RU2392000C1

RU2392000C1 - Experimental toxic chronic hepatitis treatment method

Info

Publication number: RU2392000C1
Application number: RU2009103738/14A
Authority: RU
Inventors: Александр Михайлович Дыгай (RU); Александр Михайлович Дыгай; Глеб Николаевич Зюзьков (RU); Глеб Николаевич Зюзьков; Вадим Вадимович Жданов (RU); Вадим Вадимович Жданов
Priority date: 2009-02-04
Filing date: 2009-02-04
Publication date: 2010-06-20

Abstract

FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: invention belongs to medicine, notably to experimental gastroenterology and refers to toxic chronic hepatitis treatment. Laboratory animals with pattern of toxic chronic hepatitis are administered intraperitoneal hyaluronidase injections at the rate of 1000 CU/kg. Injection is made once a day two days running. ^ EFFECT: method increases quantity of regional progenitor cells in hepatic tissue, providing significant hepatotropic effect and, as consequence, quick restitution of functionally active hepatic tissue. ^ 4 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, конкретно к фармакологии, и касается способа лечения гепатита.The invention relates to medicine, specifically to pharmacology, and relates to a method for the treatment of hepatitis.

Заболевания печени и желчевыводящих путей являются весьма распространенными во всем мире и занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости и смертности населения нашей страны. Опасность для здоровья и социальная значимость данной патологии печени определяют необходимость постоянной разработки новых эффективных патогенетически обоснованных методов фармакологической терапии и профилактики данных заболеваний.Diseases of the liver and biliary tract are very common throughout the world and occupy one of the leading places in the structure of morbidity and mortality in the population of our country. The health hazard and social significance of this liver pathology determine the need for the constant development of new effective pathogenetically substantiated methods of pharmacological therapy and prevention of these diseases.

Для лечения гепатитов используется большое количество медикаментозных и немедикаментозных способов [1, 2].For the treatment of hepatitis, a large number of drug and non-drug methods are used [1, 2].

Известен способ терапии гепатита с помощью препарата гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), основанный на активации механизмов компенсации «глубокого» резерва, связанных со стволовыми клетками [3]. Данный способ был выбран в качестве прототипа.A known method for the treatment of hepatitis using the drug granulocyte colony stimulating factor (G-CSF), based on the activation of compensation mechanisms of the "deep" reserve associated with stem cells [3]. This method was chosen as a prototype.

Однако использование данного препарата в эффективных дозах и по оптимальным схемам ограниченно вследствие достаточно высокой токсичности указанного средства [4]. Кроме того, при его применении не исключена возможность истощения «глубокого» резерва СК, определяемого их популяцией в «тканях-депо», в первую очередь в гемопоэтической ткани.However, the use of this drug in effective doses and according to optimal regimens is limited due to the rather high toxicity of this agent [4]. In addition, its use does not exclude the possibility of depletion of the “deep” SC reserve, determined by their population in “depot tissues”, primarily in hematopoietic tissue.

Задачей, решаемой предлагаемым изобретением, является расширение арсенала эффективных лекарственных средств для терапии хронического токсического гепатита.The problem solved by the invention is the expansion of the arsenal of effective drugs for the treatment of chronic toxic hepatitis.

Поставленная задача достигается техническим решением, заключающимся во внутрибрюшинном введении лабораторным животным препарата гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут, в течение 2 дней.The task is achieved by a technical solution, which consists in the intraperitoneal administration to a laboratory animal of a preparation of hyaluronidase at a dose of 1000 U / kg once a day, for 2 days.

Новым в данном изобретении является использование препарата гиалуронидазы в дозе 1000 УЕ/кг 1 раз в сут, в течение 2 дней.New in this invention is the use of a hyaluronidase preparation at a dose of 1000 UE / kg once a day for 2 days.

Полученные в последние годы сведения о свойствах и закономерностях жизнедеятельности мультипотентных клеток-предшественников организма открыли возможность развития новой стратегии лечения многих заболеваний - с помощью стволовых клеток. При этом, согласно имеющимся представлениям, не вызывает сомнения возможность активации собственных стволовых клеток (СК) с помощью различных биологически активных веществ [5, 6]. При этом замещение погибших и быстрое увеличение числа зрелых, способных активно функционировать гепатоцитов является основной практической задачей терапии хронических гепатитов.Information obtained in recent years about the properties and patterns of life of multipotent precursor cells of the body has opened the possibility of developing a new strategy for the treatment of many diseases - using stem cells. Moreover, according to existing ideas, there is no doubt that it is possible to activate own stem cells (SCs) using various biologically active substances [5, 6]. In this case, the replacement of the dead and the rapid increase in the number of mature, capable of actively functioning hepatocytes is the main practical task of the treatment of chronic hepatitis.

Известна способность гиалуронидазы модифицировать функции эндогенных СК и увеличивать их резерв в организме, не влияя на способность мигрировать из «тканей-депо» [7]. Указанные эффекты связаны с изменением свойств межклеточного матрикса в результате гидролизного расщепления гиалуроновой кислоты, низко- и среднемолекулярные формы которой обладают выраженной стимулирующей активностью в отношении клеточного деления [7]. Вместе с тем возможность повышения реализации ростового потенциала СК, сопровождаемого гепатопротекторным эффектом, с помощью гиалуронидазы при токсическом поражении печени, на сегодняшний день не известна.The ability of hyaluronidase to modify the functions of endogenous SCs and increase their reserve in the body is known, without affecting the ability to migrate from the “tissue depot” [7]. These effects are associated with a change in the properties of the intercellular matrix as a result of hydrolytic cleavage of hyaluronic acid, the low- and medium-molecular forms of which have a pronounced stimulating activity against cell division [7]. At the same time, the possibility of increasing the realization of the growth potential of SC, accompanied by a hepatoprotective effect, using hyaluronidase for toxic liver damage, is not known today.

Факт применения препарата гиалуронидазы при хроническом токсическом гепатите с достижением нового результата: создание эффективного способа терапии хронического токсического гепатита, для специалиста является не очевидным.The fact of the use of the hyaluronidase drug in chronic toxic hepatitis with the achievement of a new result: the creation of an effective method of treatment of chronic toxic hepatitis, is not obvious for a specialist.

Используемый в предлагаемом изобретении препарат позволяет активировать механизмы «глубокого резерва» и обеспечить восстановление структуры печени путем стимуляции эндогенных паренхиматозных прогениторных клеток печеночной ткани.The preparation used in the invention allows activation of the “deep reserve” mechanisms and restoration of the liver structure by stimulating endogenous parenchymatous progenitor cells of the liver tissue.

Заявляемые существенные признаки проявили в совокупности новые свойства, не являющиеся очевидными для специалиста и не вытекающие явным образом из уровня техники в данной области. Новые признаки позволяют осуществлять эффективную терапию экспериментального хронического токсического поражения печени, и предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе.The claimed essential features in the aggregate showed new properties that are not obvious to a specialist and not arising explicitly from the prior art in this field. New signs allow effective therapy of experimental chronic toxic liver damage, and the present invention can be used in medicine. An identical set of features was not found in the study of the prior art in patent and medical literature.

Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, the claimed technical solution should be considered relevant criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Лабораторному животному после окончания моделирования хронического токсического поражения печени в течение 2 дней 1 раз в день внутрибрюшинно вводят 1000 УЕ/кг препарата гиалуронидазы.After finishing modeling of chronic toxic liver damage within 2 days, a laboratory animal is injected 1000 IU / kg of hyaluronidase preparation intraperitoneally once a day.

Предлагаемый способ был изучен в экспериментах на беспородных крысах в количестве 46 штук, массой 250-300 г, и 42 мышах линии CBA/CaLac. Мыши 1 категории, все животные получены из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). У крыс гепатит моделировался внутрижелудочным введением 50% раствора CCl₄ (представляющем собой «классический» гепатотропный яд) на оливковом масле в дозе 2 мл/кг в течение 3-х недель 2 раза в неделю (6 раз). У мышей поражение печени вызывали внутрижелудочным введением тетрахлоруглерода (ТХУ) в виде 20% раствора на оливковом масле в объеме 0,2 мл/мышь живого веса по той же схеме. Для оценки состояния печени у крыс оценивали их гибель, прирост массы тела, весовой коэффициент печени на 21-е и 40-е сут (отношение массы органа в мг к массе животного в г). Проводили биохимические исследования содержания в сыворотки крови аспартат-, аланин-аминотрасфераз (АсАТ, АлАТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ) на 7, 14, 21, 28 и 40-е сут, а так же морфологическое исследование печени на 21-е и 40-е сут [8]. Активность ферментов сыворотки крови определяли по общепринятым методам, используя полуавтоматический биохимический анализатор фирмы Cormay и стандартные наборы фирм Cormay и «Витал Диагностик» (г.Санкт-Петербург). Кровь для исследования получали через катетер, имплантированный в бедренную артерию с последующей перевязкой сосудов. На гистологических препаратах печени, окрашенных гематоксилином и эозином, определяли количество клеток инфильтрата с помощью окулярной сетки Г.Г.Автандилова [9], содержащей 25 тест-точек. В 20 полях зрения подсчитывали количество клеток инфильтрата, попадающих на тест-точки сетки. Относительную площадь инфильтрации высчитывали как отношение точек сетки, приходящихся на клетки инфильтрата, ко всем точкам сетки в 20 полях зрения (т.е. к 500 точкам). Площадь соединительной ткани определяли с помощью средств компьютерной обработки графических данных. Для этого на стандартной площади среза печени (последовательные микрофотографии 10 полей зрения, выполненные микровидеокамерой "Digital micro", с программой передачи изображения на компьютер фирмы «Элекард», Томск) измеряли площадь структур, окрашенных пикрофуксином, и вычисляли процентное отношение к выбранной стандартной площади. Для исследования участия стволовых клеток в процессах восстановления печени у мышей на 3, 7, 10, 14-е сут после последнего введения тетрахлоруглерода (ТХУ) методом клонирования печеночной ткани в культуральной среде (90% DMEM ("Sigma", США), 10% неинактивированной ЭТС ("HyClone", США), 6 г/л глюкозы, 280 мг/л L-глутамина ("Sigma", США), 50 мг/л гентамицина ("Serva", ФРГ), 8000 МЕ/л гепарина ("Biochemie", Австрия), 25 мг/л свиного многокомпонентного инсулина ("Novo Nordisk", Дания) и 10 нг/мл фактора стволовой клетки (SCF) ("Sigma", США)) определяли количество регионарных паренхиматозных клеток-предшественников в печени. Материал инкубировали в течение 10 суток в CO₂ инкубаторе («Jouan», Франция) при 37°C, 5% CO₂ и 100% влажности воздуха. После инкубации под инвертированным микроскопом подсчитывали число колоний. Под колонией подразумевали круглое либо неправильной формы образование, содержащее более 30 клеток. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.The proposed method was studied in experiments on outbred rats in the amount of 46 pieces, weighing 250-300 g, and 42 CBA / CaLac mice. Mice of the 1st category, all animals were obtained from the nursery of the experimental biomedical modeling department of the Research Institute of Pharmacology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences (certificate is available). In rats, hepatitis was modeled by intragastric administration of a 50% solution of CCl ₄ (which is a “classic” hepatotropic poison) in olive oil at a dose of 2 ml / kg for 3 weeks 2 times a week (6 times). In mice, liver damage was caused by intragastric administration of tetrachlorocarbon (TCA) in the form of a 20% solution in olive oil in a volume of 0.2 ml / mouse live weight according to the same scheme. To assess the state of the liver in rats, their death, weight gain, and liver weight on the 21st and 40th days (the ratio of organ mass in mg to animal weight in g) were evaluated. Biochemical studies of serum levels of aspartate, alanine aminotrasferases (AcAT, AlAT) and alkaline phosphatase (ALP) were performed on days 7, 14, 21, 28 and 40, as well as a morphological study of the liver on the 21st and 40th day [8]. The activity of serum enzymes was determined according to generally accepted methods, using a Cormay semi-automatic biochemical analyzer and standard Cormay and Vital Diagnostic kits (St. Petersburg). Blood for the study was obtained through a catheter implanted in the femoral artery followed by vascular ligation. On liver histological preparations stained with hematoxylin and eosin, the number of infiltrate cells was determined using the G.G. Avtandilov's ocular network [9] containing 25 test points. In 20 fields of view, the number of infiltrate cells reaching the test points of the grid was counted. The relative area of infiltration was calculated as the ratio of the grid points per cell of the infiltrate to all grid points in 20 fields of view (i.e., to 500 points). The area of connective tissue was determined using computer graphics processing. For this, the area of structures stained with picrofuchsin was measured on a standard area of a liver section (successive microphotographs of 10 fields of view performed by a Digital micro video camera with an image transfer program to a computer from Elecard, Tomsk) and the percentage of the selected standard area was calculated. To study the participation of stem cells in liver repair processes in mice on days 3, 7, 10, and 14 after the last injection of tetrachlorocarbon (TCA) by cloning liver tissue in culture medium (90% DMEM (Sigma, USA), 10% non-inactivated ETS (HyClone, USA), 6 g / l glucose, 280 mg / l L-glutamine (Sigma, USA), 50 mg / l gentamicin (Serva, Germany), 8000 IU / l heparin ( Biochemie, Austria), 25 mg / L porcine multicomponent insulin (Novo Nordisk, Denmark) and 10 ng / ml stem cell factor (SCF) (Sigma, USA)) determined the number of regional parenchymal cells Vennikov in the liver. Material was incubated for 10 days in a CO ₂ incubator (Jouan, France) at 37 ° C, 5% CO ₂ and 100% air humidity. After incubation under an inverted microscope, the number of colonies was counted. A colony was understood to mean a round or irregularly formed formation containing more than 30 cells. The results were processed by the method of variation statistics using Student's t-test and non-parametric Wilcoxon-Mann-Whitney U-test.

Пример 1.Example 1

У крыс гепатит моделировался внутрижелудочным введением 50% раствора CCl₄ на оливковом масле в дозе 2 мл/кг в течение 3-х недель 2 раза в неделю (6 раз). У мышей поражение печени вызывали внутрижелудочным введением тетрахлоруглерода (ТХУ) в виде 20% раствора на оливковом масле в объеме 0,2 мл/мышь живого веса по той же схеме. Животным экспериментальной группы сразу после моделирования хронического токсического гепатита (на 19-е сут эксперимента) внутрибрюшинно 1 раз в день в течение 2 дней вводили 1000 УЕ/кг препарата гиалуронидазы («Лидаза», ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ), растворенной в 0,5 мл физиологического раствора. Животным, получавшим лечение по способу-прототипу, подкожно 1 раз в день в течение 5 дней вводили 100 мкг/кг препарата рекомбинантного человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (НИКТИ БАВ «Вектор», Новосибирск), растворенного в 0,5 мл растворителя. Животным контрольной группы в аналогичном режиме вводили физиологический раствор по 0,5 мл. Проведенные эксперименты показали, что гибель крыс во всех группах началась одновременно - после 3-го введения CCl₄ и к концу эксперимента в контрольной группе составила 21,2%, 15,1% - при назначении Г-КСФ и 14,8% при введении гиалуронидазы. На вскрытии у погибших животных печень была увеличена в размере, желтого цвета, глинистой консистенции с очагами кровоизлияний и макроскопическими признаками острой дистрофии печени. При этом при применении Г-КСФ и гиалуронидазы процент прироста массы тела крыс был достоверно выше, чем в контроле (табл.1). В то же время межгрупповых различий в весовом индексе печени не наблюдалось. Результаты биохимических исследований сыворотки крови показали повышение активности АлАТ, Ac AT и ЩФ на 7, 14, 21, 40-е сут опыта после начала введения ТХУ в контрольной группе. В то время как у крыс, получавших Г-КСФ и гиалуронидазу, концентрация данных ферментов в сыворотке крови на 28-е и 40-е сут опыта была достоверно ниже, чем у животных, которым вводили растворитель, и достигала уровеня фоновых значений (табл.2). При гистологическом исследовании печени крыс в контрольной группе отмечалось выраженное нарушение долькового строения печени: поля грануляционной ткани, новообразование сосудов и печеночных протоков, тельца Каунсильмена, выраженная крупнокапельная жировая дистрофия, жировые кисты (табл.3). Введение Г-КСФ и гиалуронидазы при моделировании CCl₄-гепатита сохраняло дольковое строение печени. При этом тельца Каунсильмена встречались лишь в единичных случаях, а жировая дистрофия гепатоцитов была преимущественно мелкокапельная. В то же время отмечалась, хотя и менее значительная, но все же существенная инфильтрация портальных трактов. Хотя инфильтрат, как правило, не проникал внутрь долек. В целом, при введении препаратов относительная площадь инфильтрации была достоверно ниже, чем в контрольной группе (более чем в два раза). Кроме того, препараты Г-КСФ и гиалуронидазы практически в 3 раза уменьшали площадь соединительной ткани (см. табл.3). Таким образом, биохимическое и морфологическое исследования состояния печени у крыс, получавших гиалуронидазу, на фоне моделирования хронического токсического гепатита выявило выраженную гепатопротекторную активность (противовоспалительное и антисклеротическое действие) данного препарата, сравнимую с таковой у Г-КСФ.In rats, hepatitis was modeled by intragastric administration of a 50% solution of CCl ₄ in olive oil at a dose of 2 ml / kg for 3 weeks 2 times a week (6 times). In mice, liver damage was caused by intragastric administration of tetrachlorocarbon (TCA) in the form of a 20% solution in olive oil in a volume of 0.2 ml / mouse live weight according to the same scheme. The animals of the experimental group immediately after modeling chronic toxic hepatitis (on the 19th day of the experiment) were injected intraperitoneally 1 time per day for 2 days with 1000 UE / kg of the hyaluronidase preparation (Lidaza, FSUE NPO Microgen, Ministry of Health of the Russian Federation), dissolved in 0 5 ml of physiological saline. Animals treated with the prototype method were injected subcutaneously once a day for 5 days with 100 μg / kg of the preparation of recombinant human granulocyte colony stimulating factor (NIKTI BAS "Vector", Novosibirsk), dissolved in 0.5 ml of solvent. Animals of the control group in a similar mode were injected with saline 0.5 ml. The experiments showed that the death of rats in all groups began simultaneously - after the 3rd injection of CCl ₄ and by the end of the experiment in the control group it was 21.2%, 15.1% with G-CSF and 14.8% with hyaluronidase. At the autopsy, in the dead animals, the liver was enlarged in size, yellow, with a clay consistency with foci of hemorrhage and macroscopic signs of acute liver dystrophy. Moreover, when using G-CSF and hyaluronidase, the percentage of increase in body weight of rats was significantly higher than in the control (Table 1). At the same time, intergroup differences in the weight index of the liver were not observed. The results of biochemical studies of blood serum showed an increase in the activity of AlAT, Ac AT, and alkaline phosphatase on the 7th, 14th, 21st, 40th day of the experiment after the start of TCA administration in the control group. While in rats treated with G-CSF and hyaluronidase, the concentration of these enzymes in the blood serum on the 28th and 40th day of the experiment was significantly lower than in animals that were injected with a solvent and reached the level of background values (Table. 2). Histological examination of rat liver in the control group showed a pronounced violation of the lobular structure of the liver: fields of granulation tissue, neoplasm of blood vessels and hepatic ducts, Kaunsilmen's body, severe large-drop fatty degeneration, fatty cysts (Table 3). The introduction of G-CSF and hyaluronidase in the simulation of CCl ₄ hepatitis preserved the lobular structure of the liver. At the same time, Kaunsilmen’s bodies were found only in isolated cases, and fatty degeneration of hepatocytes was predominantly small drop. At the same time, although less significant, but still significant infiltration of portal tracts was noted. Although the infiltrate, as a rule, did not penetrate into the lobules. In general, with the introduction of drugs, the relative area of infiltration was significantly lower than in the control group (more than twice). In addition, preparations of G-CSF and hyaluronidase almost 3 times reduced the area of connective tissue (see table 3). Thus, biochemical and morphological studies of the liver in rats treated with hyaluronidase, against the background of modeling chronic toxic hepatitis, revealed a pronounced hepatoprotective activity (anti-inflammatory and antisclerotic effect) of this drug, comparable to that of G-CSF.

Дальнейшим этапом исследований с целью изучения механизмов гепатопротекторного действия препаратов в экспериментах на мышах было изучение влияния препарата на состояние пула регионарных паренхиматозных стволовых клеток в печени. Изучение содержания регионарных клеток-предшественников в печени при моделировании гепатита выявило значительное снижение их числа (см. табл.4), свидетельствующем о недостаточности и/или несостоятельности собственного регенераторного потенциала печени, в том числе ее прогениторных элементов при воздействии CCl₄. При этом введение препаратов приводило к существенному увеличению содержания регионарных клеток-предшественников в печеночной ткани (на 10-е и 14-е сут под влиянием Г-КСФ и на 3, 7, 10 и 14-е сут при введении гиалуронидазы) (см. табл.4).The next stage of research in order to study the mechanisms of the hepatoprotective action of drugs in experiments in mice was to study the effect of the drug on the state of the pool of regional parenchymal stem cells in the liver. A study of the content of regional progenitor cells in the liver during hepatitis modeling revealed a significant decrease in their number (see Table 4), indicating the insufficiency and / or failure of the liver’s own regenerative potential, including its progenitor elements under the influence of CCl ₄ . Moreover, the administration of drugs led to a significant increase in the content of regional progenitor cells in the liver tissue (on the 10th and 14th day under the influence of G-CSF and on the 3rd, 7th, 10th and 14th day with the introduction of hyaluronidase) (see table 4).

В целом, исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что гиалуронидаза оказывает выраженный гепатопротекторный эффект при хроническом токсическом гепатите. Причем влияние данного фермента сопоставимо с гепатопротекторным эффектом Г-КСФ, механизмом действия которого является стимуляция и мобилизация СК костного мозга с их дальнейшим хомингом в печень [3]. Учитывая тот факт, что гиалуронидаза не способна вызывать мобилизацию СК из их «тканей-депо» [7], представляется очевидной зависимость фармакологического действия данного препарата от повышения реализации ростового потенциала эндогенных регионарных паренхиматозных СК печеной ткани, что позволяет предотвратить возможное истощение пула СК «глубокого резерва», которое может иметь место при использовании веществ, мобилизующих СК из «тканей-депо».In general, based on the results obtained, it can be concluded that hyaluronidase has a pronounced hepatoprotective effect in chronic toxic hepatitis. Moreover, the effect of this enzyme is comparable with the hepatoprotective effect of G-CSF, the mechanism of action of which is the stimulation and mobilization of bone marrow SC with their further homing into the liver [3]. Considering the fact that hyaluronidase is not able to cause the mobilization of SC from their “tissue depot” [7], it seems obvious that the pharmacological action of this drug depends on increasing the growth potential of endogenous regional parenchymal SC of liver tissue, which helps prevent possible depletion of the SC pool of “deep reserve ”, which may occur when using substances mobilizing SC from“ tissue-depot ”.

Предлагаемый способ позволяет проводить эффективную терапию хронического токсического гепатита, достигать быстрого восстановления функционально активной печеночной ткани путем стимуляции собственного регенераторного потенциала печени, определяемого резидентными паренхиматозными стволовыми клетками.The proposed method allows for the effective treatment of chronic toxic hepatitis, to achieve rapid recovery of functionally active liver tissue by stimulating the liver’s own regenerative potential determined by resident parenchymal stem cells.

Цитируемая литератураCited literature

1. Венгеровский А.И. Эффективность и механизм действия гепатопротекторов при экспериментальном токсическом повреждении печени: Дисс… доктора мед. наук. - Томск, 1991. - С.4-57.1. Vengerovsky A.I. Efficiency and mechanism of action of hepatoprotectors in experimental toxic liver damage: Diss ... doctors honey. sciences. - Tomsk, 1991 .-- S.4-57.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х томах. Т.1. - М: Медицина, 1996. - 624 с.2. Mashkovsky M.D. Medicines: in 2 volumes. T.1. - M: Medicine, 1996 .-- 624 p.

3. Патент (RU) на изобретение №2295971 «Способ терапии экспериментального хронического токсического гепатита», 2007 г. (опубл. 27.03.2007 г., Бюл. №9). Авторы: Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Жданов В.В., Зюзьков Г.Н. и др.3. Patent (RU) for the invention No. 2295971 "Method for the treatment of experimental chronic toxic hepatitis", 2007 (publ. March 27, 2007, Bull. No. 9). Authors: Goldberg E.D., Dygay A.M., Zhdanov V.V., Zyuzkov G.N. and etc.

4. de Wit R., Verweij J., Bontenbal M. et al. Adverse effect on bone marrow protection of prechemotherapy granulocyte colony-stimulating factor support // J. Natl. Cancer Inst. - 1996. - Vol.88. - №19. - P.1393-1398.4. de Wit R., Verweij J., Bontenbal M. et al. Adverse effect on bone marrow protection of prechemotherapy granulocyte colony-stimulating factor support // J. Natl. Cancer Inst. - 1996. - Vol. 88. - No. 19. - P.1393-1398.

5. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н. Гипоксия и система крови. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. - 142 с.5. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zyuzkov G.N. Hypoxia and the blood system. - Tomsk: Publishing house Tom. University, 2006 .-- 142 p.

6. Haas R., Murea S. The role of granulocyte colony-stimulating factor in mobilization and transplantation of peripheral blood progenitor and stem cells // Mol. Ther. - 1996.- V.2. - N.1. - P.136.6. Haas R., Murea S. The role of granulocyte colony-stimulating factor in mobilization and transplantation of peripheral blood progenitor and stem cells // Mol. Ther. - 1996.- V.2. - N.1. - P.136.

7. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов B.B., Симанина Е.В., Гурьянцева Л.А. Роль гиалуронидазы в регуляции функций мезенхимальных клеток-предшественников // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2007. - №2. - С.115-119.7. Goldberg E.D., Dygay A.M., Zyuzkov G.N., Zhdanov B.B., Simanina E.V., Guryantseva L.A. The role of hyaluronidase in the regulation of the functions of mesenchymal progenitor cells // Cellular Technologies in Biology and Medicine. - 2007. - No. 2. - S.115-119.

8. Holtzer Н. Cell lineages, stem cells and the quantal cell cycle concept. / Stem cells and tissue homeostasis. Eds: B.I.Lord, C.S.Poten, R.J.Cole. - New York, Cambrige Unyversity Press, 1978. - P.1-28.8. Holtzer N. Cell lineages, stem cells and the quantal cell cycle concept. / Stem cells and tissue homeostasis. Eds: B.I. Lord, C.S. Poten, R.J. Cole. - New York, Cambrige Unyversity Press, 1978.- P.1-28.

9. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия.- M.: Медицина, 1990. - 382 с.9. Avtandilov G.G. Medical morphometry.- M .: Medicine, 1990 .-- 382 p.

Таблица 2table 2 Биохимические показатели крови крыс-самцов после введения препаратов, X±mBiochemical blood parameters of male rats after drug administration, X ± m Показатели, сроки опыта (сутки)Indicators, terms of experience (day) H₂O (контроль)H ₂ O (control) Г-КСФG-CSF ГиалуронидазаHyaluronidase АлАТ, мккат/лAlAT, mkkat / l 7-е7th 2,78±0,09*2.78 ± 0.09 * 2,67±0,07*2.67 ± 0.07 * 2,65±0,062.65 ± 0.06 14-е14th 2,8±0,07*2.8 ± 0.07 * 2,51±0,04*2.51 ± 0.04 * 2,56±0,03*2.56 ± 0.03 * 21-е21st 1,22±0,07*1.22 ± 0.07 * 0,96±0,090.96 ± 0.09 0,87±0,08*0.87 ± 0.08 * 28-е28th 0,45±0,02*0.45 ± 0.02 * 0,37±0,01*#0.37 ± 0.01 * # 0,39±0,01*0.39 ± 0.01 * 40-е40th 0,72±0,02*0.72 ± 0.02 * 0,54±0,03#0.54 ± 0.03 # 0,55±0,02#0.55 ± 0.02 # АсАТ, мккат/лAsAT, mkkat / l 7-е7th 3,10±0,35*3.10 ± 0.35 * 3,30±0,1*3.30 ± 0.1 * 3,27±0,2*3.27 ± 0.2 * 14-е14th 2,43±0,09*2.43 ± 0.09 * 2,51±0,06*2.51 ± 0.06 * 2,5±0,05*2.5 ± 0.05 * 21-е21st 0,71±0,080.71 ± 0.08 0,74±0,02*0.74 ± 0.02 * 0,69±0,02*0.69 ± 0.02 * 28-е28th 0,40±0,01*0.40 ± 0.01 * 0,33±0,01*#0.33 ± 0.01 * # 0,32±0,01*#0.32 ± 0.01 * # 40-е40th 0,71±0,03*0.71 ± 0.03 * 0,60±0,01#0.60 ± 0.01 # 0,61±0,01 #0.61 ± 0.01 # ЩФ, Ед./лAlkaline phosphatase, units / l 7-е7th 947,4±97,7*947.4 ± 97.7 * 907,0±39,2*907.0 ± 39.2 * 924,5±41,6*924.5 ± 41.6 * 14-е14th 1283,1±172,6*1283.1 ± 172.6 * 1214,9±33,0*1214.9 ± 33.0 * 1212,4±45,0*1212.4 ± 45.0 * 21-е21st 1262,4±137,3*1262.4 ± 137.3 * 1374,4±39,3*1374.4 ± 39.3 * 1297,6±39,8*1297.6 ± 39.8 * 28-е28th 407,7±8,45*407.7 ± 8.45 * 315,9±18,2#315.9 ± 18.2 # 310,7±12,6#310.7 ± 12.6 # 40-е40th 554,2±65,3*554.2 ± 65.3 * 306,1±44,2#306.1 ± 44.2 # 309,7±9,0#309.7 ± 9.0 # * - отмечена достоверность различия показателя от фоновых значений при p≤0,05;* - the significance of the difference between the indicator and background values is noted at p≤0.05; # - отмечена достоверность различия показателя от контрольных значений p≤0,05.# - the significance of the difference between the indicator and control values p≤0.05 is noted.

Таблица 3Table 3 Влияние препаратов на морфологию печени крыс с хроническим CCl₄-гепатитомThe effect of drugs on the liver morphology of rats with chronic CCl ₄ hepatitis Сроки исследованияStudy Dates Относительная площадь инфильтрата (%)The relative area of the infiltrate (%) Относительная площадь соед. ткани (%)The relative area of the compound. tissue (%) 21 сутки21 days 40 сутки40 days 21 сутки21 days 40 сутки40 days H₂O (контроль)H ₂ O (control) 27,48±4,67*27.48 ± 4.67 * 25,40±1,2*25.40 ± 1.2 * 6,43±1,22*6.43 ± 1.22 * 5,75±0,42*5.75 ± 0.42 * Г-КСФG-CSF 10,0±1,16*#10.0 ± 1.16 * # 11,66±0,7*#11.66 ± 0.7 * # 1,89±0,32*#1.89 ± 0.32 * # 1,44±0,17*#1.44 ± 0.17 * # ГиалуронидазаHyaluronidase 8,7±0,97*#8.7 ± 0.97 * # 13,4±1,2*#13.4 ± 1.2 * # 1,56±0,29*#1.56 ± 0.29 * # 1,12±0,09*#1.12 ± 0.09 * # * - отмечена достоверность различия показателя от фоновых значений при p≤0,05;* - the significance of the difference between the indicator and background values is noted at p≤0.05; # - отмечена достоверность различия показателя от контрольных значений при p≤0,05.# - the significance of the difference between the indicator and control values at p≤0.05 is noted.

Таблица 4Table 4 Содержание паренхиматозных стволовых клеток в печеночной ткани (КОЕ-Печ) (на 10⁵ нуклеаров), X±mThe content of parenchymal stem cells in the liver tissue (CFU-Pech) (per 10 ⁵ nuclears), X ± m Показатели, сроки опыта (сутки)Indicators, terms of experience (day) H₂O (контроль)H ₂ O (control) Г-КСФG-CSF ГиалуронидазаHyaluronidase КОЕ-ПечCFU-Pecs фонbackground 55,6±3,8555.6 ± 3.85 3-е3rd 67,8±6,3967.8 ± 6.39 54,2±3,9954.2 ± 3.99 69,1±2,14*#69.1 ± 2.14 * # 7-е7th 58,25±4,0558.25 ± 4.05 48,0±3,5848.0 ± 3.58 75,9±3,8*#75.9 ± 3.8 * # 10-е10th 40,8±1,02*40.8 ± 1.02 * 93,4±3,78*#93.4 ± 3.78 * # 99,4±4,1*#99.4 ± 4.1 * # 14-е14th 102,0±5,46*102.0 ± 5.46 * 134,0±2,4*#134.0 ± 2.4 * # 121,7±1,9*#121.7 ± 1.9 * # * - отмечена достоверность различия показателя от фоновых значений при p≤0,05;* - the significance of the difference between the indicator and background values is noted at p≤0.05; # - отмечена достоверность различия показателя от контрольных значений p≤0,05.# - the significance of the difference between the indicator and control values p≤0.05 is noted.

Claims

A method of treating experimental chronic toxic hepatitis, which consists in administering a drug, characterized in that hyaluronidase is used as a drug, which is administered intraperitoneally at a dose of 1000 UE / kg once a day for 2 days.