RU2264467C2 - Method for detection of microorganisms of colon bacillus group - Google Patents
Method for detection of microorganisms of colon bacillus group Download PDFInfo
- Publication number
- RU2264467C2 RU2264467C2 RU2003135653/13A RU2003135653A RU2264467C2 RU 2264467 C2 RU2264467 C2 RU 2264467C2 RU 2003135653/13 A RU2003135653/13 A RU 2003135653/13A RU 2003135653 A RU2003135653 A RU 2003135653A RU 2264467 C2 RU2264467 C2 RU 2264467C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganisms
- sample
- color
- catholyte
- nutrient medium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к методам санитарно-микробиологического контроля производства продуктов животного происхождения и может быть использовано в молочной, мясоперерабатывающей и других отраслях пищевой промышленности.The invention relates to methods for sanitary-microbiological control of the production of products of animal origin and can be used in dairy, meat processing and other food industries.
Одним из методов микробиологического контроля производства мясных и молочных продуктов является определение в них, наряду с другими, бактерий группы кишечных палочек (БГКП), являющихся возбудителями пищевых интоксикаций. Определяют кишечную палочку и для санитарно-гигиенической оценки чистоты воды и поверхностей трубопроводов, емкостей и оборудования предприятий, а также чистоты рук персонала.One of the methods of microbiological control of the production of meat and dairy products is the determination in them, along with others, of the bacteria of the group of Escherichia coli (BGKP), which are the causative agents of food intoxication. E. coli is also determined for sanitary-hygienic assessment of the purity of water and the surfaces of pipelines, tanks and equipment of enterprises, as well as the cleanliness of the hands of personnel.
Известные способы определения БГКП основываются на способности бактерий расщеплять глюкозу и лактозу, которые входят в состав питательных сред. При этом в жидких питательных средах Хейфеца, ХБ (хинол-бромкрезол пурпурный) и КОДА, используемых в лабораторной практике, образуются кислые продукты биохимических реакций, которые изменяют цвет индикаторной (питательной) среды, что служит признаком их размножения, т.е. присутствия в пробе; в среде Кесслера образуется газ вследствие расщепления лактозы [1].Known methods for determining BGKP are based on the ability of bacteria to break down glucose and lactose, which are part of the nutrient medium. Moreover, in the liquid nutrient media of Heifetz, CB (quinol-bromocresol purple) and KODA used in laboratory practice, acidic products of biochemical reactions are formed that change the color of the indicator (nutrient) medium, which serves as a sign of their reproduction, i.e. presence in the sample; gas is formed in Kessler's medium due to lactose cleavage [1].
Способы определения БГКП в средах Хейфеца и Кесслера имеют существенные недостатки, заключающиеся в том, что анализ проводится в течение длительного времени (18-20 ч) и при температуре 37°С с необходимостью термостатирования. Кроме того, для окончательного заключения присутствия кишечных палочек требуется пересев их с этих сред (после анализа) на среду Эндо, Плоскирева или Левина и термостатирование чашек Петри со средой 18-20 ч при температуре 37°С с последующим окрашиванием по Граму и микроскопированием [2]. В результате значительно усложняется методика определения и увеличивается продолжительность анализа.The methods for determining BGKP in Heifetz and Kessler environments have significant drawbacks in that the analysis is carried out for a long time (18-20 hours) and at a temperature of 37 ° C with the need for temperature control. In addition, for the final conclusion of the presence of Escherichia coli, it is necessary to reseed them from these media (after analysis) on Endo, Ploskirev or Levin medium and thermostat Petri dishes with medium 18–20 h at 37 ° C, followed by Gram staining and microscopy [2 ]. As a result, the determination procedure is much more complicated and the analysis duration is increased.
Способ определения БГКП в среде КОДА или ХБ (прототип) вследствие выделения кишечных палочек в чистой культуре не требует дальнейшего подтверждения пересевом на другие среды [1, 2], что сокращает время анализа. Однако анализ проводится также продолжительное время (18-20 ч) и при повышенной температуре (37°С). В производственных условиях это обстоятельство не позволяет своевременно реализовать выпускаемую предприятием продукцию.The method for determining BGKP in the environment of CODE or HB (prototype) due to the isolation of E. coli in a pure culture does not require further confirmation by reseeding to other media [1, 2], which reduces the analysis time. However, the analysis is also carried out for a long time (18-20 hours) and at elevated temperature (37 ° C). In production conditions, this fact does not allow to timely realize the products manufactured by the enterprise.
Технический результат заявляемого изобретения заключается в сокращении продолжительности обнаружения бактерий группы кишечных палочек при одновременном снижении температуры при анализе.The technical result of the claimed invention is to reduce the duration of detection of bacteria of the group of Escherichia coli while lowering the temperature during analysis.
Это достигается тем, что для обнаружения БГКП в пробе по изменению цвета жидкой питательной среды КОДА или ХБ в качестве питательной среды для бактерий используют смесь среды КОДА или ХБ и католита с рН 7-9 и окислительно-восстановительным потенциалом -370 мВ при соотношении объемов 1:(0,5-1,0), а определение изменения цвета ведут после выдерживания пробы в течение 5-8 ч при температуре 18-25°С.This is achieved by the fact that for the detection of BGKP in the sample by changing the color of the liquid nutrient medium KODA or CB as a nutrient medium for bacteria, a mixture of the medium KODA or CB and catholyte with a pH of 7-9 and a redox potential of -370 mV with a volume ratio of 1 : (0.5-1.0), and the determination of color change is carried out after keeping the sample for 5-8 hours at a temperature of 18-25 ° C.
При смешивании католита, который является биологически активной жидкостью, катализирующей внутри- и межклеточный метаболизм и инициирующий процесс размножения микроорганизмов, и среды КОДА или ХБ, являющейся основным компонентом питания микроорганизмов, мы получаем жидкую систему, в которой идет ускоренное размножение микроорганизмов.By mixing catholyte, which is a biologically active fluid that catalyzes intracellular and intercellular metabolism and initiates the process of multiplication of microorganisms, and the KODA or CB environment, which is the main component of the nutrition of microorganisms, we get a liquid system in which accelerated multiplication of microorganisms occurs.
Способ осуществляется следующим образом. Приготавливают необходимое количество жидкой питательной среды путем растворения сухой среды КОДА или ХБ в дистиллированной воде и кипячения в течение нескольких (1-2) минут с последующим охлаждением до комнатной температуры.The method is as follows. The required amount of liquid nutrient medium is prepared by dissolving the dry KODA or HB medium in distilled water and boiling for several (1-2) minutes, followed by cooling to room temperature.
Католит готовят в диафрагменном электролизере униполярной обработкой водопроводной воды в катодной камере аппарата поточного или дискретного действия до рН 7...9 и окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) -200...-400 мВ.The catholyte is prepared in a diaphragm electrolyzer by unipolar treatment of tap water in the cathode chamber of a continuous or discrete apparatus up to pH 7 ... 9 and redox potential (ORP) of -200 ...- 400 mV.
Величину водородного показателя устанавливают близкой к значению рН жидкой питательной среды (около 8 единиц) с тем, чтобы резче был заметен цветовой переход среды в кислую зону при размножении кишечных палочек, а значения ОВП лежат в области наибольшего проявления биологических свойств католита, способствующих протеканию метаболических процессов в живых клетках.The pH value is set close to the pH value of the liquid nutrient medium (about 8 units) so that the color transition of the medium into the acidic zone is more noticeable when the Escherichia coli multiplies, and the ORP values lie in the region of the highest manifestation of the biological properties of catholyte, which contribute to metabolic processes in living cells.
После приготовления жидких сред берут стерильно навеску или смыв (мазок) с продукта (молока, воды) или другой поверхности известным методом и переносят его в пробирку с физраствором. Затем в пробирку с пробой приливают приготовленную жидкую питательную среду (КОДА или ХБ), а после этого - Католит в количестве 30-50% от объема питательной среды. В присутствии кишечных палочек и их размножении цвет пробы с течением времени изменяется с зеленого на желтый.After the preparation of liquid media, a weighed portion or rinse (smear) is taken from the product (milk, water) or other surface by a known method and transferred to a test tube with saline. Then, the prepared liquid nutrient medium (KODA or HB) is poured into the test tube with the sample, and then Catholyte in the amount of 30-50% of the volume of the nutrient medium. In the presence of Escherichia coli and their reproduction, the color of the sample changes from green to yellow over time.
Содержание католита в питательной жидкости менее 30% приводит к снижению скорости размножения кишечных палочек, что увеличивает время анализа; при более 50%-ной концентрации католита в смеси уменьшается интенсивность окраски пробы в пробирке и снижается точность определения и, кроме того, происходит рост других бактерий, мешающих определению. Та или иная степень разведения питательной среды католитом в указанном диапазоне зависит от концентрации БГКП: при малом их количестве необходимо больше католита, при большом - возможно снижение его количества.The catholyte content in the nutrient fluid of less than 30% leads to a decrease in the rate of propagation of Escherichia coli, which increases the analysis time; at more than 50% concentration of catholyte in the mixture, the color intensity of the sample in the test tube decreases and the accuracy of determination decreases, and in addition, the growth of other bacteria that interfere with the determination. One or another degree of dilution of the nutrient medium with catholyte in the indicated range depends on the concentration of BGKP: with a small amount of catholyte, more catholyte is needed, with a large amount it is possible to reduce its amount.
Время, в течение которого происходит изменение цвета индикаторной (питательной) среды в присутствии БГКП при их размножении в исследуемой пробе, составляет 5-8 ч, а сам анализ проводится без термостатирования при температуре 18-25°С. При этом время выдержки зависит от количества бактерий в пробе: чем их больше, тем меньше время, за которое изменится окраска пробы, и наоборот. Наблюдение за изменением окраски пробы в пробирке проводят визуально, а для повышения точности оценки цвета применяют фотометрический метод, используя для этого, например, фотоэлектрокалориметр (ФЭК). При измерении на ФЭКе фиксирование окончания анализа производят при изменении начальной окраски пробы с БГКП на 10-15%; при меньшем отклонении считают, что кишечные палочки в пробе отсутствуют.The time during which the color of the indicator (nutrient) medium changes in the presence of BGKP during their reproduction in the test sample is 5-8 hours, and the analysis itself is carried out without temperature control at a temperature of 18-25 ° C. Moreover, the exposure time depends on the number of bacteria in the sample: the more there are, the less time it takes for the color of the sample to change, and vice versa. Observation of the color change of the sample in the test tube is carried out visually, and to increase the accuracy of color estimation, the photometric method is used, using, for example, a photoelectric calorimeter (FEK). When measured at the FEK, fixing the end of the analysis is carried out when the initial color of the sample with BGKP is changed by 10-15%; with a smaller deviation, it is believed that E. coli is absent in the sample.
Пример.Example.
Приготовили раствор питательной среды растворением 40 г порошка среды КОДА по ТУ 9229-072-00419785-97 в 500 см3 холодной дистиллированной воды, прокипятили в течение 2 мин, профильтровали, вновь довели до кипения и затем охладили до комнатной температуры (22°С). Готовая жидкая питательная среда КОДА имела рН 7,5 и была светло-зеленого цвета.A nutrient medium solution was prepared by dissolving 40 g of KODA medium powder according to TU 9229-072-00419785-97 in 500 cm 3 of cold distilled water, boiled for 2 minutes, filtered, brought back to a boil and then cooled to room temperature (22 ° C) . The finished liquid nutrient medium KODA had a pH of 7.5 and was light green in color.
Католит готовили с помощью электроактиватора СТЭЛ-4Н-60 из водопроводной воды с добавлением в нее 0,9 мас.% поваренной соли. Получили 3 порции католита: с рН 7,2; 8,9 и 10,3 и ОВП -200, -370 и -460 мВ соответственно.The catholyte was prepared using an STEL-4N-60 electroactivator from tap water with the addition of 0.9 wt.% Sodium chloride. Got 3 servings of catholyte: with a pH of 7.2; 8.9 and 10.3 and ORP -200, -370 and -460 mV, respectively.
Для идентификации БГКП взяли смыв (мазок) с размороженной туши КРС и перенесли в физраствор (0,9 мас.%-ный раствор NaCl). В пробирки для анализа налили по 1 см3 приготовленной пробы. Затем в них налили жидкой питательной среды КОДА и католита (кроме контрольной пробы) из расчета соотношения объемов 1:0,5; 1:1 и 1:1,5. Общий объем пробы в каждой пробирке, включая 1 см3 физраствора с БГКП, составлял 10 см3. Пробирки с пробами закрывали стерильными марлевыми тампонами. Цвет жидкости в пробирках был от голубого до синего. Опыты проводили при температуре в лаборатории 20-24°C. Контрольная проба - без католита - анализировалась по обычной методике: при 37°С в течение 20 часов. Наблюдения изменения окраски пробы в пробирках вели визуально.To identify BGHC, a wash (smear) was taken from the thawed cattle carcass and transferred to saline (0.9 wt.% NaCl solution). 1 cm 3 of the prepared sample was poured into test tubes. Then they poured KODA and catholyte liquid nutrient medium (except for the control sample) based on a volume ratio of 1: 0.5; 1: 1 and 1: 1.5. The total sample volume in each tube, including 1 cm 3 of saline with BGKP, was 10 cm 3 . Test tubes with samples were closed with sterile gauze swabs. The color of the liquid in the test tubes was from blue to blue. The experiments were carried out at a temperature in the laboratory of 20-24 ° C. A control sample - without catholyte - was analyzed by the usual method: at 37 ° C for 20 hours. Observations of color changes in the test tubes were carried out visually.
Результаты проведенных исследований влияния добавки католита в жидкую питательную среду КОДА на скорость обнаружения БГКП показаны в таблице.The results of studies of the effect of catholyte additives in the liquid nutrient medium KODA on the detection rate of BGKP are shown in the table.
Как видно из приведенных данных, оптимальные условия идентификации БГКП лежат в пределах: рН 7,0-9,0 и ОВП -370 мВ (с учетом допустимой эстраполяции), соотношение объемов среды КОДА и католита 1:(0,5-1,0) при времени выдержки 5-8 ч при температуре 18-25°С.As can be seen from the above data, the optimal conditions for the identification of BGKP lie in the range: pH 7.0-9.0 and ORP -370 mV (taking into account permissible estrapolation), the ratio of the volumes of the medium KODA and catholyte is 1: (0.5-1.0 ) at a holding time of 5-8 hours at a temperature of 18-25 ° C.
Для подтверждения наличия БГКП в пробах произвели высев из пробирок на среду Эндо, термостатирование при температуре 37°С в течение 20 ч, окрашивание по Граму и микроскопирование. Во всех случаях присутствия кишечных палочек, показанных в таблице, анализ подтвердил их наличие, а в пробах при максимальном разведении среды КОДА католитом (1:1,5) присутствовали еще и кокки и другие бактерии.To confirm the presence of BGKP in the samples, they were plated from tubes on Endo medium, incubated at 37 ° C for 20 h, Gram staining and microscopy. In all cases of the presence of Escherichia coli shown in the table, the analysis confirmed their presence, and cocci and other bacteria were also present in the samples with the maximum dilution of the CODE with catholyte (1: 1.5).
Были проведены параллельные опыты в одинаковых условиях со средой ХБ, при этом получены аналогичные результаты.Parallel experiments were carried out under identical conditions with the CB environment, and similar results were obtained.
Таким образом, добавка католита в питательную среду КОДА или ХБ приводит к значительному ускорению роста и развития бактерий группы кишечных палочек при нормальной температуре, что ведет к сокращению времени и уменьшению температуры при анализе по сравнению с известными способами.Thus, the addition of catholyte to the nutrient medium KODA or CB leads to a significant acceleration of the growth and development of bacteria of the group of Escherichia coli at normal temperature, which leads to a reduction in time and a decrease in temperature during analysis compared to known methods.
Источники информацииSources of information
1. ГОСТ 9958-81. Изделия колбасные и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа.1. GOST 9958-81. Sausages and meat products. Methods of bacteriological analysis.
2. Артемьева С.А. и др. Микробиологический контроль мяса животных, птицы, яиц и продуктов их переработки. Справочник. М.: Колос, 2002, с.242.2. Artemyeva S.A. Microbiological control of meat of animals, poultry, eggs and products of their processing. Directory. M .: Kolos, 2002, p.242.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003135653/13A RU2264467C2 (en) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | Method for detection of microorganisms of colon bacillus group |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003135653/13A RU2264467C2 (en) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | Method for detection of microorganisms of colon bacillus group |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003135653A RU2003135653A (en) | 2005-05-27 |
| RU2264467C2 true RU2264467C2 (en) | 2005-11-20 |
Family
ID=35824238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003135653/13A RU2264467C2 (en) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | Method for detection of microorganisms of colon bacillus group |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2264467C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2732412C1 (en) * | 2020-02-27 | 2020-09-16 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for rapid diagnosis of escherichia coli and coliform bacteria in the oral cavity |
| RU2821995C1 (en) * | 2023-12-25 | 2024-06-28 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method for diagnosing desulfovibrio species in gastrointestinal microbiocenosis disorders |
-
2003
- 2003-12-08 RU RU2003135653/13A patent/RU2264467C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АРТЕМЬЕВА С.А. и др. Микробиологический контроль мяса животных, птицы, яиц и продуктов их переработки. Справочник. - М.: Колос, 2002, с.242. * |
| МЕЙНЕЛЛ ДЖ. и др. Экспериментальная микробиология. - М.: Мир, 1967, с.93-98. СИДОРОВ М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, с.196-201, 217-221. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2732412C1 (en) * | 2020-02-27 | 2020-09-16 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for rapid diagnosis of escherichia coli and coliform bacteria in the oral cavity |
| RU2821995C1 (en) * | 2023-12-25 | 2024-06-28 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method for diagnosing desulfovibrio species in gastrointestinal microbiocenosis disorders |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2003135653A (en) | 2005-05-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6046021A (en) | Comparative phenotype analysis of two or more microorganisms using a plurality of substrates within a multiwell testing device | |
| Domig et al. | Methods used for the isolation, enumeration, characterisation and identification of Enterococcus spp.: 1. Media for isolation and enumeration | |
| US10352834B2 (en) | Method for treating at least one biological sample containing a target microorganism | |
| DK2732027T3 (en) | CULTIVATION MEDIUM, METHOD OF CULTIVATING SALMONELLA AND E. COLI AND METHOD OF DETERMINING SALMONELLA AND E. COLI | |
| CN102146429B (en) | Vibrio alginolyticus selective differential medium | |
| CN111088318A (en) | Method for detecting bacterial drug sensitivity by TTC reduction reaction | |
| CN101970682A (en) | Method for detecting and/or identifying clostridium difficile | |
| Mohri et al. | Isolation of lactic acid bacteria eliminating trimethylamine (TMA) for application to fishery processing | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2264467C2 (en) | Method for detection of microorganisms of colon bacillus group | |
| Dupont et al. | Analytical procedure for use of conductance measurement to estimate Escherichia coli in shellfish | |
| Flournoy | Facilitating identification of lactose-fermenting enterobacteriaceae on macconkey agar | |
| CN105164271B (en) | Measure method existing for antibiotic in fluid | |
| Marba-Ardebol et al. | Application of flow cytometry analysis to elucidate the impact of scale-down conditions in Escherichia coli cultivations P. Gil Salvador 2013 Award in Bioengineering category.(November 22, 2013 in the Annual General Assembly of the AIQS) | |
| Wright | A medium for the rapid enumeration of Escherichia coli in the presence of other faecal coliforms in tropical waters | |
| Goncharuk et al. | Detection of microorganisms in nonculturable state in chlorinated water | |
| RU2778997C1 (en) | Nutrient medium for differentiation of parahemolytic vibrios | |
| RU2824882C1 (en) | Nutrient medium for accumulation of parahaemolyticus vibrios during kanagawa test | |
| RU2825461C1 (en) | Method for industrial production of dry nutrient medium for isolation and cultivation of lactobacillus iners and other representatives of vaginal microbiota | |
| EP2670858B1 (en) | Culture medium for microorganisms including para-aminobenzoic acid as a selective agent | |
| RU2175671C1 (en) | Nutrient medium for isolation of hemoculture in diagnosis of typhoid fever and paratyphoid fever | |
| Leroy et al. | Bacteriocin-producing strains in a meat environment | |
| EP3740585B1 (en) | Improving detection of microorganisms | |
| Tallent et al. | BAM: Bacillus cereus | |
| KR20180085769A (en) | Test for determination of antibiotics in waste |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20051209 |