RU2233323C2 - Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов (варианты), способ определения аномальных количественных потребностей в питательных веществах, способ идентификации питательных факторов и способ биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов - Google Patents
Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов (варианты), способ определения аномальных количественных потребностей в питательных веществах, способ идентификации питательных факторов и способ биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2233323C2 RU2233323C2 RU99100621/13A RU99100621A RU2233323C2 RU 2233323 C2 RU2233323 C2 RU 2233323C2 RU 99100621/13 A RU99100621/13 A RU 99100621/13A RU 99100621 A RU99100621 A RU 99100621A RU 2233323 C2 RU2233323 C2 RU 2233323C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lymphocytes
- serum
- free medium
- biochemical
- group
- Prior art date
Links
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 29
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 title claims abstract 15
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract 3
- 230000002547 anomalous effect Effects 0.000 title abstract 2
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims abstract description 16
- FRIBMENBGGCKPD-UHFFFAOYSA-N 3-(2,3-dimethoxyphenyl)prop-2-enal Chemical compound COC1=CC=CC(C=CC=O)=C1OC FRIBMENBGGCKPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 10
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229960001231 choline Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229940055726 pantothenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 47
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 26
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 17
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 17
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000007747 plating Methods 0.000 claims description 9
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012503 blood component Substances 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L (5-hydroxy-4,6-dimethylpyridin-3-yl)methyl phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP([O-])([O-])=O)C(C)=C1O RBCOYOYDYNXAFA-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 5
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 5
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 claims description 4
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 3
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N Folinic acid Natural products NC1=NC2=C(N(C=O)C(CNc3ccc(cc3)C(=O)NC(CCC(=O)O)CC(=O)O)CN2)C(=O)N1 MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 3
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 claims description 3
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 claims description 3
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 claims description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 3
- -1 alium Chemical compound 0.000 claims description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 claims description 3
- FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7, Chemical compound [Co+3].N#[C-].C1([C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)[N-]\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L 0.000 claims description 3
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 claims description 3
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 claims description 3
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims 5
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 abstract 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 abstract 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 25
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 19
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 12
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 12
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 9
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 7
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 6
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 208000000412 Avitaminosis Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010021135 Hypovitaminosis Diseases 0.000 description 3
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 208000030401 vitamin deficiency disease Diseases 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O IJRKANNOPXMZSG-SSPAHAAFSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- RWGFKTVRMDUZSP-UHFFFAOYSA-N cumene Chemical compound CC(C)C1=CC=CC=C1 RWGFKTVRMDUZSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- UQVDQSWZQXDUJB-UHFFFAOYSA-N hydron;7h-purin-6-amine;chloride Chemical compound Cl.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 UQVDQSWZQXDUJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical class O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 208000002787 Pregnancy Complications Diseases 0.000 description 1
- 108091036333 Rapid DNA Proteins 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000003915 air pollution Methods 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 235000005550 amino acid supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000008047 antioxidant nutrient Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Chemical class 0.000 description 1
- 229940093797 bioflavonoids Drugs 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- GPKFMIVTEHMOBH-UHFFFAOYSA-N cumene;hydrate Chemical compound O.CC(C)C1=CC=CC=C1 GPKFMIVTEHMOBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Chemical class 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000000975 dye Chemical class 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010193 neural tube defect Diseases 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000008557 oxygen metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 208000012113 pregnancy disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 235000011649 selenium Nutrition 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- ZEYOIOAKZLALAP-UHFFFAOYSA-M sodium amidotrizoate Chemical compound [Na+].CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I ZEYOIOAKZLALAP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Chemical class 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 1
- 231100000736 substance abuse Toxicity 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035581 susceptibility to neural tube defects Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000018648 unbalanced nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
- C12Q1/08—Quantitative determination using multifield media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/40—Nucleotides, nucleosides, bases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
- C12N2500/95—Protein-free medium and culture conditions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов в первом варианте включает глюкозу, пантотеновую кислоту, холин, неорганические ионы, гидропероксид кумола, митоген, буфер и деионизированную воду. Во второй вариант бессывороточной среды не включают пантотеновую кислоту и холин. Среды используют в способе определения аномальных количественных потребностей в питательных веществах, для идентификации питательных факторов или биохимических посредников, а также для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов. Изобретение позволяет повысить точность и клиническую эффективность оценки общего антиоксидантного статуса. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится, главным образом, к области питания и физиологической химии. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым способам биохимического определения антиоксидантной функции.
Описание предшествующего уровня техники
Клетки человека непрерывно подвергаются действию высоко химически активных и нестабильных молекул, названных свободными радикалами, которые вызывают окисленный стресс. Эти приносящие вред молекулы являются побочным продуктом нормальной жизнедеятельности и вырабатываются в результате метаболизма кислорода, то есть при клеточном дыхании, клетками иммунной системы (уничтожение чужеродного материала), а также в результате целого ряда ферментативных реакций, весьма важных в процессах обмена веществ. Источники свободных радикалов окружающей среды включают: сигаретный дым, ионизирующее излучение, загрязнение воздуха, химические соединения (карциногены, многие нефтехимические соединения, биоциды, красители, растворители, цитостатические лекарственные соединения и так далее), токсические тяжелые металлы, а также окисленные (прогорклые) жиры. К некоторым наиболее распространенным свободным радикалам относятся супероксид, гидроксид, синглетный кислород и пероксиды. Железо и медь определенных валентностей могут катализировать реакции образования свободных радикалов, хотя и короткоживущих, но которые ускоряют цепную реакцию образования радикалов, что влечет за собой изменение, повреждение биологических молекул.
Свободные радикалы токсичны для живых организмов, так как вызывают повреждение структуры всех биологических молекул. Молекулярное повреждение может приводить к изменению генетических кодов, нарушению целостности клеточной мембраны, неврологическим нарушениям, нарушению равновесия эндокринной системы, усилению аллергий, разрушению сосудистого эндотелия, а также к деградации и воспалению суставов.
Защита от вредного воздействия свободных радикалов была обнаружена среди широкого спектра молекул, названных антиоксидантами. Свободные радикалы и побочные продукты их реакций могут быть нейтрализованы и превращены в менее вредные продукты с помощью антиоксидантов. Антиоксидантами могут быть ферменты (такие как супероксиддисмутаза, каталаза, глутатион-пероксидаза), важные питательные вещества (такие как бета каротин, витамины С и Е, селен и цистеин) или широкий ряд разнообразных эндогенных соединений (таких как глутатион) или входящих в рацион питания соединений (таких как биофлаваноиды). Таким образом, организм человека имеет различные гасители свободных радикалов. Исследование человека показало, что недостаточное потребление питательных веществ, обладающих антиоксидантным действием связано с повышенным риском возникновения рака, сердечно-сосудистых заболеваний, артритов, катаракты и т.д. Также с повышенным потребление питательных веществ, обладающих антиоксидантным действием, связано снижение заболеваемости хроническими дегенеративными заболеваниями.
Обнадеживающие исследования показывают, что использование ан-тиоксидантных питательных добавок может оказывать положительное терапевтическое действие на человека. Лабораторное определение антиоксидантного статуса не вошло в обычную практику по целому ряду причин. Свободные радикалы крайне неустойчивы и, главным образом, не поддаются прямому измерению. Они могут быть определены через измерение продуктов, подвергшихся повреждающему действию свободных радикалов, таких как малондиальдегида (МДА), химически активных соединений тиобарбитуровой кислоты (АСТБК) или пероксидов липидов в сыворотке или моче. Эти тесты являются указателями окислительного стресса, однако отражают только повреждение определенных типов биомолекул (в большинстве случаев полиненасыщенных липидов и нуклеиновых кислот). Об уровнях антиоксидантных питательных веществ в сыворотке или клетках и активности антиоксидантных ферментов в клетке можно судить по недостаточности уровня специфических соединений, однако это не дает достаточной информации о взаимодействии и механизме действия антиоксидантов. Другие тесты для определения окислительного стресса пригодны в исследовательских целях, но неприемлемы для текущего практического использования в клинической лаборатории из-за их сложности и стоимости.
Недостаток предшествующего уровня техники заключается в отсутствии простых и эффективных способов биохимического определения антиоксидантной функции у человека. Настоящее изобретение осуществляет эту давнюю необходимость и потребность в данной области.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном аспекте настоящее изобретение обеспечивает клеточную культуральную среду, пригодную для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов человека, названная среда включает буферный бессывороточный раствор, содержащий следующие ингредиенты: карбогидрат, выбранный из группы, состоящей из глюкозы и соединения, биологически способного вырабатывать глюкозу в клетках; биологически пригодную форму пантотеновой кислоты, холин или биологически пригодную форму соединения, способного вырабатывать холин в клетках; неорганические ионы, состоящие из хлорида, фосфата, кальция, магния, калия, натрия и железа в биологически используемой форме, гидроксид кумола, деионизированную воду и митоген в количестве, эффективном для стимуляции исследуемых лимфоцитов; названный буферный бессывороточный раствор имеет рН, равную от приблизительно 6,8 до 7,6, заявляемая клеточная культуральная среда является эффективной для определения недостаточности, несоответствия и несбалансированности питания, а также для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ биохимического определения антиоксидантной функции клеток человека, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов конкретного индивидуума на клеточную культуральную среду настоящего изобретения, инкубацию лимфоцитов в клеточной культуральной среде и сравнение ответа лимфоцитов со средним ответом лимфоцитов в контрольной группе индивидуумов.
Еще в одном аспекте изобретение обеспечивает способ определения аномальных количественных потребностей в специфически требующихся питательных веществах у человека, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов конкретного индивидуума на клеточную культуральную среду настоящего изобретения, названная культуральная среда содержит ограничивающие рост (рост лимфоцитов) концентрации определяемого питательного вещества, инкубацию лимфоцитов в клеточной культуральной среде и сравнение ответа лимфоцитов со средним ответом лимфоцитов контрольной группы индивидуумов.
В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ определения питательных факторов или биохимических посредников, которые нейтрализуют вредное действие питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, а также других компонентов крови, включая лекарства, у людей, чувствительных к таким вредным воздействиям, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов на клеточную культуральную среду настоящего изобретения, содержащую по меньшей мере одно из питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, или других компонентов крови, включая лекарства, в концентрации, оказывающей отрицательное действие на ответ клеток; инкубацию лимфоцитов в клеточной культуральной среде и сравнение ответа с ответом в той же среде, дополненной источником тестируемого вещества, которое, как предполагается, нейтрализует отрицательное действие питательного вещества, биохимического посредника или его продуктов, или других компонентов крови, включая лекарства.
Другие дополнительные аспекты, особенности и преимущества настоящего изобретения станут понятными из следующего описания предпочтительных вариантов воплощения изобретения, приведенных с целью их раскрытия.
Для того, чтобы описание, в котором вышеизложенные особенности, преимущества и поставленные цели этого изобретения, а также те, которые будут изложены далее, стало понятным в деталях, более подробное описание изобретения, коротко сформулировано выше, может быть представлено в виде определенных вариантов его воплощения, которые иллюстрируются прилагаемым чертежом. Этот чертеж составляет часть подробного описания изобретения. Следует отметить, однако, что чертеж иллюстрирует предпочтительные варианты воплощения этого изобретения и поэтому не считается ограничивающими объем притязаний изобретения.
На чертеже показаны кривые ответа, зависимого от дозы гидропероксида кумола, полученные для ряда упомянутых исследуемых индивидуумов.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к тестам крови, с помощью которых оценивают внутриклеточную недостаточность витаминов, а также общую антиоксидантную функцию, обеспечивающую новый биохимический анализ клеток человека. Такой анализ фактически отражает насколько хорошо питательные вещества и антиоксидантные системы функционируют в периферических лимфоцитах человека. Там, где определение содержания и сбалансированности витаминов (статуса) было ранее невозможно, способ настоящего изобретения позволяет определить их недостаточность прежде, чем это повлияет на возникновение клинических нарушений.
До разработки настоящего изобретения определение содержания витаминов было основано на клиническом наблюдении и измерении их статического уровня в сыворотке, моче или волосах вместе с некоторыми ферментами или белковыми маркерами. Такие тесты показывают кратковременные статические уровни и не оценивают многосложные метаболические пути, в которых эти соединения принимают участие в качестве ферментативных кофакторов. Поэтому другие способы в этой области дают результаты часто функционально неточные и поэтому клинически непригодные.
Вместо измерения статических уровней способ настоящего изобретения анализирует как на самом деле функционируют витамины, минералы, аминокислоты и антиоксидантные системы в лейкоцитах человека. В отличие от других подходов, даже претендующих на функциональность, в способе настоящего изобретения использовали метаболически активные периферические лимфоциты и измеряли синтез ДНК (рост клеток) для определения функциональной внутриклеточной недостаточности, при которой ограничен стимулированный митогеном ответ. Таким образом, способ настоящего изобретения обеспечивает результаты исследования, которые отражают общую метаболическую функцию вместо определения уровней в сыворотке или определения использования отдельных биохимических путей.
Лимфоциты обладают особыми преимуществами, так как они:
(1) являются ответственными за опосредованный клетками иммунитет и легко стимулируются к росту (митогенез);
(2) отражают средневременной долгосрочный статус питательных веществ (время жизни лимфоцита равно, приблизительно, шести месяцам);
(3) обладают метаболическими путями, общими с другими клетками, содержат ядра, в которых возможен быстрый синтез ДНК и рост клеток, и которые легко отбираются, путем стандартной венепункции.
Способ настоящего изобретения является только тестом крови, который определяет функциональные недостаточности внутриклеточно путем измерения синтеза ДНК (клеточного роста) лимфоцитов каждого больного с использованием химически определенной культуральной среды, не содержащей сыворотку или белок. Контрольная среда содержит минимальное количество каждого из важных питательных веществ, необходимых для поддержания оптимального роста лимфоцитов, или ответа, стимулированного митогеном. Функциональный статус 19 различных витаминов, минералов и аминокислот, вовлеченных в клеточный метаболизм, определяли непосредственно путем создания зависимости роста лимфоцитов от изменения содержания отдельных питательных веществ в среде и измерения, измененного в результате этого, синтеза ДНК.
Наиболее важно то, что способ настоящего изобретения обеспечивает определение общей антиоксидантной функции, с помощью которой оценивается общая способность клеток противостоять повреждению, вызываемому свободными радикалами и другим формам окислительного стресса. Из-за значительного числа клеточных антиоксидантов с широким спектром действия, избыточными количествами, восстанавливающими и перезаряжающими возможностями измерение суммарной функции является более точным и клинически эффективным путем для оценки общего антиоксидантного статуса. Способ настоящего изобретения обеспечивает более точный и клинически эффективный анализ содержания витаминов и минералов посредством использования живых, метаболически активных лимфоцитов каждого больного, по сравнению с любым из предшествующих лабораторных тестов в данной области.
При измерении роста лимфоцитов для оценки функциональной достаточности способ настоящего изобретения отражает очень широко индивидуальные потребности каждого больного. Поэтому наполнение может быть приспособлено к специфическим биохимическим потребностям каждого индивидуума, а не "среднего" больного, как определено так называемыми нормами.
По опубликованным данным, 70% американцев подвержены риску долгосрочной недостаточности витаминов и минералов. Эта недостаточность может неблагоприятно влиять на эффективное функционирование организма и его сопротивляемость заболеваниям. Научные данные показывают, что коррекция витаминной недостаточности повышает иммунокомпетентность и помогает в предупреждении или лечении хронических дегенеративных заболеваний. Исследования также показывают, что значительной внутриклеточной функциональной недостаточностью страдают около 40% больных, уже принимавших витамины. Более того, рекомендованные Нормы Питания (RDAs) не соответствует рекомендациям с учетом индивидуальных потребностей в витаминах и минералах.
Много людей может получить пользу от этого изобретения. Коррекция витаминной недостаточности необходима для здоровых людей с точки зрения сохранения здоровья. Определение исходного уровня у таких людей жизненно необходимо. Растущее количество медицинских исследований непрерывно отмечают большое количество заболеваний, связанных с недостаточностью витаминов.
Эти исследования показывают пользу оптимального содержания витаминов, минералов, аминокислот и антиоксидантов для предупреждения и лечения заболеваний - от предупреждения болезни сердца и различных форм рака, до стимулирования функций иммунной системы и замедления возрастных отклонений физиологических функций. Кроме того, на такие состояния, как алкоголизм, токсикомания, артриты, хроническая усталость, диабет, ВИЧ/СПИД и другие иммунные нарушения, дегенерация желтого пятна, недомогание и усталость, рассеянный склероз, дефекты нервной трубки, ожирение, остеопороз, осложнения при беременности может оказывать влияние, прямое или косвенное, недостаточность витаминов и минералов и их восполнение, как было показано, способствует приостановке или предупреждению этих хронических состояний.
Несмотря на то, что более предпочтительные варианты воплощения настоящего изобретения описаны подробно ниже, различные основные составляющие части исследования настоящего изобретения, а именно растворы, культуральная среда, соли и другие компоненты описаны в Патенте США №4499064.
Настоящее изобретение направлено на клеточную культуральную среду, пригодную для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов человека, причем названная среда включает буферный бессывороточный раствор, содержащий следующие ингредиенты: карбогидрат, выбранный из группы, состоящей из глюкозы и соединения, биологически способного вырабатывать глюкозу в клетках, биологически пригодную форму пантотеновой кислоты, холин или биологически пригодную форму соединения, способного вырабатывать холин в клетках, неорганические ионы, содержащие хлорид, фосфат, кальций, магний, калий, натрий и железо в биологически используемой форме, гидропероксид кумола, деионизированную воду и митоген в количестве, эффективном для стимуляции исследуемых лимфоцитов.
Названный буферный бессывороточный раствор имеет рН от приблизительно 6,8 до 7,6, названная клеточная культуральная среда является эффективной для определения недостаточности питательных веществ или их несоответствия и несбалансированности, а также для биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов.
В одном варианте воплощения в клеточную культуральную среду добавляется питательная добавка, выбранная из группы, состоящей из биологически используемых форм аминокислот и витаминов, для определения недостаточности питательного вещества, его отсутствия в питательной добавке, или его наличия в ограничивающем или ингибирующем количестве. В этом случае витамины выбирали из группы, состоящей из биотина, фолиновой кислоты, или биологически пригодной формы фолиевой кислоты, никотинамида или никотиновой кислоты, рибофлавина, тиамина, витамина B6, витамина B12 или соединений, способных вырабатывать их в клетках, и где названные аминокислоты или соединения, способные вырабатывать аминокислоты, включают L-аргинин, L-цистеин, L-глутамин, глицин, L-гистидин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизин, L-метионин, L-фенилаланин, L-серин, L-треонин, L-триптофан, L-тирозин, L-валин, причем аминокислоты содержатся в группе, каждая в количестве, не превышающем ингибирующую концентрацию.
В большинстве случаев клеточная культуральная среда настоящего изобретения содержит концентрацию гидропероксида кумола, которая позволяет проведение точного биохимического определения антиоксидантной функции. Предпочтительно, чтобы концентрация гидропероксида кумола в клеточной культуральной среде составляла от приблизительно 50 мкМ до приблизительно 500 мкМ.
В другом варианте воплощения в клеточной культуральной среде настоящего изобретения добавляются одно или более стимулирующих питательных веществ, выбранных из группы, состоящей из пирувата, аденина и инозитола или соединений, способных вырабатывать их в клетках, в концентрациях, приближенно вызывающих максимальный ответ. Как правило, каждая аминокислота аминокислотной добавки присутствует приблизительно в минимальной концентрации, эффективной для вызова максимального ответа клеток, за исключением тестируемой аминокислоты. Кроме того, когда среда не содержит одну из аминокислот, серин или глицин или не содержит обе, в нее включают эффективную концентрацию для клеточного ответа витамина В6 или пригодной формы фолиевой кислоты, или их вместе. В другом варианте воплощения, когда среда не содержит одно из двух соединений, пантотеновую кислоту или холин, клеточная культура в названной среде эффективна для определения недостаточности питательных веществ и аномальных потребностей при добавлении или ограничивающих ответ клеток количеств пантотеновой кислоты или холина, не содержащихся в культуральной среде.
Настоящее изобретение также направлено на способ определения аномальных количественных потребностей в специфически требующихся питательных веществах у человека, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов названного индивидуума на клеточную культуральную среду пункта 1. Названная культуральная среда содержит ограничивающие концентрации определяемого питательного вещества, инкубацию лимфоцитов в клеточной культуральной среде и сравнение ответа лимфоцитов со средним ответом лимфоцитов контрольной группы индивидуумов.
Настоящее изобретение также направлено на способ идентификации факторов питания или биохимических посредников, которые нейтрализуют вредное действие питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, а также других компонентов крови, включая лекарства, у людей, чувствительных к таким вредным воздействиям, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов на клеточную культуральную среду пункта 1, содержащую по меньшей мере одно из питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, или других компонентов крови, включая лекарства, в концентрации, оказывающей отрицательное действие на ответ клеток; инкубацию лимфоцитов в клеточной среде; и сравнение ответа клеток с ответом в той же среде, дополненной источником тестируемого вещества, которое, как предполагается, нейтрализует отрицательное действие питательного вещества, биохимического посредника или другого компонента крови, включая лекарство.
Настоящее изобретение обеспечивает способ биохимического определения антиоксидантной функции клеток человека, который включает следующие стадии: посев лимфоцитов названного индивидуума на клеточную культуральную среду пункта 1, инкубацию лимфоцитов в клеточной культуральной среде, и сравнение ответа лимфоцитов со средним ответом лимфоцитов в контрольной группе индивидуумов.
Различные аспекты этих вариантов воплощения описаны подробно ниже.
Следующие примеры даны с целью иллюстрации различных вариантов воплощения этого изобретения и никоим образом не предназначены ограничивать данное изобретение.
ПРИМЕР 1
Взятие крови больного
Для способа настоящего изобретения необходимы два образца цельной крови, законсервированной смесью кислота-цитрат-декстроза, по 10 мл каждый. Не требуется спешки. Требуются только инструменты для забора крови. После этого можно приступать к проведению исследования настоящего изобретения, или кровь больного может быть переправлена в соответствующую лабораторию при комнатной температуре. Не требуется центрифугировать кровь. Исчерпывающие исследования обеспечивают глубокий научно-обоснованный анализ недостаточности у больных.
ПРИМЕР 2
Подготовка образца: выделение клеток
Все процедуры проводили с использованием стерильных способов в вытяжном шкафу под ламинарным потоком для обеспечения стерильности образца. Образцы крови каждого пациента обозначали номером по порядку, принятым в лаборатории способом. Этот порядковый номер использовали как номер образца в ходе всего процесса исследования, вместе с датой отбора крови и датой проведения определенной стадии анализа. Каждую опытную пробирку, центрифужную пробирку, планшет для микротитрования и распечатанные результаты исследования образца больного маркировали тем же номером (по порядку поступления) как исходный образец.
Образец, полученный от каждого пациента, состоял из двух пробирок типа вакутейнера, содержащих кислоту-цитрат-декстрозу (желтые крышки), которые содержали по 8 мл цельной крови каждая. После маркировки образца порядковым номером цельную кровь перемешивали переворачиванием 6 раз. Цельную кровь из двух пробирок объединяли в одноразовых центрифужных пробирках на 50 мл.
Аликвоту 500 мкл асептически отбирали из каждого образца и помещали в пробирки 12×17 мм. Эту аликвоту использовали для подсчета лейкоцитарной формулы цельной крови на Счетчике Клеток Coulter Cell Counter Модель Т450. Распечатанную в приборе лейкоцитарную формулу цельной крови маркировали номером исследуемого образца и прикрепляли к рабочему листу для данного больного.
Для каждого образца готовили две пробирки с градиентом Фикола путем добавления 5 мл Гистопак 1077 (Фикол/Диатризоат натрия, Sigma Chemicals, Сент Луис, Миссури) в 15 мл коническую центрифужную пробирку. Используя 10 мл пипетку и электрический пипетный дозатор, 8 мл цельной крови медленно наслаивали на слой градиента Фикола в каждой пробирке. Пробирки с градиентом Фикола закрывали крышками и центрифугировали при 2160 RPM в течение 20 минут.
После завершения центрифугирования пробирки с градиентом осторожно вынимали из центрифуги во избежание нарушения градиента. Пленку (слой, содержащий лимфоциты), образовавшуюся в середине слоя Фикола, переносили, используя 5 мл пипетку, в 15 мл одноразовую коническую центрифужную пробирку.
Слой, содержащий лимфициты, объединяли с раствором солевого фосфатного буфера, содержащего 0,72% глюкозы (ФБС-Г), и доводили до конечного объема 12 мл. Пробирку закрывали и переворачивали 6 раз для смешивания слоя, содержащего лимфоциты и ФБС-Г.
Пробирки, содержащие слой лимфоцитов и ФБС-Г, центрифугировали при 2160 RPM в течение 5 минут. После центрифугирования супернатант отбирали с осадка клеток и выбрасывали. Осадок клеток ресуспендировали в 12 мл ФБС-Г, переворачивали 6 раз для получения равномерного распределения клеточных элементов. Образец снова центрифугировали, как описано выше.
После второго центрифугирования супернатант отбирали и выбрасывали. Осадок ресуспендировали в 6,0 мл ФБС-Г. Клеточный осадок разрушали и перемешивали с ФБС-Г с помощью 5 мл пипетки и электрического пипетного дозатора. После получения гомогенной суспензии клеток аликвоту 200 мкл этой суспензии переносили в пробирку 12×75 мм. Эту аликвоту использовали для подсчета клеток в исходной клеточной суспензии (ИКС) с помощью Счетчика Клеток фирмы Coulter, модель Т540.
Распечатку результатов счета в этой аликвоте маркировали номером образца и присоединяли к рабочему листу. Если число лимфоцитов было между 3,9 и 1,2 тысяч клеток на кубический миллиметр (тыс./мм3), образец был готов для посева на планшет. Объем добавляемой клеточной суспензии указан в таблице III. Если число лимфоцитов было выше 3,9 тыс./мм3, то образец должен был быть разбавлен. Однако, если число лимфоцитов было ниже 1,2 тыс./мм3, то образец считался непригодным для исследования.
Дополнительное количество ФБС-Г, требующееся для правильного разведения образца, определяли, используя следующие расчеты:
C1V1=C2V2 С = концентрация лимфоцитов (тыс./мм3);
V = объем,
где С2=3,0 тыс./мм3, требуемая концентрация лимфоцитов конечной клеточной суспензии. Например, когда концентрация лимфоцитов в 6,0 мл исходной клеточной суспензии составляет 5,6 тыс./мм3 (Лц = 5,6 тыс./мм3)
C1V1=C2V2 (5,6) (6,0 мл)=(3,0) (X)
X=11,2 мл конечного объема
Соответствующий объем ФБС-Г добавляют к ресуспендированным клеткам до конечного объема 11,2 мл. В данном примере нужно добавить 5,2 мл к имеющимся 6,0 мл до конечного объема 11,2 мл. Требуемый объем ФБС-Г добавляли к (ИКС) для приготовления конечной клеточной суспензии (ККС). Концентрацию лимфоцитов (Лц) и объем ФБС-Г записывали в рабочую таблицу (Spectrox Test Worksheet).
После дополнительного разведения аликвоту 200 мкл разведенной клеточной суспензии переносили в новую пробирку 12×75 мм и проводили подсчет клеток, как описано выше. Распечатку результатов клеточного подсчета (Лц конечной клеточной суспензии) присоединяли к рабочему листу, а также записывали объем, используемый для посева.
ПРИМЕР 3
Посев на планшет
Конечную клеточную суспензию помещали в стерильный лоток. Планшет для микротитрования, содержащий среду, помещали в вытяжной шкаф с ламинарной циркуляцией. Используя 12-канальную автоматическую микропипетку, оснащенную стерильными 0-50 мкл защитными наконечниками, вносили определенное количество (в соответствии с таблицей I) конечной клеточной суспензии в каждую лунку ряда "Н" планшета.
Для посева на планшет использовали следующие объемы конечной клеточной суспензии, в зависимости от концентрации лимфоцитов (Лц тыс./мм3).
После добавления клеток к среде раствор гидропероксида кумола (CuOOH) добавляли к ряду "Н" следующим способом:
(1) В колонки 1, 2, 3 вносили 10 мкл 100 мкМ CuOOH;
(2) В колонки 4, 5, 6 вносили 10 мкл 200 мкМ CuOOH;
(3) В колонки 7, 8, 9 вносили 10 мкл 300 мкМ CuOOH;
(4) В колонки 10, 11, 12 вносили 10 мкл 400 мкМ CuOOH;
После добавления CuOOH в лунки микропланшета планшет закрывали крышкой, помещали в СО2 инкубатор и выдерживали при 37°С в течение 96 часов.
ПРИМЕР 4
Мечение
Все процедуры мечения проводили в радиоизотопной комнате. Рабочий раствор меченного тритием тимидина (H3-TdR) доставали из холодильника и согревали до 37°С в водяной бане. Через 96 часов планшеты для микротитрования доставали из СО2 инкубатора. Рабочий раствор H3-TdR помещали в стерильный лоток и с помощью 12-канальной автоматической микропипетки, оснащенной 0-50 мкл защитными наконечниками, вносили 10 мкл рабочего раствора H3-TdR в каждую лунку "Н" ряда микропланшета. Планшет вновь помещали в инкубатор при 37°С на 24 часа. Дату и инициалы лаборанта, проводившего мечение, заносили в рабочий журнал.
ПРИМЕР 5
Сбор клеток
Все процедуры сбора клеток проводили в Радиоизотопной Комнате. Один фильтр-подложку из стекловолокна (Packard Part №6005416) маркировали номером образца, используя карандаш №2. Включали вакуумный насос, и сушильный шкаф устанавливали на режим 100°С. Заполненную дистиллированной водой бутыль присоединяли к прибору для сбора клеток (Харвестеру). Планшеты для микротитрования вынимали из инкубатора через 24 часа после добавления Н3-TdR. Дату и инициалы лаборанта, проводившего сбор клеток, заносили в рабочий журнал.
Прибор для сбора клеток (фирмы Packarg Модель №С9619) находился в открытой позиции, О-Кольца выставлены, фильтр-подложку из стекловолокна помещали на поверхность сборника клеток, шероховатой стороной прикладывая к О-Кольцам. Прибор для сбора клеток закрывали и фильтр-подложку смачивали дистиллированной водой из промывной ванночки. Затем Прибор для сбора клеток переводили на вакуумный цикл (ВАК). С планшета для микротитрования удаляли крышку и помещали в Прибор для сбора клеток под наконечники зондов. Планшет медленно поднимали по направлению к зондам до тех пор, пока концы зондов не коснутся дна планшета. Одновременно с удалением среды дно лунок очищалось концами зондов в результате медленного кругового движения микропланшета. Очистку продолжали в течение 10 секунд. Одновременно с очисткой дна лунок планшета с помощью концов зонда включали режим промыва на 10 секунд. Жидкость удаляли из лунок и вышеописанные этапы повторяли. Планшет удаляли, ванночку для промыва заполняли метанолом, ванночку поднимали, метанол забирался и ванночку опускали.
Продолжали работать в режиме ВАК в течение 5 секунд, при этом Прибор для сбора клеток был открыт, фильтр-подложка плотно прилегала к верхней части. Через 5 секунд выключали ВАК и одновременно с этим удаляли фильтр-подложку с поверхности сборника клеток. Фильтр-подложку помещали шероховатой стороной вверх в сушильный шкаф на 10 минут. Фильтры-подложки вынимали из сушильного шкафа и охлаждали до комнатной температуры.
ПРИМЕР 6
Подсчет радиоактивности
Все процедуры подсчета радиоактивности проводили в Радиоизотопной комнате. Фильтр-подложку помещали в кассету для счета, шероховатой стороной вверх. Коллиматор (тонкая пластина из нержавеющей стали для фиксации фильтра-подложки) помещали сверху фильтра-подложки. Кассеты загружали в Счетчик радиоактивных бета-частиц, Packard Matrix 9600. Поток Q-газа (1,3% н-бутана в гелии) вводился в Матрикс 9600. Нажатием кнопки "СТАРТ" активизировали программу счета, в соответствии с которой производился подсчет общей радиоактивности в каждой лунке в течение 3 минут. Счет каждого образца сохраняли на жестком диске Matrix 9600. Кроме того, распечатывали печатные копии необработанных данных радиоактивного счета.
ПРИМЕР 7.
Преобразование данных
Данные с жесткого диска Матрикса 9600 переносили на 3,5 дискету. Необработанные данные преобразовывали в отчетную форму, используя программу Макро в Microsoft Exel. Эта программа Макро вычитает фон планшета из данных каждого измерения, выводит среднюю из трех параллельных значений и представляет эти данные, как процент от планшетного контроля, который приняли за 100%.
ПРИМЕР 8
Анализ данных (Нормализация)
Способ настоящего изобретения определяет общую антиоксидантную функцию. Используя лимфоциты, стимулированные к росту митогеном, антиоксидантную функцию выражали путем оценки ответа роста лимфоцитов в присутствии нескольких дозировок СuООН и без него. СuООН является фактором окислительного стресса, который использовали для определения антиоксидантной функции лимфоцитов каждого индивидуума. Первоначально рекомендованный диапазон был установлен. Однако, поскольку СuООН по своей природе является нестабильным соединением и имеет относительно короткий срок хранения, его активность со временем снижается. Поэтому периодически приходилось использовать соединение различной мощности, получаемой еще при его производстве. Каждая партия была приобретена в разное время относительно его срока хранения, и потребовалось в каждой партии ежедневно устанавливать соответствие со значениями первоначально рекомендованного диапазона. Использованные дозы СuООН (100 мкМ, 200 мкМ, 300 мкМ, 400 мкМ) были установлены первоначально с помощью большого числа СuООН в 1993/1994.
Такую нормализацию значений проводили ежедневно на каждой партии образцов. В каждом опыте проводили построение кривой дозозависимого ответа по четырем точкам, которые соответствовали четырем различным концентрациям СuООН, которые можно было выбирать из значений, ежедневно устанавливаемых для каждой партии и соответствующих первоначально рекомендованному диапазону, а также использовать новые значения для получения достоверных результатов. Нормализацию завершали путем нахождения среднего значения, медианы, диапазона и расхождения каждой дозы СuООН для каждого дня. Значение (значения), наиболее близкое к первоначально рекомендованному диапазону (которое дает 50% контроля роста), статистически сравнивали с помощью т-теста. Дозировка СuООН, наиболее близко соответствующая первоначально рекомендованному диапазону, была затем использована для вычисления результата теста. Также могут быть использованы промежуточные дозировки СuООН (такие как 200+300/2). Нормализация завершалась использованием расширенной программы Microsoft Exel.
ПРИМЕР 9
Обзор
Нормализацию проводили ежедневно для каждой партии из числа образцов, полученных от пациентов. Статистический анализ проводили для определения среднего значения, медианы, разброса и расхождения каждой СuООН дозировки с помощью описательно-статистической программы в Exel. Были выбраны значения дозировок, наиболее близкие к первоначально рекомендованному диапазону, и проведен т-тест с помощью Exel для того, чтобы определить отличалась или нет дозировка СuООН от первоначально рекомендованного диапазона. Дозировка, дающая дважды последовательно повторенные значения, наиболее близкая к 1,0 (и выше 0,5), была использована для подсчета конечных результатов. Результаты распечатывали и хранили в папке данных для данной партии.
ПРИМЕР 10
Оборудование, реактивы и растворы
Для проведения исследования настоящего изобретения было использовано следующее оборудование: вытяжной шкаф с ламинарной циркуляцией, центрифуга Beckman GS-6, счетчик клеток (Coulter, Модель Т540), 12-канальная автоматическая пипетка (5-500 мкл), электрический пипеточный дозатор (Drummond), стерильные пластиковые конические пробирки с крышками на 50 мл, полипропиленовые пробирки 12×75 мм, стерильные конические пластиковые центрифужные пробирки с крышками на 15 мл, автоматические пипетки (в диапазоне 0-20, 0-200, 0-100 мкл), стерильные стеклянные одноразовые пипетки на 5,0 мл, 10 мл, штативы для пробирок и антиаэрозольные наконечники для пипеток (0-50 мкл). В таблице 2 приведены различные соединения, используемые в способе настоящего изобретения, и их фирмы-поставщики.
ПРИМЕР 11
Растворы
Все растворы приготовлены с использованием деионизированной воды, которую обычно используют для тканевой культуры (ткд Н2O).
Для приготовления раствора фосфатного буфера солевого (ФБС), содержащего 0,72% глюкозы (ФБС-Г), ФБС готовили в соответствии с инструкциями, приложенными к упаковке, используя тдк Н2O. Добавляли необходимое количество 10% раствора глюкозы для получения конечной концентрации 0,72%. Раствор стерилизовали фильтрацией и хранили в холодильнике (при 2-8°С).
Приготовление концентрированной (2-кратной) основной среды: один (1) литр (2-кратной) основной среды содержит: (1) 23,80 г ГЭПЭС; (2) 14,02 г хлорида натрия; (3) 1,05 г фосфата калия двухосновного; (4) 0,241 г сульфата магния; (5) 1,0 мл (10 мкМ) аденина гидрохлорида; (6) 30,0 мл (100 мМ) пирувата натрия; (7) 0,5 мл 0,5% фенолового красного; (8) 5,0 мл смеси антибиотиков; (9) 8,0 мл 5N гидроксида натрия; (10) 20,0 мл Fe/ЭДТА (1,0 мМ FeSO4/0,4 мМ Na2ЭДTA). После того, как все ингредиенты были тщательно перемешаны, доводили рН до 7,6, используя 5N гидроксид натрия. Добавляли тдк H2O до конечного объема 1 литр. Раствор стерилизовали фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,2 мкМ и хранили в холодильнике при 4°С. При соблюдении этих условий стабильность сохранялась в течение 4 недель.
Основную среду, которую использовали для планшетного контроля, принятого за 100%, и нового способа настоящего изобретения готовили следующим образом.
Следует использовать стерильные приемы работы после фильтрации. Основную среду готовили в вытяжном шкафу с ламинарной циркуляцией. Все ингредиенты смешивали и доводили до конечного требуемого объема тдк Н2О. Раствор стерилизовали путем вакуумной фильтрации в стерильные бутылки. Добавляли требуемый объем основного раствора ФГА.
ПРИМЕР 12
Основной раствор гидропероксида кумола (СuООН)
Гидропероксид кумола (Sigma С 0524) имеет ограниченный срок хранения. Срок годности этого соединения равен трем месяцам от даты получения от фирмы Sigma. При отборе СuООН пипеткой из флакона необходимо учитывать повышенную вязкость СuООН. Надо быть уверенным в том, что забор жидкости в наконечник пипетки является полным. Это требует большего времени и внимания, чтобы быть уверенным в правильном наполнении наконечника пипетки. Также необходимо вытирать наконечник для удаления избытка СuООН с наружной стороны наконечника пипетки. Также необходимо равномерно размешать СuООН до полного растворения. После чего можно хранить раствор с требуемой стабильностью в холодильнике (при 2-8°С) в течение 3 месяцев.
Для приготовления первого основного раствора СuООН (1,0 М СuООН в ФБС-Г) 9,5 мкл гипероксида кумола (СuООН) смешивали с 990,5 мкл ФБС-Г.
Первый основной раствор СuООН можно хранить в холодильнике (при 2-8°С) с сохранением требуемой стабильности в течение 3 месяцев.
Второй основной раствор СuООН (100 мМ в ФБС-Г) необходимо готовить ежедневно перед началом выделения клеток. Он не может быть использован на следующий день. Для приготовления второго основного раствора СuООН, 200 мкл первого основного раствора СuООН смешивали с 1800 мкл ФБС-Г.
Четыре рабочих раствора гидропероксида кумола готовили ежедневно перед началом выделения клеток. Этот раствор добавляли в планшет для переноса (отдельный планшет) для отбора из него и добавления в опытные индивидуальные планшеты. Эти растворы нельзя использовать на следующий день. 4 рабочих раствора готовили следующим образом:
(1) 100 мкМ CuOOH: 110 мкл второго основного раствора СuООН смешивали с 4890 мкл ФБС-Г;
(2) 200 мкМ CuOOH: 220 мкл второго основного раствора CuOOH смешивали с 4780 мкл ФБС-Г;
(3) 300 мкМ CuOOH: 330 мкл второго основного раствора CuOOH смешивали с 4670 мкл ФБС-Г;
(4) 400 мкМ CuOOH: 440 мкл второго основного раствора CuOOH смешивали с 4560 мкл ФБС-Г.
ПРИМЕР 13
Основной раствор тимидина (ThY)
Основной раствор тимидина (ThY) (холодный): (1,33 мМ ThY, 0,322 г/л) готовили следующим образом: 0,161 г ThY (Sigma T9250) взвешивали и растворяли в ткд Н2О до конечного объема 500 мл. Этот раствор стерилизовали путем вакуумной фильтрации в стерильную бутылку с использованием асептических приемов работы. Этот раствор разливали на аликвоты в 50 мл центрифужные пробирки. В течение короткого времени раствор можно хранить в холодильнике (4°С) с сохранением стабильности в течение одного месяца. Для длительного хранения раствор можно замораживать (-70°), с сохранением стабильности в течение 6 месяцев. Рабочий раствор тимидина использовали для разведения радиоактивного тимидина (H3TdR), используемого для мечения клеток.
Для приготовления рабочего раствора тимидина (ThY+Н3-TdR) к 300 мл стерильной дегазированной тдк Н2O добавляли следующее: 1,15 мл 1,33 мМ раствора ThY (холодного), 1,7 мл H3-TdR (ICN Part №24066), со специфической активностью 300 мкКю/ммоль. Приготовленный раствор можно хранить в холодильнике (4°С) с сохранением требуемой стабильности в течение 1 недели.
Любые патенты или публикации, упомянутые в этом описании, свидетельствуют об уровне осведомленности тех специалистов в данной области, кому принадлежит это изобретение. Эти патенты и публикации упоминаются здесь в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, индивидуально указанная, была бы включена в виде ссылки.
Любой специалист в данной области легко оценит, что настоящее изобретение хорошо приспособлено для выполнения поставленных задач и получения результатов и упомянутых преимуществ, что также неотъемлемо. Имеющиеся примеры вместе со способами, методиками, обработками, молекулами и специфическими соединениями, описанными здесь, представляют собой предпочтительные варианты воплощения настоящего изобретения и являются иллюстрацией и не предназначены для ограничения объема притязаний изобретения. Изменения условий способа данного изобретения и другие применения, как это случается у специалиста, охватываются данным изобретением в объеме, определенном формулой изобретения.
Claims (12)
1. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов, пригодная для биохимического определения общей антиоксидантной функции лимфоцитов человека и для определения недостаточности, несоответствия и несбалансированности питания, содержащая глюкозу, присутствующую в концентрации, по меньшей мере, 0,72 г/л, пантотеновую кислоту, присутствующую в концентрациях в диапазоне 0,010-0,25 мг/л, холин, присутствующий в концентрациях в диапазоне 0,14-56 мг/л, неорганические ионы, включающие физиологические концентрации хлорида, фосфата, кальция, магния, калия, натрия и железа, гидропероксид кумола в концентрации в диапазоне 50-500 мкМ, митоген в количестве, эффективном для стимуляции клеточного роста лимфоцитов, выбранный из группы, состоящей из пирувата, аденина, инозита и их метаболических предшественников, буфер, имеющий рН около 6,8-7,6, содержащий солевой раствор с фосфатным буфером или HEPES буфер или их комбинацию, и деионизированную воду до 1 л.
2. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.1, дополнительно содержащая витамины, выбранные из группы, состоящей из фолиновой кислоты, фолиевой кислоты, никотинамида, никотиновой кислоты, рибофлавина, тиамина, витамина В6, витамина B12 и метаболических предшественников указанных витаминов.
3. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.1, при необходимости дополнительно содержащая аминокислоты, выбранные из группы, состоящей из L-аргинина, L-цистеина, L-глутамина, глицина, L-гистидина, L-изолейцина, L-лейцина, L-лизина, L-метионина, L-фенилаланина, L-серина, L-треонина, L-триптофана, L-тирозина, L-валина и метаболических предшественников указанных аминокислот, в которой аминокислоты содержатся группой.
4. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.3, в которой аминокислота либо отсутствует в указанной группе, либо присутствует в ней в концентрации меньшей, чем минимальная концентрация, эффективная для максимальной стимуляции роста клеток, а все другие аминокислоты из указанной группы присутствуют в минимальных концентрациях, эффективных для максимальной стимуляции роста клеток.
5. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.3, в которой серин или глицин либо отсутствуют в указанной группе, либо присутствуют в ней в концентрации меньшей, чем минимальная концентрация, эффективная для максимальной стимуляции роста клеток, и которая дополнительно содержит витамин В6, фолиевую кислоту или их комбинацию в концентрации, эффективной для максимальной стимуляции роста клеток.
6. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов, пригодная для биохимического определения общей антиоксидантной функции лимфоцитов человека и для определения недостаточности, несоответствия и несбалансированности питания, содержащая глюкозу, присутствующую в концентрации, по меньшей мере, 0,72 г/л, неорганические ионы, включающие физиологические концентрации хлорида, фосфата, кальция, магния, калия, натрия и железа, гидропероксид кумола в концентрациях в диапазоне 50-500 мкМ, митоген в количестве, эффективном для стимуляции клеточного роста лимфоцитов, выбранный из группы, состоящей из пирувата, аденина, инозита и их метаболических предшественников, буфер, имеющий рН около 6,8-7,6, содержащий солевой раствор с фосфатным буфером или HEPES буфер или их комбинацию, и деионизированную воду до 1 л.
7. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.6, дополнительно содержащая витамины, выбранные из группы, состоящей из фолиновой кислоты, фолиевой кислоты, никотинамида, никотиновой кислоты, рибофлавина, тиамина, витамина B6, витамина B12 и метаболических предшественников указанных витаминов.
8. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.6, дополнительно содержащая аминокислоты, выбранные из группы, состоящей из L-аргинина, L-цистеина, L-глутамина, глицина, L-гистидина, L-изолейцина, L-лейцина, L-лизина, L-метионина, L-фенилаланина, L-серина, L-треонина, L-триптофана, L-тирозина, L-валина и метаболических предшественников указанных аминокислот, и в которой аминокислоты содержатся группой.
9. Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов по п.6, дополнительно содержащая необходимое количество пантотеновой кислоты или холина.
10. Способ определения аномальных количественных потребностей индивидуума в специфически требующихся питательных веществах, отличающийся тем, что включает следующие стадии: посев лимфоцитов названного индивидуума на бессывороточную среду для культивирования лимфоцитов по любому из п.1 или 6, причем названная бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов среда содержит ограничивающие рост концентрации определяемого питательного вещества, инкубацию лимфоцитов в бессывороточной среде для культивирования лимфоцитов, сравнение ответа роста лимфоцитов со средним ответом роста лимфоцитов контрольной группы индивидуумов.
11. Способ идентификации питательных факторов или биохимических посредников, которые нейтрализуют вредное действие питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, и других компонентов крови, включая лекарства, у индивидуума, чувствительного к такому вредному воздействию, отличающийся тем, что включает следующие стадии: посев лимфоцитов названного индивидуума на бессывороточную среду для культивирования лимфоцитов по любому из п.1 или 6, содержащую, по меньшей мере, одно из питательных веществ, биохимических посредников или их продуктов, или других компонентов крови, включая лекарства, в концентрации, оказывающей отрицательное действие на клеточный ответ роста лимфоцитов, инкубацию лимфоцитов в бессывороточной среде для культивирования лимфоцитов по пункту клеточной среде, сравнение этого ответа роста лимфоцитов с ответом роста лимфоцитов в той же среде, к которой добавлен источник тестируемого вещества, которое, как предполагают, нейтрализует отрицательное действие питательного вещества, биохимического посредника или его продукта, или других компонентов крови, включая лекарства.
12. Способ биохимического определения антиоксидантной функции клеток человека, отличающийся тем, что содержит следующие стадии: посев лимфоцитов индивидуума на бессывороточную среду для культивирования лимфоцитов по любому из п.1 или 6, инкубацию лимфоцитов в бессывороточной среде для культивирования лимфоцитов, сравнение ответа роста лимфоцитов со средним ответом роста лимфоцитов контрольной группы индивидуумов.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/665,941 US5985665A (en) | 1996-06-19 | 1996-06-19 | Biochemical analysis of antioxidant function of lymphocytes in culture |
US08/665,941 | 1996-06-19 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU99100621A RU99100621A (ru) | 2000-11-20 |
RU2233323C2 true RU2233323C2 (ru) | 2004-07-27 |
Family
ID=24672179
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU99100621/13A RU2233323C2 (ru) | 1996-06-19 | 1997-06-18 | Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов (варианты), способ определения аномальных количественных потребностей в питательных веществах, способ идентификации питательных факторов и способ биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5985665A (ru) |
EP (1) | EP0925370B1 (ru) |
JP (1) | JP3679133B2 (ru) |
KR (1) | KR100461205B1 (ru) |
CN (1) | CN1109759C (ru) |
AT (1) | ATE230030T1 (ru) |
AU (1) | AU720703B2 (ru) |
CA (1) | CA2258803C (ru) |
DE (1) | DE69718017T2 (ru) |
IL (1) | IL127576A (ru) |
NZ (1) | NZ333231A (ru) |
RU (1) | RU2233323C2 (ru) |
WO (1) | WO1997048821A1 (ru) |
ZA (1) | ZA975359B (ru) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW517089B (en) * | 1996-09-03 | 2003-01-11 | Res Dev Foundation | Assessment of intracellular cysteine and glutathione concentrations |
US6165797A (en) * | 1999-02-19 | 2000-12-26 | Bio-Defense Nutritionals, Inc. | Methods for testing oxidative stress |
EP1235849A2 (en) * | 1999-12-09 | 2002-09-04 | Genaera Corporation | Asthma associated factors as targets for treating atopic allergies including asthma and related disorders |
US20050272085A1 (en) * | 2000-09-06 | 2005-12-08 | Hodge Timothy A | Methods for forensic and congenic screening |
US20030012701A1 (en) * | 2001-07-13 | 2003-01-16 | Sangha Jangbir S. | Insulated specimen sampling and shipping kit |
US20030154107A1 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-14 | Mark Medvedeff | Preventcare |
US6689617B1 (en) | 2002-07-30 | 2004-02-10 | Medi-Tech Holdings, Inc. | Agent for detecting malondialdehyde, method of making the same, and test kit for use thereof |
MX2007014624A (es) * | 2005-05-26 | 2008-03-24 | Pediatrix Medical Group Inc | Formulaciones nutriconales y metodos para proporcionar formulaciones nutricionales. |
CN110669730B (zh) * | 2019-10-23 | 2022-03-29 | 杭州杰毅麦特医疗器械有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞培养基 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4499064A (en) * | 1982-06-03 | 1985-02-12 | Clayton Foundation For Research | Assessment of nutritional status of individuals |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4927762A (en) * | 1986-04-01 | 1990-05-22 | Cell Enterprises, Inc. | Cell culture medium with antioxidant |
-
1996
- 1996-06-19 US US08/665,941 patent/US5985665A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-01-01 ZA ZA975359A patent/ZA975359B/xx unknown
- 1997-06-18 EP EP97930001A patent/EP0925370B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-18 AU AU33934/97A patent/AU720703B2/en not_active Ceased
- 1997-06-18 AT AT97930001T patent/ATE230030T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-06-18 DE DE69718017T patent/DE69718017T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-18 WO PCT/US1997/010328 patent/WO1997048821A1/en active IP Right Grant
- 1997-06-18 IL IL12757697A patent/IL127576A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-06-18 NZ NZ333231A patent/NZ333231A/xx unknown
- 1997-06-18 CA CA002258803A patent/CA2258803C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-18 KR KR10-1998-0710382A patent/KR100461205B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-06-18 CN CN97195713A patent/CN1109759C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-18 JP JP50316798A patent/JP3679133B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-18 RU RU99100621/13A patent/RU2233323C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4499064A (en) * | 1982-06-03 | 1985-02-12 | Clayton Foundation For Research | Assessment of nutritional status of individuals |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
NORDBLOM et al. Studies on Hydroperoxide-Dependent substrate hydroxylation by purified liver Microsomal Cytochrome Р-450. Arch. Biochem. Biophys. 1976, vol.175, р.524-533. JIANG et al. Ferrous ion Oxidation in the Presence of Xylenol Orange for Defection of Lipid Hydroperoxide in Low Density Lipoprotein. Analytical Biochemistry. 1992, vol.202, р.384-389. * |
новые методы культуры животных тканей. М.: изд.МИГ, 1976, 255. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP3679133B2 (ja) | 2005-08-03 |
AU3393497A (en) | 1998-01-07 |
ATE230030T1 (de) | 2003-01-15 |
WO1997048821A1 (en) | 1997-12-24 |
AU720703B2 (en) | 2000-06-08 |
ZA975359B (en) | 1998-12-18 |
CN1222940A (zh) | 1999-07-14 |
KR20000016773A (ko) | 2000-03-25 |
EP0925370A4 (en) | 2001-08-01 |
CN1109759C (zh) | 2003-05-28 |
CA2258803C (en) | 2009-01-13 |
US5985665A (en) | 1999-11-16 |
EP0925370A1 (en) | 1999-06-30 |
DE69718017T2 (de) | 2003-04-30 |
NZ333231A (en) | 2000-01-28 |
IL127576A (en) | 2000-12-06 |
JP2000514287A (ja) | 2000-10-31 |
CA2258803A1 (en) | 1997-12-24 |
EP0925370B1 (en) | 2002-12-18 |
IL127576A0 (en) | 1999-10-28 |
KR100461205B1 (ko) | 2005-06-13 |
DE69718017D1 (de) | 2003-01-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7279301B2 (en) | Methods of determining deficiencies in intracellular levels on cysteine and glutathione | |
EP0096560B1 (en) | Assessment of nutritional status of individuals | |
Krueger et al. | Inflammatory and immune cell function in psoriasis: II. Monocyte function, lymphokine production | |
RU2233323C2 (ru) | Бессывороточная среда для культивирования лимфоцитов (варианты), способ определения аномальных количественных потребностей в питательных веществах, способ идентификации питательных факторов и способ биохимического определения антиоксидантной функции лимфоцитов | |
Alexiewicz et al. | Elevated cytosolic calcium and impaired proliferation of B lymphocytes in type II diabetes mellitus | |
RU2495423C1 (ru) | Способ определения функциональной активности лимфоцитов при хроническом аденоидите у детей | |
Rennert et al. | The detection of the heterozygote and homozygote in cystic fibrosis by short term lymphocyte culture studies: A defect in RNA methylation | |
Reiken et al. | The use of an enzyme single fiber reactor in the study of leukemic cell proliferation: In vitro experiments and computer simulation | |
Tu | A simple and effective model to study insulin resistance in obesity and diabetes and the processes and mechanisms of in vitro aging using lymphocyte culture | |
Monaghan | Colony formation by human bone marrow cells in infectious mononucleosis and lymphoblastic leukemia | |
JPH06209789A (ja) | 刺激リンパ球形質転換試験の実施方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090619 |