RU2778997C1 - Nutrient medium for differentiation of parahemolytic vibrios - Google Patents
Nutrient medium for differentiation of parahemolytic vibrios Download PDFInfo
- Publication number
- RU2778997C1 RU2778997C1 RU2021139727A RU2021139727A RU2778997C1 RU 2778997 C1 RU2778997 C1 RU 2778997C1 RU 2021139727 A RU2021139727 A RU 2021139727A RU 2021139727 A RU2021139727 A RU 2021139727A RU 2778997 C1 RU2778997 C1 RU 2778997C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- vibrios
- meat
- glucose
- kanagawa
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 title claims abstract description 18
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 30
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 24
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 14
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 claims abstract description 14
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 14
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 claims abstract description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 13
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000001187 sodium carbonate Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 7-(dimethylamino)phenothiazin-3-one Chemical compound C1=CC(=O)C=C2SC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 ALJHHTHBYJROOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 230000000813 microbial Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 claims 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 abstract description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 abstract description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 2
- 101710010368 hmgs-1 Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- JFTBTTPUYRGXDG-UHFFFAOYSA-N Methyl violet Chemical compound Cl.C1=CC(=NC)C=CC1=C(C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JFTBTTPUYRGXDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 6
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 6
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 5
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 5
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 5
- 241000607259 Grimontia hollisae Species 0.000 description 4
- 241001672678 Photobacterium damselae subsp. damselae Species 0.000 description 4
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 4
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 description 2
- 241000607253 Vibrio mimicus Species 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 101700016530 ACTPH Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 210000000941 Bile Anatomy 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N Bromothymol blue Chemical compound BrC1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3S(=O)(=O)O2)C=2C(=C(Br)C(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C NUHCTOLBWMJMLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000004023 Legionellosis Diseases 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- BHZRJJOHZFYXTO-UHFFFAOYSA-L Potassium sulfite Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])=O BHZRJJOHZFYXTO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 206010045146 Tularaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000607296 Vibrio cincinnatiensis Species 0.000 description 1
- 241000607291 Vibrio fluvialis Species 0.000 description 1
- 241001148070 Vibrio furnissii Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive Effects 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000006160 differential media Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 1
- 239000001184 potassium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019252 potassium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002352 surface water Substances 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
Abstract
Description
Предполагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно является питательной средой, которая может быть использована в лабораторной практике для определения патогенных свойств вибрионов в тесте Канагава при диагностике пищевых токсикоинфекций, раневых инфекций и септицимий бактериальной природы.The alleged invention relates to the field of medical microbiology, namely, it is a nutrient medium that can be used in laboratory practice to determine the pathogenic properties of vibrios in the Kanagawa test in the diagnosis of food poisoning, wound infections and septicemia of a bacterial nature.
В тесте Канагава используют среду Вагатцума, которая предназначалась только для определения патогенности V. parahaemolyticus. В настоящее время существует более 11 патогенных видов парагемолитических вибрионов (ПГВ), из которых только часть может быть тестирована на среде Вагатцума. В связи с этим возникла необходимость в создании унифицированной питательной среды для всех видов патогенных ПГВ при использовании в тестировании на наличие гемолитического токсина в тесте Канагава.The Kanagawa test uses Wagatsuma medium, which was only intended to determine the pathogenicity of V. parahaemolyticus. There are currently more than 11 pathogenic parahemolytic vibrios (PHV) species, of which only a fraction can be tested on Wagatsuma medium. In this regard, it became necessary to create a unified nutrient medium for all types of pathogenic PHV when used in testing for the presence of hemolytic toxin in the Kanagawa test.
Известна питательная среда для выделения и идентификации ПГВ (1) следующего состава: пептон, агар микробиологический, сахароза, бромтимоловый синий с добавлением калия карбоната, калия сульфита, желчи КРС, экстракта дрожжевого сухого и смеси алкилсульфатов, а в качестве идентифицирующей добавки используют натрий хлорид.Known nutrient medium for the isolation and identification of PGV (1) of the following composition: peptone, microbiological agar, sucrose, bromthymol blue with the addition of potassium carbonate, potassium sulfite, cattle bile, dry yeast extract and a mixture of alkyl sulfates, and sodium chloride is used as an identifying additive.
Недостатком известной среды является невозможность ее использования для дифференциации среды в тесте КанагаваThe disadvantage of the known environment is the impossibility of using it to differentiate the environment in the Kanagawa test.
Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде для определения патогенности парагемолитических вибрионов в тесте Канагава является среда Вагатцума (2) состоящая из:The closest to the proposed nutrient medium for determining the pathogenicity of parahemolytic vibrios in the Kanagawa test is Wagatsuma medium (2) consisting of:
рН 8,0.pH 8.0.
Однако данная среда является импортным препаратом. При этом высокое содержание натрия хлорид - 7% ограничивает прорастание в данной среде ряда патогенных вибрионов -V. mimicus,V. damsela,V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi. Наличие в среде маннита в качестве углеводного компонента ухудшает условия культивирования V. damsela, V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi.However, this medium is an imported preparation. At the same time, the high content of sodium chloride - 7% limits the germination in this environment of a number of pathogenic vibrios -V. mimicus, V. damsela, V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi. The presence of mannitol as a carbohydrate component in the medium worsens the cultivation conditions for V. damsela, V. hollisae, V. vulnificus, V. harveyi.
Таким образом, среда Вагатцума не может быть в полной мере использована для идентификации патогенных свойств всей группы ПГВ. В связи с необходимостью стандартизации и унификации бактериологических исследований материала на наличие инфекционных патогенов, повышения эффективности среды и использования отечественных препаратов появилась потребность в новой питательной среде.Thus, the Wagatsuma medium cannot be fully used to identify the pathogenic properties of the entire PGV group. In connection with the need for standardization and unification of bacteriological studies of the material for the presence of infectious pathogens, increasing the efficiency of the medium and the use of domestic preparations, there was a need for a new nutrient medium.
Недостатком среды является ее высокая себестоимость, невозможность использования для всех видов патогенных ПГВ - V. parahaemolyticus, V. alginolyticus и в первую очередь - V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V. hollisae.The disadvantage of the medium is its high cost, the inability to use for all types of pathogenic PGV - V. parahaemolyticus, V. alginolyticus and, first of all, V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V. hollisae.
Технической задачей предполагаемого изобретения является создание новой дифференциальной питательной среды СГВ для определения патогенности ПГВ путем усиления гемолитической активности в тесте Канагава.The technical objective of the proposed invention is the creation of a new differential GBS nutrient medium for determining the pathogenicity of PBV by enhancing hemolytic activity in the Kanagawa test.
Поставленная задача достигается тем, что в известной питательной среде для дифференциации парагемолитических вибрионов, включающей питательную основу из пептона, агара микробиологического, натрия хлорид, маннит, калий гидрофосфат, эритроциты, отличие заключается в том, что среда дополнительно включает стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу, натрия карбонат, метиленовый фиолетовый, а питательная основа представляет собой ферментативный перевар мяса при следующих количественных соотношениях компонентов, г/л:This task is achieved by the fact that in a well-known nutrient medium for differentiation of parahemolytic vibrios, including a nutrient base of peptone, microbiological agar, sodium chloride, mannitol, potassium hydrogen phosphate, erythrocytes, the difference lies in the fact that the medium additionally includes a growth stimulator of hemophilic microbes, glucose, sodium carbonate, methylene violet, and the nutritional base is an enzymatic digest of meat at the following quantitative ratios of components, g/l:
Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 20.0±2.0
Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 5.0±0.5
Агар микробиологический - 15,0±2,0Microbiological agar - 15.0±2.0
при рН 8,0.at pH 8.0.
Способ приготовления питательной среды осуществляют по следующей технологии.The method of preparation of the nutrient medium is carried out according to the following technology.
Питательная среда компануется из реагентов отечественного производства: ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - производитель ООО НИЦФ г. Санкт-Петербург;The nutrient medium is compiled from domestically produced reagents: enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - manufacturer NITsF LLC, St. Petersburg;
стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - СРГМ ФБУН ГНЦ ПМБ П. Оболенск, Московская обл. и т.д.growth stimulator of hemophilic microbes (SRGM) - SRGM FBUN SRC PMB P. Obolensk, Moscow region. etc.
Вышеуказанные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С, вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.The above reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to 45-50°C, erythrocytes are added. Medium reaction 8.0. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Методические указания МУК 4.2.2046.06 предусматривают необходимость анализа всех видов патогенных парагемолитических вибрионов -V. parahaemolyticus, V. mimicus, V. hollisae, V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V.metscnicovii, V. cincinnatiensis, V. fluvialis, V. furnissii, V. alginolyticus (3).Guidelines MUK 4.2.2046.06 provide for the need to analyze all types of pathogenic parahemolytic vibrios -V. parahaemolyticus, V. mimicus, V. hollisae, V. damsela, V. vulnificus, V. harveyi, V. metscnicovii, V. cincinnatiensis, V. fluvialis, V. furnissii, V. alginolyticus (3).
Решение задачи достигают тем, что к известной прописи среды - прототипа содержащий агар, маннит, калия гидрофосфат, добавляют более питательный ферментативный перевар мяса, для активизации гемолитической активности - стимулятор роста гемофильных микробов, глюкозу и менее токсичный ингибитор метиловый фиолетовый, а так же для оптимизации роста всех видов ПГВ - снижают навеску натрия хлорида до 50 г/л. После варки, стерилизации среды, охлаждения до 45-50% вносят 5% отмытых эритроцитов крови человека.The solution to the problem is achieved by adding a more nutritious enzymatic digest of meat to the known recipe of the medium - a prototype containing agar, mannitol, potassium hydrogen phosphate, to activate hemolytic activity - a growth stimulator of hemophilic microbes, glucose and a less toxic inhibitor methyl violet, as well as to optimize growth of all types of PGV - reduce the weight of sodium chloride to 50 g/l. After boiling, sterilization of the medium, cooling to 45-50%, 5% of the washed human erythrocytes are added.
Чувствительность искомой среды в отношении 4 тест-штаммов ПГВ составляла 10-7, показатель прорастания повышался до 30-70%. При этом показатель прорастания этой среды для всех видов патогенных ПГВ составляли от 35 до 80%. Эффективность получения результатов теста Канагава в отношении всех видов патогенных ПГВ бала высокой и стабильной.The sensitivity of the desired environment in relation to 4 test strains of PGV was 10 -7 , the germination rate increased to 30-70%. At the same time, the germination rate of this medium for all types of pathogenic PGV ranged from 35 to 80%. The effectiveness of obtaining the results of the Kanagawa test in relation to all types of pathogenic PGV was high and stable.
Таким образом, состав среды СГВ:Thus, the composition of the SGW medium:
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0±2,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 20.0 ± 2.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0±0,5,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 5.0±0.5,
3. Агар микробиологический - 15,0±2,0,3. Microbiological agar - 15.0±2.0,
4. Глюкоза - 5,0±1,0,4. Glucose - 5.0±1.0,
5. Маннит - 5,0±1,0,5. Mannitol - 5.0±1.0,
6. Натрия хлорид - 50,0±2,0,6. Sodium chloride - 50.0±2.0,
7. Натрия карбонат - 1,5±0,2,7. Sodium carbonate - 1.5±0.2,
8. Калия гидрофосфат - 5,0±0,5,8. Potassium hydrophosphate - 5.0±0.5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,002±0,0005,9. Methyl violet - 0.002±0.0005,
10. Эритроциты отмытые - 50±1,10. Washed erythrocytes - 50±1,
при рН 8,0.at pH 8.0.
Контроль среды проводят в соответствии с Методическими указаниями (3, 4) с использованием тест-штаммов: V. parahaemolyticus, а так же V. mimicus,V. damsel,V. vulnificus по основным биологическим показателям для этой группы питательных сред - чувствительность, показатель прорастания, дифференцирующие свойства - размер зоны гемолиза в тесте Канагава.The environment control is carried out in accordance with the Guidelines (3, 4) using test strains: V. parahaemolyticus, as well as V. mimicus, V. Damsel, V. vulnificus according to the main biological indicators for this group of nutrient media - sensitivity, germination index, differentiating properties - the size of the hemolysis zone in the Kanagawa test.
Питательная среда состоит из сухих компонентов и после регистрации будет выпускаться в виде сухого препарата-изделия медицинского назначения с последующим освоением производства.The nutrient medium consists of dry components and, after registration, will be produced in the form of a dry preparation-medical product with subsequent development of production.
Ниже представлены результаты сравнительных испытаний различных комбинаций состава предлагаемой среды (СГВ) как в рамках нормированных показателей, так и за их пределами (примеры 1-5, таблицы 1-5). Также даны результаты проверки дифференцирующих свойств среды СГВ и сред сравнения в отношении представителей всех основных видов патогенных ПГВ.Below are the results of comparative tests of various combinations of the composition of the proposed environment (SGW) both within the normalized indicators and beyond (examples 1-5, tables 1-5). Also, the results of testing the differentiating properties of the SGV environment and comparison media in relation to representatives of all the main types of pathogenic PGV are given.
Пример 1Example 1
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в следующих максимальных концентрациях (г):To prepare the medium, the above preparations are used in the following maximum concentrations (g):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 22,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 22.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,5,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHM) - 5.5,
3. Агар микробиологический - 17,0,3. Microbiological agar - 17.0,
4. Глюкоза - 6,0,4. Glucose - 6.0,
5. Маннит - 6,0,5. Mannitol - 6.0,
6. Натрия хлорид - 52,0,6. Sodium chloride - 52.0,
7. Натрия карбонат - 1,7,7. Sodium carbonate - 1.7,
8. Калия гидрофосфат - 5,5,8. Potassium hydrophosphate - 5.5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,0025,9. Methyl violet - 0.0025,
10. Эритроциты отмытые – 51,10. Washed erythrocytes - 51,
пПри рН 8,2pAt pH 8.2
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до (45-50)°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,2. Готовую среду разливают в чашки Петри.These reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to (45-50) ° C, erythrocytes are added. Environment reaction 8.2. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Таким образом, предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма).Thus, the proposed environment provides a higher growth activity of test strains in comparison with the prototype at the required level of differentiating properties of vibrios (obligatory presence of growth on cups when sowing all PGV test strains - from 10 mc and at least 30% when sowing 100 MK, the formation of zones of lysis around the colonies of Kanagawa - positive PGV and the absence of zones of lysis around Kanagawa - a negative strain).
Пример 2Example 2
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в средних концентрациях (г):To prepare the medium, the above preparations are used in medium concentrations (g):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 20,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 20.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 5,0,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 5.0,
3. Агар микробиологический - 15,0,3. Microbiological agar - 15.0,
4. Глюкоза - 5,0,4. Glucose - 5.0,
5. Маннит - 5,0,5. Mannitol - 5.0,
6. Натрия хлорид - 50,0,6. Sodium chloride - 50.0,
7. Натрия карбонат - 1,5,7. Sodium carbonate - 1.5,
8. Калия гидрофосфат - 5,0,8. Potassium hydrophosphate - 5.0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,002,9. Methyl violet - 0.002,
10. Эритроциты отмытые – 50,10. Washed erythrocytes - 50,
при рН 8,2.at pH 8.2.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,2. Готовую среду разливают в чашки Петри.These reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to 45-50°C, erythrocytes are added. Environment reaction 8.2. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Вывод: предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма). Пример 3Conclusion: the proposed environment provides a higher growth activity of test strains in comparison with the prototype at the required level of differentiating properties of vibrios (obligatory presence of growth on cups when sowing all PGV test strains - from 10 mc and at least 30% when sowing 100 mk, the formation of zones of lysis around the Kanagawa colonies - positive PGV and the absence of zones of lysis around Kanagawa - a negative strain). Example 3
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты в минимальных концентрациях (г):To prepare the medium, the above preparations are used in minimum concentrations (g):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 18,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 18.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 4,5,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 4.5,
3. Агар микробиологический - 13,0,3. Microbiological agar - 13.0,
4. Глюкоза - 4,0,4. Glucose - 4.0,
5. Маннит - 4,0,5. Mannitol - 4.0,
6. Натрия хлорид - 48,0,6. Sodium chloride - 48.0,
7. Натрия карбонат - 1,3,7. Sodium carbonate - 1.3,
8. Калия гидрофосфат - 4,5,8. Potassium hydrophosphate - 4.5,
9. Метиловый фиолетовый - 0,0015,9. Methyl violet - 0.0015,
10. Эритроциты отмытые - 49,10. Washed erythrocytes - 49,
при рН 8,0.at pH 8.0.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.These reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to 45-50°C, erythrocytes are added. Medium reaction 8.0. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Следовательно, предлагаемая среда обеспечивает более высокую в сравнении с прототипом ростовую активность тест-штаммов при требуемом уровне дифференцирующих свойств вибрионов (обязательное наличие роста на чашках при посеве всех тест-штаммов ПГВ - из 10 м.к. и не менее 30% при посеве 100 м.к., образование зон лизиса вокруг колоний Канагава - положительных ПГВ и отсутствие зон лизиса вокруг Канагава - отрицательного штамма).Therefore, the proposed environment provides a higher growth activity of test strains in comparison with the prototype at the required level of differentiating properties of vibrios (obligatory presence of growth on cups when sowing all PGV test strains - from 10 microns and not less than 30% when sowing 100 mk, the formation of zones of lysis around the Kanagawa colonies - positive PGV and the absence of zones of lysis around Kanagawa - a negative strain).
Пример 4Example 4
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты ниже минимальной концентрации (г):To prepare the medium, use the above preparations below the minimum concentration (g):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 15,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 15.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 4,0,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 4.0,
3. Агар микробиологический - 12,0,3. Microbiological agar - 12.0,
4. Глюкоза - 3,0,4. Glucose - 3.0,
5. Маннит - 3,0,5. Mannitol - 3.0,
6. Натрия хлорид - 45,0,6. Sodium chloride - 45.0,
7. Натрия карбонат - 1,2,7. Sodium carbonate - 1.2,
8. Калия гидрофосфат - 4,0,8. Potassium hydrophosphate - 4.0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,001,9. Methyl violet - 0.001,
10. Эритроциты отмытые – 45,10. Washed erythrocytes - 45,
при рН 8,0.at pH 8.0.
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.These reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to 45-50°C, erythrocytes are added. Medium reaction 8.0. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Пример 5Example 5
Для приготовления среды используют вышеуказанные препараты выше максимальной концентрации (г):To prepare the medium, the above preparations are used above the maximum concentration (g):
1. Ферментативный перевар мяса (ГМФ - бульон) - 25,0,1. Enzymatic digestion of meat (GMF - broth) - 25.0,
2. Стимулятор роста гемофильных микробов (СРГМ) - 6,0,2. Growth stimulator of hemophilic microbes (SHGM) - 6.0,
3. Агар микробиологический - 18,0,3. Microbiological agar - 18.0,
4. Глюкоза - 7,0,4. Glucose - 7.0,
5. Маннит - 7,0,5. Mannitol - 7.0,
6. Натрия хлорид - 60,0,6. Sodium chloride - 60.0,
7. Натрия карбонат - 2,0,7. Sodium carbonate - 2.0,
8. Калия гидрофосфат - 6,0,8. Potassium hydrophosphate - 6.0,
9. Метиловый фиолетовый - 0,003,9. Methyl violet - 0.003,
10. Эритроциты отмытые – 52,10. Washed erythrocytes - 52,
при рН 8,0at pH 8.0
Данные реагенты заливают 950 мл дистиллированной воды и доводят до кипения, расплавляют при тщательном перемешивании, стерилизуют, охлаждают до 45-50°С вносят эритроциты. Реакция среды 8,0. Готовую среду разливают в чашки Петри.These reagents are poured into 950 ml of distilled water and brought to a boil, melted with thorough stirring, sterilized, cooled to 45-50°C, erythrocytes are added. Medium reaction 8.0. The prepared medium is poured into Petri dishes.
Таким образом, представленные данные указывают на высокую эффективность среды СГВ в рамках нормированного показателя состава. Ее чувствительность и показатель прорастания полностью соответствует существующим нормативным требованиям и в отличие от среды сравнения, обеспечивает высокие ростовые свойства и гемолитическую активность всех испытанных тест-штаммов.Thus, the presented data indicate the high efficiency of the SGW medium within the normalized composition index. Its sensitivity and germination rate fully complies with existing regulatory requirements and, unlike the reference medium, provides high growth properties and hemolytic activity of all tested test strains.
Пример 6Example 6
Оптимальный вариант искомой среды СГВ прошел испытания в отношении тест-штаммов основных видов патогенных ПГВ. Приготовление и контроль среды проводили с методическими подходами, использованными в вышеописанных примерах. Культуры контрольных штаммов вибрионов готовили по методике идентичной при подготовке тест-штаммов.The optimal variant of the desired SGV medium was tested against test strains of the main types of pathogenic PGV. The preparation and control of the environment was carried out with the methodological approaches used in the above examples. Cultures of control strains of vibrios were prepared according to the method identical to the preparation of test strains.
Результаты проведенного испытания представлены таблице 6.The results of the test are presented in table 6.
Исходя из представленных материалов и по результатам сравнительных испытаний предложенная композиция СГВ соответствует среде прототип Вагацума по ростовым и дифференцирующим показателям в отношении V. parahaemolyticus, и значительно превосходит в отношении других видов ПГВ. Полученные данные позволяют характеризовать новый препарат как дифференциальную среду, соответствующую современным требованиям к средам данного назначения. Особым преимуществом данного препарата можно считать ее эффективность при определении ее гемолитической активности в отношении всех групп ПГВ, что позволяет использовать ее при диагностике различных заболеваний, вызываемых ПГВ. Дополнительным преимуществом можно считать возможность ее изготовления из отечественных компонентов, и за счет этого низкую себестоимость (300-350 руб/л).Based on the presented materials and the results of comparative tests, the proposed composition of the SGV corresponds to the Vagatsuma prototype medium in terms of growth and differentiation indicators in relation to V. parahaemolyticus, and significantly exceeds in relation to other types of PGV. The data obtained make it possible to characterize the new drug as a differential medium that meets modern requirements for media for this purpose. A special advantage of this drug can be considered its effectiveness in determining its hemolytic activity against all groups of PHV, which allows it to be used in the diagnosis of various diseases caused by PHV. An additional advantage can be considered the possibility of its manufacture from domestic components, and due to this, low cost (300-350 rubles / l).
Государственная регистрация среды включена в сетевой график внедрения результатов НИР ФКУЗ Ростовского-на-Дону противочумного института Роспотребнадзора.The state registration of the environment is included in the network schedule for the implementation of the results of research and development of the FKUZ of the Rostov-on-Don Anti-Plague Institute of Rospotrebnadzor.
Источники информацииSources of information
1. Патент на изобретения №2711914 от 23.01.2020. «Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов».1. Patent for inventions No. 2711914 dated 01/23/2020. "A culture medium for the isolation and identification of parahemolytic vibrios".
2. Патент на изобретения №2711914 от 23.01.2020. «Питательная среда для выделения и идентификации парагемолитических вибрионов».2. Patent for inventions No. 2711914 dated 01/23/2020. "A culture medium for the isolation and identification of parahemolytic vibrios".
3. Методы контроля бактериологических питательных сред МУК 4.2.2316-08, М., - 20083. Methods for monitoring bacteriological nutrient media MUK 4.2.2316-08, M., - 2008
4. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителя чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза МУ 3.3.2.2124-06, М., - 2007.4. Control of diagnostic nutrient media for biological indicators for the causative agent of plague, cholera, anthrax, tularemia, brucellosis, legionellosis MU 3.3.2.2124-06, M., - 2007.
5. Методы выявления и определения парагемолитических вибрионов в рыбе, не рыбных объектах промысла, продуктах вырабатываемых из них, в воде поверхностных водоемов и других объектах. МУК 4.2.2046-06, М., - 2006.5. Methods for the detection and determination of parahemolytic vibrios in fish, non-fish species, products derived from them, in surface water and other objects. MUK 4.2.2046-06, M., - 2006.
6. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых парагемолитическими и другими патогенными для человека вибрионами. МУК 4.2.1793-03, М., - 2003.6. Laboratory diagnostics of diseases caused by parahemolytic and other vibrios pathogenic for humans. MUK 4.2.1793-03, M., - 2003.
7. Приказ №535 от 22 апреля 1985 г «Об унификации микробиологических методов исследований применяемых в клиниках - диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».7. Order No. 535 of April 22, 1985 "On the unification of microbiological research methods used in clinics - diagnostic laboratories of medical institutions."
Claims (4)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2778997C1 true RU2778997C1 (en) | 2022-08-29 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711914C1 (en) * | 2019-02-14 | 2020-01-23 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for separation and identification of para-hemolytic vibrios (embodiments) and method for production thereof (embodiments) |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2711914C1 (en) * | 2019-02-14 | 2020-01-23 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for separation and identification of para-hemolytic vibrios (embodiments) and method for production thereof (embodiments) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| РЫКОВСКАЯ О.А. и др., Разработка комплексного метода оценки вирулентности парагемолитических вибрионов, Клиническая лабораторная диагностика, 2013, N 2, с. 38-41. KAMINSKII D.I., Testing of the liquid enrichment nutrient medium HDS-N for the purpose of Vibrio cholera cultivation and isolation, Biotechnology in Russia 2003, N 4, pp. 67−71. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103282513B (en) | For detecting goods and the method for target microorganism | |
| JP2831474B2 (en) | Salmonella identification method and culture medium | |
| US5702944A (en) | Microbial transport media | |
| CN104105795B (en) | The method for detecting Salmonella microorganisms | |
| EP0254771A2 (en) | Detection of microbes in a sample | |
| JPH05505312A (en) | Bacteriological analysis method and culture medium for detecting Salmonella bacteria | |
| Yagupsky et al. | Comparison of BACTEC 9240 Peds Plus medium and isolator 1.5 microbial tube for detection of Brucella melitensis from blood cultures | |
| US7087401B2 (en) | Culture medium and method for detecting thermonuclease-positive staphylococci | |
| CN110129406A (en) | A kind of pseudomonas aeruginosa chromogenic culture medium and the method quickly detected using it | |
| CN110055301A (en) | A method of the culture medium of detection Bifidobacterium and quickly detection count | |
| CN112961805B (en) | Salmonella typhimurium with quinolone drug resistance genes gyrA and parE mutated simultaneously and application thereof | |
| US10550437B2 (en) | Clostridium difficile culture medium | |
| RU2778997C1 (en) | Nutrient medium for differentiation of parahemolytic vibrios | |
| CN102146429A (en) | Vibrio alginolyticus selectivity differential medium | |
| Desmasures et al. | Lactococcus spp., yeasts and Pseudomonas spp. on teats and udders of milking cows as potential sources of milk contamination | |
| CN107287275B (en) | Culture medium, kit containing culture medium and application of culture medium | |
| US5759799A (en) | Marker for revealing contaminants and application method for performing an antibiogram carried out directly on a sample | |
| Magalhães et al. | Traditional methods for isolation of Listeria monocytogenes | |
| CN100345977C (en) | Preparing method for cow mammitis staphylococcus culture fluid and its use | |
| TWI627277B (en) | Medium, including the set of the group, and its application | |
| Tortorello et al. | Rapid identification of Escherichia coli O157: H7 in bovine feces using the antibody-direct epifluorescent filter technique (Ab-DEFT) | |
| Yagupsky et al. | Clinical evaluation of a novel chromogenic agar dipslide for diagnosis of urinary tract infections | |
| US5380652A (en) | Device and procedure for identifying pathogenic microorganisms | |
| McDivitt et al. | Comparison of Three Media for the Isolation of Exterotoxigenic Micrococci | |
| RU2328526C1 (en) | Method for revealing cattle tuberculosis mycobacteria |