RU2322492C1 - Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i - Google Patents
Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i Download PDFInfo
- Publication number
- RU2322492C1 RU2322492C1 RU2006136335/13A RU2006136335A RU2322492C1 RU 2322492 C1 RU2322492 C1 RU 2322492C1 RU 2006136335/13 A RU2006136335/13 A RU 2006136335/13A RU 2006136335 A RU2006136335 A RU 2006136335A RU 2322492 C1 RU2322492 C1 RU 2322492C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dna
- site
- endonuclease
- specific endonuclease
- strain
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и может быть использовано для анализа ДНК. Из почвы выделен штамм Glacial ice bacterium, обеспечивающий получение сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей обе цепи метилированной нуклеотидной последовательности ДНК 5′-G(m5C)↓NG(m5C)-3′. Применение изобретения обеспечивает получение новой специфической эндонуклеазы, специфичной к метилированной последовательности ДНК. 3 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма, используемого для выделения новой сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей обе цепи нуклеотидной последовательности ДНК 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3'.
Эндонуклеаза, обладающая данной специфичностью, может быть использована для сайт-специфического гидролиза ДНК, содержащей С 5-метилцитозиновые основания.
Известен штамм Diplococcus pneumoniae, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции DpnI, которая узнает и расщепляет метилированную последовательность нуклеотидов 5'-G(m6A)↓TC-3', где m6А - N6-метиладенин [1].
Недостатком известного штамма является то, что продуцируемая им эндонуклеаза рестрикции не способна узнавать сайты, содержащие С5-метилцитозиновые основания.
Известен штамм Glacial ice bacterium I, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции GlaI, которая узнает и расщепляет метилированную нуклеотидную последовательность 5'-G(m5C)↓GC-3', где m5С - С5-метилцитозин [2].
Недостатком известного штамма является то, что продуцируемая им эндонуклеаза рестрикции не способна узнавать метилированную последовательность нуклеотидов 5'-GCNGC-3', содержащую С5-метилцитозиновые основания.
Известен штамм Bacillus simplex 23, продуцирующий сайт-специфическую эндонуклеазу BlsI, которая узнает и расщепляет метилированную нуклеотидную последовательность 5'-GCN↓GC-3', если она содержит хотя бы одно С5-метилцитозиновое основание [3].
Недостатком известного штамма является то, что продуцируемая им сайт-специфическая эндонуклеаза расщепляет метилированную нуклеотидную последовательность 5'-GC↓NGC-3' с любым количеством и расположением С5-метилцитозинов, что в ряде случаев не позволяет использовать ее для получения крупных фрагментов при сайт-специфическом расщеплении ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания; а также то, что продуцируемая известным штаммом сайт-специфическая эндонуклеаза расщепляет ДНК с образованием однонуклеотидных 3'-выступающих концов и не способна расщеплять ДНК с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов.
Наиболее близким к заявляемому штамму - прототипом, является штамм Bacillus subtilis 230, продуцирующий эндонуклеазу рестрикции BisI, которая узнает последовательность нуклеотидов 5'-GC↓NGC-3' и расщепляет ее перед центральным нуклеотидом (N) с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов, если хотя бы одно из цитозиновых оснований узнаваемой последовательности метилировано в положении 5 (С5-метилцитозин) [4].
Недостатком известного штамма является то, что продуцируемая им сайт-специфическая эндонуклеаза расщепляет метилированную нуклеотидную последовательность 5'-GC↓NGC-3' с любым количеством и расположением С5-метилцитозинов, что в ряде случаев не позволяет использовать ее для получения крупных фрагментов при сайт-специфическом расщеплении ДНК, содержащей С5-метилцитозиновые основания.
Технической задачей изобретения является получение бактериального штамма, продуцирующего сайт-специфическую эндонуклеазу, которая узнает и расщепляет обе цепи нуклеотидной последовательности ДНК 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3'.
Поставленная техническая задача достигается получением штамма Glacial ice bacterium 24 - продуцента сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей метилированную последовательность нуклеотидов:
5'-G(m5C)↓N G(m5C)-3'
3'-(m5C)GN↓(m5C)G-5',
где m5C - С5-метилцитозин. (Стрелками указаны позиции расщепления ДНК).
Таксономическая принадлежность заявляемого штамма была определена на основе анализа первичной последовательности 16S рибосомной РНК [5]. Данный вид бактерий относится к классу Actinobacteria, порядку Actinomycetales, семейству Microbacteriaceae, к группе неклассифицированных Microbacteriaceae.
Предлагаемый штамм выделен из природного материала (почвы) в результате целенаправленного систематического поиска.
Полученный штамм Glacial ice bacterium 24 депонирован в Коллекции культур микроорганизмов НПО "СибЭнзим" под регистрационным номером 6М74, а продуцируемая им сайт-специфическая эндонуклеаза названа GluI.
Штамм Glacial ice bacterium 24 характеризуется следующими признаками:
Культурально-морфологические признаки. На агаризованной среде Луриа-Бертрани (ЛБ) образует бледно-желтые, гладкие, блестящие, полупрозрачные, выпуклые, круглые колонии 1-2 мм в диаметре. В жидкой питательной среде со встряхиванием образует гомогенную муть. Клетки палочковидные, размером 0,4×1 мкм, одиночные и в небольших группах располагаются палисадно. Неподвижные. Спор не образуют. Грамположительные.
Физиолого-биохимические признаки. Облигатно-аэробные. Каталазоположительные. Оксидазоотрицательные. Растут при температуре 4-30°С, при 0,5-1,5% NaCl. Содержание гуанина и цитозина в ДНК штамма составляет 65% (определяли при помощи рестриктаз по методу [6]).
Хранение штамма осуществляется в лиофильно-высушенном состоянии или в растворе 30% глицерина при температуре -60°С.
Для культивирования штамма применяют среду следующего состава (г/л): пептон - 10, дрожжевой экстракт - 5, NaCl - 5. Культивирование проводят при 25-28°С с аэрацией до достижения стационарной стадии роста.
Выход целевого фермента составляет 200 ед/г сырой биомассы с удельной активностью 1000 ед/мл.
Полученная сайт-специфическая эндонуклеаза GluI характеризуется следующими свойствами:
1. Узнает и расщепляет метилированную последовательность нуклеотидов 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3', где m5С - С5-метилцитозин.
2. Расщепляет связи между первым цитозиновым основанием (С) и следующим за ним нуклеотидом (N) в обеих цепях узнаваемой последовательности.
3. Не расщепляет вышеприведенную последовательность, не содержащую С5-метилцитозиновых оснований (неметилированную).
4. Оптимальная температура действия 33-40°С.
5. Оптимальное значение рН для действия фермента 7,5-8,5.
6. Оптимальная концентрация соли при расщеплении ДНК 100-150 мМ NaCl.
7. Для проявления активности GluI требуются ионы Mg2+, оптимальная концентрация - 5-10 мМ.
Определяющим отличием предлагаемого штамма от штамма Bacillus subtilis 230 является то, что первый продуцирует сайт-специфическую эндонуклеазу, которая узнает и расщепляет обе цепи метилированной нуклеотидной последовательности ДНК 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3', то есть метилирование хотя бы одного цитозинового основания в сайте узнавания не является достаточным условием для расщепления ДНК. Таким образом, сайт-специфическая эндонуклеаза GluI представляет собой новый, не имеющий аналогов фермент.
Поскольку предлагаемый штамм получен впервые и для выделения сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей вышеназванную последовательность нуклеотидов в указанной позиции никогда не использовался, можно сделать вывод о соответствии предлагаемого штамма критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень».
Изобретение иллюстрируется примерами конкретного выполнения.
Пример 1.
Выращивание штамма и выделение фермента.
Для получения биомассы клетки штамма-продуцента переносят на агаризованную среду ЛБ в чашку Петри и инкубируют в течение ночи при 30°С. Свежевыращенные колонии переносят стерильной бактериологической петлей в колбы, содержащие жидкую питательную среду ЛБ и культивируют на качалках при 25-28°С при перемешивании - 135-140 об/мин, до достижения стационарной фазы роста. Клетки осаждают центрифугированием при 8000 об/мин при 4°С. Выход биомассы составляет 5 г/л среды. Дезинтеграцию клеток, выделение и очистку фермента проводят по известной методике [7].
Пример 2.
Определение специфичности сайт-специфической эндонуклеазы GluI.
Специфичность фермента определяют по картинам специфического расщепления различных ДНК (фигуры 1 и 2). В качестве субстратов для выявления специфичности расщепления используют различные плазмидные ДНК, а также синтетические олигонуклеотидные ДНК-дуплексы, содержащие или не содержащие метилированные основания (С5-метилцитозин). Расщепление ДНК проводят в оптимальных условиях (37°С, реакционный буфер - 10 мМ TrisHCl, pH 8.0, 10 мМ MgCl2, 100 мМ NaCl, 1 мМ DTT) в течение 60 мин. Продукты расщепления плазмидной ДНК разделяют путем электрофореза в 1,2% агарозном геле. Фрагменты ДНК, образующиеся в результате расщепления олигонуклеотидных дуплексов, разделяют путем электрофореза в денатурирующем 20% полиакриламидном геле с 7 М мочевиной. Расщепление субстратов происходит только в случае присутствия в них метилированной последовательности 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3'.
На фигуре 1 представлена электрофореграмма продуктов расщепления ДНК плазмид pFsp4HI2 и pFsp4HI3 эндонуклеазами GluI, BlsI и BisI.
Описание дорожек на электрофореграмме, изображенной на фиг.1:
1 - ДНК pFsp4HI2, линеаризованная ЭР BglII;
2 - ДНК pFsp4HI2, линеаризованная ЭР BglII, обработанная эндонуклеазой рестрикции BlsI;
3 - ДНК pFsp4HI2, линеаризованная ЭР BglII, обработанная сайт-специфической эндонуклеазой BlsI;
4 - ДНК pFsp4HI2, линеаризованная ЭР BglII, обработанная сайт-специфической эндонуклеазой GluI;
5 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР BglII, обработанная сайт-специфической эндонуклеазой GluI;
6 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР BglII;
7 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР DseDI, обработанная сайт-специфической эндонуклеазой GluI;
8 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР DseDI;
9 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР Pcil, обработанная сайт-специфической эндонуклеазой GluI;
10 - ДНК pFsp4HI3, линеаризованная ЭР Pcil;
11 - маркер молекулярного веса ДНК 1 kb (производство НПО СибЭнзим).
Плазмида pFsp4HI2 включает в себя ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, которая метилирует первое цитозиновое основание в последовательности 5'-GCNGC-3'. Таким образом, эта плазмида содержит метилированные последовательности 5'-GCNGC-3'. Из фиг.1 видно, что эндонуклеазы BisI и BlsI расщепляют плазмиду pFsp4HI2 с образованием идентичных фрагментов ДНК (дорожки 2, 3), тогда как эндонуклеаза GluI не расщепляет ДНК этой плазмиды (дорожка 4). Плазмида pFsp4HI3 отличается от pFsp4HI2 четырехнуклеотидной заменой в районе полилинкера, в результате которой образуется последовательность нуклеотидов 5'-GCCGCGGCAGC-3', представляющая собой 3 перекрывающихся сайта узнавания 5'-GCNGC-3'. Плазмида также включает в себя ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI. В результате метилирования приведенной выше последовательности данной метилазой формируется полностью метилированная последовательность нуклеотидов 5'-G(m5C)NG(m5C)-3'/3'-(m5C)GN(m5C)G-5'. Из фиг.1 видно, что эта плазмида расщепляется эндонуклеазой Glul в одном месте (дорожка 5). Локализацию места расщепления ДНК проводили посредством гидролиза ДНК плазмиды сайт-специфической эндонуклеазой Glul совместно с рестриктазами DseDI и PciI (дорожки 7 и 9 соответственно). Длины выщепляемых фрагментов ДНК соответствуют расчетным в случае расщепелния ДНК эндонуклеазой GluI в сайте 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3'.
На фиг.2 представлена электрофореграмма продуктов расщепления радиоактивно меченных синтетических олигонуклеотидных дуплексов эндонуклеазами GluI, BlsI и BisI. Последовательности олигонуклеотидов приведены в таблице.
Таблица | |
Название | Последовательность олигонуклеотида |
NN01: | 5' GCTTGTACTTTAGCGGCATTGATTCTCACCACG 3' |
NN02: | 5' CGTGGTGAGAATCAATGCCGCTAAAGTACAAGC 3' |
NN1: | 5' GCTTGTACTTTAGrmSQGGCATTGATTCTCACCACG 3' |
NN2: | 5' CGTGGTGAGAATCAATGrmSOCGCTAAAGTACAAGC 3' |
DD1: | 5'GCTTGTACTTTAG(m5C)GG(m5C)ATTGATTCTCACCACG 3' |
DD2: | 5' CGTGGTGAGAATCAATG(m5C)CG(m5C)TAAAGTACAAGC3' |
Описание дорожек на электрофореграмме, изображенной на фиг.2:
а
1 - исходный дуплекс NN01*/NN02;
2 - дуплекс NN01*/NN02, расщепленный Fsp4HI;
3 - дуплекс NN01*/NN02 после инкубации с GluI;
4 - дуплекс NN01*/NN02 после инкубации с BisI;
b
1 - исходный дуплекс NN1*/NN2;
2 - дуплекс NN1*/NN2 после инкубации с Fsp4HI;
3 - дуплекс NN1*/NN2 после инкубации с GluI;
4 - дуплекс NN1*/NN2, расщепленный BisI;
с
1 - исходный дуплекс DD1*/DD2;
2 - дуплекс DD1*/DD2 после инкубации с Fsp4HI;
3 - дуплекс DD1*/DD2, расщепленный GluI;
4 - дуплекс DD1*/DD2, расщепленный BisI.
Олигонуклеотиды, меченные радиоактивной меткой по 5'-концу, помечены знаком *.
Как видно из фиг.2, эндонуклеаза GluI расщепляет дуплекс DD1*/DD2, содержащий полностью метилированную последовательность 5'-GCNGC-3', но не расщепляет дуплекс NN1*/NN2, содержащий ту же последовательность с 2 метилированными цитозиновыми основаниями, и дуплекс NN01*/NN02, который содержит такую же неметилированную последовательность.
Таким образом, эксперименты, проводимые с олигонуклеотидными дуплексами, содержащими и не содержащими метилированные цитозиновые основания, содержащими сайты узнавания GluI, BisI и Fsp4HI, подтверждают вывод о том, что для расщепления ДНК сайт-специфической эндонуклеазой GluI требуется присутствие в ней полностью метилированной нуклеотидной последовательности 5'-G(m5C)NG(m5C)-3'.
Пример 3.
Определение позиций расщепления ДНК сайт-специфической эндонуклеазой GluI
Определение позиций расщепления ДНК сайт-специфической эндонуклеазой GluI осуществляли путем сравнения длин фрагментов, образующихся при расщеплении олигонуклеотидных дуплексов эндонуклеазами GluI и BisI (фиг.3). В качестве маркера длин фрагментов использовали продукты частичного расщепления этих же дуплексов экзонуклеазой III из Е.coli (ExoIII). Последовательности олигонуклеотидов приведены в таблице.
Описание дорожек на электрофореграмме, изображенной на фиг.3:
а:
1 - исходный дуплекс DD1*/DD2;
2 - дуплекс DD1*/DD2, расщепленный эндонуклеазой рестрикции BisI;
3 - дуплекс DD1*/DD2, обработанный экзонуклеазой III из E.coli;
4 - дуплекс DD1*/DD2, расщепленный сайт-специфической эндонуклеазой GluI;
b:
1 - исходный дуплекс DD2*/DD1;
2 - дуплекс DD2*/DD1, расщепленный эндонуклеазой рестрикции BisI;
3 - дуплекс DD2*/DD1, обработанный экзонуклеазой III из E.coli;
4 - дуплекс DD2*/DD1, расщепленный сайт-специфической эндонуклеазой GluI.
Олигонуклеотиды, меченные радиоактивной меткой по 5'-концу, обозначены знаком *.
Из фиг.3 видно, что длины продуктов расщепления ДНК на дорожках 2 и 4 совпадают, что свидетельствует о совпадении места расщепления ДНК эндонуклеазам BisI и Glul. Поскольку известно, что рестриктаза BisI расщепляет связи на обеих цепях ДНК в сайте узнавания между первым цитозиновым основанием и следующим нуклеотидом (N), то из приведенной электрофореграммы следует, что эндонуклеаза GluI также расщепляет ДНК в сайте узнавания после первого цитозинового основания (С) перед центральным нуклеотидом (N), с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов.
Выход сайт-специфической эндонуклеазы GluI определяют по электрофоретической картине расщепления ДНК плазмиды pFsp4HI3. За единицу активности принимают минимальное количество фермента, необходимое для полного расщепления 1 мкг ДНК линеаризованной плазмиды pFsp4HI3 в течение 1 часа при температуре 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Выход фермента составляет 200 ед/г сырой биомассы, удельная активность 1000 ед/мл.
Фермент хранится при - 20°С в буфере, содержащем 50% глицерин, 0,2 М NaCl, 10 мМ трисHCl (рН 7,5), 7 мМ 3-меркаптоэтанол, 0,1 мМ ЭДТА.
Таким образом, получен новый штамм, продуцирующий сайт-специфическую эндонуклеазу Glul, узнающую и расщепляющую обе цепи нуклеотидной последовательности ДНК 5'-G(m5C)↓NG(m5C)-3', с образованием однонуклеотидных 5'-выступающих концов.
Данная сайт-специфическая эндонуклеаза может быть использована для выявления метилированной ДНК.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Lack, S., Greenberg, B.J. // Biol. Chem. - 1975. - V.250 - P.4060-4066.
2. Чернухин В.А., Наякшина Т.Н., Абдурашитов М.А., Томилова Ю.Э., Мезенцева Н.В., Дедков B.C., Михненкова Н.А., Гончар Д.А., Дегтярев С.Х. // Биотехнология. - 2006 (в печати).
3. Чернухин В.А., Томилова Ю.Э., Чмуж Е.В., Соколова О.О., Дедков B.C., Дегтярев С.Х. // Заявка на выдачу патента РФ №2006130604, кл. С12N 1/21, дата подачи 24.08.2006 г.
4. Дегтярев С.Х., Чмуж Е.В., Абдурашитов М.А., Каширина Ю.Г., Дедков B.C., Томилова Ю.Э., Мезенцева Н.В., Гончар Д.А. // Патент РФ №2270859, кл. С12N 1/21, опубл. 27.02.2006, Бюл.№6.
5. Madden, T.L., Tatusov, R.L., Zhang, J. // Meth. Enzymol. - 1996. - V.266. - P.131-141.
6. Дедков B.C. // Биотехнология. - 2004. - №4. - С.77-82.
7. Bickle T.A., Pirotta V., Imber R. // Nucl. Acids Res. - 1977. - V.4. - P.2561-2572.
Claims (1)
- Штамм бактерий Glacial ice bacterium KKM НПО «СибЭнзим» 6М74 - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы, узнающей и расщепляющей обе цепи метилированной нуклеотидной последовательности ДНК 5′-G(m5C)↓NG(m5C)-3′ с образованием однонуклеотидных 5′-выступающих концов.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006136335/13A RU2322492C1 (ru) | 2006-10-13 | 2006-10-13 | Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006136335/13A RU2322492C1 (ru) | 2006-10-13 | 2006-10-13 | Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2322492C1 true RU2322492C1 (ru) | 2008-04-20 |
Family
ID=39454044
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006136335/13A RU2322492C1 (ru) | 2006-10-13 | 2006-10-13 | Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2322492C1 (ru) |
-
2006
- 2006-10-13 RU RU2006136335/13A patent/RU2322492C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
LEUNG D.W., LUI A.C., MERILEES H., MCBRIDE В.С., SMITH M.A restriction enzyme from Fusobacterium nucleatum 4H which recognizes GCNGC. Nucleic Acids Res. 1979 Jan; 6(1): 17-25. LUBYS A., JANULAITIS A. Cloning and analysis of the plasmid-borne genes encoding the Bsp6I restriction and modification enzymes. Gene. 1995 May 19; 157(1-2): 25-9. LEE S.Y., MERMELSTEIN L.D., BENNETT G.N., PAPOUTSAKIS E.T. Vector construction, transformation, and gene amplification in Clostridium acetobutylicum ATCC 824. Ann NY Acad Sci. 1992 Oct 13; 665: 39-51. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105018548B (zh) | 用于修饰核酸的试剂盒 | |
Lacks et al. | A deoxyribonuclease of Diplococcus pneumoniae specific for methylated DNA | |
Garber et al. | In vitro processing of B. mori transfer RNA precursor molecules | |
CN101918595A (zh) | 用于扩增和复制亚硫酸氢盐修饰的核酸的酶 | |
RU2340670C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Arthrobacter luteus B-ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ Alu BI | |
RU2322492C1 (ru) | Штамм бактерий glacial ice bacterium - продуцент сайт-специфической эндонуклеазы glu i | |
RU2475534C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Planomicrobium koreense 78K - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ PkrI | |
RU2322494C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SIMPLEX - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ BlsI | |
RU2377294C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ Paracoccus carotinifaciens 3K - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ PcsI. | |
RU2475533C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Microbacterium testaceum 17B - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ MteI | |
RU2270859C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTILIS - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ Bisi | |
RU2394099C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ Kocuria rosea - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ KroI | |
RU2614262C1 (ru) | Штамм бактерий Micrococcus luteus 805 - продуцент сайт-специфической метилзависимой эндонуклеазы MluVI | |
RU2593723C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Plantibacter flavus 3Kz - ПРОДУЦЕНТ МЕТИЛЗАВИСИМОЙ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ PfsI | |
US7989184B2 (en) | Endoribonuclease | |
RU2399663C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ Arthrobacter oxydans - ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ AoxI | |
McClain | A role for ribonuclease III in synthesis of bacteriophage T4 transfer RNAs | |
CN101228273A (zh) | 新的核糖核酸内切酶 | |
RU2287012C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Glacial ice bacterium I - ПРОДУЦЕНТ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ Gla I | |
RU2597987C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli N42 (pElmI) - ПРОДУЦЕНТ МЕТИЛЗАВИСИМОЙ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ ElmI | |
Chmuzh et al. | A Novel Restriction Endonuclease BisI from Bacillus subtilis T30 Recognizes a Methylated DNA Sequence 5'-G (m5C)↓ NGC-3' | |
EP0464990B1 (en) | New restriction enzyme | |
RU2232807C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк ptrcte-oph и продуцент фермента органофосфатгидролазы | |
RU2044055C1 (ru) | Штамм бактерий klebsiella azeanae - продуцент эндонуклеазы рестрикции kaz 48 ki | |
JP4143070B2 (ja) | 新規酵素、その製造法及びそれを用いた分子量調整二本鎖dnaの製造法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181014 |