RU2314039C1 - Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей - Google Patents
Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2314039C1 RU2314039C1 RU2006133414/14A RU2006133414A RU2314039C1 RU 2314039 C1 RU2314039 C1 RU 2314039C1 RU 2006133414/14 A RU2006133414/14 A RU 2006133414/14A RU 2006133414 A RU2006133414 A RU 2006133414A RU 2314039 C1 RU2314039 C1 RU 2314039C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pyelonephritis
- markers
- children
- chronic
- chronic pyelonephritis
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и иммунологии. В периферической крови больных определяют методом непрямой иммунофлюоресценции с применением моноклональных антител уровень экспрессии маркеров CD95 лимфоцитов и при содержании маркеров CD95 более 21,31% определяют хроническое течение пиелонефрита. Способ прост и информативен. Он позволяет быстро и объективно в течение 2,5 часов после взятия крови оценить количественный маркер нарушений механизмов апоптоза при хроническом пиелонефрите, отличается высокой информативностью для дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита, обеспечивает своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии. Оно может быть использовано в клинике для диагностики хронического пиелонефрита (ХП) у детей.
Известен способ диагностики ХП по клиническим признакам, согласно которому ХП дифференцируют от цистита, гломерулонефрита, наследственного нефрита и других заболеваний (Возианов А.Ф., Майданник В.Г., Видный В.Г., Багдасарова И.В. Основы нефрологии детского возраста. - К.: Книга плюс, 2002. - С.22-91).
Известен способ диагностики пиелонефрита по определению уровня цитокинов, который выбран в качестве ближайшего аналога. Этот способ включает выявление повышения уровня цитокинов (фактора некроза опухоли-альфа, трансформирующего фактора роста-бета 1) в плазме крови иммуноферментным методом (Хворостов И.Н., Смирнов И.Е., Зоркин С.Н., Кучеренко А.Г. Цитокины при обструктивных уропатиях у детей // Вопросы современной педиатрии. - Приложение №1: Сборник материалов Х Съезда педиатров России «Пути повышения эффективности медицинской помощи детям». - 2005. - Т.4. - С.572). Недостатком данного способа является его высокая стоимость.
Целью изобретения является повышение точности, эффективности и объективизация дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита, что обеспечит быстроту постановки диагноза, экономичность, а также своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий.
Сущность предложенного способа диагностики состоит в том, что наряду с клиническими данными и исследованием мочи определяют уровень маркеров CD95 лимфоцитов периферической крови ребенка методом непрямой иммунофлюоресценции с применением моноклональных антител и при содержании маркеров CD95 более 21,31% диагностируют хроническое течение пиелонефрита.
CD95 (FasR) относится к рецепторным белкам семейства факторов некроза опухолей - ФНО. Основная функция системы Fas-рецептор-Fas-лиганд (FasL) - индукция апоптоза в клетках. При связывании лиганда с рецептором происходит олигомеризация цитоплазматических белков, в результате чего активируется апоптозоспецифическая протеаза (каспаза-8) и развиваются характерные для апоптоза процессы. Кроме генетически детерминированных медиаторов апоптоза, клетка может подвергаться действию других соединений, регулирующих этот процесс, например цитокинов (интерлейкинов 2, 4, 10), циркулирующих в крови или связанных с биомембранами. При инфекционных процессах развитие апоптоза зависит от конкретных факторов, выделяемых микроорганизмами (суперантигены-экзотоксины часто выступают в качестве индукторов активационного апоптоза). Разрушение клеток канальцевого эпителия, наряду с некрозом, может происходить и путем апоптоза. На завершающих этапах воспаления апоптозу принадлежит важная роль, поскольку в этот период происходит устранение активированных клеток иммунной системы, выполнивших свои функции. Возможна негативная роль апоптоза в развитии вторичного иммунодефицита у больных хроническим пиелонефритом.
Способ осуществляется следующим образом: из пробы (4-5 мл) гепаринизированной крови, взятой натощак у больных детей, выделяют лимфоциты на градиенте фиколл-верографина, затем 1-0,1 млн лимфоцитов в объеме 50 мкл вносят в лунки 96-луночного круглодонного планшета. К клеткам добавляют 5 мкл тестируемых моноклональных антител (CD95) и инкубируют 30-45 мин при +4°С. Затем добавляют 150 мкл раствора Хенкса и центрифугируют 5 мин при 200 g. После удаления супернатанта вносят 50 мкл раствора Хенкса, клетки суспендируют, добавляют 150 мкл раствора Хенкса и центрифугируют 5 мин при 200 g. К осадку отмытых клеток добавляют 50 мкл F(ab~)2-фрагментов овечьих антител к Ig мыши, меченных ФИТЦ и разведенных 1:100 (для разведения используют раствор Хенкса, содержащий 0,5% желатины и 0,1% азида натрия). Клетки суспендируют и инкубируют 30 мин при +4°С, затем клетки 2 раза отмывают как указано выше. Окрашенные клетки анализируют с помощью люминесцентного микроскопа. Клетки суспендируют, переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, и препарат просматривают под иммерсией с увеличением (×3; объектив ×90). Количество антигенпозитивных клеток определяют как % флюоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом % флюоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качестве отрицательного контроля используют препараты, подготовленные аналогичным образом, но без обработки моноклональными антителами. При экспрессии маркеров CD95 более 21,31% лимфоцитов устанавливают хроническое течение пиелонефрита.
ПРИМЕР.
Девочка Д., 5 лет. Год назад находилась на стационарном лечении по поводу острого пиелонефрита; отмечались симптомы интоксикации, болевой абдоминальный синдром, мочевой синдром, представленный лейкоцитурией, бактериурией. Два дня назад после кратковременного переохлаждения повысилась температуры тела до 38,50°C, появились боли в животе, в поясничной области. При поступлении в стационар состояние средней тяжести, температура 38,5°С, кожные покровы бледные, параорбитальный цианоз. Отеков и пастозности тканей нет. В легких везикулярное дыхание. ЧДД 20 в 1 мин. Тоны сердца удовлетворительной звучности. Пульс 122 в 1 мин, АД 100/60 мм рт.ст. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области правого фланка. Симптом Пастернацкого справа положительный. Мочеиспускания учащены до 10 раз в сутки, безболезненные. В общем анализе крови нейтрофильный лейкоцитоз, увеличение СОЭ. Биохимический анализ крови: уровень общего белка, мочевины, креатинина в пределах нормы, С-реактивный белок - отриц. В общем анализе мочи - лейкоцитурия, оксалурия. Анализ мочи по Нечипоренко: лейкоциты - 25.500 в 1 мл (нейтрофилы 82%, лимфоциты 18%), эритроциты - 1000 в 1 мл. Бактериологическое исследование мочи: Е. coli 100000 КОЕ в 1 мл, чувствительна к цефтриаксону, цефтазидиму, гентамицину, норфлоксацину. Снижена антикристаллобразующая способность мочи к оксалатам кальция. По результатам исследования клиренса по эндогенному креатинину, анализа мочи по Зимницкому - функция почек сохранена. УЗИ почек и мочевого пузыря: неоднородность центрального эхо-комплекса за счет гиперэхогенных сигналов, нарушено соотношение паренхимы и чашечно-лоханочной системы справа, эхо-признаки воспалительного процесса правой почки. Экскреторная урография: выделение контрастного вещества не нарушено, отмечается сглаженность форниксов правой почки.
Уровень экспрессии маркеров CD95 лимфоцитами периферической крови 25,00%.
Диагноз. Хронический вторичный (дисметаболический) пиелонефрит, рецидивирующее течение, активная стадия. Функция почек сохранена.
Данные показывают, что уровень маркеров CD95 лимфоцитов периферической крови может служить дополнительным критерием в дифференциальной диагностике ХП.
Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей по уровню экспрессии маркеров CD95 лимфоцитами периферической крови был апробирован на 38 детях с предварительным диагнозом хронический пиелонефрит, поставленным на основании клинических признаков (основная группа). Группу сравнения составили 14 детей с диагнозом острый пиелонефрит, контрольную группу - 30 детей с первой группой здоровья, с нормальными анализами крови и мочи. Всем обследованным производился забор крови и определение уровня экспрессии маркеров CD95 лимфоцитами периферической крови перечисленным выше способом.
Результаты проведенного исследования представлены в таблице. Для обработки полученного материала и проведения статистического анализа в исследованных группах была использована программа статистической обработки информации «STATGRAPHICS PLUS». Вычисляли среднюю и ошибку средней (М±m). Сравнение в исследованных группах проводили попарно при помощи параметрических методов, так как изучаемые выборки могли быть аппроксимированы нормальным законом распределения. Сравнение осуществляли с помощью критериев Стьюдента (t) (сравнение средних) и Фишера (сравнение средних квадратических отклонений). Уровень достоверности оценивали значением р. Различия при сравнении считали достоверными с вероятностью более 95% при P<0,05.
Таблица СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПИЕЛОНЕФРИТА У ДЕТЕЙ |
|
CD95 (%) M±m (min, max) |
|
Хронический пиелонефрит | 25,45±2,07* |
(n=38) | (21,31-29,59) |
Острый пиелонефрит | 14,20±1,38* |
(n=14) | (11,44-16,96) |
Здоровые | 8,00±0,32* |
(n=30) | (7,36-8,64) |
Примечание: * - р<0,05 - достоверность различия в группах при сравнении. |
У здоровых детей маркеры CD95 экспрессируют не более 8,64% лимфоцитов периферической крови, у детей, больных острым пиелонефритом, - не более 16,96%.
Полученные данные показали, что при ХП уровень маркеров CD95 лимфоцитов периферической крови достоверно увеличивался по сравнению с уровнем у детей с ОП и контрольной группой, следовательно, уровень экспрессии молекул CD95 лимфоцитами периферической крови можно считать высоко чувствительным маркером при ХП.
Использование предложенного способа диагностики имеет следующие преимущества:
1) высокую информативность для дифференциальной диагностики ХП;
2) является информативным методом определения количественного маркера нарушений механизмов апоптоза при ХП в динамике;
3) быструю диагностику;
4) обеспечивает своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий.
Claims (1)
- Способ диагностики хронического пиелонефрита, включающий исследование периферической крови, отличающийся тем, что определяют степень экспрессии лимфоцитами маркеров CD95 методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител и при содержании в периферической крови маркеров CD95 более 21,31% считают наличие хронического течения пиелонефрита подтвержденным.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006133414/14A RU2314039C1 (ru) | 2006-09-18 | 2006-09-18 | Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006133414/14A RU2314039C1 (ru) | 2006-09-18 | 2006-09-18 | Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2314039C1 true RU2314039C1 (ru) | 2008-01-10 |
Family
ID=39020045
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006133414/14A RU2314039C1 (ru) | 2006-09-18 | 2006-09-18 | Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2314039C1 (ru) |
-
2006
- 2006-09-18 RU RU2006133414/14A patent/RU2314039C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ПОЛОСУХИНА Е.Р. Прогностическое значение экспрессии антигена CD95 (Fas/APO-1) у больных с трансплантацией почки. - Медицинская иммунология, 2001, т.2, №2, с.151-152. NACCASHA N.P. et al. Phenotypic and metabolic characteristics of monocytes and granulocytes in normal pregnancy and maternal infection. Am J Obstet Gynecol. 2001 Nov; 185(5): 1118-23. * |
ХВОРОСТОВ И.Н. и др. Цитокины при обструктивных уропатиях у детей. Вопросы современной педиатрии. Приложение №1. Сборник материалов Х Съезда педиатров России "Пути повышения эффективности медицинской помощи детям", 2005, т.4, с.572. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2359822T3 (es) | Procedimiento y dispositivos para el diagnóstico de apendicitis. | |
JP5788956B2 (ja) | 食細胞の機能評価方法 | |
TW200839238A (en) | Methods and devices for diagnosis of appendicitis | |
Abebe et al. | Variation of urine parameters among diabetic patients: A cross-sectional study | |
Kihara et al. | Urogenital schistosomiasis in women of reproductive age and pregnant mothers in Kwale County, Kenya | |
RU2314039C1 (ru) | Способ диагностики хронического пиелонефрита у детей | |
RU2679629C1 (ru) | Способ диагностики воспалительного процесса органов мочевыделительной системы у детей раннего возраста | |
RU2318447C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики хронического пиелонефрита у детей | |
RU2671637C1 (ru) | Способ прогнозирования риска отторжения почки до ее трансплантации | |
CN114113631B (zh) | 脓毒症的检测试剂盒 | |
RU2314040C1 (ru) | Способ диагностики острого пиелонефрита у детей | |
RU2485519C1 (ru) | Способ диагностики хронической почечной недостаточности у детей и подростков | |
RU2488829C2 (ru) | Способ прогнозирования течения неонатальных гепатитов у детей первого года жизни | |
RU2615353C1 (ru) | Способ определения степени активности обострения хронического обструктивного пиелонефрита | |
RU2461828C1 (ru) | Способ диагностики стадии атопического дерматита у детей | |
RU2476881C2 (ru) | Способ дифференциальной диагностики тяжести течения язвенной болезни | |
Vassalou et al. | First report of Dientamoeba fragilis infection explaining acute non-specific abdominal pain | |
JP2529836B2 (ja) | モノクロ−ナル抗体を用いた尿中腎抗原の測定による腎障害の診断方法 | |
RU2766811C1 (ru) | Способ применения маркеров бактериального воспаления для диагностики инфекции мочевыводящих путей у детей первых трех лет жизни | |
CN108241054B (zh) | 检测g蛋白偶联受体18的试剂在制备败血症诊断及病程监测和预后判断试剂中表达的应用 | |
RU2691402C1 (ru) | Способ прогнозирования характера клинического течения постинфекционного гломерулонефрита | |
RU2687563C2 (ru) | Способ дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза Эпштейна-Барр-вирусной этиологии, острого бактериального тонзиллита и острого вирусного гепатита "В" у взрослых | |
Mohkam | The 5th International Congress of Iranian Pediatric Nephrology Association | |
Hameed et al. | Diagnostic potential of soluble TNF alpha receptor 1 in diabetic and hypertensive patients with renal impairment and UTI. | |
RU2322677C1 (ru) | Способ прогнозирования характера течения реактивного артрита у детей дошкольного возраста |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080919 |