ГЭММ). В то же время имело место и увеличение количества данных элементов в периферической крови (до 433,3% от фона). Введение гиалуронидазы отменяло влияние фактора на содердание СКК в костном мозге, но приводило к значительно более выраженному увеличению числа данных родоначальных клеток в периферической крови, достигающему 747,6% от фона (табл.11).On the 3rd day after the start of the experiment, an increase in the number of hematopoietic stem cells (CFU-HEMM) was recorded in the bone marrow. At the same time, there was an increase in the number of these elements in peripheral blood (up to 433.3% of the background). The introduction of hyaluronidase abolished the influence of the factor on the content of CCM in the bone marrow, but led to a significantly more pronounced increase in the number of these parent cells in peripheral blood, reaching 747.6% of the background (Table 11).
Динамика содержания стволовых кроветворных клеток в костном мозге и периферической крови при введении СТСЕ-0214 (1) и при дополнительном введении 1000 УЕ/кг гиалуронидазы (2) (M±m)Table 11
Dynamics of the content of hematopoietic stem cells in the bone marrow and peripheral blood with the administration of CTCE-0214 (1) and with the additional administration of 1000 UE / kg of hyaluronidase (2) (M ± m)
Таким образом, гиалуронидаза усиливала мобилизирующий эффект субстанции СТСЕ-0214 (пептида-аналога SDF-1-фактора) в отношении стволовых кроветворных клеток.Thus, hyaluronidase enhanced the mobilizing effect of the substance CTCE-0214 (peptide analogue of SDF-1 factor) in relation to hematopoietic stem cells.
В целом, исходя из полученных данных, следует, что при введении гиалуронидазы на фоне моделирования экстремальных воздействий и при патологических состояниях различного генеза, а также при введении в организм веществ, вызывающих выход СК в кровь, наблюдается значительное возрастание уровня мобилизированных стволовых клеток. Причем в большей степени происходит усиление мобилизирующего эффекта в отношении наиболее ранних родоначальных элементов - мезенхимальных (истиных) стволовых клеток. При этом механизмом указанного специфического действия данного фермента, очевидно, является разрушение/ослабление связей СК с одним из основных компонентов межклеточного матрикса - гиалуроновой кислотой, связанной in situ со стволовыми клетками посредством специфических рецепторов.In general, based on the data obtained, it follows that when hyaluronidase is introduced against the background of modeling extreme effects and with pathological conditions of various origins, as well as when substances causing the release of SC into the blood are introduced into the body, a significant increase in the level of mobilized stem cells is observed. Moreover, there is a greater degree of mobilization effect in relation to the earliest parent elements - mesenchymal (true) stem cells. At the same time, the mechanism of the specified specific action of this enzyme is obviously the destruction / weakening of SC bonds with one of the main components of the intercellular matrix - hyaluronic acid, bound in situ to stem cells via specific receptors.
Предлагаемый способ позволяет существенно увеличить уровень мобилизации различных типов стволовых клеток при экстремальных воздействиях и патологических состояниях, а также повысить степень мобилизирующего эффекта веществ, способных стимулировать выход СК в кровь, путем дополнительного введения гиалуронидазы.The proposed method allows to significantly increase the level of mobilization of various types of stem cells under extreme influences and pathological conditions, as well as to increase the degree of mobilizing effect of substances that can stimulate the release of SC into the blood by additional administration of hyaluronidase.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006140032/14A RU2330674C1 (en) | 2006-11-13 | 2006-11-13 | Method of intensification of stem cells mobilisation |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006140032/14A RU2330674C1 (en) | 2006-11-13 | 2006-11-13 | Method of intensification of stem cells mobilisation |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2006140032A RU2006140032A (en) | 2008-05-20 |
RU2330674C1 true RU2330674C1 (en) | 2008-08-10 |
Family
ID=39746334
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006140032/14A RU2330674C1 (en) | 2006-11-13 | 2006-11-13 | Method of intensification of stem cells mobilisation |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2330674C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2480236C1 (en) * | 2011-10-05 | 2013-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент") | Drug possessing regenerative activity |
RU2508297C1 (en) * | 2012-06-22 | 2014-02-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for obtaining biologically active substance from chicken blood for activation of proliferation of non-differentiated cells of human marrow cells |
-
2006
- 2006-11-13 RU RU2006140032/14A patent/RU2330674C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ГОЛОВАЧЕВА А.А. Методы мобилизации аутологичных стволовых клеток периферической крови (СКПК) у онкологических и гематологических больных. Вопросы онкологии. 1999 г., т.45. №4, с.380-383. CHANG А.Н. et al. Stem cell-derived erythroid cells mediate long-term systemic protein delivery. Nat. Biotechnol. 2006 Aug; 4(8): 1017-21. Epub. 2006 Jul 16. * |
СТАВРОВА Л.А. и др. Фармакологическая регуляция функциональной активности стволовых клеток при восстановлении миокарда в постинфарктном периоде. Клеточные технологии в биологии и медицине, 2005 г., №4, с.189-193. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2480236C1 (en) * | 2011-10-05 | 2013-04-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "Саентифик Фьючер Менеджмент") | Drug possessing regenerative activity |
RU2508297C1 (en) * | 2012-06-22 | 2014-02-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации | Method for obtaining biologically active substance from chicken blood for activation of proliferation of non-differentiated cells of human marrow cells |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2006140032A (en) | 2008-05-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA200800397A1 (en) | TIZANIDINE COMPOSITIONS AND TREATMENT METHODS USING COMPOSITIONS | |
Solomonia et al. | Myo-inositol treatment prevents biochemical changes triggered by kainate-induced status epilepticus | |
RU2330674C1 (en) | Method of intensification of stem cells mobilisation | |
RU2551937C1 (en) | Method of recovering spleen after radiation load | |
RU2568584C2 (en) | Method and preparation for increasing adaptive abilities of athlete's organism in training process period | |
RU2519221C1 (en) | Biologically active composition for improvement of sexual function in men (versions) | |
RU2442601C2 (en) | Method of increasing stem cells mobilization | |
DE3220326C2 (en) | Carcinoma therapeutic | |
WO2016073801A1 (en) | Low-level laser irradiation of stimulated human stem cells | |
WO2009115429A1 (en) | Food preparation and pharmaceutical composition containing an embryonic extract | |
RU2366452C1 (en) | Method of myelopoiesis stimulation | |
RU2347583C1 (en) | Method for increase of stem cells reserve in organism | |
WO2008045528A3 (en) | Methods and compositions for the treatment of cancer | |
RU2392000C1 (en) | Experimental toxic chronic hepatitis treatment method | |
RU2480236C1 (en) | Drug possessing regenerative activity | |
RU2610014C1 (en) | Health improvement method | |
RU2006106836A (en) | METHOD FOR TREATING EXPERIMENTAL TUBERCULOSIS IN ANIMALS | |
RU2442589C1 (en) | Method for stimulating myelogenesis | |
AT511582B1 (en) | USE OF KEYHOLE-LIMPET-HEMOCYANINE OR COLD PRODUCTS THEREOF | |
Rogers | Stem Cell Therapy in Veterinary Medicine | |
RU2294206C2 (en) | Method for treating myocardial infarction | |
RU2392929C2 (en) | Agent stimulating hemopoietic stem cell emission in blood flow | |
RU2005472C1 (en) | Method for prevention of non-specific bronchial pneumonia in young cattle | |
RU2637645C1 (en) | Method for indirect endolymphatic therapy in case of bronchopneumonia in dogs | |
RU2378007C1 (en) | Anabolic agent |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 22-2008 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20081114 |