RU2310461C1 - Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов - Google Patents
Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2310461C1 RU2310461C1 RU2006105864/15A RU2006105864A RU2310461C1 RU 2310461 C1 RU2310461 C1 RU 2310461C1 RU 2006105864/15 A RU2006105864/15 A RU 2006105864/15A RU 2006105864 A RU2006105864 A RU 2006105864A RU 2310461 C1 RU2310461 C1 RU 2310461C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mucous membranes
- placenta
- substitute
- production
- regional stem
- Prior art date
Links
Abstract
Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов. Способ заключается в том, что отмывают ткани плаценты свиной в фосфатном буфере или растворе Хэнкса, измельчают ее на кусочки 2-3 см3, кусочки заливают 150 мл 0,25% раствора трипсина, проводят трипсинизацию на магнитной мешалке в течение 3 часов при 20°С, затем биомассу региональных стволовых клеток выращивают монослоем на среде 199 с последующей водно-солевой экстракцией. Изобретение обеспечивает получение экстракта из выращенных региональных стволовых клеток животного происхождения, содержащих все регуляторные пептиды, запускающие регенераторные процессы в тканях. 1 табл.
Description
Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов. Поверхностное нанесение экстракта клеток из здоровой плацентарной ткани свиной обеспечивает процессы регенерации и восстановления эпидермиса за счет содержащихся в экстракте факторов роста кератиноцитов, цитокинов и других биологически активных веществ.
Известны способы замещения поврежденных клеток культивированными in vitro трансплантатами соединительно-тканевого происхождения (фибробласты, миопласты, клетки эпителия).
Культивированные трансплантаты используют для лечения ожогов, регенерации эпидермиса, рогового эпителия, лечения хронических кожных язв и др.
Известны биосовместимые синтетические внеклеточные матрицы для тканевой инженерии (РЖ Медицина. Реф. 5913, 1999, №10). Трансплантация клеток с использованием биодеградируемых синтетических внеклеточных матриксов создает возможность формирования полностью новых органов и тканей.
Известен способ культивирования клеток для тканевой терапии, необходимых для восстановления функций поврежденного органа или ткани. Клетки в этом случае выделяются из органов пациента или донора. После культивирования имплантату придается необходимая форма и он пересаживается больному. Для улучшения реваскуляции имплантата используют различные стимуляторы роста пролонгированного действия (РФ Биотехнология, реф. №00.01-ОЧР1.353, 2000, №1).
Недостатком известных технологических решений является трудность с интеграцией живых клеток в организме реципиента, длительные сроки культивирования, использование дорогостоящих материалов - среды роста, стимуляторы и т.д.
В предлагаемом способе получения полного спектра биологически активных компонентов использовали региональные стволовые клетки, содержащие все регуляторные пептиды, запускающие регенераторные процессы в тканях.
Технический результат изобретения - получение экстракта из выращенных региональных стволовых клеток животного происхождения.
Указанный технический результат достигается использованием заявляемого способа.
Способ осуществляется следующим образом.
Плаценту, полученную при опоросе здоровой свиньи с нормальными родами, для транспортировки в лабораторию помещали в стерильный сосуд с физиологическим раствором и антибиотиками. После доставки в лабораторию плаценту переносили в сосуд, содержащий 300 мл фосфатно-буферного раствора или раствора Хэнкса (рН 7,2). Плаценту промывали осторожным взбалтыванием в течение 1-2 минут, а затем переносили в другой сосуд с раствором Хэнкса. После трех-четырехкратного отмывания в растворе Хэнкса плаценту стерильными ножницами измельчали на кусочки размером 2-3 см2. Затем заливали 150 мл 0,25% раствора трипсина. Трипсинизацию проводили на магнитной мешалке в течение 3 часов при 20°С, затем биомассу региональных стволовых клеток выращивают монослоем на среде 199 с последующей водно-солевой экстракцией.
Сущность способа поясняется примером.
Для определения максимального выхода клеточной массы подбирались параметры трипсинизации. Было проведено 3 опыта. Во всех опытах брали участок плаценты весом 200 г в опыте №1 Трипсинизацию проводили при 4°С - 1 час, в опыте №2 при 20°С - 3 часа, в опыте №3 при 37°С - 5 часов. Результаты проведенных опытов представлены в таблице 1.
Проведенные опыты показали, что оптимальным режимом получения максимального количества клеточной массы является вариант трипсинизации с использованием температурного режима 20°С в течение 3 часов, позволяющий получить 115 млн. клеток на 1 г ткани. Затем клеточную массу региональных стволовых клеток переносили на среду 199 (производства ООО «Биолот», г.Санкт-Петербург) и выращивали монослоем с последующей водно-солевой экстракцией.
Таблица 1 | ||||
Влияние параметров трипсинизации на выход клеточной массы | ||||
№ п/п | Параметры | Опыт 1 | Опыт 2 | Опыт 3 |
1 | Температура трипсинизации | 4°С | 20°С | 37°С |
2 | Время трипсинизации | 1 час | 3 часа | 5 часов |
3 | Средний выход клеточной массы | 80 млн. клеток на 1 г ткани | 115 млн. клеток на 1 г ткани | 100 млн. клеток на 1 г ткани |
Claims (1)
- Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов, характеризующийся тем, что отмывку тканей плаценты свиной проводят в фосфатном буфере или растворе Хэнкса с последующим измельчением ее на кусочки 2-3 см3, кусочки заливают 150 мл 0,25%-ного раствора трипсина, трипсинизацию проводят на магнитной мешалке в течение 3 ч при 20°С, затем биомассу региональных стволовых клеток выращивают монослоем на среде 199 с последующей водно-солевой экстракцией.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006105864/15A RU2310461C1 (ru) | 2006-02-26 | 2006-02-26 | Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006105864/15A RU2310461C1 (ru) | 2006-02-26 | 2006-02-26 | Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2310461C1 true RU2310461C1 (ru) | 2007-11-20 |
Family
ID=38959308
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006105864/15A RU2310461C1 (ru) | 2006-02-26 | 2006-02-26 | Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2310461C1 (ru) |
-
2006
- 2006-02-26 RU RU2006105864/15A patent/RU2310461C1/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Jones et al. | A guide to biological skin substitutes | |
KR101056069B1 (ko) | 동물조직 분말을 이용한 다공성 3차원 지지체의 제조방법 | |
KR100771058B1 (ko) | 지질이 제거된 인체 부피 대체용 또는 세포 배양용 지지체및 그 제조방법 | |
CN101757691B (zh) | 一种组织工程角膜的制备方法 | |
Voigt et al. | Cultured epidermal keratinocytes on a microspherical transport system are feasible to reconstitute the epidermis in full-thickness wounds | |
CN107224617B (zh) | 一种以脾脏细胞外基质为原料的水凝胶及其制备方法 | |
CN100400655C (zh) | 组织工程化细胞外基质的制备方法 | |
CN105013013B (zh) | 一种皮肤溃疡修复基质的制备方法 | |
JPWO2005087286A1 (ja) | 生体組織シート及びその作製方法、並びに同シートを用いる移植方法 | |
Lin et al. | Engineered adipose tissue of predefined shape and dimensions from human adipose-derived mesenchymal stem cells | |
WO2011094965A1 (zh) | 一种制备组织工程角膜的方法 | |
US20200078492A1 (en) | Process for obtaining a functional dermal substitute of decellurized amniotic membrane from the placenta combination with keratinocytes and its use as an agent for tissue regeneration of the skin | |
Wang et al. | Functional acellular matrix for tissue repair | |
US20170304600A1 (en) | Cell spraying device, method and sprayed cell suspension | |
KR100331608B1 (ko) | 동물 뼈를 이용한 골이식 대체재 및 그 제조 방법 | |
CN110331127B (zh) | 一种组织工程瘢痕皮肤模型的制备方法 | |
KR20180122288A (ko) | 사람 코 하비갑개 유래 중간엽 줄기세포 기반 3d 바이오프린팅 조직체 및 이의 이용 | |
US20010006813A1 (en) | Methods and compositions for the preparation of cell transplants | |
JP5340564B2 (ja) | 人工皮膚およびその製造方法 | |
Hata | Current issues regarding skin substitutes using living cells as industrial materials | |
WO2002092794A2 (en) | Isolation method of mesenchymal cells | |
RU2310461C1 (ru) | Способ получения экстракта региональных стволовых клеток из тканей плаценты свиной для замещения поврежденных клеток кожных и слизистых покровов | |
JP2016067711A (ja) | 移植用皮膚組織片の作製方法 | |
ES2565856T3 (es) | Procedimiento de preparación de estructuras tridimensionales para ingeniería tisular | |
ES2353990B1 (es) | Elaboracion de tejidos artificiales mediante ingenieria tisular utilizando biomateriales de fibrina y agarosa. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080227 |