RU2202609C2 - Питательная среда для выделения лактобактерий - Google Patents
Питательная среда для выделения лактобактерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2202609C2 RU2202609C2 RU2000125959A RU2000125959A RU2202609C2 RU 2202609 C2 RU2202609 C2 RU 2202609C2 RU 2000125959 A RU2000125959 A RU 2000125959A RU 2000125959 A RU2000125959 A RU 2000125959A RU 2202609 C2 RU2202609 C2 RU 2202609C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- lactobacilli
- agar
- colostrum
- nutrient medium
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при исследовании микрофлоры организма человека на дисбактериоз. Среда содержит, г/л: сернокислый марганец 0,049-0,05; сернокислый магний 0,19-0,2; L-цистин солянокислый 0,095-0,1; калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный 1,95-0,2; пептон 4,9-5,0; глюкоза 19,8-20,0; агар-агар 15,0±0,1; стерильный мел 9,9-10,0; гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы из отходов производства лактоглобулинов - остальное. Питательная среда не имеет дорогостоящих компонентов, проста в приготовлении, обеспечивает рост и развитие разных штаммов лактобактерий и позволяет судить о кислотообразующей активности, об образовании каталазоподобных ферментов. 6 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выделения лактобактерий из материала от людей при исследовании на дисбактериоз кишечника, влагалища и других отделов организма человека, а также для определения физиологической активности лактобактерий по их кислотообразующей способности и наличия каталазоподобных ферментов.
При диагностике дисбактериоза кишечника, влагалища, полости рта важно бывает не только знать количество лактобактерий, присутствующих в составе микрофлоры того или другого отдела, но иметь представление об их колонизирующей способности, складывающейся из ряда свойств микроорганизмов, в частности:
- их кислотообразующей способности, которая в известной степени характеризует их антагонистическую активность;
- возможности синтезировать ряд ферментов, способствующих защите микроорганизмов от фагоцитоза (каталаза, супероксиддисмутаза и т.д.).
- их кислотообразующей способности, которая в известной степени характеризует их антагонистическую активность;
- возможности синтезировать ряд ферментов, способствующих защите микроорганизмов от фагоцитоза (каталаза, супероксиддисмутаза и т.д.).
Известны питательные среды для выделения лактобактерий, состоящие их томатного, капустного, морковного отваров с добавлением пептона, L-цистина и др. Эти среды многокомпонентные, содержат трудно поддающиеся стандартизации ингредиенты, готовятся на основе пищевых продуктов. Они достаточно сложны в приготовлении, не всегда дают воспроизводимые результаты.
Известна питательная среда МРС-5 (среда Rogosa) (ФС 42-252 ВС-89, Лактобактерин сухой, 01.04.1989), имеющая следующий состав (г/л):
Сернокислый марганец - 0,05±0,0005
Цистин солянокислый - 0,2±0,0005
Сернокислый магний - 0,2±0,0005
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 2,0±0,01
Пептон - 10±0,5
Глюкоза - 20±0,5
Твин-80 - (1,0±0,02)мл
Дрожжевой аутолизат - 50,0±1,5 мл
Агар-агар - 15,0±0,1
Вода дистиллированная - 500 мл
Гидролизат молока - 500 мл
Приведенная питательная среда также многокомпонентная, содержит гидролизованное молоко по Богданову, которое сложно по технологии приготовления, имеет нестандартизированные ростовые качества, готовится из дефицитного пищевого продукта и не позволяет судить о кислотообразующей способности лактобактерий. Для определения образования каталазоподобных ферментов (псевдокаталазы и пр.) в МРС необходимо дополнительно добавить в среду гемин, прогретую кровь и другие компоненты, стимулирующие выработку данных ферментов, что не только осложняет получение питательной среды, но и делает ее более дорогостоящей.
Сернокислый марганец - 0,05±0,0005
Цистин солянокислый - 0,2±0,0005
Сернокислый магний - 0,2±0,0005
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 2,0±0,01
Пептон - 10±0,5
Глюкоза - 20±0,5
Твин-80 - (1,0±0,02)мл
Дрожжевой аутолизат - 50,0±1,5 мл
Агар-агар - 15,0±0,1
Вода дистиллированная - 500 мл
Гидролизат молока - 500 мл
Приведенная питательная среда также многокомпонентная, содержит гидролизованное молоко по Богданову, которое сложно по технологии приготовления, имеет нестандартизированные ростовые качества, готовится из дефицитного пищевого продукта и не позволяет судить о кислотообразующей способности лактобактерий. Для определения образования каталазоподобных ферментов (псевдокаталазы и пр.) в МРС необходимо дополнительно добавить в среду гемин, прогретую кровь и другие компоненты, стимулирующие выработку данных ферментов, что не только осложняет получение питательной среды, но и делает ее более дорогостоящей.
Целью настоящего изобретения является создание новой дешевой питательной среды для выделения лактобактерий и изучения их свойств кислотообразования (антагонистической способности) и продукции каталазоподобных ферментов.
Настоящая цель достигается тем, что в качестве питательной основы используют гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы (молозивного творога) из отходов производства лактоглобулина. Для определения кислотообразующей (антагонистической) способности лактобактерий в среду входит стерильный мел. Предлагаемая питательная среда состоит из следующих ингредиентов (в соотношении в г/литр готовой среды):
Сернокислый марганец - 0,049 - 0,05
Сернокислый магний - 0,19 - 0,2
L-цистин солянокислый - 0,095 - 0,1
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 1,95-0,2
Пептон - 4,9 - 5,0
Глюкоза - 19,8 - 20,0
Агар-агар - 15,0±0,1
Стерильный мел - 9,9 - 10,0
Гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы из отходов лактоглобулина - Остальное
Молозивный творог является отходом при производстве лечебного препарата лактоглобулина в процессе получения лактосыворотки из молозива коров. "Из 35 литров молозива получают (24,5±1) л лактосыворотки, при этом остается (9,3±2) кг молозивного творога, содержащего до (1,5±0,5) л сыворотки" (производственный регламент 328-91) "Лактоглобулин противоколипротейный коровий сухой для перорального применения). Молозивный творог должен иметь соотношение казеин-сыворотка не менее 7:3, рН не ниже 4,1±0,2.
Сернокислый марганец - 0,049 - 0,05
Сернокислый магний - 0,19 - 0,2
L-цистин солянокислый - 0,095 - 0,1
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 1,95-0,2
Пептон - 4,9 - 5,0
Глюкоза - 19,8 - 20,0
Агар-агар - 15,0±0,1
Стерильный мел - 9,9 - 10,0
Гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы из отходов лактоглобулина - Остальное
Молозивный творог является отходом при производстве лечебного препарата лактоглобулина в процессе получения лактосыворотки из молозива коров. "Из 35 литров молозива получают (24,5±1) л лактосыворотки, при этом остается (9,3±2) кг молозивного творога, содержащего до (1,5±0,5) л сыворотки" (производственный регламент 328-91) "Лактоглобулин противоколипротейный коровий сухой для перорального применения). Молозивный творог должен иметь соотношение казеин-сыворотка не менее 7:3, рН не ниже 4,1±0,2.
Молозивный творог помещают в 5 литровую бутыль, разбавляют дистиллированной водой из расчета 100 грамм массы на 1 литр дистиллированной воды, хорошо перемешивают, доводят рН 25% водным раствором аммиака до рН 8,0, добавляют панкреатин (МРТУ 425946-84) в количестве 0,1 г на литр смеси, вновь хорошо перемешивают и помещают смесь в термостат при температуре (45±1)oС на 3±0,5 часа. В течение инкубации каждый час смесь перемешивают, доводя рН до 8,0 с помощью 25% водного раствора аммиака. По истечении 3-х часов гидролиз останавливают, изменяя рН смеси до значений 4,3 с помощью уксусной кислоты. Смесь прогревают до закипания и выдерживают при такой температуре 3-5 минут, затем охлаждают и фильтруют через миткалевый фильтр. Полученный гидролизат стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 30 минут. Стерильный гидролизат годен к употреблению в течение 3-х месяцев.
Пример 1.
Среда с максимальным содержанием ингредиентов. К 0,5 литра гидролизата последовательно добавляют глюкозы 25 г, пептона 5,5 г, L-цистина солянокислого 0,15 г, сернокислого марганца 0,055 г, сернокислого магния 0,25 г, калия двузамещенного фосфорнокислого 3-х водного 2,2 г, агар-агара 15,5 г, стерильного мела 15,0 г. Объем среды доводят до 1,0 л гидролизатом. После внесения всех ингредиентов измеряют рН, доводят до значения 7,4-7,6 разливают по флаконам и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 15 мин.
Пример 2.
Среда с оптимальным содержанием компонентов. К 0,5 литра гидролизата последовательно добавляют глюкозы 20 г, пептона 5 г, L-цистина солянокислого 0,1 г, сернокислого марганца 0,05 г, сернокислого магния 0,2 г, калия двузамещенного фосфорнокислого 3-х водного 2,0 г, агар-агара 15,0 г, стерильного мела 10,0 г. Объем среды доводят до 1,0 л гидролизатом.
После внесения всех ингредиентов измеряют рН, доводят до значения 7,4-7,6 разливают по флаконам и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 15 мин.
Пример 3.
Среда с минимальным содержанием ингредиентов. К 0,5 литра гидролизата последовательно добавляют глюкозы 15 г, пептона 4,5 г, L-цистина солянокислого 0,05 г, сернокислого марганца 0,05 г, сернокислого магния 0,15 г, калия двузамещенного фосфорнокислого 3-х водного 1,9 г, агар-агара 14,5 г, стерильного мела 9,0 г. Объем среды доводят до 1,0 л гидролизатом. После внесения всех ингредиентов измеряют рН, доводят до значения 7,4-7,6 разливают по флаконам и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм в течение 15 мин.
Пример 4.
Ростовые свойства среды определяют по отношению к типовому штамму лактобактерий Lactobacterium plantarum 8P-A3 по сравнению со средой МРС-5 - прототип. Сравнительные данные ростовых свойств трех вариантов предлагаемой среды изложены в таблице 1.
Приведенные в таблице результаты свидетельствуют, что на предлагаемой среде лактобактерий типового штамма Lactobacterium plantarum 8P-A3 растут лучше, чем на типовой среде МРС-5.
Пример 5.
Использование среды для выращивания лактобактерий. Среда с гидролизатом использована для обеспечения роста разных видов лактобактерий (Lactobacterium plantarum, L.fermenti, L.casei, L.acidophilus). Полученные результаты изложены в таблице 2.
Как видно из представленных данных, полученная среда с гидролизатом молозивного творога обеспечивает рост разных видов лактобактерий в титрах, несколько превышающих количество их на среде МРС-5.
Пример 6.
Возможность практического использования среды для диагностики дисбактериозов кишечника у людей.
Изучено использование среды с гидролизатом молозивного творога для выделения лактобактерий из фекалий людей с дисбактериозом. Производили параллельный посев фекалий в разведениях от 104 до 107 на стандартную среду МРС-5 и предлагаемую среду на основе гидролизата молозивного творога. Результаты представлены в таблице 3.
Приведенные результаты указывают, что использование среды с гидролизатом молозивного творога позволяет выявить лактобактерии в фекалиях людей с дисбактериозом в более высоких титрах, чем среда МРС-5.
Пример 7.
Изучение антагонистической активности лактобактерий.
Сопоставляли степень антагонистической активности лактобактерий и величину зон просветления вокруг колоний на среде с гидролизатом молозивного творога на примере производственного штамма Lactobacterium plantarum 8P-A3.
Антагонистическую активность 100 клонов производственного штамма L. plantarum 8P-A3 определяли по отношению к тест-кульутрам патогенных (Shigella flexneri-2 культуры, Shigella sonnei-1 культура) и условно-патогенных бактерий (Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Escherichiae coli, Staphilococcus aureus) методом отсроченного антагонизма, изложенному в ФС 42-252 ВС-89 "Лактобактерин сухой". Клоны штамма L.plantarum 8P-A3 получали путем рассева культуры производственного штамма лактобактерий L.plantarum, выращенной в течение (47±1) часов на среде МРС-1 при температуре (37,2±0,2)oС. Степень активности клонов определяли по величине зоны задержки роста тест-культур. При этом высокоактивными считали клоны, дающие зоны задержки роста более 21 мм, среднеактивными - 10-20 мм, слабо активными - менее 10 мм. Результаты сопоставления степени антагонистической активности изученных клонов и их кислотообразующей способности на предлагаемой среде приведены в таблице 4.
Представленные в таблице 4 результаты указывают на наличие тесной взаимозависимости величины зон просветления на предлагаемой среде и антагонистической активности культур лактобактерий.
Пример 8.
Изучение кислотообразующей и антагонистической активности культур лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом.
Изучена кислотообразующая активность 142 культур лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом, а также их антагонистическая активность по отношению к тест-культурам патогенных (Shigella flexneri, Shigella sonnei) и условно-патогенных бактерий (Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Escherichiae coli, Staphilococcus aureus) методом отсроченного антагонизма. Данные приведены в таблице 5.
Приведенные в таблице 5 результаты указывают на полное совпадение данных о величине зон просветления вокруг колоний лактобактерий, выросших на среде с основой из гидролизата молозивного творога и их антагонистической активности.
Пример 9.
Изучение наличия каталазоподобных ферментов у лактобактерий.
Определяли наличие каталазоподобных ферментов у лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника (100 штаммов) и от практически здоровых людей (127 штаммов). Учет реакции проводили с использованием 6% раствора перекиси водорода согласно методике, описанной в руководстве под редакцией М. Биргера (1982г.). Каталазоподобные ферменты определяли у лактобактерий, выросших на стандартной среде МРС-5 с добавлением прогретой крови и без добавления, а также на предлагаемой среде на основе гидролизата молозивного творога. Результаты исследования представлены в таблице 6.
На предлагаемой среде и на среде МРС-5 с добавлением прогретой крови в обеих группах обследованных штаммов каталазоподобные ферменты выявлялись в сопоставимых процентах случаев, в то время как, на среде МРС-5 без добавления прогретой крови признак отсутствовал в обеих группах.
Таким образом, предлагаемая питательная среда проста в изготовлении, содержит доступные компоненты. Использование отходов производства лактоглобулина позволяет среду в больших количествах. Предлагаемая питательная среда позволяет уже при первичном анализе на дисбактериоз судить о физиологической активности и частично о колонизующей способности лактобактерий, выделенных их материала от больных, по двум признакам - их антагонистической активности и способности к продукции каталазоподобных ферментов.
Claims (1)
- Питательная среда для выделения лактобактерий, содержащая питательную основу, глюкозу, пептон, L-цистин солянокислый, сернокислый марганец, сернокислый магний, калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный, отличающаяся тем, что в качестве питательной основы среда содержит ферментативный гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы из отходов производства лактоглобулинов и дополнительно включает стерильный мел и агар-агар при следующем соотношении компонентов, в г/л:
Сернокислый марганец - 0,049 - 0,05
Сернокислый магний - 0,19 - 0,2
L-цистин солянокислый - 0,095 - 0,1
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 1,95 - 0,2
Пептон - 4,9 - 5,0
Глюкоза - 19,8 - 20,0
Агар-агар - 15,0±0,1
Стерильный мел - 9,9 - 10,0
Гидролизат молозивной казеиново-сывороточной массы из отходов производства лактоглобулинов - Остальноел
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000125959A RU2202609C2 (ru) | 2000-10-12 | 2000-10-12 | Питательная среда для выделения лактобактерий |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000125959A RU2202609C2 (ru) | 2000-10-12 | 2000-10-12 | Питательная среда для выделения лактобактерий |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000125959A RU2000125959A (ru) | 2002-10-20 |
RU2202609C2 true RU2202609C2 (ru) | 2003-04-20 |
Family
ID=20241023
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000125959A RU2202609C2 (ru) | 2000-10-12 | 2000-10-12 | Питательная среда для выделения лактобактерий |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2202609C2 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2510416C1 (ru) * | 2012-12-18 | 2014-03-27 | Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Питательная среда для выделения лактобактерий |
RU2550256C1 (ru) * | 2014-04-04 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий |
RU2551960C1 (ru) * | 2014-04-01 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Питательная среда для культивирования лактобактерий |
RU2681440C1 (ru) * | 2018-03-19 | 2019-03-06 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Способ контроля качества кисломолочной продукции |
-
2000
- 2000-10-12 RU RU2000125959A patent/RU2202609C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ФС 42-252ВС-89, Лактобактерин сухой, 01.04.1989. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2510416C1 (ru) * | 2012-12-18 | 2014-03-27 | Федеральное бюджетное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Питательная среда для выделения лактобактерий |
RU2551960C1 (ru) * | 2014-04-01 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Питательная среда для культивирования лактобактерий |
RU2550256C1 (ru) * | 2014-04-04 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий |
RU2681440C1 (ru) * | 2018-03-19 | 2019-03-06 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Способ контроля качества кисломолочной продукции |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2259747C2 (ru) | Штамм bifidobacterium, способ получения иммуностимулирующего молочного продукта и продукт, полученный этим способом | |
Solomon et al. | Substantiation of the technology for fermented sour-milk desserts with bifidogenic properties | |
CN1387564A (zh) | 产生抗高血压二和三肽的瑞士乳杆菌 | |
RU2175192C1 (ru) | Способ получения симбиотического кисломолочного желированного продукта | |
RU2326938C2 (ru) | Консорциум штаммов лактобактерий и способ получения на его основе препарата, используемого в качестве биологически активной добавки или закваски для производства кисломолочных продуктов | |
RU2314337C1 (ru) | Штамм bifidobacterium adolescentis два-3, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
CN101361506A (zh) | 一种降胆固醇的发酵酸乳及其制备方法 | |
RU2202609C2 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
RU2317326C1 (ru) | Штамм bifidobacterium longum po-6, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
RU2130269C1 (ru) | Способ получения симбиотического кисломолочного продукта "бифацил" | |
RU2646163C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур | |
RU2317327C1 (ru) | Штамм bifidobacterium adolescentis два-5, используемый для получения ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
RU2141210C1 (ru) | Способ получения симбиотического кисломолочного продукта "кефинар" или "знаки зодиака" | |
RU2169472C2 (ru) | Способ получения бактериальной закваски для кисломолочного продукта | |
RU2100936C1 (ru) | Способ приготовления закваски для получения лечебно-профилактического кисломолочного продукта "нормофлор" и способ его получения | |
RU2314342C1 (ru) | Штамм bifidobacterium bifidum 79-31, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
RU2366699C2 (ru) | Способ получения биомассы бифидобактерий | |
RU2218795C2 (ru) | Способ производства сметаны | |
RU2216588C1 (ru) | Штамм bifidobacterium longum я2, используемый для получения кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, заквасок, гигиенических и косметических средств, биологически активных добавок и бактерийных препаратов | |
RU2108723C1 (ru) | Способ получения симбиотического кисломолочного продукта "кефинар" или "знаки зодиака" | |
JP3993322B2 (ja) | 乳酸菌生育促進剤及びその利用 | |
JPS6313654B2 (ru) | ||
RU2060673C1 (ru) | Способ приготовления пробиотика на основе живых бифидобактерий и лактобактерий | |
RU2104706C1 (ru) | Способ получения бифидосодержащих препаратов | |
RU2299237C2 (ru) | Питательная среда для выделения грибов рода candida |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20061013 |