RU2198177C2 - Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity - Google Patents
Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2198177C2 RU2198177C2 RU2001108620/04A RU2001108620A RU2198177C2 RU 2198177 C2 RU2198177 C2 RU 2198177C2 RU 2001108620/04 A RU2001108620/04 A RU 2001108620/04A RU 2001108620 A RU2001108620 A RU 2001108620A RU 2198177 C2 RU2198177 C2 RU 2198177C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cysteine
- benzyl
- hiv
- glycyrrhizic acid
- activity
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно к гликопептиду глицирризиновой кислоты с S-бензил-L-цистеином [I]: 3-О-{2-О-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин(S-бензил)-N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин(S-бензил)]}-(3β,20β)-11-оксо-олеан-12-ен-30-(N-карбонил-L-цистеин(S-бензил)-3-ил формулы (Iб), проявляющему анти-ВИЧ активность. The invention relates to new chemical compounds, specifically to the glycopeptide glycyrrhizic acid with S-benzyl-L-cysteine [I]: 3-O- {2-O- [N- (β-D-glucopyranosyluronoyl) -L-cysteine (S- benzyl) -N- (β-D-glucopyranosyluronoyl) -L-cysteine (S-benzyl)]} - (3β, 20β) -11-oxo-olean-12-en-30- (N-carbonyl-L-cysteine (S-benzyl) -3-yl of the formula (IB) exhibiting anti-HIV activity.
Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны.
The specified compound and its properties are not described in the literature.
В настоящее время во всем мире интенсивно ведутся исследования по поиску средств для борьбы с ВИЧ-инфекцией. Выявлен ряд соединений, ингибирующих репродукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ): рибавирин, азидотимидин (зидовудин), 2,3-дидезоксинуклеозиды и др. [1,2] . В 1987-88 гг. группой японских ученых была обнаружена способность глицирризиновой кислоты (ГК) - основного биоактивного компонента экстракта корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra) и уральской (G1. uralensis) ингибировать ВИЧ in vitro и in vivo [3-5]. ГК была успешно использована в условиях клиники для лечения больных СПИДом [2,3,6]. Основным недостатком ГК является его малая эффективность как ингибитора обратной транскриптазы ВИЧ [7] и высокие дозы препарата, которые вызывают подавление репродукции ВИЧ [8]. Currently, worldwide research is intensively conducted to find means to combat HIV infection. A number of compounds have been identified that inhibit the reproduction of the human immunodeficiency virus (HIV): ribavirin, azidothymidine (zidovudine), 2,3-dideoxynucleosides, etc. [1,2]. In 1987-88 a group of Japanese scientists discovered the ability of glycyrrhizic acid (HA), the main bioactive component of the extract of licorice root (Glycyrrhiza glabra) and Uralic (G1. uralensis), to inhibit HIV in vitro and in vivo [3-5]. HA was successfully used in a clinic for the treatment of AIDS patients [2,3,6]. The main disadvantage of HA is its low efficiency as an HIV reverse transcriptase inhibitor [7] and high doses of the drug, which cause suppression of HIV reproduction [8].
Задача, на решение которой направлено заявленное техническое решение, заключается в поиске новых соединений в ряду производных ГК, обладающих анти-ВИЧ активностью. The problem to which the claimed technical solution is directed is to search for new compounds in a series of HA derivatives with anti-HIV activity.
В заявленном техническом решении синтезировано новое соединение - гликопептид ГК с S-бензил-L-цистеином: 3-O-{ 2-O-[N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин(S-бензил)-N-(β-D-глюкопиранозилуроноил)-L-цистеин(S-бензил)] } -(3β, 20β)-11-оксо-олеан-12-ен-30-(N-карбонил-L-цистеин)(S-бензил)-3-ил формулы (Iб), проявляющий анти-ВИЧ активность. In the claimed technical solution, a new compound was synthesized - HA glycopeptide with S-benzyl-L-cysteine: 3-O- {2-O- [N- (β-D-glucopyranosyluronoyl) -L-cysteine (S-benzyl) -N- (β-D-glucopyranosyluronoyl) -L-cysteine (S-benzyl)]} - (3β, 20β) -11-oxo-olean-12-en-30- (N-carbonyl-L-cysteine) (S-benzyl ) -3-yl of the formula (IB) exhibiting anti-HIV activity.
Биологические свойства данного соединения были изучены в лаборатории ретровирусов Института молекулярной биологии ГНЦ ВБ "Вектор". The biological properties of this compound were studied in the laboratory of retroviruses of the Institute of Molecular Biology of the SSC VB "Vector".
Противовирусную активность препарата изучали на традиционной модели первично инфицированных ВИЧ лимфоидных клеток МТ-4. В работе использовали штамм ВИЧ-1/ЭВК. В качестве препаратов сравнения использовали глицирризиновую кислоту в концентрации 100 мкг/мл и один из известных противовирусных препаратов - ингибиторов репликации ВИЧ - азидотимидин (АЗТ) (зидовудин [9] ), облегчающий течение заболевания СПИДом, в концентрации 0,1 мкг/мл. Механизм действия АЗТ связан с подавлением фермента - обратной транскриптазы (ревертазы) ВИЧ, обеспечивающей считывание вирусной ДНК в пораженной клетке с РНК, содержащейся в вирионе (транспортной форме вируса). Однако со временем ВИЧ становится устойчивым к действию ингибиторов обратной транскриптазы, поэтому в последнее время АЗТ и его аналоги стали применять в сочетании с противовирусными, эффективными при ВИЧ-инфекции препаратами другого механизма действия - ингибиторами протеаз. Кроме того, АЗТ является более токсичным препаратом, чем ГК [8]. The antiviral activity of the drug was studied on a traditional model of primary HIV-infected MT-4 lymphoid cells. A strain of HIV-1 / EVK was used in the work. Glycyrrhizic acid at a concentration of 100 μg / ml and one of the known antiviral drugs, HIV replication inhibitors, azidothymidine (AZT) (zidovudine [9]), which alleviates the course of AIDS disease, at a concentration of 0.1 μg / ml were used as reference preparations. The mechanism of action of AZT is associated with the suppression of the enzyme - reverse transcriptase (revertase) of HIV, which ensures the reading of viral DNA in the affected cell with RNA contained in the virion (transport form of the virus). However, over time, HIV becomes resistant to the action of reverse transcriptase inhibitors, therefore, recently, AZT and its analogues began to be used in combination with antiviral drugs effective in HIV infection of another mechanism of action - protease inhibitors. In addition, AZT is a more toxic drug than HA [8].
Цитотоксичность исследуемого соединения оценивали на культуре перевиваемых Т-лимфоцитов человека (линия МТ-4). Препарат растворяли в ДМСО и в соответствующих разведениях вносили в лунки 96-луночных планшетов (по три на каждое разведение) при рассеве клеток. The cytotoxicity of the test compound was evaluated on a culture of transplantable human T-lymphocytes (line MT-4). The drug was dissolved in DMSO and in the appropriate dilutions were added to the wells of 96-well plates (three for each dilution) during cell sieving.
По окончании инкубации подсчитывали долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания трипановым синим. Строили дозазависимую кривую и определяли концентрацию препарата, вызывающего гибель 50% клеток, CD50 (токсическая доза).At the end of the incubation, the fraction of viable cells in the Goryaev chamber was counted after staining with trypan blue. A dose-dependent curve was constructed and the concentration of the drug causing the death of 50% of the cells, CD 50 (toxic dose) was determined.
Для оценки анти-ВИЧ активности соединения клетки МТ-4 (концентрация 2•106 клеток/мл) инфицировали штаммом ВИЧ-1/ЭВК с множественностью заражения 0,2-0,5 инфекционных единиц на клетку. После адсорбции вируса в течение 1 часа при 37oС инфицированные и контрольные клетки (без вируса) разводили ростовой культуральной средой до посевной концентрации 5•105 клеток/мл и вносили в лунки 96-луночных культуральных планшетов. Затем в соответствующие лунки вносили растворы исследуемого соединения (по три лунки на каждое разведение). Конечная концентрация исследуемых препаратов в клеточной суспензии составляла от 0,1 до 100 мкг/мл.To evaluate the anti-HIV activity of the compound, MT-4 cells (concentration of 2 × 10 6 cells / ml) were infected with an HIV-1 / EVA strain with a multiplicity of infection of 0.2-0.5 infectious units per cell. After adsorption of the virus for 1 hour at 37 ° C, infected and control cells (without virus) were diluted with growth culture medium to an inoculum concentration of 5 × 10 5 cells / ml and introduced into wells of 96-well culture plates. Then, the solutions of the test compound (three wells for each dilution) were added to the corresponding wells. The final concentration of the studied drugs in the cell suspension ranged from 0.1 to 100 μg / ml.
Ингибирующий эффект соединения оценивали на 4-е сутки культивирования измерением количества вирусного антигена - вирусоспецифического белка р24 - иммуноферментным методом. Кроме того, определяли долю жизнеспособных клеток после окрашивания трипановым синим путем подсчета в камере Горяева. На основе полученных экспериментальных данных строили дозазависимые кривые и определяли количественные характеристики ингибирования: ID50 - концентрацию соединения, на 50% подавляющую продукцию вируса или обеспечивающую 50% защиту клеток от гибели вследствие инфекции; ID90 - концентрацию соединения, на 90% подавляющую продукцию вируса или обеспечивающую 90% защиту клеток от гибели вследствие инфекции; IS - индекс селективности - отношение токсичной дозы CD50 к его эффективной дозе ID50. Результаты проведенных исследований приведены в таблице.The inhibitory effect of the compound was evaluated on the 4th day of cultivation by measuring the amount of viral antigen - virus-specific protein p24 - enzyme immunoassay. In addition, the proportion of viable cells after staining with trypan blue was determined by counting in a Goryaev chamber. Based on the obtained experimental data, dose-dependent curves were constructed and quantitative characteristics of inhibition were determined: ID 50 — concentration of the compound, 50% suppressing virus production or providing 50% protection of cells from death due to infection; ID 90 - the concentration of the compound, 90% suppressing the production of the virus or providing 90% protection of cells from death due to infection; IS - selectivity index - the ratio of the toxic dose of CD 50 to its effective dose ID 50 . The results of the studies are shown in the table.
Установлено, что для гликопептида (Iб) 50%-ная цитотоксическая доза (СD50) (вызывающая 50% гибель клеток) составила 270 мкг/мл (198 мкМ). Данное соединение является ~ в 50-55 раз менее токсичным веществом, чем АЗТ (CD50= 3,5 мкМ) [8] и проявляет выраженную анти-ВИЧ-1 активность, с высокой эффективностью ингибируя накопление вирусоспецифического белка р24 (ID50=3 мкг/мл, что соответствует 2,2 мкМ). 90%-ное подавление репродукции вируса наблюдается при концентрации гликопептида (Iб) 100 мкг/мл (ID90=100 мгк/мл). В данной концентрации анти-ВИЧ активность (ингибирование р24) препарата (Iб) превосходит анти-ВИЧ эффект ГК и аналогична активности АЗТ в лечебной дозе (0,1 мкг/мл) (см. таблицу). В диапазоне концентраций от 0,1 до 100 мкг/мл данное соединение не является токсичным для клеток (см. таблицу). Кроме того, оказалось, что индекс селективности данного соединения IS=90, что существенно выше такового для ГК (IS=4,4-24). В концентрации 100 мкг/мл гликопептид (Iб) также превосходит ГК по проценту ингибирования вирусоспецифического белка р24 (см. таблицу).It was found that for glycopeptide (IB), a 50% cytotoxic dose (CD 50 ) (causing 50% cell death) was 270 μg / ml (198 μM). This compound is ~ 50-55 times less toxic than AZT (CD 50 = 3.5 μM) [8] and exhibits pronounced anti-HIV-1 activity, inhibiting the accumulation of p24 virus-specific protein with high efficiency (ID 50 = 3 μg / ml, which corresponds to 2.2 μM). 90% inhibition of viral reproduction is observed at a concentration of glycopeptide (IB) of 100 μg / ml (ID 90 = 100 mg / ml). At this concentration, the anti-HIV activity (inhibition of p24) of the preparation (Ib) exceeds the anti-HIV effect of HA and is similar to the activity of AZT at a therapeutic dose (0.1 μg / ml) (see table). In the concentration range from 0.1 to 100 μg / ml, this compound is not toxic to cells (see table). In addition, it turned out that the selectivity index of this compound is IS = 90, which is significantly higher than that for HA (IS = 4.4-24). At a concentration of 100 μg / ml, the glycopeptide (IB) also surpasses HA in the percentage of inhibition of the virus-specific protein p24 (see table).
Синтез гликопептида (Iб) проводили путем конденсации ГК (94±2% чистоты) с трет-бутиловым эфиром S-бензил-L-цистеина методом активированных эфиров с помощью N, N'-дициклогексилкарбодиимида (DСС)-N-гидроксисукцинимида (HOSu). Выход карбоксизащищенного гликопептида (Iа) после очистки колоночной хроматографией (КХ) на силикагеле (СГ) составил 60%. The synthesis of glycopeptide (IB) was carried out by condensation of HA (94 ± 2% purity) with S-benzyl-L-cysteine tert-butyl ether by the method of activated esters with N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) -N-hydroxysuccinimide (HOSu). The yield of carboxy-protected glycopeptide (Ia) after purification by column chromatography (KX) on silica gel (SG) was 60%.
При обработке гликопептида (Iа) раствором СF3СООН в хлористом метилене при 20-22oС получали целевой продукт (Iб) с выходом 53% после очистки КХ на СГ.When glycopeptide (Ia) was treated with a solution of CF 3 COOH in methylene chloride at 20-22 ° C, the desired product (Ib) was obtained with a yield of 53% after purification of CH on SG.
Сущность технического решения иллюстрируется следующими примерами. The essence of the technical solution is illustrated by the following examples.
Пример 1. Синтез гликопептида (Iб). Example 1. The synthesis of glycopeptide (IB).
а) К раствору 1,64 г (2 ммоль) глицирризиновой кислоты в 20 мл диоксана при 0oС прибавили 1,2 г (ммоль) N-гидроксисукцинимида, 1,2 г (ммоль) N,N'-дициклогексилкарбодиимида и перемешивали смесь при 0 - 5oС 2 ч. Отфильтровали осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату прибавили 2,12 г (7 ммоль) трет-бутилового эфира S-бензил-L-цистеина и 1,3 мл триэтиламина в 30 мл диоксана. Смесь выдержали с периодическим перемешиванием при 20-22oС 18 ч, разбавили холодной водой и подкислили лимонной кислотой до рН~4. Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Получили 2,36 г продукта (Iа), который хроматографировали на колонке с СГ, элюируя смесью хлороформа-метанола-воды, 300: 10:1, 200:10:1 и 100:10:1 (v%). Смесью 200:10:1 вымыли 1,58 г (60%) гомогенного по ТСХ карбоксизащищенного гликопептида (Iа). Rf 0,33 (хлороформ-метанол-вода, 45:10:1). [α]
ИК-спектр, ν, см-1: 3200-3600 (ОН, NH); 1740 (COOR); 1670 (С11=О); 1540 (CONH); 1500 (Ph). УФ-спектр, λmax (МеОН), нм (lg ε): 245 (4.40). Спектр ЯМР 13С (DMF-d7, δ, м. д. ): 199,69 (С11); 178,55 (С30); 170,53 (С13); 127,48 (С12); 105,04 (С1'); 104,27 (Cl''); 89,06 (C3); 82,30 (С2'); 169,85 (С6'); 169,79 (С6''); 76,75 (С5'); 76,18 (С5''); 75,17 (C3''); 73,11 (С4'); 72,79 (С4''); 62,03 (С9); 55,37 (С5); 49,0 (С18); 45,64 (С14); 39,84 (С1); 169,93; 170,00; 163,22; 163,03; 162,83; 162,45; 138,94; 138,86; 129,56; 128,98 (С6H5). Спектр ЯМР 1H (DMF-d7, δ, м.д.): 0,78; 0,84; 1,06; 1,08; 1,16; 1,26 (все с, 7 СН3, 21 Н); 1,38; 1,44 (оба с, 9 СН3, 27 Н, трет-бутил); 5,50 (= C12-Н); 7,20-7,40 (м, Н аром.).IR spectrum, ν, cm -1 : 3200-3600 (OH, NH); 1740 (COOR); 1670 (C 11 = O); 1540 (CONH); 1500 (Ph). UV spectrum, λ max (MeOH), nm (log ε): 245 (4.40). 13 C NMR spectrum (DMF-d 7 , δ, ppm): 199.69 (C11); 178.55 (C30); 170.53 (C13); 127.48 (C12); 105.04 (C1 '); 104.27 (Cl``); 89.06 (C3); 82.30 (C2 '); 169.85 (C6 '); 169.79 (C6``); 76.75 (C5 '); 76.18 (C5``); 75.17 (C3``); 73.11 (C4 '); 72.79 (C4``); 62.03 (C9); 55.37 (C5); 49.0 (C18); 45.64 (C14); 39.84 (C1); 169.93; 170.00; 163.22; 163.03; 162.83; 162.45; 138.94; 138.86; 129.56; 128.98 (C 6 H 5 ). 1 H NMR Spectrum (DMF-d 7 , δ, ppm): 0.78; 0.84; 1.06; 1.08; 1.16; 1.26 (all s, 7 CH 3 , 21 N); 1.38; 1.44 (both s, 9 CH 3 , 27 N, tert-butyl); 5.50 (= C 12 -H); 7.20-7.40 (m, N arom.).
Найдено, %: N 2,3. С84Н119N3О19S3. Вычислено, %: N 2,7. М.в. 1570,90.Found,%: N 2,3. C 84 H 119 N 3 O 19 S 3 . Calculated,%: N 2.7. M.V. 1570.90.
б) 0,68 г (0,5 ммоль) гликопептида (Iа) обработали раствором СF3СООН в хлористом метилене (2 мл/20 мл) при 20-22oС, упарили досуха и хроматографировали на колонке с СГ, элюируя смесью хлороформ-метанол-вода, 100:10:1, 50: 10: 1, 25: 10:1 (v%). Выход гомогенного по ТСХ гликопептида (Iб) 0,32 г (53%) (аморфное вещество желтоватого цвета), [α]
ИК-спектр, ν, см-1: 3600-3200 (ОН, NH); 1710 (СООН); 1670 (С11=О); 1550 (CONH); 1510 (Ph). УФ-спектр, λmax (МеОН), нм (lg ε): 250 (4,5). Спектр ЯМР 13С (δ, м.д., ацетон-d6): 199,04 (С11); 177,04 (С30); 171,49 (С6'); 170,73 (С6''); 172,99 (С13); 103,20 (С1'); 102,88 (Cl''); 88,10 (C3); 80,08 (С2'); 75,31 (С5'); 74,85 (С5''); 74,10 (C3'); 73,71 (C3''); 72,55 (С2''); 71,69 (С4''); 61,03 (С9); 54,26 (С5); 47,75 (С18); 45,66 (С14); 44,65 (С20); 38,84 (Cl); 36,08; 35,54; 35,33 (CH2 Bzl); 51,27; 50,78; 50,53 (α-CH L-Cys); 169,98; 169,64; 169,32 (COOH L-Cys); 137,78; 137,59; 129,96; 128,91; 128,48; 128,37; 128,13; 127,93; 127,85; 127,70; 127,25; 126,78; 126,46; 126,37 (С6Н5). Спектр ЯМР 1Н (δ, м.д., ацетон-d6): 0,78; 0,84; 1,06; 1,14; 1,36 (21 Н, 7 СН3); 5,54 (=С12-Н); 7,2-7,4 (Н аром.).IR spectrum, ν, cm -1 : 3600-3200 (OH, NH); 1710 (COOH); 1670 (C 11 = O); 1550 (CONH); 1510 (Ph). UV spectrum, λ max (MeOH), nm (log ε): 250 (4.5). 13 C NMR Spectrum (δ, ppm, acetone-d 6 ): 199.04 (C11); 177.04 (C30); 171.49 (C6 '); 170.73 (C6``); 172.99 (C13); 103.20 (C1 '); 102.88 (Cl``); 88.10 (C3); 80.08 (C2 '); 75.31 (C5 '); 74.85 (C5``); 74.10 (C3 '); 73.71 (C3``); 72.55 (C2``); 71.69 (C4``); 61.03 (C9); 54.26 (C5); 47.75 (C18); 45.66 (C14); 44.65 (C20); 38.84 (Cl); 36.08; 35.54; 35.33 (CH 2 Bzl); 51.27; 50.78; 50.53 (α-CH L-Cys); 169.98; 169.64; 169.32 (COOH L-Cys); 137.78; 137.59; 129.96; 128.91; 128.48; 128.37; 128.13; 127.93; 127.85; 127.70; 127.25; 126.78; 126.46; 126.37 (C 6 H 5 ). 1 H NMR Spectrum (δ, ppm, acetone-d 6 ): 0.78; 0.84; 1.06; 1.14; 1.36 (21 N, 7 CH 3 ); 5.54 (= C 12 -H); 7.2-7.4 (N arom.).
Пример 2. Изучение анти-ВИЧ активности соединения (Iб). Example 2. The study of anti-HIV activity of the compound (IB).
Цитотоксичность исследуемого соединения оценивали на культуре перевиваемых Т-лимфоцитов человека (линия МТ-4). Препарат растворяли в ДМСО и в соответствующих разведениях вносили в лунки 96-луночных планшетов (по три на каждое разведение) при рассеве клеток. Посевная концентрация клеток составляла 0,5•106 клеток/мл. Клетки культивировали в 96-луночных планшетах для культур клеток фирмы "Costar" (США) на ростовой питательной среде (среда RPMI-1640 с добавлением 10% сыворотки плода коровы, 0,06% L-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина) при 37oС и 5% СО2 в течение 4 суток.The cytotoxicity of the test compound was evaluated on a culture of transplantable human T-lymphocytes (line MT-4). The drug was dissolved in DMSO and in the appropriate dilutions were added to the wells of 96-well plates (three for each dilution) during cell sieving. The inoculum cell concentration was 0.5 x 10 6 cells / ml. Cells were cultured in 96-well cell culture plates from Costar (USA) on growth medium (RPMI-1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum, 0.06% L-glutamine, 100 μg / ml gentamicin) at 37 o C and 5% CO 2 for 4 days.
По окончании инкубации подсчитывали долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания трипановым синим. Строили дозазависимую кривую и определяли концентрацию соединений, вызывающую гибель 50% клеток, CD50.At the end of the incubation, the fraction of viable cells in the Goryaev chamber was counted after staining with trypan blue. A dose-dependent curve was constructed and the concentration of compounds causing the death of 50% of the cells, CD 50 , was determined.
Для оценки анти-ВИЧ активности соединения (Iб) клетки МТ-4 (концентрация 2•106 клеток/мл) инфицировали штаммом ВИЧ-1/ЭВК с множественностью заражения 0,2-0,5 инфекционных единиц на клетку. После адсорбции вируса в течение 1 ч при 37oС инфицированные и контрольные клетки (без вируса) разводили ростовой культуральной средой до посевной концентрации 5•105 клеток/мл и вносили в лунки 96-луночных культуральных планшетов. Затем в соответствующие лунки вносили растворы исследуемого соединения (по три лунки на каждое разведение) и далее культивировали как описано выше. В качестве препаратов сравнения использовали очищенную глицирризиновую кислоту (95%) (ГК) - нативный гликозид солодкового корня в концентрации 100 мкг/мл и азидотимидин (АЗТ) (зидовудин) - известный анти-ВИЧ препарат в концентрации 0,1 мкг/мл. Конечная концентрация исследуемых препаратов в клеточной суспензии составляла от 0,1 до 100 мкг/мл.To assess the anti-HIV activity of compound (IB), MT-4 cells (concentration of 2 × 10 6 cells / ml) were infected with an HIV-1 / EVA strain with a multiplicity of infection of 0.2-0.5 infectious units per cell. After the virus was adsorbed for 1 h at 37 ° C, infected and control cells (without virus) were diluted with growth culture medium to an inoculum concentration of 5 • 10 5 cells / ml and introduced into wells of 96-well culture plates. Then, the solutions of the test compound (three wells for each dilution) were added to the corresponding wells and then cultured as described above. As reference preparations, purified glycyrrhizic acid (95%) (HA) - native licorice root glycoside at a concentration of 100 μg / ml and azidothymidine (AZT) (zidovudine) - a well-known anti-HIV drug at a concentration of 0.1 μg / ml, were used. The final concentration of the studied drugs in the cell suspension ranged from 0.1 to 100 μg / ml.
Ингибирующий эффект соединения (Iб) оценивали на 4-е сутки культивирования измерением количества вирусного антигена р24 иммуноферментным методом. Кроме того, определяли долю жизнеспособных клеток после окрашивания трипановым синим путем подсчета в камере Горяева. На основе полученных экспериментальных данных строили дозазависимые кривые и определяли количественные характеристики ингибирования: ID50 - концентрацию соединения, на 50% подавляющую продукцию вируса или обеспечивающую 50%-ную защиту клеток от гибели вследствие инфекции; ID90 - концентрацию соединения, на 90% подавляющую продукцию вируса или обеспечивающую 90%-ную защиту клеток от гибели вследствие инфекции; IS - индекс селективности - отношение токсичной дозы CD50 к его эффективной дозе ID50.The inhibitory effect of compound (IB) was evaluated on the 4th day of cultivation by measuring the amount of p24 viral antigen by the enzyme immunoassay. In addition, the proportion of viable cells after staining with trypan blue was determined by counting in a Goryaev chamber. Based on the obtained experimental data, dose-dependent curves were constructed and quantitative characteristics of inhibition were determined: ID 50 — concentration of the compound, 50% suppressing virus production or providing 50% protection of cells from death due to infection; ID 90 - the concentration of the compound, 90% suppressing the production of the virus or providing 90% protection of cells from death due to infection; IS - selectivity index - the ratio of the toxic dose of CD 50 to its effective dose ID 50 .
Установлено, что для исследуемого соединения 50%-ная цитотоксическая доза СD50 составила 270 мкг/мл (198 мкМ).It was found that for the test compound, the 50% cytotoxic dose of CD 50 was 270 μg / ml (198 μM).
Гликопептид (Iб) проявляет выраженную анти-ВИЧ-1 активность, с высокой эффективностью ингибируя накопление вирусоспецифического белка р24 (ID50=3 мкг/мл, что соответствует 2,2 мкМ). ID90=l00 мкг/мл (90%-ное подавление репродукции вируса). В данной концентрации противовирусная активность препарата аналогична активности АЗТ и превосходит ингибирующий эффект (накопление р24) ГК в равной дозе (100 мг/кг) (см. таблицу). Гликопептид (Iб) является ~ в 50-55 раз менее токсичным веществом для ВИЧ-инфицированных клеток в исследованном диапазоне концентраций (CD50=270 мкг/мл или 198 мкМ) по сравнению с АЗТ (CD50=3,5 мкМ) [8].Glycopeptide (IB) exhibits pronounced anti-HIV-1 activity, inhibiting the accumulation of p24 virus-specific protein with high efficiency (ID 50 = 3 μg / ml, which corresponds to 2.2 μM). ID 90 = l00 μg / ml (90% inhibition of virus reproduction). At this concentration, the antiviral activity of the drug is similar to that of AZT and exceeds the inhibitory effect (accumulation of p24) of HA in an equal dose (100 mg / kg) (see table). Glycopeptide (IB) is ~ 50-55 times less toxic for HIV-infected cells in the studied concentration range (CD 50 = 270 μg / ml or 198 μM) compared with AZT (CD 50 = 3.5 μM) [8 ].
Индекс селективности гликопептида (Iб) или химиотерапевтический индекс IS= 90 (по ингибированию р24 ВИЧ-1), что существенно выше такового для глицирризиновой кислоты (IS=4,4-24) [10]. Glycopeptide selectivity index (Ib) or chemotherapeutic index IS = 90 (for p24 inhibition of HIV-1), which is significantly higher than that for glycyrrhizic acid (IS = 4.4-24) [10].
ЛИТЕРАТУРА
1. E. De Clerq. New selective antiviral agents active against the AIDS virus.// Trends Pharmacol. Sci, 1987, v. 8, N 9, р. 339-345.LITERATURE
1. E. De Clerq. New selective antiviral agents active against the AIDS virus.// Trends Pharmacol. Sci, 1987, v. 8, N 9, p. 339-345.
2. E. De Clerq. Toward improved anti-HIV chemotherapy: therapeutic strategies for interferon with HIV infections. //J. Med. Chem., 1995, v. 38, N 14, p. 2491-2517. 2. E. De Clerq. Toward improved anti-HIV chemotherapy: therapeutic strategies for interferon with HIV infections. // J. Med. Chem., 1995, v. 38, N 14, p. 2491-2517.
3. A. J.Vlietinck, T. De Bruyne, S.Apers and L.A.Pieters. Plant-Derived Leading Compounds for Chemotherapy of Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection. //Planta Medica, 1998, v. 64, p. 97-109. 3. A. J. Vlietinck, T. De Bruyne, S. Apers and L. A. Pieters. Plant-Derived Leading Compounds for Chemotherapy of Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection. // Planta Medica, 1998, v. 64, p. 97-109.
4. M. Ito, H.Nakashima, M.Baba, R.Pauwels, E. De Clerq, Sh. Shigeta and N. Yamamoto. Inhibitory effect of glycyrrhizin on the in vitro infectivity and cytopathic activity of the human immunodeficiency virus [HIV (HTLV-III/LAV)]. //Antiviral Res., 1987, v. 7, p. 127-137. 4. M. Ito, H. Nakashima, M. Baba, R. Powels, E. De Clerq, Sh. Shigeta and N. Yamamoto. Inhibitory effect of glycyrrhizin on the in vitro infectivity and cytopathic activity of the human immunodeficiency virus [HIV (HTLV-III / LAV)]. // Antiviral Res., 1987, v. 7, p. 127-137.
5. M. Ito, A. Sato, K.Hirabayashi, F.Tanabe, Sh.Shigeta, M.Baba, E. De Clerq, H. Nakashima and N. Yamamoto. Mechanism of inhibitory effect of glycyrrhizin on replication of human immunodeficiency virus (HIV). // Antiviral Res., 1988, v. 10, p. 289-298. 5. M. Ito, A. Sato, K. Hirabayashi, F. Tanabe, Sh. Shigeta, M. Baba, E. De Clerq, H. Nakashima and N. Yamamoto. Mechanism of inhibitory effect of glycyrrhizin on replication of human immunodeficiency virus (HIV). // Antiviral Res., 1988, v. 10, p. 289-298.
6. Г. А. Толстиков, Л.А.Балтина, Э.Э.Шульц, А.Г.Покровский. Глицирризиновая кислота. //Биоорганическая химия, 1997, т. 23, 9, с. 691-709. 6. G. A. Tolstikov, L. A. Baltina, E. E. Schulz, A. G. Pokrovsky. Glycyrrhizic acid. // Bioorganic chemistry, 1997, v. 23, 9, p. 691-709.
7. О. А. Плясунова. Скрининг и изучение препаратов - ингибиторов вируса иммунодефицита человека. Дисс. канд. биол. наук. Кольцово, 1992, 55 с. 7. O. A. Plyasunova. Screening and study of drugs - inhibitors of the human immunodeficiency virus. Diss. Cand. biol. sciences. Koltsovo, 1992, 55 p.
8. О.А.Плясунова, И.Н.Егоричева, Н.В.Федюк, А.Г.Покровский, Л.А.Балтина, Ю. И. Муринов, Г.А.Толстиков. Изучение анти-ВИЧ активности β-глицирризиновой кислоты. //Вопросы вирусол., 1992, 5 - 6, с. 235-238. 8. O. A. Plyasunova, I. N. Egoricheva, N. V. Fedyuk, A. G. Pokrovsky, L. A. Baltina, Yu. I. Murinov, G. A. Tolstikov. The study of anti-HIV activity of β-glycyrrhizic acid. // Questions of virusol., 1992, 5-6, p. 235-238.
9. М. Д. Машковский. Лекарственные средства. Пособие для врачей. Изд. 14-е, т. 2. Москва: "Новая Волна", 2000, с. 330. 9. M. D. Mashkovsky. Medicines A manual for doctors. Ed. 14th, vol. 2. Moscow: New Wave, 2000, p. 330.
10. О. А.Плясунова. Скрининг и изучение препаратов - ингибиторов вируса иммунодефицита человека. Дисс. канд. биол. наук в форме научного доклада. Кольцово, 1992, 55 с. 10. O. A. Plyasunova. Screening and study of drugs - inhibitors of the human immunodeficiency virus. Diss. Cand. biol. sciences in the form of a scientific report. Koltsovo, 1992, 55 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001108620/04A RU2198177C2 (en) | 2001-03-30 | 2001-03-30 | Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001108620/04A RU2198177C2 (en) | 2001-03-30 | 2001-03-30 | Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2198177C2 true RU2198177C2 (en) | 2003-02-10 |
RU2001108620A RU2001108620A (en) | 2003-02-20 |
Family
ID=20247853
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001108620/04A RU2198177C2 (en) | 2001-03-30 | 2001-03-30 | Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2198177C2 (en) |
-
2001
- 2001-03-30 RU RU2001108620/04A patent/RU2198177C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
A.J.Vlietinck. Planta Medica, 1998, 64, p.97-109. M.Jto, A.Sato. Antiviral Res., 1988, 10, p.289-298. Толстиков Г.А. и др. Биоорганическая химия, 1997, т. 23, №9, с. 691-709. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ogata et al. | HIV-1 reverse transcriptase inhibitor from Phyllanthus niruri | |
Baltina | Chemical modification of glycyrrhizic acid as a route to new bioactive compounds for medicine | |
AU606391B2 (en) | 3'-azido-2',3'-dideoxyuridine anti-retroviral composition | |
RU2136692C1 (en) | Ureido-derivatives of naphthalenephosphonic acids or their pharmaceutically acceptable salts and pharmaceutical composition on said | |
CA2189358A1 (en) | Increased bioavailability of biologically active compounds by linking to polypyrrolecarboxamidonaphthalene derivatives | |
EP1140846B1 (en) | Aspartic protease inhibitors | |
WO2014154131A1 (en) | Caffeoyl substituted pentacyclic triterpene derivative and use thereof | |
DK156252B (en) | METHOD OF ANALOGUE FOR THE PREPARATION OF DI, TRIAL OR TETRAPEPTIDE DERIVATIVES OR SALTS THEREOF | |
WO2003053989A1 (en) | Masked phosphate containing nucleoside derivatives and their use as antivirals | |
KR0145412B1 (en) | Anti-inflammatory and/or anti-allergic composition | |
Lee et al. | Anti-HIV-1 efficacy of extracts from medicinal plants | |
Baltina et al. | Synthesis and anti-HIV-1 activity of new conjugates of 18 β-and 18 α-glycyrrhizic acids with aspartic acid esters | |
EP1868613A2 (en) | Polymorphs of 3-o-(3',3'-dimethylsuccinyl) betulinic acid di-n-methyl-d-glucamine | |
JP3769011B2 (en) | Use of inositol triphosphates in pharmaceutical preparations | |
RU2198177C2 (en) | Glycyrrhizic acid glycopeptide with s-benzyl-l-cysteine eliciting anti-hiv activity | |
KR20030078906A (en) | Compounds comprising disulfide-containing peptides and nitrogenous bases, and medical uses thereof | |
AU635057B2 (en) | Antiviral compositions containing sulfoquinovosyl glycerol derivatives and analogs thereof and methods for using the same | |
RU2211843C1 (en) | N'-{n-[3-oxo-20[29]lupen-28-oyl]-9-aminononanoyl}-3-amino-3-phenylpropionic acid eliciting immuno-stimulating and antiviral activity | |
RU2315058C1 (en) | Glycyrrhizic acid glycopeptide with glycyl-l-phenylalanine eliciting anti-hiv-1 activity | |
AU2004276307A1 (en) | Novel triterpene derivatives, preparation thereof and use thereof | |
RU2199547C2 (en) | Glycyrrhizic acid amide with 5-aminouracil eliciting anti-hiv-activity | |
RU2475498C1 (en) | Novel hemin derivatives having antibacterial and antiviral activity | |
RU2429227C1 (en) | ACETYLHYDRAZONE 1-CYANO-19β,28-EPOXY-2,3-SECO-18α-OLEAN-3-AL, EXHIBITING INHIBITING ACTIVITY TOWARDS VESICULAR STOMATITIS VIRUS "INDIANA" STRAIN | |
RU2277908C1 (en) | Water soluble agent having antiviral activity based on silver compound with cystine and method for production thereof | |
RU2418795C2 (en) | Dioxolane derivatives for cancer treatment |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040331 |