RU2251112C1 - Способ диагностики хламидиозов - Google Patents
Способ диагностики хламидиозов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2251112C1 RU2251112C1 RU2003123891/15A RU2003123891A RU2251112C1 RU 2251112 C1 RU2251112 C1 RU 2251112C1 RU 2003123891/15 A RU2003123891/15 A RU 2003123891/15A RU 2003123891 A RU2003123891 A RU 2003123891A RU 2251112 C1 RU2251112 C1 RU 2251112C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- leukocytes
- patient
- chlamydia
- incubation
- prl
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии и касается диагностики хламидиозов с помощью реакции специфического лейкоцитолиза. Сущность изобретения состоит в том, что гепаринизированную кровь смешивают с хламидийным антигенным диагностикумом в опытной пробирке с физиологическим раствором в контрольной пробирке, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют, через 2 часа повторно подсчитывают количество лейкоцитов и расчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) и при величине ПРЛ большей или равной 0,2 диагностируют хламидиоз. Техническим результатом является диагностика хламидиоза в более ранние сроки. 5 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается диагностики хламидиозов с помощью реакции специфического лейкоцитолиза (РСЛ).
Хламидийная инфекция по распространенности и поражаемому контингенту выходит в настоящее время на одно из первых мест среди других инфекционных заболеваний. Однако клиническая диагностика ее затруднена тем, что около 70% случаев хламидиозов протекают бессимптомно, а если признаки болезни и наблюдаются, то они не носят специфического характера. Поэтому решающее значение для правильной постановки диагноза имеет лабораторная диагностика хламидийной инфекции.
Основные диагностические тесты направлены на выявление хламидий или их антигенов в клиническом материале от больных. К ним относятся культуральный метод, прямой вариант метода флуоресцирующих антител, полимеразная и лигазная цепные реакции (Лозняк А.Л. и др. // Эпидемиол. и инфекц. болезни. - 2002. - №5. - С.46-53).
По мнению многочисленных исследователей, диагностика хламидиозов требует применения комплекса лабораторных методов, позволяющих обнаруживать как антигены хламидий, так и антитела к ним (Скрипкин Ю.К. и др. // Вестн. Дерматол. Венерол. - 1996. - №4. - С.26-29).
Наиболее близким аналогом, предлагаемому способу является иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения антител к хламидиям в сыворотке крови больных, который предусматривает инкубацию ее при 37°С в лунке стрипа с сорбированным антигеном, отмывку промывающим раствором, последовательную обработку рабочим разведением пероксидазного конъюгата и ортофенилендиамином, добавление стоп-реагента и измерение оптической плотности при длине волны 492 нм (Яковлев А.Т., Зыкин Л.Ф., Рыбкин B.C. Иммуноферментный анализ в микробиологии // Саратов: Изд-во Саратовск. Университета, 1990. - 112 с.).
Известно, что хламидии являются слабоиммуногенными микроорганизмами и вызывают замедленный низкий гуморальный иммунный ответ. Для его оценки необходимо исследование парных сывороток. В то же время считается, что реакции клеточного иммунитета более чувствительны к воздействию чужеродных антигенов, и с их помощью можно выявлять характерные изменения, начиная со 2-го дня от начала болезни.
Целью изобретения является выявление ответа клеточного иммунитета на хламидийную инфекцию в ранние сроки заболевания.
Поставленная цель достигается тем, что гепаринизированную кровь смешивают с хламидийным антигеном, подсчитывают в ней количество лейкоцитов, инкубируют при 37°С, через 2 ч вновь определяют количество лейкоцитов и рассчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) по формуле.
ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ
Пример 1. Постановка РСЛ у пациента с циститом бактериальной этиологии.
Больной М. обратился в медицинское учреждение по поводу цистита. Для установления хламидийной этиологии заболевания ему была выполнена РСЛ. Стерильным шприцем у больного взяли 1 мл крови из локтевой вены и поместили ее в пробирку с 0,1 мл раствора гепарина (5 ЕД/мл крови). Затем по 0,1 мл гепаринизированной крови внесли в 2 пробирки. В 1-ю (опытную) добавили 0,1 мл хламидийного антигена, в качестве которого использовали коммерческий диагностикум для РИГА и РСК, полученный из желточных мешков, инфицированных культурой хламидии. Во 2-ю пробирку вносили 0,1 мл забуференного физиологического раствора рН 7,2-7,4 (контроль). Каждую пробирку встряхивали по 20 сек. Содержимое пробирок набирали в меланжеры до метки 0,5 и далее - 3% уксусную кислоту до метки 11. Меланжеры клали горизонтально. Пробирки помещали в термостат при 37°С на 2 ч. Меланжеры встряхивали 2 мин, первые 3 капли удаляли, заполняли счетную камеру Горяева и устанавливали ее на предметном столике микроскопа. Для определения количества лейкоцитов в 1 мкл реакционной смеси в опытной и контрольных пробах подсчитывали их число в 100 больших квадратах по всей сетке и умножали на 50. Через 2 часа инкубирования пробирки извлекали из термостата и вновь подсчитывали в содержимом из них количество лейкоцитов с помощью меланжеров и камеры Горяева.
Реакцию оценивали по показателю разрушения лейкоцитов (ПРЛ), который рассчитывали по формуле:
где
L01 - количество лейкоцитов в опытной пробирке до инкубации
L02 - количество лейкоцитов в опытной пробирке после инкубациии
LK1 - количество лейкоцитов в контрольной пробирке до инкубациии
LK2 - количество лейкоцитов в контрольной пробирке после инкубациии,
и при величине ПРЛ, большей или равной 0,2 диагностируют хламйдиоз.
Полученные результаты представлены в таблице 1.
Пример расчета:
Таблица 1 | ||||
Пробирки | До инкубации | После инкубации | ||
Опытная | 4000 | 3900 | ||
Контрольная | 4000 | 3900 | ||
L01 – 4000 | ПРЛ=0,2 | |||
L02 - 3900 | ||||
LK1 - 4000 | ||||
LK2 - 3900 |
Величина ПРЛ оказалась меньше значения 0,2, следовательно, у больного хламидийная инфекция отсутствует. При исследовании мочи и соскобов из уретры больного М. прямым методом флуоресцирующих антител антигены хламидий не обнаружены.
Пример 2. Постановка РСЛ у больной негонококковым уретритом.
Больной З. Для выяснения причины негонококкового уретрита провели РСЛ. Техника постановки реакции подробно описана в примере 1. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2 | ||||
Пробирки | До инкубации | После инкубации | ||
Опытная | 4200 | 2500 | ||
Контрольная | 4300 | 4200 | ||
L01 – 4200 | ПРЛ=0,4 | |||
L02 - 2500 | ||||
LK1 - 4300 | ||||
LK2 - 4200 |
Значение ПРЛ превышало величину 0,2, поэтому у больной имеются антигены хламидий. Методом флуоресцирующих антител подтверждено присутствие хламидий (C.trachomatis) в соскобах из мочеиспускательного канала.
Пример 3. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим бронхитом.
Больной С. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего бронхита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1.
Результаты обследования представлены в таблице 3.
Таблица 3 | ||||
Пробирки | До инкубации | После инкубации | ||
Опытная | 3400 | 1600 | ||
Контрольная | 3400 | 3300 | ||
L01 – 3400 | ПРЛ=0,55 | |||
L02 - 1600 | ||||
LK1 - 3400 | ||||
LK2 - 3300 |
Величина ПРЛ превысила 0,2, поэтому считали, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании мокроты и мазка из зева методом флуоресцирующих антител у больного С.выявлены антигены C.pneumoniae.
Пример 4. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим простатитом.
Больной П. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего простатита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1.
Результаты обследования представлены в таблице 4.
Таблица 4 | ||||
Пробирки | До инкубации | После инкубации | ||
Опытная | 3400 | 1400 | ||
Контрольная | 3400 | 3200 | ||
L01 – 3400 | ПРЛ=0,6 | |||
L02 - 1400 | ||||
LK1 - 3400 | ||||
LK2 - 3200 |
Величина ПРЛ превысила 0,2, поэтому считаем, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании сока простаты методом флуоресцирующих антител у больного П. выявлены антигены C.trachomatis.
Пример 5. Постановка РСЛ у больного хроническим рецидивирующим конъюнктивитом.
Больной К. обратился за медицинской помощью по поводу хронического рецидивирующего конъюнктивита. Кровь пациента исследовали с помощью РСЛ, как описано в примере 1.
Результаты обследования представлены в таблице 5.
Таблица 5 | ||||
Пробирки | До инкубации | После инкубации | ||
Опытная | 2500 | 1500 | ||
Контрольная | 2500 | 2400 | ||
L01 – 2500 | ПРЛ=0,4 | |||
L02 - 1500 | ||||
LK1 - 2500 | ||||
LK2 - 2400 |
Величина ПРЛ превысила 0,2, указывающая, что у больного имеется хламидийная инфекция. При исследовании мазка с конъюнктивы методом флуоресцирующих антител у больного К. выявлены антигены C.trachomatis.
Таким образом, стало возможным выполнять диагностику хламидиоза в ранние сроки заболевания по величине ПРЛ.
Предлагаемый способ диагностики хламидиозов прост, доступен, не трудоемок, не требует повторного исследования крови больного и позволяет выявлять наличие хламидийной инфекции.
Рекомендуется использовать как дополнительный тест в комплексной диагностике хламидиозов.
Claims (1)
- Способ диагностики хламидиозов путем исследования крови больного, отличающийся тем, что 0,1 мл гепаринизированной крови смешивают с 0,1 мл хламидийного антигенного диагностикума в опытной пробирке с 0,1 мл физиологического раствора в контрольной пробирке, подсчитывают количество лейкоцитов, инкубируют в термостате при 37°С, через 2 ч повторно подсчитывают количество лейкоцитов и расчитывают показатель разрушения лейкоцитов (ПРЛ) по формуле:гдеL01 - количество лейкоцитов в опытной пробирке до инкубации;L02 - количество лейкоцитов в опытной пробирке после инкубации;LK1 - количество лейкоцитов в контрольной пробирке до инкубации;LK2 - количество лейкоцитов в контрольной пробирке после инкубации,и при величине ПРЛ, большей или равной 0,2, диагностируют хламидиоз.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003123891/15A RU2251112C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Способ диагностики хламидиозов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003123891/15A RU2251112C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Способ диагностики хламидиозов |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003123891A RU2003123891A (ru) | 2005-02-10 |
RU2251112C1 true RU2251112C1 (ru) | 2005-04-27 |
Family
ID=35208381
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003123891/15A RU2251112C1 (ru) | 2003-07-30 | 2003-07-30 | Способ диагностики хламидиозов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2251112C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2662940C1 (ru) * | 2017-10-05 | 2018-07-31 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) | Способ диагностики хламидиоза |
-
2003
- 2003-07-30 RU RU2003123891/15A patent/RU2251112C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ЯКОВЛЕВ А.Т. и др. Иммуноферментный анализ в микробиологии. - Саратов: издательство Саратовского университета, 1990, с.12-18. БОЧКАРЕВ Е.Г. Лабораторная диагностика хламидийной инфекции. Иммунопатология, аллергология и инфектология. 2000, №4, с.65-73. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2662940C1 (ru) * | 2017-10-05 | 2018-07-31 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) | Способ диагностики хламидиоза |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2003123891A (ru) | 2005-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Larsen et al. | Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis | |
Benenson et al. | Rapid identification of Vibrio cholerae by darkfield microscopy | |
Ayele et al. | Evaluation of circulating cathodic antigen (CCA) strip for diagnosis of urinary schistosomiasis in Hassoba school children, Afar, Ethiopia | |
US7422869B2 (en) | Method for diagnosing infectious diseases | |
CN103499685A (zh) | 人泌尿系统病原菌感染临床诊断的免疫荧光诊断试剂及其制备和应用方法 | |
US20240044890A1 (en) | Antibody detection test strip of integrating primary screening and diagnosis of bovine brucellosis | |
RU2251112C1 (ru) | Способ диагностики хламидиозов | |
KR101894489B1 (ko) | Igm 반정량적 렙토스피라증 진단 키트 | |
Perine et al. | New technologies for use in the surveillance and control of yaws | |
RU2425384C2 (ru) | Способ диагностики течения сальмонеллёзно-протозойных острых кишечных инфекций у детей | |
RU2635515C1 (ru) | Способ дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота | |
RU2394496C1 (ru) | Способ диагностики сифилиса путем одновременного определения реагиновых и трепонемоспецифических антител к t.pallidum на микроскопных альдегидных слайдах | |
RU2810589C1 (ru) | Способ постановки реакции иммунофлюоресценции для диагностики лейкоза крупного рогатого скота | |
CN111638329B (zh) | 一种用于检测布鲁氏菌病elispot检测试剂盒及其应用 | |
RU2803893C1 (ru) | Ускоренный способ послеубойной диагностики лейкоза крупного рогатого скота с применением иммуноферментного анализа | |
RU2247383C2 (ru) | Способ серологической диагностики хламидийных конъюнктивитов | |
RU2226082C1 (ru) | Способ выявления вспышек аденовирусных конъюнктивитов среди населения | |
RU2415439C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни бехтерева | |
RU2685278C1 (ru) | Способ оценки эффективности лечения урогенитального хламидиоза | |
RU2702011C1 (ru) | Способ диагностики инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний | |
RU2305842C1 (ru) | Гемагглютинационный тест на основе рекомбинантного антигена для серодиагностики сифилиса | |
RU2287154C2 (ru) | Способ диагностики токсоплазмоза у собак и кошек | |
RU2113172C1 (ru) | Способ иммунологической экспресс-диагностики токсических форм дифтерийной инфекции | |
US6689571B1 (en) | Assay method and kit for pythium insidiosum antibodies | |
Roy et al. | Detection of LD body in peripheral blood buffy-coat from suspected kala-azar cases of Bangladesh |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050731 |