RU2248574C1 - Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза - Google Patents
Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2248574C1 RU2248574C1 RU2003123171/15A RU2003123171A RU2248574C1 RU 2248574 C1 RU2248574 C1 RU 2248574C1 RU 2003123171/15 A RU2003123171/15 A RU 2003123171/15A RU 2003123171 A RU2003123171 A RU 2003123171A RU 2248574 C1 RU2248574 C1 RU 2248574C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tnf
- cll
- patients
- course
- dna
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и касается способа прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза. Сущность изобретения заключается в том, что из лимфоцитов периферической крови выделяют ДНК методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, проводят генотипирование полиморфизма промоторной области гена TNF-α и TNF-β. При выявлении генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, выявляют лиц, предрасположенных к развитию хронического лимфолейкоза, а при определении комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 или TNF*12/LT*11 у больных хроническим лимфолейкозом прогнозируют агрессивное течение заболевания. Преимущество изобретения заключается в повышении точности прогнозирования. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза.
Согласно современным представлениям хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) является опухолью кроветворной системы, характеризующейся пролиферацией и аккумуляцией морфологически зрелых лимфоцитов, в большинстве случаев имеющих фенотип В-лимфоцитов, реже - Т-лимфоцитов. При классической форме ХЛЛ наблюдается прогрессирующий лимфатический лейкоцитоз, диффузная зрелоклеточная пролиферация в лимфоузле и трепанобиоптате костного мозга, увеличение лимфоузлов, селезенки, нередко печени.
По новой переработанной и дополненной классификации гемобластозов лимфатической природы А.И. Воробьева и М.Д. Бриллиант (1999) хронический В-клеточный лейкоз относится к зрелоклеточным опухолям лимфатической системы. Согласно этой классификации больные были разделены на 2 группы - с агрессивным и доброкачественным течением заболевания [Воробьев А.И., Кременецкая А.М., Д.В. //Гематол. и трансфузиол. - 2000, -Т.45, N 3. -C.4-14].
Все формы с агрессивным течением требуют назначения полихимиотерапии, при данном течении прогноз неблагоприятный, наблюдается лекарственная резистентность. Таким образом, раннее определение прогноза позволило бы:
- оптимизировать терапию данного заболевания;
- повлиять на качество жизни этих пациентов;
- снизить количество затрачиваемых средств государством на лечение данных больных.
Известны традиционные способы прогнозирования развития ХЛЛ, например:
Критерии прогнозирования ХЛЛ.: [Nelson К., Bruce D. Cheson /The Oncologist 1999; 4:352-369]
- Удвоение времени лимфоцитов (<12 месяцев - прогноз хуже);
- Диффузная инфильтрация лимфоцитами костного мозга в биопсийном материале (плохой прогноз);
- Сывороточный β-2 микроглобуллин (повышенный уровень - прогноз хуже);
- Растворимый CD23 в сыворотке и ЛДГ (повышенный уровень - прогноз хуже).
Аналогом предлагаемого изобретения является способ прогнозирования течения ХЛЛ путем определения хромосомных нарушений. По мнению большинства исследователей, наличие дополнительной хромосомы 12 прогностически неблагоприятно [Juliusson G., Меrup М. Sem. OncoL-1998. -Vol.25. -P.19-26]. Существует точка зрения, что дополнительная хромосома не влияет на прогноз [Geisler С., Philip P., Christensen В. et al Leuk. Res. -1997. -Vol.21. -P.1011-1023]. Также есть мнение, что хронический лимфолейкоз с трисомией 12 представляет собой отдельный вариант болезни с атипичной морфологией лимфоцитов и относительно неблагоприятным течением [Oscier D.G. In: VIII intemat Worksh. On CLL. Darwin medical Communication Ltd.-Oxford Chise, U.K., 1999 -P.17]. Крайне неблагоприятны в прогностическом отношении и делеции хромосомы 11 [Neilson J., Auer R., White D. et al. Leukemia. -1997. -Vol.11. -P.1929-1932]. Медиана выживаемости у данных больных 64 мес.
Недостатками данных способов является следующее.
1. Дороговизна и значительная трудоемкость выполнения данной методики как в амбулаторных, так и в условиях стационара.
2. Достаточно большой выбор неблагоприятных в прогностическом отношении хромосомных нарушений.
3. Большое количество противоречивых литературных данных относительно возможного прогностического значения того или иного хромосомного нарушения.
Другой аналог предлагаемого изобретения - способ прогнозирования развития ХЛЛ путем определения сывороточного уровня интерлейкина-6 (ИЛ-6), который является индикатором активности течения ХЛЛ [Robak Т., Wierzbowska A., Blasinska-Morawiec M et al: Mediators inflamm. - 1999. -Vol. 8(6). - P.277-86]. Так в работе [Fayad L, Keating M.J., Reuben M.J. at al: Blood. - 2001. - Vol.97(1).-P.256-63] показано, что уровень ИЛ-6 и ИЛ-10 был выше у пациентов с ХЛЛ по сравнению с контролем. Пациенты с повышенным уровнем ИЛ-6 и/или ИЛ-10 имели худшую медиану или 3-х летнюю выживаемость и неблагоприятные характеристики (предшествующая температура, увеличение уровня бета-2 микроглобулина или лактат-дегидрогеназы или стадию заболевания по Раи III или IV. Результаты [Hulkkonen J., Vilpo J., Vilpo L. et al: Br J Haematol. - 1998. - Vol.100 (3). - P.478-83] свидетельствуют, что различная способность продуцировать ИЛ-6 и фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α) может играть роль при В-ХЛЛ прогрессии и клинической манифестации этого заболевания.
Вместе с тем к недостаткам способа следует отнести следующие:
1) относительно высокую вариабельность сывороточного уровня (СУ) ИЛ-6 даже в течение суток у одного и того же пациента (например, утреннее или послеобеденное время);
2) наличие сопутствующих заболеваний у пациентов может существенно влиять на регистрируемый СУ ИЛ-6. Главным недостатком способа является невозможность выделить группы благоприятного (неблагоприятного) течения заболевания на начальной стадии и тем самым осуществить своевременные профилактические мероприятия (адекватная химиотерапия).
Прототипом данного изобретения является метод, описанный Demeter J. и др. (Demeter J., Porzolt F., Ramiisch S., Schmidt D., Schmidt M., Messer G. Polymorphism of the tumor necrosis factor-alfa and lymphotoxin-alpha genes in chronic lymphocytic leukaemia. // Br. J. Haematol, 1997, Apr; 97(1):107-12), сообщающий о повышении частоты полиморфизма гена TNF-альфа и TNF-бета у больных ХЛЛ по сравнению с контрольной группой. Было выявлено значительное увеличение частоты встречаемости аллели TNF 1 полиморфизма гена TNF-alfa -308G в группе 73 больных ХЛЛ по сравнению с контролем (RR=3.18, границы 95% доверительного интервала 1,57-8,3; р=0.006). А также было выявлено увеличение частоты аллея TNF-beta LT*2 у больных ХЛЛ (р=0.004). На основании полученных данных авторы сделали заключение о вовлечении иммуногенетической ассоциации с вовлечением полиморфизма генов цитокинов TNF/LT как паракринных и аутокринных факторов роста в патогенез ХЛЛ.
Недостатками данного метода является следующее.
1. Отсутствие данных о полиморфизме указанных генов при ХЛЛ в зависимости от вариантов течения заболевания.
2. Отсутствие данных об изучении особенности комбинаций генотипов по локусам TNF-α и β у больных ХЛЛ.
Технический результат - повышение точности прогнозирования развития и течения ХЛЛ. Технический результат достигается тем, что на ранней стадии развития заболевания проводят генотипирование полиморфизма промоторной области гена TNF-alfa и TNF-betta и при выявлении генотипа LT*22 выявляют лиц, предрасположенных к развитию ХЛЛ, а при определении комбинации генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 прогонозируют у больных ХЛЛ агрессивное течение заболевания.
Способ осуществляется следующим образом.
Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови.
Материалом для молекулярно-генетического исследования служили образцы ДНК крови. Кровь набирали в пробирки со стандартным консервантом (1 мл глюгицира) в соотношении 4:1. До выделения ДНК кровь хранили при температуре +4°С не более 1 месяца. ДНК выделяли из лимфоцитов периферической венозной крови методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew С.С., 1984). Для этого к 4 мл крови добавляли 50 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритона Х 100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl рН 7,6. Ядра лимфоцитов осаждали центрифугированием при 4°С и 4000 об/мин в течение 20 минут; к осадку добавляли 8 мл раствора, содержащего 25 мМ EDTA (рН=8,0), суспендировали, добавляли 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К до конечной концентрации 100 мкг/мл, затем инкубировали при 42°С 16 часов. Очистка ДНК от белков производилась с помощью последовательной эктракции раствора ДНК забуференным фенолом (рН=7,8), смесью фенол-хлороформа (1:1) и хлороформом. При этом фенол активно денатурирует белки, смесь фенол-хлороформа полностью ингибирует РНК-зную активность, в результате последней экстракции хлороформом из препарата ДНК удаляют остатки фенола. Экстракцию производили, смешивая раствор ДНК и растворитель до образования эмульсии. Разделение фаз проводили ценрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 мин. Осаждение ДНК производилось добавлением двух объемов охлажденного 96% этанола. Осажденную ДНК дважды промывали 70% этанолом, удаляли этанол из пробирки и подсушенный осадок ДНК растворяли в деионизированной Н2О. Раствор ДНК хранили при -20°С.
Проведение полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.
Анализ полиморфных локусов генов -308G→A промоторного участка гена фактора некроза опухолей α (-308TNF-α) и +252А→G интрона 1 гена фактора некроза опухолей β(+252TNF-β) проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) на термоциклере в автоматическом режиме с использованием локусспецифических олигонуклеотидных праймеров Полиморфизм -308G→A промоторной области гена TNF-α выявляли с использованием праймеров, один из которых содержит искусственную однонуклеотидную замену для создания сайта рестрикции в нативной последовательности ДНК для рестриктазы NcoI (Wilson A.G. et al., 1993). Условия ПЦР и состав ПЦР-смеси идентичны вышеизложенным. Продукт ПЦР длиной 108 пн подвергали ферментному гидролизу рестриктазой Ncol при температуре 37°С. Аллель TNF-α*22 размером 108 пн (генотип АА) типировался на электрофорезе в 7% ПААГ по отсутствию сайта рестрикции, аллель TNF-α*11 (генотип GG), содержал сайт рестрикции и идентифицировался по наличию двух фрагментов длиной 88 и 20 пн (Wilson A.G.et аl., 1993).
Полиморфизм +252A→G интрона 1 гена ФНО-β выявляли методом ПЦР с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. Условия ПЦР и состав ПЦР-смеси идентичны вышеизложенным. Продукт ПЦР длиной 300 пн подвергали ферментному гидролизу рестриктазой Ncol при температуре 37°С. Аллель TNF*12 размером 300 пн (генотип АА) типировался на электрофорезе в 7% ПААГ по отсутствию сайта рестрикции, тогда как при наличии сайта рестрикции идентифицировался мутантный аллель TNF-β*22 (генотип GG).
В качестве контроля обследовали группу здоровых индивидов, проживающих на территории республики Башкортостан (101 человек), у которых отсутствовали какие-либо злокачественные заболевания.
В группу с доброкачественным течением ХЛЛ вошли больные с медленным нарастанием лейкоцитоза, очаговым типом роста в костном мозге, незначительным увеличением периферических лимфоузлов и селезенки. В начальной стадии заболевания лечение больным данной группы не назначается.
В группу с агрессивным течением ХЛЛ вошли больные с прогрессирующей формой (быстрое увеличение лимфоузлов и селезенки, диффузный или диффузно-интерстициальный рост опухоли в костном мозге), опухолевой формой ХЛЛ (наличие больших плотных конгломератов лимфоузлов, диффузный рост опухоли в костном мозге) и абдоминальной формой (отличающейся наличием конгломератов лимфоузлов в брюшной полости и диффузной пролиферации в трепанате). Данным категориям больных требовалось назначение полихимиотерапии.
Группа больных ХЛЛ с доброкачественным течением составила 54 человека, группа с агрессивным течением заболевания - 50 человек. В качестве контроля обследована группа практически здоровых доноров, подобранных в соответствии с возрастом и полом исследуемых групп больных.
Молекулярно-генетическое изучение полиморфного локуса -308G→А промоторного участка гена TNF-α. В табл.1 приведены результаты изучения полиморфного локуса -308G→A промоторного участка гена TNF-α. В группе больных ХЛЛ частота генотипа TNF*2/2 гомозиготного по мутантным аллелям и определяющего повышенный уровень экспрессии гена ФНО-α, составила 2,88%, частота аллеля TNF*2 - 22,31%, что не имеет достоверных отличий по сравнению с контрольной группой, где на долю генотипа TNF*2/2 и аллеля TNF*2 приходится 2,13 и 19,29% соответственно. Полученные результаты согласуются с аналогичными литературными данными, представленные в работах Mainou-Fowler Т. и Wihiborg С. [Mainou-Fowler Т., Dickinson A. M., Taylor P.R. et al. // Leuk Lymphoma 2000 Aug; 38(5-6):547-52; Wihiborg C., Sjoberg J., Intaglietta M., et al. //Br. J. Haematol 1999 Feb;104(2):346-9]. Авторами этих исследований был изучен полиморфизм гена TNF-α у больных с В-ХЛЛ и болезнью Ходжкина. Результаты этих работ показали отсутствие достоверных различий между группами больных и контролем по распределению частот аллелей.
В результате изучения характера распределения частот генотипов у больных ХЛЛ в зависимости от степени тяжести клинического течения заболевания выявлено увеличение частоты встречаемости мутантного генотипа TNF*2 полиморфного локуса - 308G→A TNF-α у больных с агрессивным течением ХЛЛ до 4,0% по сравнению с доброкачественным течением заболевания, 1,9%. Хотя применение критерия χ2 не выявило достоверных различий по частотам аллелей между больными хроническим лимфолейкозом и контрольной группой (χ2=0,01; р=0,95), что может быть обусловлено недостаточностью выборки, повышение частоты мутантного генотипа у больных с опухолевой формой свидетельствует о возможной прогностической значимости данного генетического маркера.
Таблица 1 Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса -308G→A промоторного участка гена TNF-α |
||||||
Обследованные группы | Объем выборки | Частота генотипов (%) | Частота аллелей (%) | |||
TNF*11 | TNF*12 | TNF*22 | TNF*1 | TNF*2 | ||
Контроль | 101 | 76,59 | 21,28 | 2,13 | 80,71 | 19,29 |
Больные ХЛЛ, в целом | 104 | 72,12 | 25,00 | 2,88 | 77,69 | 22,31 |
Доброкачественное течение | 54 | 72,2 | 25,9 | 1,9 | 77,9 | 22,1 |
Агрессивное течение | 50 | 72,0 | 24,0 | 4,0 | 77,4 | 22,6 |
Молекулярно-генетическое изучение полиморфного локуса +252А→G гена TNF-P. В табл.2 приведены результаты изучения полиморфного локуса +252А→G гена TNF-β. Как видно из полученных данных, только один генотип, а именно генотип LT*22, характеризующийся наличием мутации гена ФНО-β в гомозиготном состоянии, у больных хроническим лимфолейкозом встречался более чем в 2 раза чаще по сравнению с контролем (9,00% и 3,55% соответственно). Применение критерия χ2 показало достоверность различий (χ2=3,82; р=0,05). Для генотипа LT*22 был рассчитан показатель OR, который для больных хроническим лимфолейкозом составил 2,68, что указывает на повышение вероятности развития хронического лимфолейкоза у данной категории индивидов.
Таблица 2 Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного локуса +252A→G промоторного участка гена TNF-β |
||||||
Обследованные группы | Объем выборки | Частота генотипов (%) | Частота аллелей (%) | |||
LT*11 | LT*12 | LT*22 | LT*1 | LT*2 | ||
Контроль | 101 | 55,03 | 41,42 | 3,55 | 68,21 | 31,79 |
Больные ХЛЛ, в целом | 104 | 55,00 | 36,00 | 9,00 | 66,91 | 33,09 |
Доброкачественное течение | 52 | 53,84 | 36,54 | 9,62 | 66,19 | 33,80 |
Агрессивное течение | 48 | 56,25 | 35,42 | 8,33 | 67,69 | 32,31 |
Анализ комбинаций генотипов по локусам TNF-α и TNF-β больных хроническим лимфолейкозом. Принимая во внимание, что гены TNF-α и TNF-β расположены на одной хромосоме в непосредственной близости (локус 6р21.3), целесообразным представлялось изучить особенности комбинаций генотипов по изученным локусам и характер сцепления между ними. Данные по распределению комбинаций генотипов приведены в табл. 3.
В качестве прогностически неблагоприятных комбинаций генотипов по локусам TNF-α и TNF-β следует отметить варианты TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11, частота которых при агрессивном течении ХЛЛ оказалась почти в 2 раза выше, чем при доброкачественной форме заболевания. Показатели OR в отношении агрессивного течения ХЛЛ составили 2,22 для сочетания TNF*22/LT*11 и 2,27 для комбинации генотипов TNF*12/LT*11. Полученные результаты позволяют использовать данные комбинации генотипов по локусам TNF-α и β в качестве генетических маркеров предрасположенности к агрессивному течению ХЛЛ.
Таблица 3 Распределение генотипов по локусам TNF-α и TNF-β у больных хроническим лимфолейкозом и в контроле |
||||
Комбинации генотипов -308/+252 | Частота (%) | |||
Контроль (n=101) | Больные ХЛЛ, в целом (n=104) | Доброкачественное течение (n=52) | Агрессивное течение(n=48) | |
TNF*11/LT*11 | 44,94 | 47,12 | 50,0 | 47,92 |
TNF*11/LT*12 | 18,35 | 18,27 | 15,38 | 22,92 |
TNF*11/LT*22 | 1,89 | 3,85 | 5,77 | 2,08 |
TNF*22/LT*11 | 1,27 | - | - | - |
TNF*22/LT*12 | 0,63 | - | - | - |
TNF*22/LT*22 | 0.63 | 2,88 | 1,92 | 4,17 |
TNF*12/LT*11 | 9,49 | 5,77 | 3,85 | 8,33 |
TNF*12/LT*12 | 21,52 | 16,35 | 21,15 | 12,5 |
TNF*12/LT*22 | 1,27 | 1,92 | 1,92 | 2,08 |
Таким образом, определение генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, позволит выявлять лица, предрасположенные к возникновению ХЛЛ.
В качестве прогностических маркеров для выявления лиц, предрасположенных к агрессивному течению ХЛЛ должны определяться комбинации генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 у больных ХЛЛ.
Для иллюстрации приведем некоторые клинические примеры.
Б-ая М-о., 1937 года рождения, город Белебей, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в апреле 1996 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами 89%. Регулярно получает полихимиотерапию с включением циклофосфана, преднизолона. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по К.Rai III, продолжает принимать лечение, наблюдается прогрессирование течения заболевания, увеличение количества лимфоузлов, увеличение их до 2 см в диаметре, группирование их в конгломераты, при пальпации отмечается болезненность. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфных локусов генов TNF-α и β больной выявило генотип LT*22, свидетельствующий о предрасположенности к возникновению ХЛЛ, а выявление комбинации генотипов TNF*22/LT*22 позволило прогнозировать агрессивное течение заболевания.
Пациентка К-ва 1948 года рождения, г.Учалы, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в сентябре 2000 года, подтвержден стернальной пункцией, 95%-зрелых лимфоцитов. Неоднократно проводилось лечение циклофосфаном и преднизолоном. Смерть наступила в декабре 2002 г, на фоне прогрессирования лимфоцитоза до 250×109/л, анемии -Нв-43 г/л, Тромбоцитопении-Рlt-31×109/л. Гиперсплено-, гепатомегалия. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. При исследовании установлена комбинация генотипов TNF*12/LT*11, что позволило нам прогнозировать агрессивное течение болезни.
Б-ая М-в., 1944 года рождения, город Нефтекамск, Республика Башкортостан. Диагноз ХЛЛ установлен в сентябре 1998 года, подтвержден стернальной пункцией, костный мозг богат клеточными элементами, представлен зрелыми лимфоцитами - 67%. Получает Хлорбутин 5 мг 4 раза в день. В настоящее время диагноз ХЛЛ, стадия по К.Rai II, продолжает принимать лечение, наблюдается стабильное течение заболевания. Увеличены периферические лимфоузлы до 1,0 см в диаметре, при пальпации мягкие, безболезненные. Умеренная гиперспленомегалия, печень по краю реберной дуги. WBC - 106×109/л, RВС - 3,94×1012/л, PLT - 156×109/л, Нв - 123 г/л. При молекулярно-генетическом тестировании у больного было взято 8 мл венозной крови с последующим выделением ДНК и амплификацией полиморфных участков генов TNF-α и β в реакционной смеси, содержащей примерно 0.1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0.25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После рестрикции амплифицированных ПЦР-продуктов эндонуклеазой Hsp92II провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе. Исследование полиморфных локусов генов TNF-α и β больной не выявило генотип LT*22 свидетельствующий о предрасположенности к возникновению ХЛЛ. При изучении локусов генов TNF-α и β была выявлена комбинация генотипов TNF*11/LT*11, в данном случае мы не можем точно прогнозировать течение заболевания, возможен был как доброкачественный, так и злокачественный вариант течения болезни; стратегия химиотерапии выбиралась исходя из традиционных критериев.
Таким образом, нами проведено молекулярно-генетическое изучение полиморфных локусов -308G→A и +252A→G промоторных областей генов TNF-α и β у больных с хроническим лимфолейкозом и в контрольной группе. Установлено, что у лиц с выявленным генотипом LT*22 характеризующегося наличием мутации гена TNF-P в гомозиготном состоянии, возможность развития ХЛЛ значительно выше по сравнению с контролем. Определение комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 и TNF*12/LT*11 у больных ХЛЛ, позволяют прогнозировать агрессивные варианты течения ХЛЛ на самых ранних стадиях развития заболевания.
Claims (1)
- Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза путем типирования полиморфизма ДНК лимфоцитов, выделенных из крови больного, генов TNF-alfa и TNF-beta, отличающийся тем, что из лимфоцитов периферической крови выделяют ДНК методом полимеразно-цепной реакции синтеза ДНК, проводят генотипирование полиморфных локусов - 308G→А и +252А→G промоторных областей генов TNF-α и β и при выявлении генотипа LT*22, характеризующегося наличием мутации гена TNF-β в гомозиготном состоянии, выявляют лиц, предрасположенных к развитию хронического лимфолейкоза, а при определении комбинаций генотипов TNF*22/LT*22 или TNF*12/LT*11 у больных хроническим лимфолейкозом прогнозируют агрессивное течение заболевания.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003123171A RU2003123171A (ru) | 2005-01-20 |
RU2248574C1 true RU2248574C1 (ru) | 2005-03-20 |
Family
ID=34977801
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003123171/15A RU2248574C1 (ru) | 2003-07-22 | 2003-07-22 | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2248574C1 (ru) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2458349C1 (ru) * | 2011-07-15 | 2012-08-10 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания |
RU2490642C1 (ru) * | 2012-08-01 | 2013-08-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза |
RU2496110C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2013-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза |
RU2498313C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2013-11-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом |
RU2508543C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2014-02-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течении хронического лимфолейкоза |
RU2788816C1 (ru) * | 2022-11-18 | 2023-01-24 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования течения хронического лимфолейкоза |
-
2003
- 2003-07-22 RU RU2003123171/15A patent/RU2248574C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
DEMETER J., et al., Polymorphism of the tumor necrosis factor-alfa and tymphotoxin-alpha genes in chronic lymphocytic leukaemia, Br. J.Haematol, 1997, apr., 97(1), pp.107-112. * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2458349C1 (ru) * | 2011-07-15 | 2012-08-10 | Российская Федерация, От Имени Которой Выступает Министерство Образования И Науки Российской Федерации | Способ прогнозирования формирования хронического лимфолейкоза и развития сочетанных осложнений в дебюте заболевания |
RU2496110C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2013-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза |
RU2490642C1 (ru) * | 2012-08-01 | 2013-08-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ прогнозирования клинической формы хронического лимфолейкоза |
RU2498313C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2013-11-10 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования общей выживаемости больных хроническим лимфолейкозом |
RU2508543C1 (ru) * | 2012-09-18 | 2014-02-27 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" | Способ прогнозирования риска развития тромбоцитопении в течении хронического лимфолейкоза |
RU2788816C1 (ru) * | 2022-11-18 | 2023-01-24 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования течения хронического лимфолейкоза |
RU2824086C1 (ru) * | 2023-12-29 | 2024-08-01 | ФГБУН "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ выявления суррогатных маркеров мутаций генов вариабельных участков тяжелых цепей иммуноглобулинов при хроническом лимфолейкозе |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2003123171A (ru) | 2005-01-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20070281300A1 (en) | Thrombomodulin (Thbd) Haplotypes Predict Outcome | |
US6844156B2 (en) | Methods for identifying a preferred liver transplant donor | |
CA2881027A1 (en) | Prognosis biomarkers in cartilage disorders | |
RU2248574C1 (ru) | Способ прогнозирования развития и течения хронического лимфолейкоза | |
CN116411059B (zh) | 一种引发溶血性输血反应的类孟买表型的snp位点、应用及试剂 | |
US6248533B1 (en) | Gene diagnosis of diseases wherein TNF-α promotors participate | |
CN108676870B (zh) | 与tia易感性相关的fmo3基因snp的检测方法、检测试剂盒及其应用 | |
KR102063486B1 (ko) | Rnf213 단일염기다형성과 한국인 모야모야병 발병 위험도의 연관성 | |
US10770183B2 (en) | Methods of assessing a risk of developing necrotizing meningoencephalitis | |
KR20180040461A (ko) | Bnip2 유전자 부위의 염기서열 다형성을 이용한 장기이식 후 거부반응 예측 방법 | |
US20140141432A1 (en) | Method and kit for diagnosing glaucoma in dogs | |
EP2764116B1 (en) | Genetic polymorphisms associated with venous thrombosis in women, methods of detection and uses thereof | |
Watling et al. | Loss of heterozygosity analysis of chromosomes 9, 10 and 17 in gliomas in families | |
EP3592860B1 (en) | Rhd gene allele associated with a weak d phenotype and its uses | |
JP2007274986A (ja) | 2型糖尿病に対する感受性の判定方法 | |
Tsai et al. | Rapid identification of the ABO genotypes by their single‐stand conformation polymorphism | |
KR101806025B1 (ko) | 비소세포폐암 환자의 항암제 치료 반응성 및 예후 예측용 snp 마커 및 이의 용도 | |
CN110577992A (zh) | Rxra基因的多态性在抗结核病药物不良反应中的应用 | |
Sellami et al. | Evidence that erythrocyte DARC-positive phenotype can affect the GVHD occurrence after HLA-identical sibling HSCT | |
WO2021066038A1 (ja) | 膀胱癌治療におけるbcg膀胱内注入療法の治療効果を予測するためのバイオマーカー、方法、キット及びアレイ | |
JP6516128B2 (ja) | 抗甲状腺薬誘発性無顆粒球症リスクを判定するための検査方法及び判定用キット | |
JP2013536675A (ja) | 2型糖尿病の検出方法 | |
RU2282852C1 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы | |
KR101700623B1 (ko) | 돼지의 혈액 내 아밀라아제 수준 판단용 snp 마커 및 이의 용도 | |
RU2225612C2 (ru) | Способ прогнозирования течения множественной миеломы |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090723 |