RU22827U1 - Планшет для серологических реакций - Google Patents

Description

ПЛАНШЕТ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Полезная модель относится к области медицины, биотехнологии, ветеринарии, биологии, а именно к оборудованию для проведения серологических реакций, и может быть использована в клинических, иммунологических, биохимических лабораториях для определения иммуноглобулинов (А, М, G), компонентов системы комплемента, С-реактивного белка, di-антитрипсина и т.п.

Наиболее близким к заявленному решению по совокупности признаков является 96-микролуночный планшет UNIWELL для серологических реакций Каталог АО «ФинБио «Вся палитра..., СанктПетербург, б/г. - С.З. Планшет, принятый за прототип, представляет собой горизонтальную поверхность, снабженную бортиками. Па плоскости поверхности выполнены 96 лунок, объемом 0,370 мл.

Планшет-прототип не позволяет получить технический результат, достигаемый при использовании заявленного планшета, по следующим причинам. При применении планшета-прототипа визуальный контроль за ходом реакции затруднителен. Это обусловлено тем, что исследуемый

материал, как правило, прозрачен (не имеет окраски), и при заборе микроколичеств этого материала, а также при последующей работе с ним высока вероятность технических опшбок, связанных с субъективными особенностями лаборанта, проводящего анализ (недостатки зрения, усталость, невнимательность). Кроме того, невозможен независимый контроль (другим лицом) за результатом. Поэтому в случаях получения отрицательных результатов реакции оказывается невозможным определить, чем обусловлен отрицательный результат: отсутствием исследуемого вещества или технической опшбкой лаборанта, проводивщего анализ. Возможность получения ложноотрицательных результатов обусловливает относительно низкую точность анализа и, в ряде случаев, приводит к необходимости его повторного проведения. Кроме того, при использовании планщета-прототипа, как правило, происходит бактериальная контаминация исследуемого материала, что также препятствует точной оценке результатов реакции и обусловливает необходимость повторного проведения анализа.

Задачей полезной модели является создание плашпета для серологических реакций, обеспечивающего исключение возможности получения ложноотрицательных результатов серологических реакций за счет возможности двойного визуального контроля как за ходом реакции, так и за ее результатом.

Поставленная задача решается тем, что в планшете для серологических реакций, выполненном в виде горизонтальной поверхности, снабженной бортиками, на плоскости которой расположены лунки, согласно полезной модели на внутренней поверхности лунок размещен слой, содержащий краситель. Наиболее эффективным является выполнение слоя, содержащего краситель, из вещества, обладающего

антибактериальными свойствами, например из метиленового синего. Оптимальным является также выполнение планшета со съемной крышкой.

Достижение обеспечиваемого полезной моделью технического результата обусловлено следуюпщм. Использование заявленного планшета предусматривает получение интенсивной окраски исследуемого материала. Это позволяет обеспечить визуальный контроль как за ходом, так и за результатом реакции не только со стороны лаборанта, проводящего анализ, но и со стороны второго (независимого) контролирующего лица. Исключение технических ошибок, связанных с субъективными особенностями технического персонала, обусловливает исключение возможности получения ложноотрицательных результатов реакции. Это, в свою очередь, обеспечивает относительно высокую точность анализа и позволяет избежать необходимости проведения повторного анализа. Кроме того, использование красителя, обладающего антибактериальными свойствами (бактериостатическими или бактерицидными) позволяет практически полностью исключить возможность бактериальной контаминации исследуемого материала. Это дополнительно повышает точность учета результатов реакции и дополнительно способствует исключению необходимости проведения повторного анализа. Наличие съемной крышки позволяет упростить подготовительные работы по подбору дополнительных приспособлений для анализа, способствуя, тем самым, снижению трудоемкости последнего.

Полезная модель поясняется чертежами, где на фиг. 1 представлен общий вид заявленного планшета со съемной крышкой (аксонометрическая проекция); на фиг. 2 - главный вид (фронтальный разрез).

Заявленный планшет представ.11яет собой горизонтальную поверхность (пластину) 1, снабженную бортиками 2. На пластине 1

выполнены лунки 3, внутренняя поверхность которых покрыта слоем 4, содержащим краситель. В качестве красителя используют вещества, достаточно стабильные в условиях анализа и обеспечивающие контрастный фон при анализе. К их числу относятся, в частности, метиленовый синий, метилоранж, эозин, фуксин, фукарцин, нейтраль-рот и т.п. вещества. Наиболее эффективным является использование красителей, обладающих антибактериальными свойствами (метиленовый синий, эозин, фуксин, фукарщ1н и т.п.). Как правило, количество вносимого в лунки планшета красителя составляет около 1 мг на лунку. Планшет выполняют, как правило, из прозрачного бесцветного материала, например из пластмассы, стекла и т.п. Планшет может быть выполнен, например 96-луночным с размерами 120x90 мм. Планшет может быть дополнительно снабжен съемной крышкой 5, выполненной из того же материала, что и пластина 1.

Получение и использование заявленного планшета осуществляют следующим образом. В лунки 3 планшета вносят раствор, содержащий по 1 мг красителя, например метиленового снмего, на лунку, после чего тщательно высушивают с образованием слоя 4, содержащего красите:п. Затем в лунки 3 планшета вносят по 0,1 мм (на лунку) исследуемого материала (сыворотка крови больного, ликвор, с.дюна, моча, мокрота, экссудат, транссудат и т.п.), с которым в последующем и производят реакщга для определения исследуемого параметра (уровня иммуноглобулинов, или компонентов системы комплемента, или

С-реактивного белка, или di-антитрипсина и т.д.).

Например, при определении концентрации иммуноглобулинов А, М, G (IgA, IgM, IgG) в сыворотке крови больных в отдельные лунки вносят по 0,1 мл цельной и разведенной веронал-мединаловым буфером 1:2, 1:4 и 1:8 контрольной сыворотки с известным содержанием

иммуноглобулинов (А, М, G), а в остальные (свободные) лунки - но ОД мл исследуемых сывороток крови больных. На донолнительную пластину, например на съемную крышку 5 планшета, наносят смесь расплавленного и охлажденного до температуры 1,5%-ного агара и иммуноспецифической сыворотки против исследуемого иммуноглобулина. Толш;ина слоя агара должна составлять 1 мм. После застывания агара в слое агара пробойником вырезают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 15 мм одна от другой. На крышке 5 планшета делают несколько рядов л)шок. В лунки первого ряда вносят с помощью микропипетки по 2 мкл (в каждую лунку) контрольной неразведенной и разведенной 1:2, 1:4 и 1:8 сыворотки, взятой из соответствуюпщх лунок 3 на пластине 1 заявленного планшета. Пробитые в агаре (на крышке 5 планшета) лунки следуюпщх рядов (свободные) заполняют исследуемыми сыворотками крови больных, взятыми из соответствуюш;их лунок 3 на пластине 1 заявленного планшета, в количестве по 2 мкл на лунку. Крышку 5 планшета с внесенными контрольными и исследуемыми сыворотками инкубируют во влажной камере при температуре (4-6) С в течение 24 ч, а при исследовании IgM в течение 48 ч. Но окончании срока инкубации измеряют образовавшиеся кольца преципитации (в мм) вокруг лунок в агаре, пробитых на крышке 5 планшета. На полулогарифмической бумаге по оси абсцисс откладывают диаметры колец преципитации (в мм) контрольной сыворотки, а по оси ординат - известную концентрацию иммуноглобулина в МЕ/мл или мг/мл, содержащегося в контрольной сыворотке каждого разведения. Образовавшиеся точки соединяют прямой. Таким образом строят графики для каждого исследуемого иммуноглобулина. Для определения зфовня иммуноглобулинов в исследуемой сыворотке крови больного поступают следуюпщм образом. На оси абсцисс откладывают диаметр кольца преципитации исследуемой сыворотки крови больного. Восстанавливают

Дг(

перпендикуляр до пересечения с кривой графика и точку пересечения проектируют на ось ординат. Полученное значение соответствует уровню исследуемого иммуноглобулина в МЕ/мл или мг/мл в сыворотке крови данного больного.

Заявленный планшет был использован для определения иммзшоглобулинов (IgA, IgM, IgG) в сыворотках крови 1500 больных с аллергическими, нефрологическими, гематологическими, хирургическими и соматическими заболеваниями. Для сравнения определение IgA, IgM, IgG у всех больных производили также с помопр ю планшета-прототипа.

Результаты анализов показали, что при использовании заявленного планшета ложноотрицательные результаты отсутствовали. На момент определения иммуноглобулинов бактериальной контаминации крышек планшета с агаром не отмечено. При применении планшета-прототипа ложноотрицательные результаты были получены в 2-5% случаев. Бактериальная контаминация крышек планшета с агаром отмечалась в 100% случаев, что суш;ественно мешало учету результатов. Ложноотрицательные результаты реакций и наличие бактериальной контаминации привели к необходимости повторной постановки реакции в 10-15% случаев.

Таким образом, проведенные сравнительные испытания показали, что заявленный планшет при его использовании позволяет примерно на 5-10% снизить трудозатраты на проведение анализа и на 10-15% повысить его точность.

Claims (4)

1. Планшет для серологических реакций, выполненный в виде горизонтальной поверхности, снабженной бортиками, на плоскости которой расположены лунки, отличающийся тем, что на внутренней поверхности лунок размещен слой, содержащий краситель.

2. Планшет по п.1, отличающийся тем, что слой, содержащий краситель, выполнен из вещества, обладающего антибактериальными свойствами.

3. Планшет по п.2, отличающийся тем, что слой, содержащий краситель, выполнен из метиленового синего.

4. Планшет по пп. 1-3, отличающийся тем, что он дополнительно снабжен съемной крышкой.