RU2311199C1 - Vaccine against pasteurellosis in animals - Google Patents
Vaccine against pasteurellosis in animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2311199C1 RU2311199C1 RU2006124245/13A RU2006124245A RU2311199C1 RU 2311199 C1 RU2311199 C1 RU 2311199C1 RU 2006124245/13 A RU2006124245/13 A RU 2006124245/13A RU 2006124245 A RU2006124245 A RU 2006124245A RU 2311199 C1 RU2311199 C1 RU 2311199C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- multocida
- hours
- adjuvant
- serological
- cultivation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке средств специфической профилактики, и в частности для получения вакцины против пастереллеза животных.The invention relates to veterinary microbiology and biotechnology and can be used in the development of specific prophylactics, and in particular for obtaining a vaccine against animal pasteurellosis.
Известна вакцина против пастереллеза животных, включающая инактивированную баксуспензию Pasteurella multocida серологических вариантов A, B, D и адъювант (Патент РФ №2162339, «Способ изготовления эмульсионной противопастереллезной вакцины», Бюл. №3, 2001, МКИ А61К 39/102).Known vaccine against pasteurellosis of animals, including inactivated Bakususpension Pasteurella multocida serological options A, B, D and adjuvant (RF Patent No. 2162339, "Method for the manufacture of emulsion anti-proterellosis vaccine", Bull. No. 3, 2001, MKI A61K 39/102).
Недостатками известной вакцины является низкое качество целевого продукта, выявляемое низкой антигенной активностью при высоком содержании балластных веществ, реактогенностью, обуславливающей сенсибилизацию организма животных.The disadvantages of the known vaccine is the low quality of the target product, detected by low antigenic activity with a high content of ballast substances, reactogenicity, causing sensitization of the animal organism.
Задачей заявленного технического решения является повышение качества целевого продукта за счет обогащения его протективными поверхностными растворимыми антигенами /что повышает антигенную и иммуногенную активности, уменьшает неспецифическую нагрузку на иммунную систему животных и снижает реактогенность/.The objective of the claimed technical solution is to improve the quality of the target product by enriching it with protective surface soluble antigens / which increases antigenic and immunogenic activity, reduces the non-specific load on the animal’s immune system and reduces reactogenicity /.
Поставленная задача решается в вакцине против пастереллеза животных, включающей инактивированную баксуспензию Pasteurella multocida серологических вариантов A, B, D и адъювант, тем, что в качестве Р.multocida серологических вариантов A, B, D используют Pasteurella multocida серологических вариантов A, B, D с активностью растворимых поверхностных антигенов в реакции пассивной гемагглютинации как 1:256-4096, 1:512-8192, 1: 256-4096 соответственно, при следующем соотношении компонентов, мас.%:The problem is solved in a vaccine against animal pasteurellosis, including inactivated Bakususpension Pasteurella multocida serological options A, B, D and adjuvant, in that as P.multocida serological options A, B, D use Pasteurella multocida serological options A, B, D with the activity of soluble surface antigens in the reaction of passive hemagglutination as 1: 256-4096, 1: 512-8192, 1: 256-4096, respectively, in the following ratio of components, wt.%:
Поставленная задача решается в вакцине против пастереллеза животных, включающей инактивированную баксуспензию Pasteurella multocida серологических вариантов A, B, D и адъювант, также тем, что в качестве адъюванта она содержит эмульгатор 139 и минеральное масло Маркол 52, взятые в массовом соотношении 1:10-12.The problem is solved in the vaccine against pasteurellosis of animals, including inactivated Bakususpension Pasteurella multocida serological options A, B, D and adjuvant, also by the fact that as an adjuvant it contains emulsifier 139 and mineral oil Markol 52, taken in a mass ratio of 1: 10-12 .
Минеральное масло Маркол 52 и эмульгатор 139 известны и используются в качестве адъюванта (см., например, Патент РФ №2195318).Mineral oil Markol 52 and emulsifier 139 are known and used as an adjuvant (see, for example, RF Patent No. 2195318).
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию «новизна».In the patent and scientific and technical literature, technical solutions are not known containing signs similar to those claimed, i.e. the proposal meets the criterion of "novelty."
Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».The proposal is feasible in laboratory and industrial conditions, aimed at solving a real technical problem, i.e. the proposal is “industrially applicable”.
Существующие вакцины против пастереллезов животных изготавливают из бактериальной массы пастерелл, выращенной без учета протективной характеристики компонентов клетки возбудителей, функционально относящихся к факторам патогенности. Реакторное культивирование пастерелл до стационарной фазы роста бактерий производится без учета выявления, определения уровня специфической активности, сохранения этой активности и распределения в среде роста протективных поверхностных растворимых антигенных комплексов. Процесс культивирования проводится в неконтролируемом по факторам патогенности режиме. Нами впервые установлено, что при получении максимального выхода биомассы, как это в настоящее время принято при промышленном культивировании, снижается качество антигенного материала, так как по достижении определенной фазы развития культуры под действием собственных ферментов в процессе старения культуры происходят деструктивные изменения части компонентов поверхностных антигенов, что обуславливает потери иммунологически активного материала и недопустимо при производстве эффективных противобактерийных препаратов. Впервые предложен способ получения вакцины против пастереллезов животных, в котором вместо определения критерия количества клеток пастерелл по физико-химическим и биологическим показателям, максимальный уровень производства антигенов определяют по уровню активности растворимых поверхностных антигенов пастерелл в реакции пассивной гемагглютинации в культуральной жидкости, освобожденной от клеточной бакмассы, что позволяет получить неочевидный положительный эффект - повышение качества целевого продукта и ускорение способа, т.е. предложение соответствует критериям «новизна» и «изобретательский уровень».Existing vaccines against pasteurellosis of animals are made from the bacterial mass of pasteurellae grown without taking into account the protective characteristics of the cell components of pathogens that are functionally related to pathogenicity factors. Reactivation of pasteurells to the stationary phase of bacterial growth is carried out without taking into account the identification, determination of the level of specific activity, the preservation of this activity and the distribution of protective surface soluble antigenic complexes in the growth medium. The cultivation process is carried out in an uncontrolled mode of pathogenicity factors. We first established that when obtaining the maximum biomass yield, as is currently accepted in industrial cultivation, the quality of the antigenic material decreases, since upon reaching a certain phase of the development of the culture under the influence of its own enzymes during the aging of the culture, destructive changes in some of the components of surface antigens occur, which causes the loss of immunologically active material and is unacceptable in the production of effective antibacterial drugs. For the first time, a method for producing a vaccine against pasteurellosis of animals has been proposed, in which, instead of determining the criterion for the number of pasteurella cells by physicochemical and biological indicators, the maximum level of antigen production is determined by the activity level of soluble surface pasteurella antigens in the reaction of passive hemagglutination in a culture fluid freed from cellular bacterial which allows you to get a non-obvious positive effect - improving the quality of the target product and accelerating the method, i.e. the proposal meets the criteria of "novelty" and "inventive step".
Способ иллюстрируется на следующих примерах.The method is illustrated in the following examples.
Пример 1.Example 1
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Pasteurella multocida /P.multocida/ серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 8 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of Pasteurella multocida / P.multocida/ serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which were seeded in an industrial bioreactor with a production medium at a rate of 10 ± 2% by volume nutrient medium and thoroughly mixed in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 8 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р. multocida серовариантов A, B, D через 8 часов культивирования был равен 1:256; 1:512; 1:256 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 8 hours of cultivation was equal to 1: 256; 1: 512; 1: 256 respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,3%-ной концентрации к общему объему в течение 24 часов при 37°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The resulting bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.3% to the total volume for 24 hours at 37 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут по 1 кг бактериальной суспензии каждого штамма (всего 3 кг баксуспензии) и добавляют 3 кг адъюванта, полученного смешиванием 10 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:10), получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 1 kg of the bacterial suspension of each strain (total 3 kg of suspension) and add 3 kg of adjuvant obtained by mixing 10 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and Markol 52 oil is 1:10), getting the composition 1 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 2.Example 2
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 10 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 10 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р. multocida серовариантов A, B, D через 10 часов культивирования был равен 1:4096; 1:8192; 1:4096 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 10 hours of cultivation was equal to 1: 4096; 1: 8192; 1: 4096, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,35%-ной концентрации к общему объему в течение 18 часов при 38°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.35% to the total volume for 18 hours at 38 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 1 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 0,8 кг Р.multocida сероварианта В, 0,8 кг Р.multocida сероварианта D и добавляют 1 кг адъюванта, полученного смешиванием 11 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:11), получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 1 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 0.8 kg of P.multocida of serovariant B, 0.8 kg of P.multocida of serovariant D and add 1 kg of adjuvant obtained by mixing 11 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and Markol 52 oil is 1:11), obtaining composition 2 in the following ratio, wt.%:
Пример 3.Example 3
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 9 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 9 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 9 часов культивирования был равен 1:2048; 1:4096; 1:2048 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 9 hours of cultivation was 1: 2048; 1: 4096; 1: 2048, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,4%-ной концентрации к общему объему в течение 22 часов при 37,5°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The resulting bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.4% to the total volume for 22 hours at 37.5 ° C, stirring periodically every 4 hours.
По окончании инактивации берут 1 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 1,2 кг Р.multocida сероварианта В, 1,2 кг Р.multocida сероварианта D и добавляют 1 кг адъюванта, полученного смешиванием 12 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение и эмульгатор 139 масло Маркол 52 равно 1:12), получая состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 1 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 1.2 kg of P.multocida of serovariant B, 1.2 kg of P.multocida of serovariant D and add 1 kg of adjuvant obtained by mixing 12 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (ratio and emulsifier 139 Markol oil 52 is 1:12), obtaining composition 3 in the following ratio, wt.%:
Пример 4.Example 4
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р. multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 8 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P. multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which were seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 8 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 8 часов культивирования был равен 1:256; 1:512; 1:256 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 8 hours of cultivation was equal to 1: 256; 1: 512; 1: 256 respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,3%-ной концентрации к общему объему в течение 24 часов при 37°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The resulting bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.3% to the total volume for 24 hours at 37 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,45 кг смеси бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг суспензии каждого штамма, и добавляют 0,55 кг адъюванта, полученного смешиванием 10 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:10), получая состав 4 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of the inactivation, 0.45 kg of the mixture of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of the suspension of each strain is taken, and 0.55 kg of the adjuvant obtained by mixing 10 kg of Markol mineral oil and 1 kg of emulsifier 139 is added (the ratio of emulsifier 139 and Markol 52 oil is 1:10), obtaining composition 4 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 5.Example 5
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С±1°С в течение 10 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 10 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 10 часов культивирования был равен 1:4096; 1:8192; 1:4096 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out until the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 10 hours of cultivation was equal to 1: 4096; 1: 8192; 1: 4096, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,35%-ной концентрации к общему объему в течение 18 часов при 38°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.35% to the total volume for 18 hours at 38 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,45 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 0,8 кг Р.multocida сероварианта В, 0,8 кг Р.multocida сероварианта D и добавляют 0,55 кг адъюванта, полученного смешиванием 11 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:11), получая состав 5 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 0.45 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 0.8 kg of P.multocida of serovariant B, 0.8 kg of P.multocida of serovariant D and add 0.55 kg of the adjuvant obtained by mixing 11 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and oil Markol 52 is 1:11), obtaining composition 5 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 6.Example 6
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мл %. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 9 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 ml% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 9 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 9 часов культивирования был равен 1:2048; 1:4096; 1:2048 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 9 hours of cultivation was 1: 2048; 1: 4096; 1: 2048, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,4%-ной концентрации к общему объему в течение 22 часа при 37,5°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.4% to the total volume for 22 hours at 37.5 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,45 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 1,2 кг Р.multocida сероварианта В, 1,2 кг Р.multocida сероварианта D и добавляют 0,55 кг адъюванта, полученного смешиванием 12 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:12), получая состав 6 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, 0.45 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 1.2 kg of P.multocida of serovariant B, 1.2 kg of P.multocida of serovariant D is taken and 0.55 kg of the adjuvant obtained by mixing is added 12 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and oil Markol 52 is 1:12), obtaining composition 6 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 7.Example 7
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мл%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 8 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 ml% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 8 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 8 часов культивирования был равен 1:256; 1:512; 1:256 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 8 hours of cultivation was equal to 1: 256; 1: 512; 1: 256 respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,3%-ной концентрации к общему объему в течение 24 часов при 37°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The resulting bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.3% to the total volume for 24 hours at 37 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,55 кг смеси бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг суспензии каждого штамма, и добавляют 0,45 кг адъюванта, полученного смешиванием 10 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:10), получая состав 7 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, they take 0.55 kg of a mixture of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of the suspension of each strain, and 0.45 kg of the adjuvant obtained by mixing 10 kg of Markol 52 mineral oil and 1 kg of emulsifier 139 is added (the ratio of emulsifier 139 and Markol 52 oil is 1:10), obtaining composition 7 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 8.Example 8
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 10 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 10 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 10 часов культивирования был равен 1:4096; 1:8192; 1:4096 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out until the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 10 hours of cultivation was equal to 1: 4096; 1: 8192; 1: 4096, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,35%-ной концентрации к общему объему в течение 18 часов при 38°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.35% to the total volume for 18 hours at 38 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,55 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 0,8 кг Р.multocida сероварианта В, 0,8 кг Р.multocida сероварианта D, и добавляют 0,45 кг адъюванта, полученного смешиванием 12 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:12), получая состав 8 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 0.55 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 0.8 kg of P.multocida of serovariant B, 0.8 kg of P.multocida of serovariant D, and 0.45 kg of the adjuvant obtained mixing 12 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and oil Markol 52 is 1:12), obtaining a composition of 8 in the following ratio, wt.%:
Пример 9.Example 9
Для получения вакцины против пастереллеза животных отобраны три производственных штамма Р.multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые засевают в промышленный биореактор с производственной средой из расчета 10±2% к объему питательной среды и тщательно перемешивают в биореакторе объемом 300 литров с регулировкой температуры, рН, оборотов мешалки и аэрации. Для выращивания пастерелл используют питательные среды на основе перевара Хоттингера с рН 7,9-8,0 и содержанием аминного азота не менее 178-180 мг%. Культивирование проводят при температуре 37°С ± 1°С в течение 9 часов. Каждый штамм выращивают отдельно.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, three production strains of P.multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which are seeded in an industrial bioreactor with a production medium at the rate of 10 ± 2% of the volume of the nutrient medium and carefully mix in a bioreactor of 300 liters with adjustable temperature, pH, stirrer speed and aeration. For the cultivation of pasteurells, nutrient media based on the Hottinger reagent with a pH of 7.9-8.0 and an amine nitrogen content of at least 178-180 mg% are used. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ° C ± 1 ° C for 9 hours. Each strain is grown separately.
Оптическую концентрацию бактериальных клеток определяют фотометрическим методом КФК-2 по калибровочной кривой. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют активность поверхностных растворимых антигенов в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с антителами, полученными на поверхностные растворимые антигены пастерелл. Объектом исследования служит супернатант-культуральная жидкость, освобожденная от клеток двукратным центрифугированием при 14000 об/мин и фильтрованием через стерилизующие пластины. Культивирование проводят до максимального накопления поверхностных растворимых антигенов в среде роста, определяемый по уровню титров в РПГА, в частности, данный показатель уровня активности для Р.multocida серовариантов A, B, D через 9 часов культивирования был равен 1:2048; 1:4096; 1:2048 соответственно.The optical concentration of bacterial cells is determined by the KFK-2 photometric method using a calibration curve. At all stages of the technological production of the vaccine, the activity of surface soluble antigens in the reaction of passive hemagglutination (RPHA) with antibodies obtained on surface soluble pasteurell antigens is determined every 1.5-2 hours. The object of the study is the supernatant-culture fluid, freed from the cells by double centrifugation at 14,000 rpm and filtering through sterilizing plates. Cultivation is carried out to the maximum accumulation of surface soluble antigens in the growth medium, determined by the level of titers in RPGA, in particular, this indicator of the level of activity for P. multocida serovariants A, B, D after 9 hours of cultivation was 1: 2048; 1: 4096; 1: 2048, respectively.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,4%-ной концентрации к общему объему в течение 22 часа при 37,5°С, периодически перемешивая каждые 4 часа.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final concentration of 0.4% to the total volume for 22 hours at 37.5 ° C, periodically stirring every 4 hours.
По окончании инактивации берут 0,55 кг бактериальной суспензии, полученной смешиванием 1 кг Р.multocida сероварианта А, 1,2 кг Р.multocida сероварианта В, 1,2 кг Р.multocida сероварианта D, и добавляют 0,45 кг адъюванта, полученного смешиванием 12 кг минерального масла Маркол 52 и 1 кг эмульгатора 139 (соотношение эмульгатор 139 и масло Маркол 52 равно 1:12), получая состав 9 при следующем соотношении компонентов, мас.%:At the end of inactivation, take 0.55 kg of the bacterial suspension obtained by mixing 1 kg of P.multocida of serovariant A, 1.2 kg of P.multocida of serovariant B, 1.2 kg of P.multocida of serovariant D, and 0.45 kg of the adjuvant obtained mixing 12 kg of mineral oil Markol 52 and 1 kg of emulsifier 139 (the ratio of emulsifier 139 and oil Markol 52 is 1:12), obtaining composition 9 in the following ratio of components, wt.%:
Пример 10.Example 10
Для получения вакцины против пастереллеза животных, согласно известному техническому решению /прототипу/, отобраны три производственных штамма Р. multocida серологических вариантов A, B, D №№1231, 681, Т-80, которые культивировали раздельно в бульоне на основе гидролизата Хоттингера с рН 7,6 при постоянном перемешивании. На всех этапах технологического производства вакцины через каждые 1,5-2 часа определяют концентрацию микробных клеток. Культивирование проводят до максимального накопления микробных клеток в среде роста, в частности, данный показатель был равен 24,3 млрд. клеток через 12 часов культивирования.To obtain a vaccine against animal pasteurellosis, according to the well-known technical solution / prototype /, three production strains of P. multocida serological variants A, B, D No. 1231, 681, T-80 were selected, which were separately cultured in broth based on Hottinger hydrolyzate with pH 7.6 with constant stirring. At all stages of the technological production of the vaccine, the concentration of microbial cells is determined every 1.5-2 hours. Cultivation is carried out until the maximum accumulation of microbial cells in the growth medium, in particular, this indicator was equal to 24.3 billion cells after 12 hours of cultivation.
Полученную баксуспензию инактивируют формалином до конечной 0,3% концентрации к общему объему в течение 24 часов при 37°С, периодически перемешивая каждые 4 часа, и далее готовят вакцину согласно известному способу.The obtained bacuspension is inactivated with formalin to a final 0.3% concentration to the total volume for 24 hours at 37 ° C, periodically stirring every 4 hours, and then the vaccine is prepared according to the known method.
В таблице приводим технические данные вакцин, согласно известному и предлагаемому техническим решениям.In the table we present the technical data of the vaccines, according to the known and proposed technical solutions.
Уменьшение концентрации микробных клеток в единице объема в сравнении с известным техническим решением в 1,3-1,5 раз позволяет снизить реактогенность вакцины.A decrease in the concentration of microbial cells per unit volume in comparison with the known technical solution by 1.3-1.5 times allows to reduce the reactogenicity of the vaccine.
Как показали результаты экспериментальных исследований, предлагаемая вакцина против пастереллеза животных позволяет повысить качество целевого продукта путем повышения его активности в 2-32 раза, а также увеличить сроки хранения вакцины против пастереллеза животных, не снижая ее активности, в 1,5 раза.As shown by the results of experimental studies, the proposed vaccine against animal pasteurellosis can improve the quality of the target product by increasing its activity by 2-32 times, as well as increase the shelf life of the animal pasteurellosis vaccine without reducing its activity by 1.5 times.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006124245/13A RU2311199C1 (en) | 2006-07-06 | 2006-07-06 | Vaccine against pasteurellosis in animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006124245/13A RU2311199C1 (en) | 2006-07-06 | 2006-07-06 | Vaccine against pasteurellosis in animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2311199C1 true RU2311199C1 (en) | 2007-11-27 |
Family
ID=38960163
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006124245/13A RU2311199C1 (en) | 2006-07-06 | 2006-07-06 | Vaccine against pasteurellosis in animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2311199C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744744C1 (en) * | 2020-04-17 | 2021-03-15 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) | Vaccine against manchemiosis, bibershteiniosis and pasterelosis of large and small cattle associated inactivated, method for its preparation |
-
2006
- 2006-07-06 RU RU2006124245/13A patent/RU2311199C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744744C1 (en) * | 2020-04-17 | 2021-03-15 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) | Vaccine against manchemiosis, bibershteiniosis and pasterelosis of large and small cattle associated inactivated, method for its preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101979514B (en) | Virus and vaccine of porcine reproductive and respiratory syndrome and preparation method of same | |
| Sizonenko et al. | The New Efficiency of the «SRMP»–Listerias Growth-Promoting Factor During Factory Cultivation | |
| RU2311199C1 (en) | Vaccine against pasteurellosis in animals | |
| RU2416634C1 (en) | Halobacterium salinarum bacterial strain - bacteriorhodopsin producer | |
| CN110643522A (en) | Culture medium, culture method and application of pasteurella multocida | |
| RU2414929C1 (en) | Animal's pasteurellosis vaccine | |
| RU2723580C1 (en) | Method for producing salmon fish vibriosis adsorbed vaccine | |
| RU2405567C1 (en) | Method of obtaining vaccine against animal pasteurellosis | |
| RU2325183C1 (en) | Production method of animal colibacillosis vaccine | |
| RU2310473C1 (en) | Method for production of vaccine against animal pasteurellosis | |
| RU2309767C1 (en) | Method for manufacturing vaccine against pseudomonosis in swine | |
| CN108949606A (en) | A kind of chicken virus mycoplasma high density fermentation culture technique | |
| RU2803269C1 (en) | Nutrient medium for the cultivation of pasteurella in industrial bioreactors | |
| RU2288002C1 (en) | Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias | |
| RU2316345C1 (en) | Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
| RU2764118C1 (en) | Polyvalent vaccine against salmonellosis of productive animals | |
| RU2541454C1 (en) | Nutrient culture medium for swine erysipelas strain erysipelothrix rhuisipathie | |
| RU2687373C2 (en) | Method of obtaining brucellar biomass of vaccine strains at deep cultivation using a minimally invasive liquid nutrient medium | |
| RU2124366C1 (en) | Method of preparing vaccine against salmonellosis in agriculture animals and poultry | |
| CN110241090B (en) | Method for producing porcine pseudorabies virus antigen by full suspension cell culture | |
| RU2431664C1 (en) | Method for preparing fish aeromonosis vaccine | |
| RU2340357C2 (en) | Vaccine against animal colibacillosis | |
| CN114381386B (en) | Culture medium for producing avermectin through fermentation | |
| RU2642316C1 (en) | Method for production of vaccine against brucellosis of small cattle | |
| RU2465316C1 (en) | Haemophilus influenzae b n 326 bacterial strain, stable producer of capsular saccharide |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110707 |