RU2231793C1

RU2231793C1 - Method for evaluating anti-whooping vaccine immunogenicity

Info

Publication number: RU2231793C1
Application number: RU2003106582/14A
Authority: RU
Inventors: Е.П. Москаленко (RU); Е.П. Москаленко; О.А. Волошина (RU); О.А. Волошина; С.И. Ильина (RU); С.И. Ильина; С.Ф. Уразовский (RU); С.Ф. Уразовский
Original assignee: Москаленко Екатерина Петровна; Волошина Ольга Александровна; Ильина Светлана Ивановна; Уразовский Сергей Федорович
Priority date: 2003-03-11
Filing date: 2003-03-11
Publication date: 2004-06-27

Abstract

FIELD: public health, microbiology, vaccine prophylaxis.

SUBSTANCE: invention can be used for evaluation of immunogenic properties of anti-whooping vaccines making for series producing. Method provides reducing time for analysis, consumption of testing vaccines and elimination of laboratory animals. Testing anti-whooping vaccine is treated with low-frequency ultrasonic oscillation 42-50 kHz for 5 min and the neutralization reaction of antigen with erythrocytes sensitized with whooping toxin and hyperimmune serum against whooping toxin is carried out followed by determination of amount whooping toxin. Testing vaccine is defined as highly immune in the value of whooping toxin from 18 ± 1.45 mcg/ml and above.

EFFECT: improved evaluating method.

3 tbl

Description

Изобретение относится к области здравоохранения, а точнее к микробиологии и вакцинопрофилактике, и может быть использовано для оценки иммуногенных свойств коклюшных вакцин на стадии их производства для исключения возможности использования в практике вакцинопрофилактики коклюшных вакцин со слабой иммуногенной активностью, не способных сформировать полноценную защиту против коклюша в детском организме.The invention relates to the field of healthcare, and more specifically to microbiology and vaccination, and can be used to evaluate the immunogenic properties of pertussis vaccines at the stage of their production to exclude the possibility of using pertussis vaccines with weak immunogenic activity in practice, which are not able to form a complete protection against pertussis in children the body.

Коклюш является тяжелым острым респираторным заболеванием, поражающим ежегодно во всем мире более 60 млн. человек, из которых около 0,6 млн. погибают от этой инфекции. Внедрение широкомасштабной вакцинации против коклюша значительно уменьшило заболеваемость этой инфекцией. Однако в последние годы наблюдается существенный рост заболеваемости коклюшем как в нашей стране (Сигаева Л.А. с соавт. “Причины роста заболеваемости коклюшем и программа на ближайшие годы”, ж-л. “Здравоохранение РФ” 1993, №1, с.19-21; Селезнева Т.С. с соавт. “Клинико-эпидемиологические аспекты коклюшной инфекции в современных условиях”, ж.-л. “Эпидемиология инфекционных болезней”, 1999, №2, с.63-64), так и за рубежом (“Коклюш” ААР 2000, Red Book; Report the Committee on Infetions Diseases, 25 th, Copyrigth; 2000 American Academy Pediatrics, p.436) причем формирование заболеваний коклюшем отмечается не только у непривитых, но и у полноценно привитых детей (Williams Y.V. “Смертельные случаи коклюша у привитых детей в Южном Уэльсе в 1996-1997 гг.” Med.Y. Apr. 22:139, Apr 16). Этот факт может быть обусловлен как уменьшением иммунной прослойки населения за счет противопоказаний к вакцинации против коклюша, так и применением коклюшных вакцин со слабыми защитными свойствами. Использование таких вакцин в практике вакцинопрофилактики обусловлено несовершенством методов контроля их иммуногенной активности.Whooping cough is a serious acute respiratory disease, affecting more than 60 million people worldwide every year, of which about 0.6 million die from this infection. The introduction of large-scale vaccination against pertussis significantly reduced the incidence of this infection. However, in recent years there has been a significant increase in the incidence of whooping cough as in our country (L. Sigaeva et al. “Reasons for an increase in the incidence of whooping cough and the program for the coming years,” J. Health of the Russian Federation 1993, No. 1, p. 19 -21; TS Selezneva et al. “Clinical and epidemiological aspects of pertussis infection in modern conditions”, J.-L. “Epidemiology of Infectious Diseases”, 1999, No. 2, pp. 63-64), and abroad (“Pertussis” AAP 2000, Red Book; Report the Committee on Infetions Diseases, 25 th, Copyrigth; 2000 American Academy Pediatrics, p.436) and the formation of whooping cough diseases is noted not only in unvaccinated, but also in fully vaccinated children (Williams Y.V. “Fatal cases of pertussis in vaccinated children in South Wales in 1996-1997” Med.Y. Apr. 22: 139, Apr 16). This fact may be due to both a decrease in the immune layer of the population due to contraindications for pertussis vaccination, and the use of pertussis vaccines with weak protective properties. The use of such vaccines in the practice of vaccination is due to the imperfection of methods for monitoring their immunogenic activity.

В научной и патентной литературе известны способы оценки токсичности коклюшных вакцин, описанные в патентах Е.П.Москаленко с соавт. “Способ оценки токсичности коклюшных вакцин” №1459001 от 30.12.92 г.; №1321227 от 30.12.92; №2174229 от 27.09.01 г. и статьях - А.Р.Нуридинова с соавт. “К формированию системы тестов оценки безопасности коклюшных препаратов различного типа: цитотоксическое действие на тимоциты мышей in vitro” ЖМЭИ, 1990. - С.50-54 и др. Тогда как простые и надежные способы оценки иммуногенных свойств, адекватно отражающие защитную активность коклюшных вакцин, выпускаемых в массовую вакцинопрофилактику, не выявлено.Methods for assessing the toxicity of pertussis vaccines described in the patents of E.P. Moskalenko et al. Are known in the scientific and patent literature. “A method for assessing the toxicity of pertussis vaccines” No. 1459001 from 12.30.92; No. 1321227 dated 12/30/92; No. 2174229 dated 09/27/01 and in articles by A.R. Nuridinov et al. “On the formation of a test system for assessing the safety of pertussis preparations of various types: the cytotoxic effect on thymocytes of mice in vitro” ZhMEI, 1990. - P.50-54 and others. While simple and reliable methods for assessing immunogenic properties adequately reflecting the protective activity of pertussis vaccines, released into mass vaccine prophylaxis, not detected.

Поэтому разработка новых методов контроля и оценки защитных свойств коммерческих коклюшных вакцин, выпускаемых в серийное производство, является актуальной задачей современной вакцинопрофилактики.Therefore, the development of new methods for monitoring and evaluating the protective properties of commercial pertussis vaccines produced in mass production is an urgent task of modern vaccine prevention.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе выявлены различные способы оценки эффективности коклюшных вакцин. Так, van der Ark A. et al. ("Коклюшный серологический тест, как альтернатива внутримозговому тесту для оценки иммуногенной активности коклюшных вакцин". Develop. in Biol. Stand. - 1996. -Vol.86. - P.271-281) предлагают оценивать защитную активность коклюшных вакцин по уровню антител к основным протективным антигенам (КТ и ФГА) В. Pertussis на 4-5 неделе после введения их экспериментальным животным. В журнале Inf. and Immun. - 1998. - Vol. 66, №2. - Р.594-602 (Mills КН., et al. "Мышиная модель, в которой иммуногенные свойства коклюшных вакцин, коррелирует с их эффективностью у детей") изложен способ оценки иммуногенности коклюшных вакцин на респираторной мышиной модели по степени очищения верхних дыхательных путей от вирулентных коклюшных бактерий на 7-10 день после заражения. Авторами Syukuda Y. et al. ("Тест аэрозольного инфицирования для оценки иммуногенности коклюшных вакцин". Tokai J. Ехр. Clin. Med. - 1988. - Vol.l3, Suppl. 2. - P.71-72) предложен способ оценки защитных свойств коклюшных вакцин по проценту выживаемости мышей, иммунизированных коклюшными вакцинами и, аэрозольно зараженных вирулентным штаммом В.pertussis.Conducted research on the medical-scientific and patent literature revealed various methods for assessing the effectiveness of pertussis vaccines. So, van der Ark A. et al. ("Pertussis serological test as an alternative to the intracerebral test for assessing the immunogenic activity of pertussis vaccines." Develop. In Biol. Stand. - 1996. -Vol.86. - P.271-281) propose to evaluate the protective activity of pertussis vaccines by the level of antibodies to the main protective antigens (CT and PHA) of B. Pertussis at 4-5 weeks after administration to experimental animals. In the magazine Inf. and Immun. - 1998. - Vol. 66, No. 2. - P.594-602 (Mills KN., Et al. "A mouse model in which the immunogenic properties of pertussis vaccines correlate with their efficacy in children") describes a method for evaluating the immunogenicity of pertussis vaccines in a respiratory mouse model by the degree of purification of the upper respiratory tract from virulent pertussis bacteria at 7-10 days after infection. The authors of Syukuda Y. et al. ("Aerosol infection test for assessing the immunogenicity of pertussis vaccines." Tokai J. Exp. Clin. Med. - 1988. - Vol.l3, Suppl. 2. - P.71-72) a method for evaluating the protective properties of pertussis vaccines according to the percentage of survival mice immunized with pertussis vaccines and aerosol infected with a virulent strain of B.pertussis.

Однако описанные способы оценки иммуногенности коклюшных вакцин сложны, требуют использования большого количества лабораторных животных, расхода коклюшных вакцин, длительных сроков исследования, а также отличаются высокой вариабельностью.However, the described methods for assessing the immunogenicity of pertussis vaccines are complex, require the use of a large number of laboratory animals, the consumption of pertussis vaccines, long periods of research, and also are highly variable.

Прототипом данного изобретения является метод оценки защитных свойств коклюшных вакцин, полученных из производственных штаммов коклюшных бактерий, описанный в “Инструкции по отбору, проверке и хранению производственных штаммов коклюшных бактерий”, М., 1987, с.18-28. Способ заключается в следующем: белых беспородных мышей массой 10-12 г (20 шт.) внутрибрюшинно иммунизируют испытуемой коклюшной вакциной в дозе, составляющей прививочную дозу для человека (10 млрд.м.т.). Через 2 нед. проводят внутримозговое заражение экспериментальных животных нейротропным штаммом бактерий 18323, в 100% случаях вызывающей гибель интактных животных. Доза вирулентного штамма должна составлять не менее 100 ЛД₅₀ (летальная доза, при которой погибают 50% животных, взятых в опыт). Для вычисления ЛД₅₀ параллельно с основным опытом заражают 40 интактных мышей используемой вирулентной культурой четырьмя дозами с пятикратным шагом. После заражения наблюдение за экспериментальными животными проводят в течение 14-17 суток, ежедневно учитывая гибель и паралич мышей. По окончании опыта высчитывают процент выживших животных. Эффективными считаются вакцины, защищающие не менее 70% животных, взятых в опыт. Этому способу свойственны следующие недостатки: длительность срока исследования, значительное количество экспериментальных животных, большой расход испытуемых коклюшных вакцин, а также низкая точность и воспроизводимость, вызванные вариабельностью индивидуальных показателей у беспородных белых мышей.The prototype of this invention is a method for assessing the protective properties of pertussis vaccines obtained from production strains of pertussis bacteria, described in the “Instructions for the selection, verification and storage of production strains of pertussis bacteria”, M., 1987, p. 18-28. The method consists in the following: white outbred mice weighing 10-12 g (20 pcs.) Are immunized intraperitoneally with the test pertussis vaccine at a dose of a vaccination dose for humans (10 billion m.t.). In 2 weeks they carry out intracerebral infection of experimental animals with a neurotropic strain of bacteria 18323, which in 100% cases causes the death of intact animals. The dose of the virulent strain should be at least 100 LD ₅₀ (lethal dose at which 50% of the animals taken in the experiment die). To calculate LD _50, in parallel with the main experiment, 40 intact mice are infected with the used virulent culture in four doses with a five-fold step. After infection, the observation of experimental animals is carried out for 14-17 days, daily considering the death and paralysis of mice. At the end of the experiment, the percentage of surviving animals is calculated. Effective vaccines are considered that protect at least 70% of the animals taken in the experiment. This method has the following disadvantages: the length of the study period, a significant number of experimental animals, the high consumption of tested pertussis vaccines, as well as low accuracy and reproducibility caused by the variability of individual indicators in outbred white mice.

Целью настоящего изобретения является упрощение способа, сокращение сроков исследования, расхода испытуемых вакцин и использования лабораторных животных.The aim of the present invention is to simplify the method, reducing the duration of the study, the consumption of test vaccines and the use of laboratory animals.

Эта цель достигается путем постановки реакции нейтрализации антигена с испытуемыми коклюшными вакцинами, обработанными низкочастотным ультразвуком (42-50 кГц) в течение 5 минут, с эритроцитами, сенсибилизированными коклюшным токсином (КТ) и гипериммунной сывороткой против КТ для количественного определения КТ в испытуемых коклюшных вакцинах. По количеству содержания КТ в испытуемых коклюшных вакцинах оценивают их иммуногенную активность.This goal is achieved by setting the antigen neutralization reaction with test pertussis vaccines treated with low-frequency ultrasound (42-50 kHz) for 5 minutes, with red blood cells sensitized with pertussis toxin (CT) and hyperimmune anti-CT serum to quantify CT in test pertussis vaccines. By the amount of CT content in the tested pertussis vaccines, their immunogenic activity is evaluated.

Использование в качестве индикатора иммуногенных свойств коклюшных вакцин количество коклюшного токсина (КТ), содержащееся в них, обусловлено тем, что КТ является основной биологически активной субстанцией коклюшного микроба, обеспечивающей активную защиту организма против коклюшной инфекции (“Коклюш” ААР 2000, Red Book; Report the Committee on Infetions Diseases, 25 th, Copyrigth; 2000 American Academy Pediatrics, p.439; Wendy A. Keitell M.D. “Новые вакцины и новые вакцинные технологии” Infect. Dis. Clin of Noth America, V 13, №1, 1999, р.83-84).The use of the pertussis toxin (CT) contained in them as an indicator of the immunogenic properties of pertussis vaccines is due to the fact that CT is the main biologically active substance of the pertussis microbe, which provides active protection of the body against pertussis infection (“Pertussis” AAP 2000, Red Book; Report the Committee on Infetions Diseases, 25 th, Copyrigth; 2000 American Academy Pediatrics, p.439; Wendy A. Keitell MD “New Vaccines and New Vaccine Technologies” Infect. Dis. Clin of Noth America, V 13, No. 1, 1999, p. 83-84).

Предлагаемый способ оценки иммуногенности коклюшных вакцин осуществляется следующим образомThe proposed method for assessing the immunogenicity of pertussis vaccines is as follows

Испытуемую коклюшную вакцину, приготовленную по МРТУ 42-263-68 (Межреспубликанские технические условия, утвержденные Минздравом СССР, 1968), содержащую 500 млрд.м.т. в 1 мл обрабатывают низкочастотным ультразвуком (42-50 кГц) с амплитудой колебания волновода-дезинтегратора 10-30 мкм при экспозиции воздействия 5 минут и помещают в шуттель-аппарат на 1 час при комнатной температуре для равномерного перемешивания и более полного выхода биологически активных субстанций из коклюшного микроба. Обработанную таким образом вакцину разводят до концентрации 20 млрд.м.т. в 1 мл изотоническим раствором хлорида натрия (стандартное разведение коклюшных вакцин, применяемое в практике вакцинопрофилактики) и ставят реакцию нейтрализации антигена (РНАг) с эритроцитами, сенсибилизированными коклюшным токсином (КТ) и гипериммунной сывороткой против КТ. Обнаружение КТ в количестве от 15 мкг/мл по титру, выявляемому в РНАг, пересчитывают количество Кт в мкг на 1 мл испытуемой вакциныA test pertussis vaccine prepared according to MRTU 42-263-68 (Inter-republican technical specifications approved by the USSR Ministry of Health, 1968), containing 500 billion m.t. in 1 ml is treated with low-frequency ultrasound (42-50 kHz) with an amplitude of oscillation of the waveguide-disintegrator of 10-30 microns with exposure exposure of 5 minutes and placed in a shuttle apparatus for 1 hour at room temperature for uniform mixing and more complete exit of biologically active substances from pertussis microbe. The vaccine thus treated is diluted to a concentration of 20 billion m.t. in 1 ml of isotonic sodium chloride solution (standard dilution of pertussis vaccines used in the practice of vaccine prophylaxis) and the antigen neutralization reaction (RNA) with red blood cells sensitized with pertussis toxin (CT) and hyperimmune anti-CT serum is set. Detection of CT in an amount of 15 μg / ml according to the titer detected in RNAg, the number of CT in μg is recalculated per 1 ml of the tested vaccine

Обработку коклюшных вакцин низкочастотным ультразвуком применяют для обеспечения наиболее полного выхода КТ из бактериальной клетки, с целью полноценной оценки иммуногенных свойств испытуемых препаратов. Для этого используют низкочастотный ультразвук (42-50 кГц) с амплитудой колебания волновода-дезинтегратора 10-30 мкм, при экспозиции воздействия 5 минут. Выбор такого режима обусловлен тем, что низкочастотный ультразвук имеет значительные преимущества по сравнению с высокочастотным ультразвуком, так как позволяет уменьшить акустическую мощность воздействия, увеличивая экономичность воздействия. Кроме того, низкая трансформация энергии из акустической в тепловую позволяет предотвратить инактивацию коклюшного токсина, в состав которого входят белковые субстанции, в процессе ультразвукового воздействия (Ф.И.Брагинская “Количественные закономерности действия ультразвука на биомолекулы и клетки, и ультразвуковая спектроскопия биологических структур”. Автор. докт. диссерт. - М., 1981 г.).The treatment of pertussis vaccines with low-frequency ultrasound is used to ensure the most complete exit of CT from the bacterial cell, in order to fully assess the immunogenic properties of the tested drugs. To do this, use low-frequency ultrasound (42-50 kHz) with an amplitude of oscillation of the waveguide disintegrator 10-30 microns, with exposure for 5 minutes. The choice of this mode is due to the fact that low-frequency ultrasound has significant advantages compared with high-frequency ultrasound, as it allows to reduce the acoustic power of the impact, increasing the efficiency of the impact. In addition, the low transformation of energy from acoustic into thermal energy prevents the inactivation of pertussis toxin, which contains protein substances, during ultrasonic exposure (F.I. Braginskaya “Quantitative laws of the action of ultrasound on biomolecules and cells, and ultrasonic spectroscopy of biological structures”. Author.Doctoral dissertation. - M., 1981).

Особенности постановки реакции нейтрализации антигена для определения количества коклюшного токсина в коклюшных вакцинных препаратах.Features of the formulation of the antigen neutralization reaction to determine the amount of pertussis toxin in pertussis vaccine preparations.

Все серологические реакции ставят в микротитраторе “Такачи”, в объеме 0,025 мл.All serological reactions are placed in a microtiter “Takachi”, in a volume of 0.025 ml.

Перед постановкой РНАг ставят реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитами, сенсибилизированными КТ коклюшных микробов и гипериммунной сывороткой против КТ для определения двух гемагглютинирующих единиц гипериммунной сыворотки. Так, если титр гипериммунной сыворотки в РПГА составляет 1:640, то две гемагглютинирующие единицы (2 ГЕ) соответствуют ее разведению 1:320. Затем титруют исследуемую коклюшную вакцину и к ней в каждое разведение добавляют 2 ГЕ гипериммунной сыворотки, смесь выдерживают в термостате в течение 30 минут, после чего добавляют эритроциты, сенсибилизированные коклюшным токсином, по капле в каждую лунку. Учет реакции производят через 1,5-2 часа. Параллельно с этой реакцией титруют стандартный препарат коклюшного токсина (ОСО-42-28-186-90 - отраслевой стандартный образец коклюшного токсина, производства Уфимского НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова), содержащий 100 мкг КТ в 1 мл, и также к каждому его разведению добавляют 2 ГЕ гипериммунной сыворотки против КТ. После 30-минутного выдерживания в термостате в каждую лунку по капле вносят эритроциты, сенсибилизированные КТ. Пересчет обнаруженного КТ в коклюшной вакцине на микрограммы производят следующим образом: т.к. в 1 мл КТ-ОСО содержится 100 мкг препарата, то в 0,025 мл (объем реакции) содержится 2,5 мкг КТ - 1-я лунка, во 2-й - 1,25 мкг, в 3-й - 0,625, в 4-й - 0,31, в 5-й - 0,15, в 6-й - 0,07, в 7-й - 0,035, в 8-й - 0,017, в 9-й - 0,008, в 10-й - 0,004 мкг и т.д. Если конец реакции приходится на 9-ю лунку, то это означает, что 2 ГЕ гипериммунной сыворотки против КТ связывают 0,008 мкг коклюшного токсина. В исследуемой коклюшной вакцине конец реакции определяют в 7-й лунке - значит в этой лунке содержится 0,008 КТ, в 6-й - 0,016, в 5-й - 0,031, в 4-й - 0,062, в 3-й - 0,124, во 2-й - 0,25, в 1-й - 0,5 мкг КТ. Поскольку коклюшную вакцину титровали в объеме 0,025 мл, что в 40 раз меньше 1 мл, то выявленное количество КТ в РНАг умножают на 40 (0,5×40=20 мкг) и получают количество КТ, содержащееся в 1 мл испытуемой коклюшной вакцины.Before setting RNAg put a reaction of passive hemagglutination (RPHA) with red blood cells sensitized by CT of pertussis microbes and hyperimmune serum against CT to determine two hemagglutinating units of hyperimmune serum. So, if the titer of hyperimmune serum in RPGA is 1: 640, then two hemagglutinating units (2 CU) correspond to its dilution of 1: 320. Then the test pertussis vaccine is titrated and 2 GU of hyperimmune serum are added to it at each dilution, the mixture is kept in an incubator for 30 minutes, after which red blood cells sensitized by pertussis toxin are added dropwise to each well. Accounting for the reaction is carried out after 1.5-2 hours. In parallel with this reaction, a standard pertussis toxin preparation is titrated (OSO-42-28-186-90, an industry standard sample of pertussis toxin, manufactured by the Ufa Scientific Research Institute of Vaccines and Serums named after II Mechnikov), containing 100 μg CT in 1 ml, and also, to each dilution 2 GU of hyperimmune serum against CT are added. After 30 minutes in a thermostat, erythrocytes sensitized by CT are added dropwise to each well. The conversion of the detected CT in the pertussis vaccine to micrograms is performed as follows: 1 ml of CT-OCO contains 100 μg of the drug, then 0.025 ml (reaction volume) contains 2.5 μg of CT - the 1st well, in the 2nd - 1.25 μg, in the 3rd - 0.625, in 4 -th - 0.31, in the 5th - 0.15, in the 6th - 0.07, in the 7th - 0.035, in the 8th - 0.017, in the 9th - 0.008, in the 10th - 0.004 mcg, etc. If the end of the reaction falls on the 9th well, then this means that 2 TBU of hyperimmune serum against CT bind 0.008 μg of pertussis toxin. In the studied pertussis vaccine, the end of the reaction is determined in the 7th well - it means that in this well contains 0.008 CT, in the 6th - 0.016, in the 5th - 0.031, in the 4th - 0.062, in the 3rd - 0.124, in 2nd - 0.25, in the 1st - 0.5 μg CT. Since the pertussis vaccine was titrated in a volume of 0.025 ml, which is 40 times less than 1 ml, the detected amount of CT in RNAg is multiplied by 40 (0.5 × 40 = 20 μg) and the amount of CT contained in 1 ml of the tested pertussis vaccine is obtained.

С целью отработки параметров предлагаемого способа были проведены соответствующие исследования. В этих опытах использовали коклюшные вакцины, приготовленные в соответствии с МРТУ 42-263-68, из производственных штаммов коклюшных бактерий, полученных из коллекции Государственного института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича (г. Москва). Высокоиммуногенные коклюшные вакцины были приготовлены из штаммов 267 и 305, со средней защитной активностью - из шт. 475 и 703, и слабоиммуногенная - из шт. 298. Иммуногенные свойства коклюшных вакцин изучали методом, описанным в прототипе (Инструкция по отбору, проверке и хранению производственных штаммов коклюшных бактерий, М. 1987, с.18-28) и предлагаемым способом.In order to refine the parameters of the proposed method, relevant studies were conducted. In these experiments, pertussis vaccines were prepared in accordance with MRTU 42-263-68 from production strains of pertussis bacteria obtained from the collection of the State Institute of Standardization and Control of Medical and Biological Preparations named after L.A. Tarasevicha (Moscow). Highly immunogenic pertussis vaccines were prepared from strains 267 and 305, with an average protective activity - from pc. 475 and 703, and weakly immunogenic - from pcs. 298. The immunogenic properties of pertussis vaccines were studied by the method described in the prototype (Instructions for the selection, verification and storage of production strains of pertussis bacteria, M. 1987, p. 18-28) and the proposed method.

Результаты исследования представлены в таблице 1. Как видно из полученных данных, высокоиммуногенные вакцины, полученные из штаммов 267 и 305, защищали от 90% до 95% животных, взятых в опыт, и содержали от 18±1,45 до 22±1,13 мкг/мл коклюшного токсина. Коклюшные вакцины со средней защитной активностью защищали от 75% до 80% животных и содержали от 15±1,2 до 17±1,37 мкг/мл КТ. Низкоиммуногенная коклюшная вакцина из шт. 298 защищала лишь 65% экспериментальных мышей и содержала всего 4,5±0,98 мкг/мл коклюшного токсина.The results of the study are presented in table 1. As can be seen from the data obtained, highly immunogenic vaccines obtained from strains 267 and 305 protected from 90% to 95% of the animals taken in the experiment, and contained from 18 ± 1.45 to 22 ± 1.13 mcg / ml pertussis toxin. Pertussis vaccines with average protective activity protected from 75% to 80% of animals and contained from 15 ± 1.2 to 17 ± 1.37 μg / ml CT. Low immunogenic pertussis vaccine from pcs. 298 protected only 65% of the experimental mice and contained only 4.5 ± 0.98 μg / ml pertussis toxin.

С целью доказательства возможности использования способа по предложенному назначению были проведены соответствующие исследования.In order to prove the feasibility of using the method for the proposed purpose, relevant studies were conducted.

В опытах использовали 19 серий АКДС-вакцины (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина) производства Ташкентского НИИВ (№№ 63, 65, 68, 83, 89, 96, 98, 102) и одна серия АКДС-вакцины НИИВС им. И.Н.Мечникова АМН СССР (№563), которые применяются в практике вакцинопрофилактики. С вышеуказанными вакцинами поставили реакцию нейтрализации антигена с эритроцитарным диагностикумом, содержащим КТ, и гипериммунной сывороткой против КТ, и произвели подсчет количества КТ, содержащегося в них. Как видно из таблицы 2, производственные серии АКДС-вакцины содержали разное количество КТ, которое колебалось от 8,4±0,81 до 24±1,22. Затем у этих серий АКДС-вакцин проверили иммуногенные свойства по методу, описанному в Инструкции по отбору, проверке и хранению производственных штаммов коклюшных бактерий (М., 1987, с.18-28).In the experiments, we used 19 series of DTP vaccines (adsorbed pertussis-diphtheria-tetanus vaccine) produced by the Tashkent NIIV (No. 63, 65, 68, 83, 89, 96, 98, 102) and one series of DTP vaccine of the NIIVS named after I.N. Mechnikov Academy of Medical Sciences of the USSR (No. 563), which are used in the practice of vaccination. With the above vaccines, the antigen neutralization reaction was performed with an erythrocytic diagnosticum containing CT and hyperimmune serum against CT, and the amount of CT contained in them was counted. As can be seen from table 2, the production series of DTP vaccines contained a different amount of CT, which ranged from 8.4 ± 0.81 to 24 ± 1.22. Then, immunogenic properties of these series of DTP vaccines were tested according to the method described in the Instructions for the selection, verification and storage of production strains of pertussis bacteria (M., 1987, p. 18-28).

Результаты, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что коклюшные вакцины серий 63 и 67, содержащие низкое количество КТ (8,4±0,81 и 10,2±0,45 мкг/мл соответственно) защищали всего 20-40% животных, взятых в опыт, а коклюшные вакцины серий 83, 89, 102, 563, содержащие от 22±0,33 до 24±1,22, защищали от 90% до 95% экспериментальных животных.The results presented in table 2 indicate that pertussis vaccines of series 63 and 67 containing a low amount of CT (8.4 ± 0.81 and 10.2 ± 0.45 μg / ml, respectively) protected only 20-40% experimental animals, and pertussis vaccines of series 83, 89, 102, 563, containing from 22 ± 0.33 to 24 ± 1.22, protected from 90% to 95% of experimental animals.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно утверждать, что предлагаемый способ адекватно позволяет оценивать защитную активность коммерческих коклюшных вакцин по количественному содержанию в них коклюшного токсина.Thus, based on the studies, it can be argued that the proposed method adequately allows you to evaluate the protective activity of commercial pertussis vaccines by the quantitative content of pertussis toxin in them.

На основании полученных данных выявлен ряд отличительных признаков предлагаемого способа по сравнению с прототипом, которые представлены в таблице 3.Based on the data obtained, a number of distinctive features of the proposed method are revealed in comparison with the prototype, which are presented in table 3.

Таким образом, как видно из таблицы 3, предлагаемый способ по сравнению с прототипом обладает следующими преимуществами: на 27 суток сокращается срок исследования, в 1000 раз - стоимость эксперимента за счет исключения использования лабораторных животных, в 4000 - расход испытуемых коклюшных вакцин, а также существенно упрощается трудоемкость процесса.Thus, as can be seen from table 3, the proposed method in comparison with the prototype has the following advantages: the study time is reduced by 27 days, the experiment cost by 1000 times by eliminating the use of laboratory animals, by 4000 the consumption of pertussis vaccines tested, and also significantly the complexity of the process is simplified.

Claims

A method for assessing the immunogenicity of pertussis vaccines, characterized in that the test pertussis vaccine is treated with low-frequency ultrasound 42-50 kHz for 5 minutes, the antigen neutralization reaction is performed with red blood cells sensitized by pertussis toxin and hyperimmune serum against pertussis toxin and the amount of pertussis toxin is determined and the amount of pertussis toxin is determined from (18 ± 1.45) mcg / ml and higher, the test vaccine is evaluated as highly immunogenic.