RU2188036C1 - Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit - Google Patents
Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit Download PDFInfo
- Publication number
- RU2188036C1 RU2188036C1 RU2001100888A RU2001100888A RU2188036C1 RU 2188036 C1 RU2188036 C1 RU 2188036C1 RU 2001100888 A RU2001100888 A RU 2001100888A RU 2001100888 A RU2001100888 A RU 2001100888A RU 2188036 C1 RU2188036 C1 RU 2188036C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- diagnosticum
- antigenic
- red blood
- blood cells
- solution
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения эритроцитарных диагностикумов, и может быть использовано для определения титра специфических антител при остром и хроническом сапе при помощи реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). The invention relates to the field of medical and veterinary microbiology, in particular to methods for producing erythrocyte diagnosticums, and can be used to determine the titer of specific antibodies in acute and chronic glanders using the indirect hemagglutination reaction (RNGA).
Известны способы приготовления эритроцитарных диагностикумов, предназначенных для серологической диагностики многих инфекционных заболеваний (см. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. /Под ред. П.Н. Бургасова. - М., 1978). Known methods for the preparation of erythrocyte diagnostic kits intended for serological diagnosis of many infectious diseases (see. Manual for vaccine and serum case. / Under the editorship of PN Burgasov. - M., 1978).
Общим с заявляемым способом являются этапы получения формалинизированных эритроцитов, выделения специфического антигена, использования его для приготовления диагностикума (сенсибилизация эритроцитов), розлива диагностикума в стеклотару и укупорки ее. In common with the claimed method are the steps of obtaining formalized red blood cells, isolating a specific antigen, using it to prepare a diagnosticum (sensitization of red blood cells), filling the diagnosticum into glass containers and capping it.
Указанные диагностикумы не могут быть использованы для определения сапных антител, поскольку их готовят на основе антигенных комплексов, не являющихся специфическими для возбудителя сапа. По этой причине они не способны вступать в реакцию агглютинации со специфическими антителами, обрадующимися в организме больного при сапной инфекции либо у иммунизированных сапной вакциной. These diagnostics cannot be used to determine the sap antibodies, since they are prepared on the basis of antigenic complexes that are not specific for the glanders pathogen. For this reason, they are not able to enter into an agglutination reaction with specific antibodies that are produced in the patient’s body with a papillary infection or immunized with a papillary vaccine.
Известны способы приготовления сапного эритроцитарного антигенного диагностикума, основанные на применении маллеина или его алкогольного экстракта в качестве антигенного комплекса для сенсибилизации эритроцитов (см. Boyden S. V. Absorbtion by erythrocytes of antigens of Mallcomyces mallei and Malleomyces Pseudomallei // Proc. Soc. Exp. Biol. and Med. - 1950. - Vol.73, 2. - P. 289-291). Known methods for the preparation of sap erythrocyte antigenic diagnosticum based on the use of mallein or its alcoholic extract as an antigenic complex for sensitizing red blood cells (see Boyden SV Absorbtion by erythrocytes of antigens of Mallcomyces mallei and Malleomyces Pseudomallei // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1950. - Vol. 73, 2. - P. 289-291).
Рассматриваемые способы осуществляют по этапам, общим для способов приготовления эритроцитарных диагностикумов, рекомендованных для других возбудителей инфекционных заболеваний. Однако практического применения они не нашли, поскольку маллеин представляет собой продукт, содержащий не только специфические для сапа аллергены, но и не обладающие специфичностью продукты лизиса клеток, их метаболиты, а также компоненты питательной среды. The methods under consideration are carried out in stages common to the methods for preparing erythrocyte diagnosticums recommended for other infectious pathogens. However, they did not find practical application, since mallein is a product containing not only glanders specific allergens, but also cell lysis products not possessing specificity, their metabolites, as well as nutrient components.
Наиболее близким к заявляемому решению является способ получения эритроцитарного диагностикума, основанный на использовании для сенсибилизации эритроцитов "полного" сапного антигена (см. Гольберг А.М., Ширяев Д.Г. О возможности применения реакции пассивной гемагглютинации для диагностики сапа // Диагностика особо опасных инфекций - Ростов Н/Д. - 1968. - С.52-53). Closest to the claimed solution is a method of obtaining an erythrocyte diagnosticum, based on the use of или full ’sap antigen for sensitization of erythrocytes (see Golberg A.M., Shiryaev DG On the possibility of using a passive hemagglutination reaction to diagnose glanders // Diagnosis of especially dangerous infections - Rostov N / A. - 1968. - S.52-53).
Способ включает следующие этапы:
выращивание культуры сапных микробов;
выделение "полного" сапного антигена при помощи панкреатического переваривания микробной массы с последующим алкогольным осаждением и диализом;
сенсибилизация танизированных эритроцитов крови барана антигеном в дозе 50 мкг на 1 мл 2,5% взвеси эритроцитов при рН 1,2 и температуре +4oС, в течение 20 часов;
формалинизация готовых эритроцитов путем добавления 1% формалина.The method includes the following steps:
cultivation of culture of shoe microbes;
Isolation of the “complete” Sap antigen by pancreatic digestion of the microbial mass followed by alcohol precipitation and dialysis;
sensitization of ramified ram blood red blood cells with an antigen at a dose of 50 μg per 1 ml of 2.5% suspension of red blood cells at a pH of 1.2 and a temperature of + 4 o C, for 20 hours;
formalization of finished red blood cells by adding 1% formalin.
Общим с заявляемым способом является последовательность этапов приготовления диагностикума. In common with the claimed method is the sequence of stages of preparation of the diagnosticum.
Недостатки рассматриваемого способа заключаются в том, что он готовится на основе "полного" антигена, содержащего, помимо специфических для сапа антигенов, еще и неспецифические компоненты микробных клеток, образующиеся после переваривания ферментами поджелудочной железы. В результате диагностикум, полученный по этому способу, давал в РПГА положительные результаты не только с сыворотками против сапа и близкородственного ему мелиоидоза, но и с бруцеллезными и туляремийными сыворотками в разведениях 1:40...1:80 (см. Ширяев Д.Т., Рассудов С.М., Гольберг А.М. и др. Эритроцитарные диагностикумы в реакции пассивной гемагглютинации при мелиоидозе и сапе // Диагностика особо опасных инфекций. - Ростов Н/Д. - 1968. - С.42-47). Наличие невысоких специфических свойств снижает диагностические возможности диагностикума, что, очевидно, явилось причиной отсутствия до последнего времени в системе здравоохранения и ветеринарной службы страны нормативно-технической документации на приготовление и применение указанного препарата. Кроме того, предложенный диагностикум отличается невысокой стабильностью, поскольку сохраняет свою активность лишь в течение 6...8 месяцев. The disadvantages of this method are that it is prepared on the basis of a "full" antigen, which contains, in addition to glanders specific for antigens, also non-specific components of microbial cells formed after digestion by pancreatic enzymes. As a result, the diagnosticum obtained by this method gave positive results in RPHA not only with serums against glanders and melioidosis closely related to it, but also with brucellosis and tularemia serums in dilutions 1:40 ... 1:80 (see Shiryaev D.T. ., Rassudov S.M., Golberg A.M. et al. Erythrocyte diagnostics in the reaction of passive hemagglutination in case of melioidosis and glanders // Diagnosis of especially dangerous infections. - Rostov N / A. - 1968. - P.42-47). The presence of low specific properties reduces the diagnostic capabilities of the diagnosticum, which, obviously, was the reason for the lack of until recently in the healthcare system and veterinary service of the country of normative and technical documentation for the preparation and use of this drug. In addition, the proposed diagnosticum is not very stable, since it retains its activity only for 6 ... 8 months.
Задачей изобретения является разработка высокочувствительного, специфического и стабильного эритроцитарного диагностикума, пригодного для определения при помощи РНГА титра антител при сапной инфекции и сапном вакцинном процессе, что необходимо для повышения точности диагностики. The objective of the invention is to develop a highly sensitive, specific and stable erythrocyte diagnosticum, suitable for determining using RNGA antibody titer in case of a papillary infection and papal vaccine process, which is necessary to improve the accuracy of diagnosis.
Поставленная задача решается благодаря тому, что в способе получения сапного эритроцитарного антигенного диагностикума, включающем этапы выращивания культуры, извлечение антигенного комплекса, модификацию поверхности эритроцитов танином, сенсибилизацию их антигенным комплексом, обработку формалином, предусмотрены следующие отличия:
для приготовления диагностикума в качестве производственного используют высоковирулентный штамм Ц-5 Burkholderia (Pseudomonas) mallei;
диагностикум готовят на основе антигенного комплекса, выделенного при помощи цетавлона-цетилтриметиламмоний бромида из высушенных ацетоном микробных клеток;
модификацию поверхности эритроцитов и нагрузку их антигенным комплексом осуществляют при экспериментально обоснованных условиях;
консервацию эритроцитов обеспечивают путем добавления 5% формалина.The problem is solved due to the fact that the following differences are envisaged in the method for producing an erythrocyte antigenic diagnosticum sap, which includes the steps of growing a culture, extracting an antigenic complex, modifying the surface of red blood cells with tannin, sensitizing them with an antigenic complex, and processing with formalin:
for the preparation of a diagnosticum, the highly virulent strain C-5 Burkholderia (Pseudomonas) mallei is used as an industrial one;
a diagnosticum is prepared on the basis of an antigenic complex isolated with cetavlon-cetyltrimethylammonium bromide from acetone-dried microbial cells;
modification of the surface of red blood cells and the load of their antigenic complex is carried out under experimentally justified conditions;
erythrocyte preservation is achieved by adding 5% formalin.
Указанные отличия обусловлены следующими причинами:
микробы штамма Ц-5 являются типичными представителями В.mallei и обладают всеми характерными для данного вида бактерий морфологическими, культуральными, антигенными и вирулентными свойствами. По вирулентности для золотистых хомячков при подкожном заражении они превосходят примерно в 5 раз микробов штамма 5584, принятого на отечественных биофабриках в качестве производственного штамма для приготовления сапных диагностикумов;
обработка микробов сапа поверхностно-активным веществом - цетавлоном - позволяет экстрагировать высокоочищенный антигенный комплекс с высокой сорбционной активностью в отношении эритроцитов;
подготовка эритроцитов к нанесению антигенного комплекса проводится при экспериментально обоснованных условиях и включает фиксацию формалином с последующей модификацией поверхности эритроцитов танином;
экспериментально обоснованный режим сенсибилизации эритроцитов антигеном обеспечивает получение стабильного диагностикума с высокой серологической активностью;
стабилизация диагностикума методом "закрепления" с использованием формалина в обоснованной экспериментально концентрации позволяет определить допустимый срок хранения препарата до двух лет.These differences are due to the following reasons:
microbes of strain C-5 are typical representatives of B. mallei and have all the morphological, cultural, antigenic and virulent properties characteristic of this type of bacteria. In virulence for golden hamsters with subcutaneous infection, they are approximately 5 times superior to the microbes of strain 5584, adopted at domestic biofactories as a production strain for the preparation of shoe diagnostics;
treatment of glanders with a surfactant — cetavlon — allows the extraction of a highly purified antigenic complex with high sorption activity against red blood cells;
the preparation of red blood cells for the application of the antigenic complex is carried out under experimentally justified conditions and includes fixation with formalin, followed by modification of the surface of red blood cells with tannin;
an experimentally substantiated regimen of erythrocyte sensitization by an antigen provides a stable diagnosticum with high serological activity;
stabilization of the diagnosticum by the method of "fixing" using formalin in experimentally justified concentrations allows you to determine the acceptable shelf life of the drug up to two years.
Способ включает следующие этапы:
выращивание культуры микробов штамма Ц-5;
выделение антигенного комплекса В.mallei;
подготовка эритроцитов к нагрузке антигенного комплекса;
приготовление эритроцитарного диагностикума;
контроль качества диагностикума;
розлив диагностикума в стеклотару и укупорка ее.The method includes the following steps:
growing microbial culture of strain C-5;
isolation of the antigenic complex B.mallei;
preparation of red blood cells for the load of the antigenic complex;
erythrocyte diagnosticum preparation;
quality control of a diagnosticum;
bottling a diagnosticum in glass containers and capping it.
Способ выполняется следующим образом:
1. Выращивание культуры сапных микробов.The method is as follows:
1. Cultivation of the culture of sap microbes.
Исходным материалом служит лиофилизированная сапная культура штамма Ц-5, сохраняемая в ампулах под вакуумом. Для выращивания микробов готовят плотную питательную среду на основе недеионизированного солянокислого гидролизата казеина с содержанием аминного азота 25...35 мг%, глицерина - 10 мл/л и агар-агар - 1,5%. рН среды 6,8...7,0. Расплавленную питательную среду разливают по 300...500 мл в матрацы. Выращивание микробов осуществляют при температуре 36...38oС в течение двух суток.The starting material is a lyophilized shoe culture of strain C-5, stored in ampoules under vacuum. For the cultivation of microbes, a dense nutrient medium is prepared on the basis of non-deionized hydrochloric acid casein hydrolyzate with an amine nitrogen content of 25 ... 35 mg%, glycerol - 10 ml / l and agar-agar - 1.5%. pH of the medium is 6.8 ... 7.0. The molten nutrient medium is poured into 300 ... 500 ml in mattresses. The cultivation of microbes is carried out at a temperature of 36 ... 38 o C for two days.
2. Получение антигенного комплекса. 2. Obtaining an antigenic complex.
Сформировавшуюся в матрацах культуру смывают 10...15 мл фосфатного буферного раствора рН 6,9...7,0. Суспензию охлаждают до температуры 2...4oС. В соотношении 1: 2 по объему к суспензии добавляют охлажденный до температуры минус 20oС ацетон. Смесь выдерживают при 2...4oС 1 сутки. Затем клетки отделяют от ацетона путем фильтрования. Отстоявшийся ацетон сливают, к осадку клеток добавляют 3 объема охлажденного ацетона. Смесь снова выдерживают при 2. ..4oС 1 сутки. После чего процедуру повторяют, добавив 5 объемов ацетона. Осадок помещают в эксикатор и высушивают до постоянного веса.The culture formed in the mattresses is washed off with 10 ... 15 ml of a phosphate buffer solution, pH 6.9 ... 7.0. The suspension is cooled to a temperature of 2 ... 4 o C. In a ratio of 1: 2 by volume, acetone cooled to a temperature of minus 20 o C is added to the suspension. The mixture is maintained at 2 ... 4 o With 1 day. Then the cells are separated from acetone by filtration. The settled acetone is drained, 3 volumes of chilled acetone are added to the cell pellet. The mixture is again maintained at 2. ..4 o With 1 day. Then the procedure is repeated by adding 5 volumes of acetone. The precipitate is placed in a desiccator and dried to constant weight.
К ацетонвысушенным клеткам добавляют 1%-ый раствор цетавлона. Полученную суспензию перемешивают на магнитной мешалке при 20...24oС в течение 18...20 ч и осаждают центрифугированием. Антигенный комплекс выделяют из надосадочной жидкости, добавляя в соотношении 1:4 ацетон. Полученный антигенный комплекс помещают на фильтрованную бумагу и досушивают на воздухе.To acetone-dried cells add 1% solution of cetavlon. The resulting suspension is stirred on a magnetic stirrer at 20 ... 24 o C for 18 ... 20 hours and precipitated by centrifugation. The antigenic complex is isolated from the supernatant by adding acetone in a 1: 4 ratio. The resulting antigenic complex is placed on filtered paper and dried in air.
Специфическую активность полученного антигенного комплекса определяют в реакции диффузной преципитации (РДП) с сапной поливалентной кроличьей сывороткой. Титр полученного антигена с концентрацией 10 мг/мл должен быть не менее 1:16. The specific activity of the obtained antigenic complex is determined in the reaction of diffuse precipitation (RDP) with polyvalent rabbit serum sap. The titer of the obtained antigen with a concentration of 10 mg / ml should be at least 1:16.
3. Подготовка эритроцитов к нагрузке антигенного комплекса. 3. Preparation of red blood cells to the load of the antigenic complex.
Кровь у интактных баранов отбирают в стеклянные колбы, смешивая с консервирующим раствором на основе цитрата натрия. Кровь в консервирующем растворе хранят при (2±2)oС до 10 суток для отстаивания эритроцитов.Blood from intact sheep is taken into glass flasks, mixed with a sodium citrate preservative solution. Blood in a preservative solution is stored at (2 ± 2) o C for up to 10 days to defend red blood cells.
От сывороточных белков осадок эритроцитов отмывают забуференным физиологическим раствором (рН 7,0...7,2). From whey proteins, the erythrocyte sediment is washed with buffered saline (pH 7.0 ... 7.2).
Осадок отмытых эритроцитов взвешивают и из него готовят 15% (по весу) суспензию эритроцитов в забуференном физиологическом растворе. При перемешивании эритроцитарной суспензии с помощью магнитной мешалки к эритроцитам капельным способом добавляют формалин так, чтобы его конечная концентрация составила 15%. The precipitate of washed red blood cells is weighed and a 15% (by weight) suspension of red blood cells in buffered saline is prepared from it. While mixing the erythrocyte suspension using a magnetic stirrer, formalin is added dropwise to the red blood cells so that its final concentration is 15%.
Эритроцитарную суспензию отстаивают при (2±2)oС в течение 3 суток.The erythrocyte suspension is maintained at (2 ± 2) o C for 3 days.
Для последующей модификации поверхности эритроцитов полученную суспензию разводят физиологическим раствором в 10 раз. Затем к ней добавляют равный объем 0,005% раствора танина в физиологическом растворе. Смесь перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 минут 26...28oС, эритроциты осаждают центрифугированием при 2000 об/мин. Осадок эритроцитов однократно отмывают забуференным физиологическим раствором и ресуспендируют в забуференном физиологическом растворе до 5% концентрации эритроцитов.For subsequent modification of the surface of red blood cells, the resulting suspension is diluted with
4. Приготовление эритроцитарного диагностикума. 4. Preparation of red blood cell diagnosticum.
К полученной суспензии танизированных эритроцитов добавляют равный объем 0,02% раствора сапного антигенного комплекса в забуференном физиологическом растворе. Суспензию перемешивают и выдерживают при 2...8oС в течение 18...20 часов. Затем эритроциты центрифугированием при 2000 об/мин отмывают трехкратно забуференным физиологическим раствором. После чего осадок ресуспендируют в забуференном физиологическом растворе с 5% формалина до 10% концентрации эритроцитов.To the resulting suspension of tanized red blood cells add an equal volume of a 0.02% solution of the shoe antigenic complex in buffered saline. The suspension is stirred and maintained at 2 ... 8 o C for 18 ... 20 hours. Then, the red blood cells are centrifuged at 2000 rpm and washed three times with buffered saline. After which the precipitate is resuspended in buffered saline with 5% formalin to 10% concentration of red blood cells.
Полученный эритроцитарный сапной антигенный диагностикум должен определять титр специфических антител с сапной поливалентной кроличьей сывороткой не ниже 1:10240...1:20480. The obtained erythrocytic papal antigenic diagnosticum should determine the titer of specific antibodies with papvnaya polyvalent rabbit serum not lower than 1: 10240 ... 1: 20480.
Диагностикум разливают по 5,0 мл во флаконы. Флаконы закрывают резиновыми пробками и обжимают алюминиевыми колпачками. Гарантийный срок хранения диагностикума при условии его содержания при температуре (4±2)oС составляет 2 года.Diagnosticum is poured into 5.0 ml vials. The vials are closed with rubber stoppers and crimped with aluminum caps. The guaranteed shelf life of the diagnosticum, provided that it is kept at a temperature of (4 ± 2) o С, is 2 years.
Для сравнения специфичности и чувствительности сапных антигенных эритроцитарных диагностикумов, приготовленных по предлагаемому способу и прототипу, были приведены две серии экспериментов. В первой исследовали в РНГА иммунные сыворотки против возбудителей туляремии, бруцеллеза, чумы, сальмонеллеза и сибирской язвы, полученные гипериммунизацией кроликов убитыми фенолом культурами F.tularensis, Br.melitensis, Y.pestis, S.typhimurium, B. anthracis. Bo второй серии опытов исследовали сыворотки от людей и обезьян павианов гамадрилов, не имевших контакта с возбудителем сапа, и обезьян, зараженных сапом. Павианы гамадрилы были использованы как одна из наиболее близких человеку биологических моделей. Результаты проведенных исследований обобщены в таблицах 1 и 2. To compare the specificity and sensitivity of shoe antigenic erythrocyte diagnosticums prepared by the proposed method and prototype, two series of experiments were presented. In the first, immune sera against the causative agents of tularemia, brucellosis, plague, salmonellosis and anthrax, obtained by hyperimmunization of rabbits with phenol-killed cultures of F.tularensis, Br.melitensis, Y. pestis, S. typhimurium, B. anthracis, were studied in RNGA. In the second series of experiments, we studied sera from humans and monkeys of hamadril baboons who had no contact with the causative agent of glanders, and monkeys infected with glanders. Hamadryl baboons were used as one of the biological models closest to humans. The results of the studies are summarized in tables 1 and 2.
Анализ полученных данных позволяет сделать вывод, что диагностикум, приготовленный по прототипу, отличается меньшими специфическими свойствами, что снижает его диагностические возможности. Если диагностикум, приготовленный по заявляемому способу, не реагировал с чумной, сальмонеллезной, сибиреязвенной и туляремийной сыворотками, то диагностикум-прототип показал положительные результаты не только с бруцеллезной, но и с туляремийной сыворотками и в более высоких титрах. Существенным недостатком данного препарата являлось получение в пределах фоновых значений титров довольно большого количества неспецифических результатов, обусловленных перекрестными реакциями. При исследовании сывороток людей и обезьян павианов гамадрилов, не имевших контакта с возбудителями сапа, с помощью этого диагностикума были определены титры гемагглютининов от 1:10 до 1:320. С диагностикумом, приготовленным по заявляемому способу, эти же сыворотки реагировали в титрах 1: 10...1:20. Analysis of the obtained data allows us to conclude that the diagnosticum prepared according to the prototype has less specific properties, which reduces its diagnostic capabilities. If the diagnosticum prepared by the present method did not react with plague, salmonella, anthrax and tularemia serums, then the diagnostic prototype showed positive results not only with brucellosis, but also with tularemia serums and in higher titers. A significant drawback of this drug was the receipt within the background titer values of a fairly large number of non-specific results due to cross-reactions. In the study of human sera and monkeys of hamadril baboons who had no contact with glanders, hemagglutinin titers from 1:10 to 1: 320 were determined using this diagnosticum. With a diagnosticum prepared by the present method, these same sera reacted in titers of 1: 10 ... 1:20.
При анализе сывороток обезьян на 15...20 сутки после заражения сапом в РНГА с диагностикумом, полученным по прототипу, результаты оказались следующими: в 43% титр антител был 1:10 и 1:20 и лишь в 13% - 1:160 и выше. Тогда как с диагностикумом, полученным по заявляемому способу, при исследовании этих же сывороток гемагглютинины были выявлены в титре 1:160 и выше - в 97%. When analyzing monkey sera on
Диагностическая ценность полученного диагностикума была изучена в ходе Государственных испытаний. В соответствии с Программой испытаний диагностикума эритроцитарного антигенного сапного в качестве контрольного препарата использовали диагностикум эритроцитарный сапной иммуноглобулиновый для выявления антител в реакции нейтрализации антигена (РНАг). Материалами для исследования служили сыворотки крови от людей: здоровых, вакцинированных против чумы, туляремии, бруцеллеза, больных вирусным гепатитом; морских свинок: здоровых и инфицированных В.mallei; обезьян павианов гамадрилов: здоровых и инфицированных возбудителем сапа и мелиоидоза. Диагноз у больных животных был подтвержден клинически, серологически и патоморфологически.The diagnostic value of the obtained diagnosticum was studied during the State tests. In accordance with the test program for the erythrocyte antigenic shoe diagnosticum, the erythrocyte heap immunoglobulin diagnosticum was used as a control preparation to detect antibodies in the antigen neutralization reaction (PHA g ). Materials for the study were serum from people: healthy, vaccinated against plague, tularemia, brucellosis, patients with viral hepatitis; Guinea pigs: healthy and infected with B.mallei; Hamadrilian baboons monkeys: healthy and infected with glanders and melioidosis. The diagnosis in sick animals was confirmed clinically, serologically and pathomorphologically.
Полученные результаты показали, что испытуемый препарат имеет значительные преимущества перед контрольным по следующим показателям:
по чувствительности: у больных сапом обезьян на 5...7 сутки после заражения диагностические титры антител 1:320 отмечались в 23,3% случаев, на 10.. .12 сутки - в 86,3%, на 15...21 сутки - в 100% случаев при применении испытуемого диагностикума; при использовании контрольного препарата на 5...7 сутки титры 1:320 наблюдались в 10%, на 10...12 сутки - в 13,4% и на 15...21 сутки - в 10% случаев;
по специфичности: при постановке РНГА с сыворотками здоровых людей с испытуемым диагностикумом фоновые (недиагностические) титры гемагглютининов 1: 20 обнаружены всего в 9% случаев, в то время как в РНАг с контрольным препаратом фоновые значения титров составляли от 1:20 до 1:160 и обнаруживались у 55% обследованных здоровых людей; аналогичные результаты получены при исследовании сывороток крови людей, больных вирусным гепатитом, и здоровых обезьян;
при исследовании сыворотки крови от обезьян на 7 сутки после инфицирования возбудителем мелиоидоза результаты в РНГА с испытуемым диагностикумом оказались в 48 случаев с титром 1:20 и в 52%-1:160. При анализе контрольным методом - в 50% с титрами 1:40, а в 16,7% - с диагностическим титром 1:320;
по четкости реакции: испытуемый диагностикум давал четкую реакцию в 100% случаев, для контрольного этот показатель составил 91,7%;
по скорости учета результатов: реакцию учитывали для испытуемого препарата через 2...4 ч, можно и через 20 ч, результаты совпадали, для контрольного - только через 20 ч;
по простоте и времени постановки: РНГА является двухкомпонентной реакцией для испытуемого, а РНАг - трехкомпонентной для контрольного препарата.The results showed that the test drug has significant advantages over the control in the following indicators:
sensitivity: in patients with glanders of monkeys on 5 ... 7 days after infection, diagnostic antibody titers of 1: 320 were observed in 23.3% of cases, on 10 ... 12 days - in 86.3%, on 15 ... 21 day - in 100% of cases when using the test diagnosticum; when using the control drug on
by specificity: when setting RNGA with sera of healthy people with the tested diagnosticum, background (non-diagnostic) titers of hemagglutinins 1: 20 were found in only 9% of cases, while in PHA g with a control preparation, background titers ranged from 1:20 to 1: 160 and were found in 55% of the examined healthy people; similar results were obtained in the study of blood serum of people with viral hepatitis and healthy monkeys;
in the study of blood serum from monkeys on the 7th day after infection with the causative agent of melioidosis, results in RNGA with the test diagnosticum were found in 48 cases with a titer of 1:20 and in 52% -1: 160. When analyzed by the control method, in 50% with titers of 1:40, and in 16.7% with a diagnostic titer of 1: 320;
according to the clarity of the reaction: the test diagnosticum gave a clear reaction in 100% of cases, for the control this indicator was 91.7%;
according to the speed of recording results: the reaction was taken into account for the test drug after 2 ... 4 hours, it is possible after 20 hours, the results coincided, for the control only after 20 hours;
in terms of simplicity and formulation time: RNGA is a two-component reaction for a test subject, and RNA g is a three-component reaction for a control drug.
Результаты Государственных испытаний позволили рекомендовать внедрение в практику здравоохранения диагностикума эритроцитарного антигенного сапного, изготовленного по заявляемому способу и оформить всю необходимую нормативно-техническую документацию ("Регламент производства диагностикума сапного эритроцитарного антигенного", "Временная фармакопейная статья", "Инструкция по применению"). Временная фармакопейная статья на диагностикум эритроцитарный антигенный сапной зарегистрирована за номером ВФС 42-3465-99. The results of the state tests made it possible to recommend the introduction of a erythrocyte antigenic shoe diagnosticum, made according to the claimed method, into medical practice and to draw up all the necessary regulatory and technical documentation ("Schedule for production of a erythrocyte antigenic shoe diagnostics", "Temporary Pharmacopoeia Article", "Instructions for Use"). A temporary pharmacopeia article on the erythrocyte antigenic papillum diagnosticum is registered under VFS number 42-3465-99.
Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемыми техническими результатами показано в таблице 3. Из ее анализа следует, что сапной эритроцитарный диагностикум, приготовленный по заявляемому способу, показывает результаты, существенно превосходящие прототип по чувствительности, специфичности и стабильности свойств при хранении. The presence of a causal relationship between the totality of the essential features of the claimed object and the achieved technical results is shown in table 3. From its analysis it follows that the erythrocyte sap test, prepared by the present method, shows results that significantly exceed the prototype in terms of sensitivity, specificity and stability of storage properties .
Возможность осуществления предложенного способа может быть продемонстрирована следующим примером. The possibility of implementing the proposed method can be demonstrated by the following example.
На АТЛ, созданной в НИИ микробиологии МО РФ, были приготовлены 4 серии эритроцитарного сапного антигенного диагностикума в соответствии с утвержденной нормативно-технической документацией. Характеристика серий представлена в таблицах 4 и 5. At the ATL, created at the Scientific Research Institute of Microbiology of the Ministry of Defense of the Russian Federation, 4 series of erythrocyte sap antigenic diagnosticum were prepared in accordance with the approved regulatory and technical documentation. The characteristics of the series are presented in tables 4 and 5.
Из представленных в таблицах 4, 5 данных следует, что все серии сапного эритроцитарного антигенного диагностикума полностью отвечали требованиям ВФС 42-3465-99 и не реагировали с чумной, туляремийной, сальмонеллезной и сибиреязвенной иммунными сыворотками, а с бруцеллезной отмечались титры 1:10 в пределах фоновых значений. From the data presented in Tables 4, 5, it follows that all series of Sap erythrocyte antigenic diagnosticum fully met the requirements of VFS 42-3465-99 and did not react with plague, tularemia, salmonella and anthrax immune sera, and titers 1:10 were observed with brucellosis within background values.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001100888A RU2188036C1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2001100888A RU2188036C1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2188036C1 true RU2188036C1 (en) | 2002-08-27 |
Family
ID=20244722
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001100888A RU2188036C1 (en) | 2001-01-09 | 2001-01-09 | Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2188036C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2540902C1 (en) * | 2013-07-26 | 2015-02-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for preparing erythrocytic diagnostic antigen for detecting actinobacillus mallei and melioidosis antigen antibodies |
-
2001
- 2001-01-09 RU RU2001100888A patent/RU2188036C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КУЛАКОВ М.Я и др. Моноклональный эритроцитарный диагностикум для обнаружения возбудителей сапа и мелиоидоза.//Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии. - Астрахань, 1996, с. 146-147. САЯПИНА Л.В. и др. Изучение активности и специфичности диагностикумов эритроцитарных мелиоидозного и сапного антигенных.//Природноочаговые инфекции в России. - Омск, 1998, с. 188-190. АЛЕКСЕЕВ В.В. и др. Ранняя лабораторная диагностика легочной формы сапа и мелиоидоза с использованием экспресс-методов иммунохимического анализа.//Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии, 1994, №5, с. 59-63. БАРКОВ и др. Использование РПГА для диагностики сапа и мелиоидоза.// Особоопасные инфекционные заболевания: Диагностика, профилактика и биологические свойства возбудителей. - Волгоград, 1990, с. 200-201. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2540902C1 (en) * | 2013-07-26 | 2015-02-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method for preparing erythrocytic diagnostic antigen for detecting actinobacillus mallei and melioidosis antigen antibodies |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ward et al. | Rapid diagnosis of Hemophilus influenzae type b infections by latex particle agglutination and counterimmunoelectrophoresis | |
| HU184141B (en) | Adjuvant particles compositions containing said particles and biologically active substances adsorbed thereon and a process for the preparation thereof | |
| CA1045031A (en) | Serological test for gonorrheal antibodies | |
| Hardy Jr et al. | Specific agglutination of Treponema pallidum by sera from rabbits and human beings with treponemal infections | |
| Leinonen et al. | Comparison of counter-current immunoelectrophoresis, latex agglutination, and radioimmunoassay in detection of soluble capsular polysaccharide antigens of Haemophilus influenzae type b and Neisseria meningitidis of groups A or C. | |
| CN109182167B (en) | Production process of high titer tuberculin skin test diagnostic reagent (PPD) | |
| Nakhla et al. | Studies on the antigen in β-haemolytic streptococci that cross-reacts with an antigen in human myocardium | |
| CN105611942A (en) | Compositions and methods of immunizing against clostridium difficile | |
| Smith et al. | The relationship between rubella hemagglutination inhibition antibody (HIA) and rubella induced in vitro lymphocyte tritiated thymidine incorporation | |
| Wenzel et al. | Field trial of an inactivated Mycoplasma pneumoniae vaccine. I. Vaccine efficacy | |
| Relyveld et al. | Antibody response of pregnant women to two different adsorbed tetanus toxoids | |
| RU2188036C1 (en) | Method for obtaining erythrocytic antigenic glanderous diagnostic kit | |
| RU2549434C2 (en) | Method for making brucellosis diagnostic serum | |
| RU2240822C2 (en) | Method for obtaining antitularemic serum and method for obtaining a dry erythrocytic tularemic immunoglobulin test kit | |
| Fox et al. | Primary immunization of infants and children with group A streptococcal M protein | |
| Käyhty et al. | Radioimmunoassay of capsular polysaccharide antigens of groups A and C meningococci and Haemophilus influenzae type b in cerebrospinal fluid. | |
| Adler et al. | Effect of dextrose in medium for the preparation of Mycoplasma gallisepticum plate antigens | |
| Lazarus et al. | The Virus of Psittacosis: III. Serological Investigations | |
| RU2341288C1 (en) | MEDICINE FORMING CELLULAR IMMUNITY FOR MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS H37 Rv, METHOD OF PRODUCTION THEREOF (VERSIONS), RECOMBINANT STRAIN AND TUBERCULOSIS DIAGNOSTIC AGENT | |
| RU2184567C1 (en) | Strain feline calicivirus used for control of immunogenic activity of vaccines, preparing specific curative-prophylaxis and diagnostic biopreparations | |
| RU2802251C1 (en) | Vaccine composition for the prevention of enzootic abortion in sheep | |
| RU2798283C1 (en) | Chlamydia vnitibp-21 chlamydia abortus strain for the production of immunobiological medicinal products | |
| RU2416429C2 (en) | Method for producing antigen preparation of l-brucellas | |
| Hassan et al. | Immunohemagglutination Test for Rapid Detection and Assay of Rubella Antibodies. | |
| RU2754465C1 (en) | Method for obtaining an erythrocyte diagnosticum for the indirect hemagglutination reaction (ihar) with clostridiosis of animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080110 |