RU2193567C2 - Protected calcitonine peptides - Google Patents

Protected calcitonine peptides Download PDF

Info

Publication number
RU2193567C2
RU2193567C2 RU2000123696/04A RU2000123696A RU2193567C2 RU 2193567 C2 RU2193567 C2 RU 2193567C2 RU 2000123696/04 A RU2000123696/04 A RU 2000123696/04A RU 2000123696 A RU2000123696 A RU 2000123696A RU 2193567 C2 RU2193567 C2 RU 2193567C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
leu
lys
thr
boc
gln
Prior art date
Application number
RU2000123696/04A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2000123696A (en
Inventor
В.В. Самуков
П.И. Поздняков
А.Н. Сабиров
Original Assignee
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Общество с ограниченной ответственностью "Фармсинтез"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор", Общество с ограниченной ответственностью "Фармсинтез" filed Critical Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор"
Priority to RU2000123696/04A priority Critical patent/RU2193567C2/en
Publication of RU2000123696A publication Critical patent/RU2000123696A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2193567C2 publication Critical patent/RU2193567C2/en

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry of proteins, biochemistry. SUBSTANCE: invention relates to compounds of the formula: X1-Leu-His-Lys(R1)-Leu-Gln-Thr-(R2)-Pro-Y where X1 means H-, A1O-CO-, H-Lys-(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-, A1O-CO-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-; Y means OH, -Arg-Thr-Asn-Thr -Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2; A1 means tert. -butyl; R1 is protective group of the formula B1O-CO- for epsilon-amino-group of Lys residue; R2 is protective group of the formula B2O-CO-for hydroxyl-group of Tyr residue; R3 is protective group of the formula B3O-CO- for epsilon-amino-group of Lys residue; R4- is protective group for gammacarboxyl group of Glu residue being B1, B2, B3, B4 can be similar or different and they are taken among the order: 2-alkylsulfonylethyl, 2-phenylsulfonyl- -ethyl, 2-(substituted aryl)-sulfonylethyl. The use of indicated protected peptides ensures to simplify synthesis of salmon calcitonine. EFFECT: simplified method of synthesis. 2 tbl, 10 ex

Description

Изобретение относится к новым исходным соединениям, применяемым для получения кальцитонина лосося и его аналогов, а именно к защищенным пептидам общей формулы
X1-Leu-His-Lys(R1)-Leu-Gln-Thr-Tyr(R2)-Pro-Y,
где Х1 - Н-, А1O-СО-, H-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-, A1O-CO-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-;
Y - -ОН, -Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2;
А1 - трет-бутил;
R1 - защитная группа формулы В1O-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys,
R2 - защитная группа формулы В2O-СО- для гидроксильной группы остатка Тyr,
R3 - защитная группа формулы В3O-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys,
В4 - защитная группа для гамма-карбоксильной группы остатка Glu,
причем В1, В2, В3 и В4 могут быть одинаковыми или разными и выбираются из ряда: 2-алкилсульфонилэтил, 2-фенилсульфонилэтил, 2-(замещенный арил)сульфонилэтил.The invention relates to new starting compounds used to obtain salmon calcitonin and its analogues, namely, protected peptides of the general formula
X 1 -Leu-His-Lys (R 1 ) -Leu-Gln-Thr-Tyr (R 2 ) -Pro-Y,
where X 1 is H-, A 1 O-CO-, H-Lys (R 3 ) -Leu-Ser-Gln-Glu (B 4 ) -, A 1 O-CO-Lys (R 3 ) -Leu-Ser -Gln-Glu (B 4 ) -;
Y is —OH, —Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 ;
A 1 is tert-butyl;
R 1 is a protecting group of formula B 1 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue,
R 2 is a protecting group of the formula B 2 O — CO— for the hydroxyl group of the Tyr residue,
R 3 is a protecting group of formula B 3 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue,
In 4 - a protective group for the gamma-carboxyl group of the residue Glu,
moreover, B 1 , B 2 , B 3, and B 4 may be the same or different and are selected from the series: 2-alkylsulfonylethyl, 2-phenylsulfonylethyl, 2- (substituted aryl) sulfonylethyl.

Гипокальциемический гормон кальцитонин является важнейшим лекарственным средством, применяемым для лечения заболеваний, связанных с нарушением обмена кальция в организме: гиперкальциемии различного происхождения, острой дистрофии костей, остеопороза, болезни Паже, замедленного сращивания костей после переломов или хирургических операций. В медицинской практике наибольшее применение находит кальцитонин лосося, по биологической активности более чем в 40 раз превосходящий кальцитонины человека и млекопитающих. The hypocalcemic hormone calcitonin is the most important drug used to treat diseases associated with impaired calcium metabolism in the body: hypercalcemia of various origins, acute bone degeneration, osteoporosis, Paget's disease, delayed bone fusion after fractures or surgical operations. In medical practice, salmon calcitonin is most widely used, with biological activity more than 40 times that of human and mammalian calcitonins.

Кальцитонин лосося представляет собой полипептид, состоящий из 32 аминокислотных остатков, содержащий дисульфидный мостик между остатками цистеина в положениях 1 и 7 и амидированный С-концевой остаток пролина:

Figure 00000001

Основным источником кальцитонина медицинского назначения является химический синтез. Для химического синтеза кальцитонина используются два основных подхода, существующих в химии пептидов: твердофазный, или синтез на нерастворимом полимерном носителе, и жидкофазный, или синтез в растворе. Несмотря на значительный прогресс, достигнутый в последние годы, твердофазный синтез по-прежнему остается мало приспособленным для получения пептидов в больших количествах, требуемых для клинических испытаний и серийного производства лекарственных средств. В этом отношении к недостаткам твердофазного синтеза можно отнести: а) необходимость применения полной постоянной защиты три функциональных аминокислот; б) использование больших избытков защищенных аминокислот, как правило, не подлежащих регенерации; в) ограниченные возможности контроля хода синтеза, невозможность очистки промежуточных продуктов; г) трудность масштабирования; д) опасность загрязнения целевого пептида близкими по структуре примесями, трудоемкость и многостадийность очистки конечного продукта; е) высокую стоимость исходных материалов - защищенных аминокислот, реагентов и полимеров.Salmon calcitonin is a polypeptide consisting of 32 amino acid residues, containing a disulfide bridge between the cysteine residues at positions 1 and 7 and the amidated C-terminal proline residue:
Figure 00000001

The main source of medical calcitonin is chemical synthesis. For the chemical synthesis of calcitonin, two main approaches are used that exist in the chemistry of peptides: solid-phase, or synthesis on an insoluble polymer carrier, and liquid-phase, or synthesis in solution. Despite the significant progress achieved in recent years, solid-phase synthesis still remains poorly adapted to produce peptides in large quantities required for clinical trials and serial production of drugs. In this regard, the disadvantages of solid-phase synthesis include: a) the need to use full permanent protection of three functional amino acids; b) the use of large excesses of protected amino acids, as a rule, not subject to regeneration; c) limited ability to control the course of synthesis, the inability to purify intermediate products; d) the difficulty of scaling; d) the danger of contamination of the target peptide with impurities close in structure, the complexity and multi-stage purification of the final product; e) the high cost of the starting materials - protected amino acids, reagents and polymers.

Поэтому жидкофазный синтез, несмотря на относительно высокую трудоемкость, является основным методом пилотного и промышленного производства пептидов, так как он обеспечивает тактическую гибкость в выборе схем защиты (от минимальной до полной) и методов конденсации, полный контроль хода синтеза, возможность очистки промежуточных продуктов, а также возможность масштабирования всего процесса. Однако эффективность процесса, выходы и качество конечных продуктов существенным образом зависят от оптимальности тактической схемы синтеза. Therefore, liquid-phase synthesis, despite the relatively high complexity, is the main method for pilot and industrial production of peptides, since it provides tactical flexibility in the choice of protection schemes (from minimal to complete) and condensation methods, full control over the synthesis progress, the ability to purify intermediate products, and also the ability to scale the entire process. However, the efficiency of the process, yields and quality of the final products substantially depend on the optimality of the tactical synthesis scheme.

Синтез кальцитонина в растворе осуществляют путем сборки его полной последовательности из соответствующим образом защищенных пептидных сегментов, удаления защитных групп, последующей очистки и выделения целевого продукта. Защищенные пептидные сегменты, в свою очередь, синтезируют из защищенных аминокислот и/или более коротких пептидных сегментов. Аминокислотные последовательности сегментов, природа и расположение в их структуре защитных групп, порядок и способы сборки из сегментов полной последовательности кальцитонина определяются выбранной тактической схемой синтеза. Чтобы схема была эффективной и масштабируемой, при ее разработке необходимо следовать некоторым общим правилам: а) разбиение на сегменты нужно проводить таким образом, чтобы риск рацемизации при конденсации сегментов в единую цепь был минимальным; б) сегменты должны быть достаточно длинными, чтобы уменьшить число последовательных стадий при сборке молекулы кальцитонина; в) постоянные и временные защитные группы сегментов должны, с одной стороны, обеспечить необходимый уровень защиты от побочных реакций при синтезе сегментов и последующей их конденсации в единую цепь, с другой стороны, легко удаляться на финальной стадии процесса без повреждения структуры целевого продукта; г) защищенные пептидные сегменты должны быть хорошо растворимы в растворителях, используемых для конденсации сегментов. Эти требования во многом являются противоречащими друг другу, поэтому добиться их полного выполнения на практике очень трудно. The synthesis of calcitonin in solution is carried out by assembling its complete sequence from suitably protected peptide segments, removing the protective groups, subsequent purification and isolation of the target product. Protected peptide segments, in turn, are synthesized from protected amino acids and / or shorter peptide segments. The amino acid sequences of the segments, the nature and location of the protective groups in their structure, the order and methods of assembling the complete sequence of calcitonin from the segments are determined by the chosen tactical synthesis scheme. In order to make the scheme efficient and scalable, it is necessary to follow some general rules during its development: a) segmentation should be carried out in such a way that the risk of racemization during condensation of segments into a single chain is minimal; b) the segments should be long enough to reduce the number of successive stages in the assembly of the calcitonin molecule; c) permanent and temporary protective groups of segments should, on the one hand, provide the necessary level of protection against adverse reactions in the synthesis of segments and their subsequent condensation into a single chain, on the other hand, can be easily removed at the final stage of the process without damaging the structure of the target product; d) protected peptide segments must be readily soluble in the solvents used to condense the segments. These requirements are largely contradictory to each other, so it is very difficult to achieve their full implementation in practice.

Структурной особенностью молекулы кальцитонина лосося является наличие всего трех аминокислотных остатков (кроме двух остатков Cys), требующих обязательной постоянной защиты, - Lys11, Lys18 и Glu15, высокое содержание гидроксиаминокислот, а также наличие остатков His и Arg, постоянная защита которых при жидкофазном синтезе не является строго обязательной. Это открывает возможности для осуществления синтеза кальцитонина с применением разнообразных схем защиты - от минимальной до полной.The structural feature of the salmon calcitonin molecule is the presence of only three amino acid residues (except for two Cys residues) requiring constant protection, Lys 11 , Lys 18 and Glu 15 , a high content of hydroxy amino acids, as well as the presence of His and Arg residues, whose constant protection during liquid phase synthesis is not strictly required. This opens up possibilities for the synthesis of calcitonin using a variety of protection schemes - from minimal to complete.

Известны способы получения кальцитонина лосося и его аналогов из пептидных сегментов с полной постоянной защитой бензильного типа (патент Швейцарии 624660, Cl. C 07 C 103/52) и трет-бутильного типа (патент Японии 0616694, Cl. C 07 K 7/06; Европейский патент 606816, Cl. C 07 K 001/06). Полная защита позволяет минимизировать возможные побочные реакции при сборке последовательности кальцитонина. Вместе с тем, отщепление большого числа защитных групп кислотными реагентами по окончании синтеза само по себе часто является источником побочных реакций. Кроме того, растворимость полностью защищенных пептидов в органических растворителях существенно снижается с увеличением их длины. Это затрудняет проведение синтеза и делает почти невозможными очистку и контроль чистоты промежуточных продуктов. Тем самым теряется одно из основных преимуществ жидкофазного синтеза пептидов. Known methods for producing salmon calcitonin and its analogues from peptide segments with full permanent protection of benzyl type (Swiss patent 624660, Cl. C 07 C 103/52) and tert-butyl type (Japanese patent 0616694, Cl. C 07 K 7/06; European Patent 606816, Cl. C 07 K 001/06). Complete protection minimizes potential adverse reactions during assembly of the calcitonin sequence. However, the removal of a large number of protective groups with acid reagents at the end of the synthesis itself is often a source of adverse reactions. In addition, the solubility of fully protected peptides in organic solvents decreases significantly with increasing length. This complicates the synthesis and makes it almost impossible to purify and control the purity of the intermediates. Thus, one of the main advantages of liquid-phase synthesis of peptides is lost.

Схемы синтеза кальцитонина и его аналогов из пептидных сегментов с минимальной постоянной защитой трет-бутильного типа, описанные, например, в статье Guttmann S., Pless J., Huguenin R.L., Sandrin E., Bossert H., Zehnder K. Helv. Chim. Acta, 1969, v. 52, p.1788-1795, в патентной заявке Германии 2025791, Cl. C 07 C, а также промежуточные (неполные) варианты постоянной защиты (например, патент Японии 0616694, Cl. C 07 К 7/06) позволяют улучшить ситуацию с растворимостью синтезируемого полипептида. Отщепление в мягких условиях небольшого числа защитных групп на финальной стадии процесса дает высокий выход целевого продукта, который не требует многостадийной очистки. Однако применение в качестве постоянной защиты кислотолабильных групп трет-бутильного типа исключает возможность одновременного использования групп аналогичного типа (например, трет-бутоксикарбонильной и трет-бутильной) в качестве высокоэффективных временных защитных групп для α-амино- и α-карбоксильных групп защищенных пептидных сегментов. Это существенно усложняет синтетические подходы к получению пептидных сегментов, перекрывающих область с 11-го по 23-й аминокислотный остаток последовательности кальцитонина лосося. Schemes for the synthesis of calcitonin and its analogues from peptide segments with minimal permanent protection of the tert-butyl type, as described, for example, in the article by Guttmann S., Pless J., Huguenin R. L., Sandrin E., Bossert H., Zehnder K. Helv. Chim. Acta, 1969, v. 52, p. 1788-1795, in German patent application 2025791, Cl. C 07 C, as well as intermediate (incomplete) options for real-time protection (for example, Japanese patent 0616694, Cl. C 07 K 7/06) can improve the solubility of the synthesized polypeptide. Cleavage under mild conditions of a small number of protective groups at the final stage of the process gives a high yield of the target product, which does not require multi-stage purification. However, the use of tert-butyl type acid labile groups as a permanent protection precludes the simultaneous use of groups of a similar type (for example, tert-butoxycarbonyl and tert-butyl) as highly effective temporary protective groups for the α-amino and α-carboxyl groups of the protected peptide segments. This significantly complicates the synthetic approaches to the preparation of peptide segments spanning the region from the 11th to the 23rd amino acid residue of the salmon calcitonin sequence.

Таким образом, разработка эффективной и масштабируемой схемы жидкофазного синтеза кальцитонина является, по существу, разработкой набора оптимально защищенных пептидных сегментов и способов их соединения в единую аминокислотную последовательность. Thus, the development of an effective and scalable scheme of liquid-phase calcitonin synthesis is essentially the development of a set of optimally protected peptide segments and methods for combining them into a single amino acid sequence.

Задачей изобретения является изыскание новых защищенных пептидов, которые можно было бы использовать в качестве исходных соединений для эффективного и масштабируемого синтеза кальцитонина лосося. The objective of the invention is the search for new protected peptides that could be used as starting compounds for efficient and scalable synthesis of salmon calcitonin.

Поставленная задача достигается тем, что предлагаются новые соединения, а именно защищенные пептиды кальцитонина общей формулы
X1-Leu-His-Lys(R1)-Leu-Gln-Thr-Tyr(R2)-Pro-Y,
где Х1 - Н-, А1O-СО-, H-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-, A1O-CO-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-;
Y - -ОН, -Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2;
А1 - трет-бутил;
R1 - защитная группа формулы В1O-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys,
R2 - защитная группа формулы В2O-СО- для гидроксильной группы остатка Тyr,
R3 - защитная группа формулы В3O-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys,
В4 - защитная группа для гамма-карбоксильной группы остатка Glu,
причем В1, В2, В3 и В4 могут быть одинаковыми или разными и выбираются из ряда: 2-алкилсульфонилэтил, 2-фенилсульфонилэтил, 2-(замещенный арил)сульфонилэтил.This object is achieved in that new compounds are proposed, namely, protected calcitonin peptides of the general formula
X 1 -Leu-His-Lys (R 1 ) -Leu-Gln-Thr-Tyr (R 2 ) -Pro-Y,
where X 1 is H-, A 1 O-CO-, H-Lys (R 3 ) -Leu-Ser-Gln-Glu (B 4 ) -, A 1 O-CO-Lys (R 3 ) -Leu-Ser -Gln-Glu (B 4 ) -;
Y is —OH, —Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 ;
A 1 is tert-butyl;
R 1 is a protecting group of formula B 1 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue,
R 2 is a protecting group of the formula B 2 O — CO— for the hydroxyl group of the Tyr residue,
R 3 is a protecting group of formula B 3 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue,
In 4 - a protective group for the gamma-carboxyl group of the residue Glu,
moreover, B 1 , B 2 , B 3, and B 4 may be the same or different and are selected from the series: 2-alkylsulfonylethyl, 2-phenylsulfonylethyl, 2- (substituted aryl) sulfonylethyl.

Предметом изобретения, таким образом, являются пептидные сегменты 16-23, 11-23, 16-32 и 11-32 (I-IV) последовательности кальцитонина лосося, имеющие защитные группы на боковых радикалах аминокислотных остатков Lys11, Lys18, Glu15 и Тyr22 (табл.1).The subject of the invention, therefore, are peptide segments 16-23, 11-23, 16-32 and 11-32 (I-IV) salmon calcitonin sequences having protective groups on the side radicals of the amino acid residues Lys 11 , Lys 18 , Glu 15 and Tyr 22 (Table 1).

Сегменты I-IV могут иметь свободную α-аминогруппу (X2 - Н) либо блокированную уретановой защитной группой (X2 - А1O-СО-), предпочтительно трет-бутоксикарбонильной (А1 - трет-бутил). Боковые защитные группы R1-R3, В4 представляют собой удаляемые основаниями группировки 2-алкил- или 2-арилсульфонилэтильного типа: карбаматные (уретановые) для остатков Lys11 и Lys18 (R1 - В1O-СО-, R3 - В3O-СО-); карбонатные для остатка Тyr22 (R2 - В2O-СО-); сложноэфирные для остатка Glu15 (В4). Применение защитных групп 2-алкил- и 2-арилсульфонилэтильного типа для блокирования функциональных групп аминокислот описано в литературе. 2-Алкил(арил)сульфонилэтильные заместители В1-В4 в соединениях I-IV могут присутствовать в различных сочетаниях, быть одинаковыми или разными.Segments I-IV may have a free α-amino group (X 2 -H) or blocked with a urethane protecting group (X 2 -A 1 O-CO-), preferably tert-butoxycarbonyl (A 1 - tert-butyl). The lateral protecting groups R 1 -R 3 , B 4 are base-removed groups of the 2-alkyl- or 2-arylsulfonylethyl type: carbamate (urethane) for residues Lys 11 and Lys 18 (R 1 - B 1 O-CO-, R 3 - In 3 O-CO-); carbonate for the remainder of Tyr 22 (R 2 —B 2 O — CO—); ester for residue Glu 15 (B 4 ). The use of protective groups of the 2-alkyl- and 2-arylsulfonylethyl type to block the functional groups of amino acids is described in the literature. 2-Alkyl (aryl) sulfonylethyl substituents B 1 -B 4 in compounds I-IV may be present in various combinations, be the same or different.

Пептидные сегменты I-IV являются новыми, не описанными ранее веществами. Peptide segments I-IV are new substances not previously described.

Для синтеза пептидных сегментов I-IV могут быть использованы приемы и методы пептидного синтеза, описанные в литературе. Сегмент I (16-23) можно синтезировать методом ступенчатого наращивания пептидной цепи от С-конца к N-концу с использованием Nα-защищенных аминокислот. В качестве временной Nα-защиты в данном случае можно применять группу, удаляемую каталитическим гидрогенолизом, например карбобензоксигруппу, либо мягким ацидолизом, например трет-бутоксикарбонильную или 4-метоксибензилоксикарбонильную. Для постоянного блокирования С-концевой карбоксильной группы синтезируемого пептида можно использовать сложноэфирную защиту, например, в виде бензилового или 2,2,2-тригалогенэтилового эфира. Для активации карбоксильных групп аминокислотных остатков, вводимых в пептидную цепь, можно использовать разнообразные методы, описанные в литературе, например метод активированных эфиров, метод смешанных ангидридов, азидный метод, карбодиимидный метод. Полученный сегмент 16-23 имеет защищенные α-амино- и α-карбоксильную группы.For the synthesis of peptide segments I-IV can be used techniques and methods of peptide synthesis described in the literature. Segment I (16-23) can be synthesized by the method of stepwise extension of the peptide chain from the C-end to the N-end using N α- protected amino acids. In this case, as a temporary N α -protection, one can use a group removed by catalytic hydrogenolysis, for example, a carbobenzoxy group, or by mild acidolysis, for example, tert-butoxycarbonyl or 4-methoxybenzyloxycarbonyl. To permanently block the C-terminal carboxyl group of the synthesized peptide, ester protection, for example, in the form of benzyl or 2,2,2-trihaloethyl ether, can be used. A variety of methods described in the literature can be used to activate the carboxyl groups of amino acid residues introduced into the peptide chain, for example, the activated ester method, the mixed anhydride method, the azide method, and the carbodiimide method. The resulting segment 16-23 has protected α-amino and α-carboxyl groups.

Для синтеза сегмента II (11-23) с полученного Nα,Cα-защищенного сегмента 16-23 удаляют Nα-защитную группу и наращивают его далее ступенчато до последовательности 11-23, как описано выше, либо конденсируют его известными способами с предварительно синтезированным сегментом 11-15 общей формулы
X2-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-OH (V),
где Х2 есть уретановая защитная группа, предпочтительно трет-бутоксикарбонильная, а R3 и В4 принимают значения, указанные выше. Удаление Cα-защиты с полученного Nα,Cα-защищенного сегмента 11-23 дает целевой Nα-защищенный сегмент II.For the synthesis of segment II (11-23), from the obtained N α , C α -protected segment 16-23, the N α -protecting group is removed and it is further increased stepwise to the sequence 11-23, as described above, or it is condensed by known methods with previously synthesized segment 11-15 of the General formula
X 2 -Lys (R 3 ) -Leu-Ser-Gln-Glu (B 4 ) -OH (V),
where X 2 is a urethane protecting group, preferably tert-butoxycarbonyl, and R 3 and B 4 are as defined above. Removal of the C α -protection from the obtained N α , C α -protected segment 11-23 gives the target N α -protected segment II.

Для синтеза сегмента III (16-32) с Nα,Cα-защищенного сегмента 16-23 удаляют Cα-защитную группу, и полученный Nα-защищенный сегмент I конденсируют известными способами с описанным в литературе сегментом 24-32 формулы
H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (VI).For the synthesis of segment III (16-32) with an N α , C α -protected segment 16-23, the C α -protected group is removed, and the obtained N α -protected segment I is condensed by known methods with the described segment 24-32 of the formula
H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (VI).

Сегмент IV (11-32) можно синтезировать двумя путями: 1) Nα-эащищенный сегмент II конденсируют с сегментом VI; 2) сегмент III со свободной α-аминогруппой конденсируют с сегментом V.Segment IV (11-32) can be synthesized in two ways: 1) N α -protected segment II is condensed with segment VI; 2) segment III with a free α-amino group is condensed with segment V.

Очевидно, что практически осуществимо получение сегментов I-1V с любыми сочетаниями заместителей В1-В4 при указанных выше значениях В1-В4. В качестве защитных групп R1-R3, В4 для сегментов I-1V могут, в частности, использоваться группы, выбранные из числа описанных в литературе (табл.2).Obviously, it is practicable to obtain segments I-1V with any combination of substituents B 1 -B 4 at the above values of B 1 -B 4 . As protective groups R 1 -R 3 , B 4 for segments I-1V, in particular, groups selected from those described in the literature can be used (Table 2).

Описанные выше сегменты I-IV могут быть использованы в качестве полупродуктов для получения кальцитонина лосося. Для синтеза полной аминокислотной последовательности кальцитонина лосося сегмент IV со свободной α-аминогруппой, полученный из сегмента II либо из сегмента III, как описано выше, конденсируют известными способами с Nα-защищенным сегментом 1-10 аминокислотной последовательности кальцитонина лосося, например с описанным в литературе пептидом формулы

Figure 00000002

С продукта конденсации удаляют Nα-Вос-защиту, например, действием трифторуксусной кислоты, и получают пептид, имеющий аминокислотную последовательность кальцитонина лосося 1-32 и содержащий четыре аминокислотных остатка, блокированных защитными группами 2-алкил(арил)сульфонилэтильного типа:
Figure 00000003

Для удаления защитных групп пептид VIII подвергают кратковременному действию разбавленного раствора основания, например обработке 0.1 н. водным раствором гидроксида натрия в течение 3-20 мин при температуре от 0 до 20oС, смесь нейтрализуют, например, добавлением избытка уксусной кислоты, после чего выделяют из полученного раствора кальцитонин лосося известными способами, например ионообменной или/и обращенно-фазовой хроматографией.Segments I-IV described above can be used as intermediates for the production of salmon calcitonin. To synthesize the complete amino acid sequence of salmon calcitonin, the free α-amino group segment IV obtained from segment II or from segment III, as described above, is condensed by known methods with the N α -protected segment 1-10 of the salmon calcitonin amino acid sequence, for example, as described in the literature peptide of the formula
Figure 00000002

N α -Boc protection is removed from the condensation product, for example, by the action of trifluoroacetic acid, and a peptide is obtained having the amino acid sequence of salmon calcitonin 1-32 and containing four amino acid residues blocked by protecting groups of the 2-alkyl (aryl) sulfonylethyl type:
Figure 00000003

To remove the protective groups, peptide VIII is subjected to a short-term action of a dilute base solution, for example, 0.1 N treatment. an aqueous solution of sodium hydroxide for 3-20 minutes at a temperature of from 0 to 20 o C, the mixture is neutralized, for example, by adding an excess of acetic acid, and then salmon calcitonin is isolated from the resulting solution by known methods, for example, ion exchange and / or reverse phase chromatography.

Сущность изобретения иллюстрируется примерами. При описании примеров используются следующие сокращения и условные обозначения:
ДМФА - диметилформамид,
ДЦГК - дициклогексилкарбодиимид,
ОБТ - 1-гидроксибензотриазол,
ТФУ - трифторуксусная кислота,
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография,
Cpsc - 2-(4-хлорфенил)сульфонилэтоксикарбонил,
Msc - 2-метилсульфонилэтоксикарбонил,
Psc - 2-фенилсульфонилэтоксикарбонил,
Pse - 2-фенилсульфонилэтил,
Tse - 2-(4-толил)сульфонилэтил,
Tce - 2,2,2-трихлорэтил.The invention is illustrated by examples. When describing the examples, the following abbreviations and conventions are used:
DMF - dimethylformamide,
DHCA - dicyclohexylcarbodiimide,
MBT - 1-hydroxybenzotriazole,
TFA - trifluoroacetic acid,
HPLC - high performance liquid chromatography,
Cpsc - 2- (4-chlorophenyl) sulfonylethoxycarbonyl,
Msc - 2-methylsulfonylethoxycarbonyl,
Psc - 2-phenylsulfonylethoxycarbonyl,
Pse - 2-phenylsulfonylethyl,
Tse - 2- (4-tolyl) sulfonylethyl,
Tce is 2,2,2-trichloroethyl.

Сокращенные обозначения аминокислот и защитных групп используются в соответствии с рекомендациями Комиссии по биохимической номенклатуре при IUPAC-IUB, опубликованными в Eur. J. Biochem., 1984, v. 138, N 1, pp. 9-37. Оптически активные аминокислоты, приведенные в описаниях примеров, по умолчанию имеют L-конфигурацию. The abbreviations for amino acids and protective groups are used in accordance with the recommendations of the Commission on Biochemical Nomenclature at IUPAC-IUB, published in Eur. J. Biochem., 1984, v. 138, N 1, pp. 9-37. The optically active amino acids shown in the descriptions of the examples have an L configuration by default.

Значения хроматографических подвижностей Rf приведены для пластинок для тонкослойной хроматографии Alufolien Kieselgel 60 F254 (Merck, ФРГ) в системах хлороформ-метанол-уксусная кислота 95:5:3 (А) или 90:10:3 (Б); этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода 60: 5: 15:10 (В). Обнаружение пятен на пластинках проводили в УФ-свете и нингидриновым реактивом после прогревания. Массы молекулярных ионов (М+H)+ измерены на времяпролетном масс-спектрометре МСБХ-1 (НПО "Электрон", Украина) или на масс-спектрометре MALDI-TOF VISION 2000 (Thermo Bioanalysis, Англия). Анализ аминокислотного состава проводили на анализаторе Biotronik LC5001 после кислотного гидролиза образцов пептидного материала в запаянных ампулах (6 н. НС1, 24 ч, 110oС).The values of the chromatographic mobilities R f are given for Alufolien Kieselgel 60 F 254 thin-layer chromatography plates (Merck, Germany) in chloroform-methanol-acetic acid systems 95: 5: 3 (A) or 90: 10: 3 (B); ethyl acetate-pyridine-acetic acid-water 60: 5: 15:10 (B). Spot detection on the plates was carried out in UV light and ninhydrin reagent after heating. Masses of molecular ions (M + H) + were measured on an MSBH-1 time-of-flight mass spectrometer (NPO Elektron, Ukraine) or on a MALDI-TOF VISION 2000 mass spectrometer (Thermo Bioanalysis, England). Analysis of the amino acid composition was carried out on a Biotronik LC5001 analyzer after acid hydrolysis of samples of the peptide material in sealed ampoules (6 N HC1, 24 h, 110 ° C).

Пример 1. Получение Boc-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OH (сегмент Iа). Example 1. Obtaining Boc-Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OH (segment Ia).

а. Вос-Рrо-ОТсе. 3.9 г Вос-Рrо-ОН растворяют в 20 мл сухого этилацетата, добавляют 50 мг 4-диметиламинопиридина и 2 мл 2,2,2-трихлорэтанола, охлаждают в ледяной бане и добавляют 4.2 г ДЦГК. Перемешивают 30 мин при 0oС и 30 мин при 20oС, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат экстрагируют 50 мл воды, 50 мл насыщенного NaHCО3 и 50 мл насыщенного NaCl, затем упаривают. Получают 6.1 г бесцветного масла, Rf 0.65-0.7 (А).a. Vos-ro-otse. 3.9 g of Boc-Pro-OH are dissolved in 20 ml of dry ethyl acetate, 50 mg of 4-dimethylaminopyridine and 2 ml of 2,2,2-trichloroethanol are added, cooled in an ice bath and 4.2 g of DCCA is added. It is stirred for 30 minutes at 0 ° C. and 30 minutes at 20 ° C. , the precipitate of dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate is extracted with 50 ml of water, 50 ml of saturated NaHCO 3 and 50 ml of saturated NaCl, then evaporated. Obtain 6.1 g of a colorless oil, R f 0.65-0.7 (A).

б. Boc-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Масло Вос-Рrо-ОТсе (пример Iа) растворяют в 30 мл 2 М НСl в уксусной кислоте, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток переупаривают с толуолом, промывают эфиром и растворяют в 50 мл ДМФА. К раствору добавляют 9.5 г Boc-Tyr(Psc)-OH, 2.0 мл N-метилморфолина и 2.2 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 3.5 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oС и 2 ч при 20oС, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату добавляют 150 мл этилацетата и экстрагируют 100 мл воды, 100 мл насыщенного NаНСО3, 100 мл 0.5 М KHSO4 и 50 мл насыщенного NaCl. Органический слой упаривают досуха и обрабатывают остаток петролейным эфиром. Получают 10.5 г бесцветного кристаллического продукта, Rf 0.7-0.75 (А); масс-спектр: (М+H)+ 724.2 (вычислено: 723.08).b. Boc-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Pro-Otse oil (Example Ia) was dissolved in 30 ml of 2 M HCl in acetic acid, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was re-evaporated with toluene, washed with ether and dissolved in 50 ml of DMF. 9.5 g of Boc-Tyr (Psc) -OH, 2.0 ml of N-methylmorpholine and 2.2 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath, and then 3.5 g of DCCA are added. It is stirred for 1.5 hours at 0 ° C and 2 hours at 20 ° C, the precipitate of dicyclohexylurea is filtered off, 150 ml of ethyl acetate are added to the filtrate and extracted with 100 ml of water, 100 ml of saturated NaHCO 3 , 100 ml of 0.5 M KHSO 4 and 50 ml of saturated NaCl. The organic layer was evaporated to dryness and the residue was taken up in petroleum ether. Obtain 10.5 g of a colorless crystalline product, R f 0.7-0.75 (A); mass spectrum: (M + H) + 724.2 (calculated: 723.08).

в. Boc-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1б) растворяют в 40 мл 2 М НСl в уксусной кислоте, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток переупаривают с толуолом, промывают эфиром и растворяют в 70 мл ДМФА. К раствору добавляют 4 г Boc-Thr-OH, 1.8 мл N-метилморфолина и 2.4 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 3.5 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oС и 3 ч при 20oС, затем обрабатывают реакционную смесь как описано в примере 1б. Получают 11 г бесцветного аморфного вещества, Rf 0.40-0.45 (А); масс-спектр: (М+Н)+ 823.5 (вычислено: 823.19).in. Boc-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 1b) was dissolved in 40 ml of 2 M HCl in acetic acid, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was re-evaporated with toluene, washed with ether and dissolved in 70 ml of DMF. 4 g of Boc-Thr-OH, 1.8 ml of N-methylmorpholine and 2.4 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath, and then 3.5 g of DCCA are added. Stirred for 1.5 hours at 0 ° C. and 3 hours at 20 ° C. , then the reaction mixture was treated as described in Example 1b. Obtain 11 g of a colorless amorphous substance, R f 0.40-0.45 (A); mass spectrum: (M + H) + 823.5 (calculated: 823.19).

г. Boc-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1в) растворяют в 50 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 11 г трифторацетата H-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 70 мл ДМФА, к раствору добавляют 3.95 г Boc-Gln-OH, 1.8 мл N-метилморфолина и 2.2 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 3.3 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oC и 3 ч при 20oС, затем обрабатывают реакционную смесь как описано в примере 1б. Остаток после упаривания экстракта обрабатывают эфиром и получают 10.4 г целевого продукта, Rf 0.15-0.20 (А), 0.50-0.55 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 921.5 (вычислено: 952.33).Boc-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 1c) was dissolved in 50 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 11 g of H-Thr-Tyr (Psc) -Pro- trifluoroacetate was isolated. OTce. It is dissolved in 70 ml of DMF, 3.95 g of Boc-Gln-OH, 1.8 ml of N-methylmorpholine and 2.2 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath and then 3.3 g of DCCA are added. Stirred for 1.5 hours at 0 ° C. and 3 hours at 20 ° C. , then the reaction mixture was treated as described in Example 1b. The residue after evaporation of the extract is treated with ether and get 10.4 g of the target product, R f 0.15-0.20 (A), 0.50-0.55 (B); mass spectrum: (M + H) + 921.5 (calculated: 952.33).

д. Boc-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1г) растворяют в 50 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 9.8 г трифторацетата H-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 70 мл ДМФА, к раствору добавляют 3 г моногидрата Boc-Leu-OH, 1.4 мл N-метилморфолина и 2 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 2.8 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oС и 8 ч при 20oС, затем обрабатывают реакционную смесь как описано в примере 1г. Получают 9.6 г целевого пентапептида, Rf 0.10-0.15 (А), 0.55-0.60 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 1067.3 (вычислено: 1065.50).D. Boc-Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 1g) was dissolved in 50 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 9.8 g of H-Gln-Thr-Tyr trifluoroacetate (Psc) was isolated. ) -Pro-OTce. It is dissolved in 70 ml of DMF, 3 g of Boc-Leu-OH monohydrate, 1.4 ml of N-methylmorpholine and 2 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath, and then 2.8 g of DCCA are added. Stirred for 1.5 hours at 0 ° C. and 8 hours at 20 ° C. , then the reaction mixture was treated as described in Example 1d. Obtain 9.6 g of the target pentapeptide, R f 0.10-0.15 (A), 0.55-0.60 (B); mass spectrum: (M + H) + 1067.3 (calculated: 1065.50).

е. Boc-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-ОТсе (пример 1д) растворяют в 60 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 9.5 г трифторацетата H-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Рrо-ОТсе. Его растворяют в 70 мл ДМФА, к раствору добавляют 6.5 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-Lys(Psc), 1.4 мл N-метилморфолина и 1.4 г ОБТ. Перемешивают смесь 8 ч при 20oС, затем отгоняют растворитель при пониженном давлении и обрабатывают остаток эфиром. Осадок отфильтровывают, промывают эфиром и получают 11.4 г гексапептида, Rf 0.35-0.40 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 1404.2 (вычислено: 1405.91).e. Boc-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTse (Example 1e) was dissolved in 60 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 9.5 g of H-Leu-Gln-Thr trifluoroacetate was isolated. Tyr (Psc) -Pro-Otse. It is dissolved in 70 ml of DMF, 6.5 g of Boc-Lys 2,4,5-trichlorophenyl ether (Psc), 1.4 ml of N-methylmorpholine and 1.4 g of MBT are added to the solution. The mixture is stirred for 8 hours at 20 ° C. , then the solvent is distilled off under reduced pressure and the residue is taken up in ether. The precipitate is filtered off, washed with ether and 11.4 g of hexapeptide are obtained, R f 0.35-0.40 (B); mass spectrum: (M + H) + 1404.2 (calculated: 1405.91).

ж. Boc-His(Boc)-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1е) растворяют в 60 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 11.5 г трифторацетата Н-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 70 мл ДМФА, к раствору добавляют 5.4 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-His(Boc), 1.4 мл N-метилморфолина и 1.35 г ОБТ. Перемешивают смесь 12 ч при 20oС, затем отгоняют растворитель при пониженном давлении и обрабатывают остаток эфиром. Осадок отфильтровывают, переосаждают из ДМФА эфиром и получают 12.3 г гептапептида, Rf 0.30-0.40 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 1444.1 (вычислено: 1442.94).g. Boc-His (Boc) -Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 1e) was dissolved in 60 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 11.5 g of trifluoroacetate H- were isolated. Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. It is dissolved in 70 ml of DMF, 5.4 g of Boc-His 2,4,5-trichlorophenyl ether (Boc), 1.4 ml of N-methylmorpholine and 1.35 g of MBT are added to the solution. The mixture is stirred for 12 hours at 20 ° C. , then the solvent is distilled off under reduced pressure and the residue is taken up in ether. The precipitate is filtered off, reprecipitated from DMF with ether and 12.3 g of heptapeptide are obtained, R f 0.30-0.40 (B); mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 1444.1 (calculated: 1442.94).

з. Boc-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-His(Boc)-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1e) растворяют в 60 мл ТФУ, через 40 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 12 г бистрифторацетата H-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 70 мл ДМФА, к раствору добавляют 3 г N-гидроксисукцинимидного эфира Boc-Leu и 2.2 мл N-метилморфолина. Перемешивают смесь 18 ч при 20oС, затем отгоняют растворитель при пониженном давлении и обрабатывают остаток этилацетатом. Осадок отфильтровывают, переосаждают из ДМФА эфиром и получают 11.6 г октапептида, Rf 0.10-0.15 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 1554.6 (вычислено: 1556.11).h. Boc-Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-His (Boc) -Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (example 1e) was dissolved in 60 ml of TFA, evaporated after 40 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and isolated 12 g of H-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce bistrifluoroacetate. It is dissolved in 70 ml of DMF, 3 g of Boc-Leu N-hydroxysuccinimide ester and 2.2 ml of N-methylmorpholine are added to the solution. The mixture is stirred for 18 hours at 20 ° C. , then the solvent is distilled off under reduced pressure, and the residue is taken up in ethyl acetate. The precipitate is filtered off, reprecipitated from DMF with ether and 11.6 g of octapeptide are obtained, R f 0.10-0.15 (B); mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 1554.6 (calculated: 1556.11).

и. Boc-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OH (сегмент Ia). К раствору 6.5 г Тсе-эфира сегмента Iа (пример 1з) в 60 мл тетрагидрофурана, 15 мл воды и 5 мл уксусной кислоты при быстром перемешивании добавляют порциями в течение 10 мин 3 г активированной цинковой пыли. Смесь перемешивают еще 20 мин, отфильтровывают шлам и упаривают фильтрат досуха. Остаток обрабатывают 150 мл воды, осадок отделяют фильтрованием и сушат на воздухе. Продукт переосаждают из уксусной кислоты эфиром и сушат в вакууме. Получают 5.3 г целевого сегмента Ia, Rf 0.40-0.45 (В); масс-спектр: (М+Н)+ 1524.1 (вычислено: 1524.84); аминокислотный состав: Glx 0.93 (1); Thr 0.85 (1); Leu 2.00 (2); Pro 1.09 (1); Тyr 0.91 (1); His 1.13 (1); Lys 1.02 (1).and. Boc-Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OH (segment Ia). To a solution of 6.5 g of Tce-ester of segment Ia (Example 1h) in 60 ml of tetrahydrofuran, 15 ml of water and 5 ml of acetic acid, 3 g of activated zinc dust are added in portions over 10 minutes with rapid stirring. The mixture was stirred for another 20 minutes, the sludge was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. The residue is taken up in 150 ml of water, the precipitate is filtered off and dried in air. The product was reprecipitated from acetic acid with ether and dried in vacuo. Obtain 5.3 g of the target segment Ia, R f 0.40-0.45 (B); mass spectrum: (M + H) + 1524.1 (calculated: 1524.84); amino acid composition: Glx 0.93 (1); Thr 0.85 (1); Leu 2.00 (2); Pro 1.09 (1); Tyr 0.91 (1); His 1.13 (1); Lys 1.02 (1).

Пример 2. Получение Boc-Leu-His-Lys(Msc)-Leu-G1n-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OH (сегмент Ib). Example 2. Obtaining Boc-Leu-His-Lys (Msc) -Leu-G1n-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OH (segment Ib).

a. Boc-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. 3.2 г трифторацетата H-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 1е) растворяют в 15 мл ДМФА, к раствору добавляют 2 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-Lys(Msc), 0.5 мл N-метилморфолина и 450 мг ОБТ. Перемешивают смесь 4 ч при 20oС, затем отгоняют растворитель при пониженном давлении и обрабатывают остаток эфиром. Осадок отфильтровывают, промывают эфиром и получают 3.9 г гексапептида, Rf 0.30-0.35 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 1342.2 (вычислено: 1343.84).a. Boc-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. 3.2 g of trifluoroacetate H-Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (example 1e) are dissolved in 15 ml of DMF, 2 g of Boc-Lys 2,4,5-trichlorophenyl ether (Msc) are added to the solution, 0.5 ml of N-methylmorpholine and 450 mg of MBT. The mixture is stirred for 4 hours at 20 ° C. , then the solvent is distilled off under reduced pressure and the residue is taken up in ether. The precipitate is filtered off, washed with ether and 3.9 g of hexapeptide are obtained, R f 0.30-0.35 (B); mass spectrum: (M + H) + 1342.2 (calculated: 1343.84).

б. Boc-His(Boc)-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 2а) растворяют в 15 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 4.0 г трифторацетата Н-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 20 мл ДМФА, к раствору добавляют 1.8 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-His(Boc), 450 мкл N-метилморфолина и 400 мг ОБТ. Перемешивают смесь 12 ч при 20oС, затем отгоняют растворитель при пониженном давлении и обрабатывают остаток эфиром. Осадок отфильтровывают, переосаждают из уксусной кислоты эфиром и получают 4.0 г гептапептида, Rf 0.30-0.40 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 1381.1 (вычислено: 1380.87).b. Boc-His (Boc) -Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 2a) was dissolved in 15 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 4.0 g of trifluoroacetate N- was isolated. Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. It is dissolved in 20 ml of DMF, 1.8 g of Boc-His 2,4,5-trichlorophenyl ether (Boc), 450 μl of N-methylmorpholine and 400 mg of OBT are added to the solution. The mixture is stirred for 12 hours at 20 ° C. , then the solvent is distilled off under reduced pressure and the residue is taken up in ether. The precipitate is filtered off, reprecipitated from acetic acid with ether and get 4.0 g of heptapeptide, R f 0.30-0.40 (B); mass spectrum (after removal of Boc protection): (M + H) + 1381.1 (calculated: 1380.87).

в. Boc-Leu-His-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Boc-His(Boc)-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce (пример 2б) растворяют в 15 мл ТФУ, через 40 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 3.9 г бис-трифторацетата H-His-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 20 мл ДМФА, к раствору добавляют 900 мг N-гидроксисукцинимидного эфира Boc-Leu и 0.82 мл N-метилморфолина. Перемешивают смесь 24 ч при 20oС, затем обрабатывают смесь как описано в примере 1з и получают 3.8 г октапептида, Rf 0.08-0.15 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 1495.1 (вычислено: 1494.04).in. Boc-Leu-His-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. Boc-His (Boc) -Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce (Example 2b) was dissolved in 15 ml of TFA, evaporated after 40 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and isolated 3.9 g of H-His-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce bis-trifluoroacetate. It is dissolved in 20 ml of DMF, 900 mg of Boc-Leu N-hydroxysuccinimide ether and 0.82 ml of N-methylmorpholine are added to the solution. The mixture is stirred for 24 hours at 20 ° C. , then the mixture is treated as described in Example 1h to obtain 3.8 g of octapeptide, R f 0.08-0.15 (B); mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 1495.1 (calculated: 1494.04).

г. Boc-Leu-His-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OH (сегмент Ib). К раствору 1.8 г Тсе-эфира сегмента Ib (пример 2в) в 20 мл тетрагидрофурана, 5 мл воды и 2 мл уксусной кислоты при быстром перемешивании добавляют порциями в течение 10 мин 1 г активированной цинковой пыли. Смесь перемешивают еще 20 мин, отфильтровывают шлам и упаривают фильтрат досуха. Остаток обрабатывают 50 мл воды, осадок отделяют фильтрованием и сушат на воздухе. Пептид переосаждают из уксусной кислоты эфиром и сушат в вакууме. Получают 1.4 г целевого сегмента Ib, Rf 0.35-0.40 (В); масс-спектр: (М+Н)+ 1464.0 (вычислено: 1462.77); аминокислотный состав: Glx 1.04 (1); Thr 0.82 (1); Leu 2.00 (2); Pro 1.13 (1); Тyr 0.95 (1); His 1.08 (1); Lys 1.01 (1).g. Boc-Leu-His-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OH (segment Ib). To a solution of 1.8 g of Tce-ester of segment Ib (example 2c) in 20 ml of tetrahydrofuran, 5 ml of water and 2 ml of acetic acid, 1 g of activated zinc dust is added in portions over 10 minutes with rapid stirring. The mixture was stirred for another 20 minutes, the sludge was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. The residue is taken up in 50 ml of water, the precipitate is filtered off and dried in air. The peptide was reprecipitated from acetic acid with ether and dried in vacuo. Obtain 1.4 g of the target segment Ib, R f 0.35-0.40 (B); mass spectrum: (M + H) + 1464.0 (calculated: 1462.77); amino acid composition: Glx 1.04 (1); Thr 0.82 (1); Leu 2.00 (2); Pro 1.13 (1); Tyr 0.95 (1); His 1.08 (1); Lys 1.01 (1).

Пример 3. Получение Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OH (сегмент IIа). Example 3. Obtaining Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-OH (segment IIa).

a. Boc-Glu(OPse)-OTce. 4.2 г Boc-Glu(OPse)-OH растворяют в 20 мл сухого этилацетата, добавляют 20 мг 4-диметиламинопиридина и 1.2 мл 2,2,2-трихлорэтанола, охлаждают в ледяной бане и добавляют 2.3 г ДЦГК. Перемешивают 30 мин при 0oС и 60 мин при 20oС, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат экстрагируют 20 мл воды, 30 мл насыщенного NaHCО3 и 30 мл насыщенного NaCl, затем упаривают. Остаток кристаллизуют из эфира и получают 5.0 г бесцветного кристаллического продукта, Rf 0.55-0.6 (А).a. Boc-Glu (OPse) -OTce. 4.2 g of Boc-Glu (OPse) -OH are dissolved in 20 ml of dry ethyl acetate, 20 mg of 4-dimethylaminopyridine and 1.2 ml of 2,2,2-trichloroethanol are added, cooled in an ice bath and 2.3 g of DCCA are added. It is stirred for 30 minutes at 0 ° C. and 60 minutes at 20 ° C. , the precipitate of dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate is extracted with 20 ml of water, 30 ml of saturated NaHCO 3 and 30 ml of saturated NaCl, then evaporated. The residue was crystallized from ether to give 5.0 g of a colorless crystalline product, R f 0.55-0.6 (A).

б. Boc-Gln-Glu(OPse)-OTce. Boc-Glu(OPse)-OTce (пример 3а) растворяют в 20 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток кристаллизуют из эфира и получают 4.8 г трифторацетата H-Glu(OPse)-OTce. Его растворяют в 15 мл ДМФА, к раствору добавляют 2.6 г Boc-Gln-OH, 1.1 мл N-метилморфолина и 1.35 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 2.3 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oС и 7 ч при 20oС, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат упаривают. Остаток промывают водой, упаривают с этанолом и кристаллизуют из эфира. Получают 5.4 г дипептида, Rf 0.15-0.20 (А), 0.40-0.45 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 676.3 (вычислено: 676.02).b. Boc-Gln-Glu (OPse) -OTce. Boc-Glu (OPse) -OTce (Example 3a) was dissolved in 20 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was crystallized from ether to give 4.8 g of H-Glu (OPse) -OTce trifluoroacetate. It is dissolved in 15 ml of DMF, 2.6 g of Boc-Gln-OH, 1.1 ml of N-methylmorpholine and 1.35 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath and then 2.3 g of DCCA are added. Stirred for 1.5 hours at 0 ° C. and 7 hours at 20 ° C. , dicyclohexylurea precipitate was filtered off, and the filtrate was evaporated. The residue was washed with water, evaporated with ethanol and crystallized from ether. Obtain 5.4 g of the dipeptide, R f 0.15-0.20 (A), 0.40-0.45 (B); mass spectrum: (M + H) + 676.3 (calculated: 676.02).

в. Boc-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTce. Boc-Gln-Glu(OPse)-OTce (пример 3б) растворяют в 20 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток кристаллизуют из эфира и получают 5.4 г трифторацетата H-Gln-Glu(OPse)-OTce. Его растворяют в 15 мл ДМФА, к раствору добавляют 3.4 г пентафторфенилового эфира Boc-Ser и 1.1 мл N-метилморфолина. Перемешивают 1.5 ч при 20oС и упаривают реакционную смесь до масла. Остаток промывают гексаном, затем обрабатывают эфиром и получают 5.5 г трипептида, Rf 0.05-0.10 (А), 0.30-0.35 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 762.9 (вычислено: 763.10).in. Boc-Ser-Gln-Glu (OPse) -OTce. Boc-Gln-Glu (OPse) -OTce (Example 3b) was dissolved in 20 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was crystallized from ether to give 5.4 g of trifluoroacetate H-Gln-Glu (OPse) -OTce. It is dissolved in 15 ml of DMF, 3.4 g of Boc-Ser pentafluorophenyl ether and 1.1 ml of N-methylmorpholine are added to the solution. Stirred for 1.5 hours at 20 ° C. and evaporated the reaction mixture to an oil. The residue was washed with hexane, then treated with ether to give 5.5 g of the tripeptide, R f 0.05-0.10 (A), 0.30-0.35 (B); mass spectrum: (M + H) + 762.9 (calculated: 763.10).

г. Boc-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTcc. Boc-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTce (пример 3в) растворяют в 20 мл ТФУ, через 50 мин при 20oС упаривают, остаток кристаллизуют из эфира и получают 5.4 г трифторацетата H-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTce. Его растворяют в 15 мл ДМФА, к раствору добавляют 3.4 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Вос-Leu, 450 мг ОБТ и 1.1 мл N-метилморфолина. Перемешивают 5 ч при 20oС и упаривают реакционную смесь до масла. Остаток промывают водой, упаривают с этанолом, затем обрабатывают эфиром и получают 5.2 г тетрапептида, Rf 0.05-0.10 (А), 0.40-0.45 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 877.4 (вычислено: 876.28).Boc-Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -OTcc. Boc-Ser-Gln-Glu (OPse) -OTce (Example 3c) was dissolved in 20 ml of TFA, evaporated after 50 minutes at 20 ° C, the residue was crystallized from ether to give 5.4 g of H-Ser-Gln-Glu trifluoroacetate (OPse) -OTce. It is dissolved in 15 ml of DMF, 3.4 g of Boc-Leu 2,4,5-trichlorophenyl ether, 450 mg of OBT and 1.1 ml of N-methylmorpholine are added to the solution. It is stirred for 5 hours at 20 ° C. and the reaction mixture is evaporated to an oil. The residue was washed with water, evaporated with ethanol, then treated with ether to give 5.2 g of the tetrapeptide, R f 0.05-0.10 (A), 0.40-0.45 (B); mass spectrum: (M + H) + 877.4 (calculated: 876.28).

д. Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTce. Boc-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-OTce (пример 3г) растворяют в 20 мл ТФУ, через 40 мин при 20oС упаривают, остаток кристаллизуют из эфира и получают 5.3 г трифторацетата H-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-ОТсе. Его растворяют в 25 мл ДМФА, к раствору добавляют 4.3 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-Lys(Psc), 450 мг ОБТ и 1.4 мл N-метилморфолина. Перемешивают 2 ч при 20oС и упаривают реакционную смесь до масла. Остаток промывают водой, эфиром, упаривают с этанолом, затем обрабатывают эфиром и получают 6.5 г пентапептида, Rf 0.05-0.10 (А), 0.30-0.35 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 1117.4 (вычислено: 1116.56).D. Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -OTce. Boc-Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -OTce (Example 3g) was dissolved in 20 ml of TFA, evaporated after 40 minutes at 20 ° C, the residue was crystallized from ether to give 5.3 g of trifluoroacetate H-Leu-Ser-Gln- Glu (OPse) -Otse. It is dissolved in 25 ml of DMF, 4.3 g of Boc-Lys 2,4,5-trichlorophenyl ether (Psc), 450 mg of OBT and 1.4 ml of N-methylmorpholine are added to the solution. It is stirred for 2 hours at 20 ° C. and the reaction mixture is evaporated to an oil. The residue is washed with water, ether, evaporated with ethanol, then treated with ether and 6.5 g of pentapeptide are obtained, R f 0.05-0.10 (A), 0.30-0.35 (B); mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 1117.4 (calculated: 1116.56).

e. Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-OH (сегмент Va). К раствору 6.0 г Тсе-эфира сегмента Va (пример 3д) в 50 мл тетрагидрофурана, 10 мл воды и 2 мл уксусной кислоты при быстром перемешивании добавляют порциями в течение 10 мин 2 г активированной цинковой пыли. Смесь перемешивают еще 30 мин, отфильтровывают шлам и упаривают фильтрат досуха. Остаток обрабатывают 100 мл воды, осадок отделяют фильтрованием и сушат на воздухе. Пептид переосаждают из смеси метанола и уксусной кислоты эфиром и сушат в вакууме. Получают 4.2 г целевого сегмента Va, Rf 0.55-0.60 (В); масс-спектр: (М+Н)+ 1084.6 (вычислено: 1085.30); аминокислотный состав: Glx 2.04 (2); Ser 0.85 (1); Leu 1.00 (1); Lys 1.06 (1).e. Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -OH (segment Va). To a solution of 6.0 g of Tse-ester of segment Va (Example 3d) in 50 ml of tetrahydrofuran, 10 ml of water and 2 ml of acetic acid, 2 g of activated zinc dust are added portionwise over 10 minutes. The mixture was stirred for another 30 minutes, the sludge was filtered off and the filtrate was evaporated to dryness. The residue is treated with 100 ml of water, the precipitate is filtered off and dried in air. The peptide is reprecipitated from a mixture of methanol and acetic acid with ether and dried in vacuum. Obtain 4.2 g of the target segment Va, R f 0.55-0.60 (B); mass spectrum: (M + H) + 1084.6 (calculated: 1085.30); amino acid composition: Glx 2.04 (2); Ser 0.85 (1); Leu 1.00 (1); Lys 1.06 (1).

ж. Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Рго-ОТсе (Тсе-эфир сегмента IIа). 1.65 г Тсе-эфира сегмента Ia (пример 1з) растворяют в 15 мл ТФУ, через 40 мин при 20oС упаривают, остаток обрабатывают эфиром и выделяют 1.7 г бис-трифторацетата H-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-OTce. Его растворяют в 10 мл ДМФА, к раствору добавляют 1.2 г сегмента Va (пример 3е), 270 мг ОБТ, 230 мкл N-метилморфолина и, при охлаждении в ледяной бане, 300 мг ДЦГК. Смесь перемешивают 2 ч при охлаждении, затем 18 ч при 20oС. Отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат упаривают до масла и остаток обрабатывают 100 мл этилацетата. Осадок отделяют фильтрованием, переосаждают из ДМФА этилацетатом, промывают эфиром и получают 2.32 г тридекапептида; масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 2524.2 (вычислено: 2522.26).g. Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Rgo-Otse (Tse-ether of segment IIa). 1.65 g of Tce-ester of segment Ia (Example 1h) was dissolved in 15 ml of TFA, evaporated after 40 minutes at 20 ° C, the residue was taken up in ether and 1.7 g of H-Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln bis-trifluoroacetate was isolated. -Thr-Tyr (Psc) -Pro-OTce. It is dissolved in 10 ml of DMF, 1.2 g of Va segment (Example 3e), 270 mg of OBT, 230 μl of N-methylmorpholine and, when cooled in an ice bath, 300 mg of DCCA are added to the solution. The mixture was stirred for 2 hours while cooling, then 18 hours at 20 ° C. The dicyclohexylurea precipitate was filtered off, the filtrate was evaporated to an oil and the residue was treated with 100 ml of ethyl acetate. The precipitate was separated by filtration, reprecipitated from DMF with ethyl acetate, washed with ether and 2.32 g of tridecapeptide were obtained; mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 2524.2 (calculated: 2522.26).

з. Сегмент IIа. К 2.3 г Тсе-эфира IIа (пример 3ж) в смеси 10 мл ДМФА, 20 мл тетрагидрофурана, 5 мл воды и 2 мл уксусной кислоты при быстром перемешивании добавляют порциями в течение 10 мин 1 г активированной цинковой пыли. Смесь перемешивают еще 50 мин, затем обрабатывают как описано в примере 3е. Получают 2 г сегмента IIа; масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+Н)+ 2389.6 (вычислено: 2390.87); аминокислотный состав: Glx 2.73 (3); Ser 0.83 (1); Thr 0.87 (1); Leu 3.00 (3); Pro 1.11 (1); Тyr 0.91 (l); His l.06 (l); Lys 2.02 (2).h. Segment IIa. To 2.3 g of Tce-ester IIa (Example 3g) in a mixture of 10 ml of DMF, 20 ml of tetrahydrofuran, 5 ml of water and 2 ml of acetic acid, 1 g of activated zinc dust was added in portions over 10 minutes with rapid stirring. The mixture was stirred for another 50 minutes, then treated as described in Example 3e. Obtain 2 g of segment IIa; mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 2389.6 (calculated: 2390.87); amino acid composition: Glx 2.73 (3); Ser 0.83 (1); Thr 0.87 (1); Leu 3.00 (3); Pro 1.11 (1); Tyr 0.91 (l); His l.06 (l); Lys 2.02 (2).

Пример 4. Получение Boc-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (сегмент IIIa).Example 4. Obtaining Boc-Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (segment IIIa).

К раствору 770 мг сегмента Ia (пример 1и), 600 мг бис-трифторацетата сегмента VI (Helv. Chim. Acta, 1969, v. 52, 1788-1795), 135 мг ОБТ и 100 мкл N-метилморфолина в 6 мл ДМФА добавляют 140 мг ДЦГК и перемешивают смесь 24 ч при 20oС. Реакционную смесь обрабатывают как описано в примере 1ж, полученный осадок сырого гептадекапептида растворяют в 20 мл смеси ацетонитрил-вода (1:4) и хроматографируют на колонке 4•15 см с LiChroprep RP18 (Merck, Германия) в градиенте ацетонитрила (от 10 до 50%) в воде, содержащей 0.2% ТФУ. Фракции, содержащие чистый продукт (более 90% по ВЭЖХ), объединяют и упаривают досуха, остаток обрабатывают эфиром и получают 0.94 г трифторацетата сегмента IIIа; масс-спектр: (М+Н)+ 2394.9 (вычислено: 2395.83); аминокислотный состав: Asx 1.01 (1); Glx 1.05 (1); Ser 0.81 (1); Thr 3.57 (4); Gly 1.94 (2); Leu 2.00 (2); Pro 2.08 (2); Тyr 0.90 (1); His 1.06 (l); Lys 1.08 (l); Arg 1.01 (1).To a solution of 770 mg of segment Ia (example 1i), 600 mg of segment VI bis-trifluoroacetate (Helv. Chim. Acta, 1969, v. 52, 1788-1795), 135 mg of OBT and 100 μl of N-methylmorpholine in 6 ml of DMF are added 140 mg of DCCA and the mixture is stirred for 24 hours at 20 ° C. The reaction mixture is treated as described in Example 1g, the resulting crude heptadecapeptide peptide is dissolved in 20 ml of acetonitrile-water (1: 4) mixture and chromatographed on a 4 x 15 cm column with LiChroprep RP18 (Merck, Germany) in a gradient of acetonitrile (from 10 to 50%) in water containing 0.2% TFA. Fractions containing the pure product (over 90% by HPLC) were combined and evaporated to dryness, the residue was taken up in ether to give 0.94 g of trifluoroacetate segment IIIa; mass spectrum: (M + H) + 2394.9 (calculated: 2395.83); amino acid composition: Asx 1.01 (1); Glx 1.05 (1); Ser 0.81 (1); Thr 3.57 (4); Gly 1.94 (2); Leu 2.00 (2); Pro 2.08 (2); Tyr 0.90 (1); His 1.06 (l); Lys 1.08 (l); Arg 1.01 (1).

Пример 5. Получение Boc-Leu-His-Lys(Msc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (сегмент IIIb)/
Получают из 750 мг сегмента Ib (пример 2) и 600 мг бис-трифторацетата сегмента VI, как описано для сегмента IIIa в примере 4. После хроматографической очистки выделяют 0.86 г трифторацетата сегмента IIIb; масс-спектр: (М+Н)+ 2334.2 (вычислено: 2333.76); аминокислотный состав: Asx 1.08 (1); Glx 1.00 (1); Ser 0.84 (1); Thr 3.50 (4); Gly 1.96 (2); Leu 2.00 (2); Pro 1.88 (2); Туr 0.95 (1); His 1.09 (1); Lys 1.03 (1); Arg 1.00 (1).Example 5. Obtaining Boc-Leu-His-Lys (Msc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (segment IIIb) /
Obtained from 750 mg of segment Ib (example 2) and 600 mg of segment VI bis-trifluoroacetate, as described for segment IIIa in example 4. 0.86 g of segment IIIb trifluoroacetate are isolated after chromatographic purification; mass spectrum: (M + H) + 2334.2 (calculated: 2333.76); amino acid composition: Asx 1.08 (1); Glx 1.00 (1); Ser 0.84 (1); Thr 3.50 (4); Gly 1.96 (2); Leu 2.00 (2); Pro 1.88 (2); Tur 0.95 (1); His 1.09 (1); Lys 1.03 (1); Arg 1.00 (1).

Пример 6. Получение Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (сегмент IVa). Вариант 1.Example 6. Obtaining Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-Arg-Thr-Asn- Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (segment IVa). Option 1.

К раствору 1.25 г сегмента IIа (пример 3), 600 мг бис-трифторацетата сегмента VI, 135 мг ОБТ и 120 мкл М-метилморфолина в 10 мл ДМФА добавляют 160 мг ДЦГК и перемешивают смесь 40 ч при 20oС. Реакционную смесь обрабатывают как описано в примере 1ж, полученный осадок сырого 22-пептида растворяют в 30 мл смеси ацетонитрил-вода (1:4) и хроматографируют на колонке 4•15 см с LiChroprep RP18 (Merck, Германия) в градиенте ацетонитрила (от 10 до 70%) в воде, содержащей 0.2% ТФУ. Фракции, содержащие чистый продукт (более 90% по ВЭЖХ), объединяют и упаривают досуха, остаток обрабатывают эфиром и получают 1.15 г трифторацетата сегмента IVa; масс-спектр: (М+H)+ 3363.1 (вычислено: 3361.97); аминокислотный состав: Asx 1.04 (1); Glx 3.15 (3); Ser 1.80 (2); Thr 3.48 (4); Gly 1.96 (2); Leu 3.00 (3); Pro 2.01 (2); Туr 0.88 (1); His 1.07 (1); Lys 2.10 (2); Arg 1.00 (1).To a solution of 1.25 g of segment IIa (example 3), 600 mg of segment VI bis-trifluoroacetate, 135 mg of MBT and 120 μl of M-methylmorpholine in 10 ml of DMF, 160 mg of DCCA are added and the mixture is stirred for 40 hours at 20 ° C. The reaction mixture is treated as described in Example 1g, the obtained precipitate of crude 22-peptide was dissolved in 30 ml of a mixture of acetonitrile-water (1: 4) and chromatographed on a 4 × 15 cm column with LiChroprep RP18 (Merck, Germany) in an acetonitrile gradient (from 10 to 70%) in water containing 0.2% TFU. Fractions containing the pure product (over 90% by HPLC) were combined and evaporated to dryness, the residue was taken up in ether to give 1.15 g of trifluoroacetate segment IVa; mass spectrum: (M + H) + 3363.1 (calculated: 3361.97); amino acid composition: Asx 1.04 (1); Glx 3.15 (3); Ser 1.80 (2); Thr 3.48 (4); Gly 1.96 (2); Leu 3.00 (3); Pro 2.01 (2); Tur 0.88 (1); His 1.07 (1); Lys 2.10 (2); Arg 1.00 (1).

Пример 7. Получение Boc-Lys(Psc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OPse)-Leu-His-Lys(Psc)-Leu-Gln-Thr-Tyr(Psc)-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (сегмент IVa). Вариант 2.Example 7. Obtaining Boc-Lys (Psc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OPse) -Leu-His-Lys (Psc) -Leu-Gln-Thr-Tyr (Psc) -Pro-Arg-Thr-Asn- Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (segment IVa). Option 2

С 1.30 г сегмента IIIa (пример 4) удаляют Вос-защиту действием ТФУ, как описано в примере 3ж, и получают 1.33 г трис-трифторацетата сегмента IIIа со свободной α-аминогруппой, (М+Н)+ 2295.3. Его конденсируют с 600 мг сегмента Va (пример 3е), как описано в примере 6. После хроматографической очистки выделяют 1.28 г трифторацетата сегмента IVa, идентичного полученному в примере 6.With 1.30 g of segment IIIa (Example 4), the Boc-protection is removed by the action of TFA as described in Example 3g, and 1.33 g of tris-trifluoroacetate of segment IIIa with free α-amino group is obtained, (M + H) + 2295.3. It is condensed with 600 mg of segment Va (example 3e), as described in example 6. After chromatographic purification, 1.28 g of segment IVa trifluoroacetate, identical to that obtained in example 6, is isolated.

Пример 8. Получение Boc-Lys(Cpsc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTse)-Leu-His-Lys(Msc)-Leu-GIn-Thr-Tyr(Psc)-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 (сегмент IVb).Example 8. Obtaining Boc-Lys (Cpsc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTse) -Leu-His-Lys (Msc) -Leu-GIn-Thr-Tyr (Psc) -Pro-Arg-Thr-Asn- Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 (segment IVb).

a. Boc-Glu(OTse)-OTce. 2.2 г Boc-Glu(OTse)-OH растворяют в 10 мл сухого этилацетата, добавляют 10 мг 4-диметиламинопиридина и 0.65 мл 2,2,2-трихлорэтанола, охлаждают в ледяной бане и добавляют 1.2 г ДЦГК. Перемешивают 30 мин при 0oС и 60 мин при 20oС, отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, фильтрат разбавляют 15 мл этилацетата и экстрагируют 20 мл воды, 30 мл насыщенного NaHCO3 и 30 мл насыщенного NaCl, затем упаривают. Остаток кристаллизуют из эфира и получают 2.5 г бесцветного кристаллического продукта, Rf 0.55-0.6 (А).a. Boc-Glu (OTse) -OTce. 2.2 g of Boc-Glu (OTse) -OH are dissolved in 10 ml of dry ethyl acetate, 10 mg of 4-dimethylaminopyridine and 0.65 ml of 2,2,2-trichloroethanol are added, cooled in an ice bath and 1.2 g of DCCA is added. It is stirred for 30 minutes at 0 ° C. and 60 minutes at 20 ° C. , the precipitate of dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate is diluted with 15 ml of ethyl acetate and extracted with 20 ml of water, 30 ml of saturated NaHCO 3 and 30 ml of saturated NaCl, then evaporated. The residue was crystallized from ether to give 2.5 g of a colorless crystalline product, R f 0.55-0.6 (A).

б. Boc-Gln-Glu(OTse)-OTce. Boc-Glu(OTse)-OTce (пример 8а) растворяют в 10 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают, остаток кристаллизуют из эфира и получают 2.5 г трифторацетата H-Glu(OTse)-OTce. Его растворяют в 10 мл ДМФА, к раствору добавляют 1.3 г Boc-Gln-OH, 600 мкл N-метилморфолина и 0.65 г ОБТ, охлаждают в ледяной бане и затем добавляют 1.2 г ДЦГК. Перемешивают 1.5 ч при 0oС и 10 ч при 20oС, затем обрабатывают смесь как описано в примере 3б. Получают 2.8 г дипептида, Rf 0.15-0.20 (А), 0.40-0.45 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 689.4 (вычислено: 690.05).b. Boc-Gln-Glu (OTse) -OTce. Boc-Glu (OTse) -OTce (Example 8a) was dissolved in 10 ml of TFA, evaporated after 30 minutes at 20 ° C, the residue was crystallized from ether to give 2.5 g of H-Glu (OTse) -OTce trifluoroacetate. It is dissolved in 10 ml of DMF, 1.3 g of Boc-Gln-OH, 600 μl of N-methylmorpholine and 0.65 g of MBT are added to the solution, cooled in an ice bath and then 1.2 g of DCCA are added. Stirred for 1.5 hours at 0 ° C and 10 hours at 20 ° C, then treat the mixture as described in example 3b. Obtain 2.8 g of the dipeptide, R f 0.15-0.20 (A), 0.40-0.45 (B); mass spectrum: (M + H) + 689.4 (calculated: 690.05).

в. Boc-Ser-Gln-Glu(OTse)-OTce. С дипептида Boc-Gln-Glu(OTse)-OTce (пример 8б) удаляют Вос-защиту и конденсируют его с 1.7 г пентафторфенилового эфира Boc-Ser, как описано в примере 3в. Получают 2.8 г трипептида, Rf 0.05-0.10 (А), 0.30-0.35 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 777.9 (вычислено: 777.11).in. Boc-Ser-Gln-Glu (OTse) -OTce. Boc-protection was removed from the Boc-Gln-Glu (OTse) -OTce dipeptide (Example 8b) and condensed with 1.7 g of Boc-Ser pentafluorophenyl ether, as described in Example 3c. Obtain 2.8 g of tripeptide, R f 0.05-0.10 (A), 0.30-0.35 (B); mass spectrum: (M + H) + 777.9 (calculated: 777.11).

г. Boc-Leu-Ser-Gln-Glu(OTse)-OTce. С пептида Boc-Ser-Gln-Glu(OTse)-OTce (пример 8в) удаляют Вос-защиту и конденсируют его с 1.8 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-Leu, как описано в примере 3г. Получают 2.7 г тетрапептида, Rf 0.05-0.10 (А), 0.30-0.35 (Б); масс-спектр: (М+Н)+ 892.0 (вычислено: 890.29).Boc-Leu-Ser-Gln-Glu (OTse) -OTce. Boc-protection was removed from the Boc-Ser-Gln-Glu (OTse) -OTce peptide (Example 8c) and condensed with 1.8 g of Boc-Leu 2,4,5-trichlorophenyl ether, as described in Example 3d. Obtain 2.7 g of the tetrapeptide, R f 0.05-0.10 (A), 0.30-0.35 (B); mass spectrum: (M + H) + 892.0 (calculated: 890.29).

д. Boc-Lys(Cpsc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTse)-OTce. С тетрапептида Boc-Leu-Ser-Gln-Glu(OTse)-OTce (пример 8г) удаляют Вос-защиту и конденсируют его с 2.3 г 2,4,5-трихлорфенилового эфира Boc-Lys(Cpsc), как описано в примере 3д. Получают 3.3 г пентапептида (Тсе-эфира сегмента Vb), Rf 0.05-0.10 (А), 0.30-0.35 (Б); масс-спектр (после удаления Вос-защиты): (М+H)+ 1166.4 (вычислено: 1165.04).D. Boc-Lys (Cpsc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTse) -OTce. Boc-protection was removed from the Boc-Leu-Ser-Gln-Glu (OTse) -OTce tetrapeptide (Example 8g) and condensed with 2.3 g of Boc-Lys 2,4,5-trichlorophenyl ether (Cpsc) as described in Example 3d . 3.3 g of pentapeptide (Tce-ester of segment Vb) are obtained, R f 0.05-0.10 (A), 0.30-0.35 (B); mass spectrum (after removal of Boc-protection): (M + H) + 1166.4 (calculated: 1165.04).

е. Boc-Lys(Cpsc)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTse)-OH (сегмент Vb). С 3 г Тсе-эфира сегмента Vb (пример 8д) удаляют Tce-защиту обработкой цинковой пылью, как описано в примере 3е. Получают 2.3 г сегмента Vb, Rf 0.55-0.60 (В); масс-спектр: (М+Н)+ 1132.0 (вычислено: 1133.78); аминокислотный состав: Glx 1.86 (2); Ser 0.89 (1); Leu 1.00 (l); Lys 1.03(1).e. Boc-Lys (Cpsc) -Leu-Ser-Gln-Glu (OTse) -OH (Vb segment). With 3 g of Tce-ester of Vb segment (Example 8e), the Tce-protection is removed by treatment with zinc dust, as described in Example 3e. Obtain 2.3 g of the segment Vb, R f 0.55-0.60 (B); mass spectrum: (M + H) + 1132.0 (calculated: 1133.78); amino acid composition: Glx 1.86 (2); Ser 0.89 (1); Leu 1.00 (l); Lys 1.03 (1).

ж. Сегмент IVb. С 600 мг трифторацетата сегмента IIIb (пример 5) удаляют Вос-защиту действием ТФУ и получают 620 мг трис-трифторацетата сегмента IIIb со свободной α-аминогруппой, (М+Н)+ 2232.3. Его конденсируют с 330 мг сегмента Vb (пример 8е), как описано в примере 6. После хроматографической очистки выделяют 630 мг трифторацетата сегмента IVb; масс-спектр: (М+Н)+ 3350.1 (вычислено: 3348.39); аминокислотный состав: Asx 1.01 (1); Glx 3.20 (3); Ser 1.88 (2); Thr 3.63 (4); Gly 2.04 (2); Leu 3.00 (3); Pro 2.03 (2); Тyr 0.94 (1); His 1.07 (1); Lys 2.01 (2); Arg 1.05 (1).g. Segment IVb. With 600 mg of segment IIIb trifluoroacetate (Example 5), the Boc protection is removed by the action of TFA and 620 mg of segment IIIb tris-trifluoroacetate of segment IIIb with free α-amino group is obtained, (M + H) + 2232.3. It is condensed with 330 mg of Vb segment (Example 8e) as described in Example 6. After chromatographic purification, 630 mg of segment IVb trifluoroacetate is isolated; mass spectrum: (M + H) + 3350.1 (calculated: 3348.39); amino acid composition: Asx 1.01 (1); Glx 3.20 (3); Ser 1.88 (2); Thr 3.63 (4); Gly 2.04 (2); Leu 3.00 (3); Pro 2.03 (2); Tyr 0.94 (1); His 1.07 (1); Lys 2.01 (2); Arg 1.05 (1).

Пример 9. Получение кальцитонина лосося (с использованием сегмента IVa). Example 9. Obtaining salmon calcitonin (using segment IVa).

360 мг сегмента IVa растворяют в 3 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают досуха и обрабатывают остаток эфиром. Получают 365 мг трис-трифторацетата сегмента IVa со свободной α-аминогруппой, (М+Н)+ 3262.4. Его растворяют в 3 мл диметилсульфоксида, добавляют 130 мг сегмента VII (Helv. С him. Acta, 1969, v. 52, 1788-1795), 30 мкл N-метилморфолина, 27 мг ОБТ и 40 мг ДЦГК, смесь перемешивают 24 ч при 20oС. Отфильтровывают осадок дициклогексилмочевины, к фильтрату добавляют 40 мл этилацетата, выпавший осадок отделяют, получают 480 мг сырого защищенного 32-пептида VIIIa. Его обрабатывают ТФУ для удаления Вос-защиты, как описано выше, затем растворяют в 20 мл смеси ДМФА-вода (1:4). К раствору при сильном перемешивании в течение 30 с добавляют по каплям 2 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия и перемешивают еще 5 мин, затем добавляют 0.5 мл уксусной кислоты. Смесь разбавляют водой до 50 мл и наносят на колонку 4•15 см с целлюлозой СМ-52 (Whatman, Англия), уравновешенную 0.05 М ацетатом аммония (рН 5.9). Проводят элюцию градиентом от 0.1 до 0.7 М ацетата аммония (рН 5.9), фракции, содержащие целевой продукт, объединяют и лиофилизуют. Получают 182 мг кальцитонина лосося; хроматографическая чистота по ВЭЖХ 92%, массовое содержание пептидного материала 76%. Масс-спектр: (М+Н)+ 3432.8 (вычислено: 3433.15); аминокислотный состав: Asx 2.01 (2); Glx 3.22 (3); Ser 3.58 (4); Thr 4.63 (5); Gly 3.04 (3); Val 0.94 (1); Leu 5.00 (5); Pro 2.11 (2); Туr 0.94 (1); His 1.07 (1); Lys 2.01 (2); Arg 1.05 (1); Cys не определяется.360 mg of segment IVa was dissolved in 3 ml of TFA, after 30 minutes at 20 ° C, evaporated to dryness and the residue was taken up in ether. 365 mg of tris-trifluoroacetate segment IVa are obtained with the free α-amino group, (M + H) + 3262.4. It is dissolved in 3 ml of dimethyl sulfoxide, 130 mg of segment VII (Helv. With him. Acta, 1969, v. 52, 1788-1795), 30 μl of N-methylmorpholine, 27 mg of MBT and 40 mg of DCCA are added, the mixture is stirred for 24 hours at 20 ° C. The dicyclohexylurea precipitate was filtered off, 40 ml of ethyl acetate was added to the filtrate, the precipitate was separated, and 480 mg of crude protected 32-peptide VIIIa were obtained. It is treated with TFA to remove Boc protection, as described above, then dissolved in 20 ml of a mixture of DMF-water (1: 4). To the solution, with vigorous stirring, 2 ml of 1N was added dropwise over 30 s. aqueous sodium hydroxide solution and stirred for another 5 min, then add 0.5 ml of acetic acid. The mixture was diluted with water to 50 ml and applied to a 4 x 15 cm column with CM-52 cellulose (Whatman, England), balanced with 0.05 M ammonium acetate (pH 5.9). Elution is carried out with a gradient from 0.1 to 0.7 M ammonium acetate (pH 5.9), fractions containing the target product are combined and lyophilized. 182 mg of salmon calcitonin are obtained; chromatographic purity by HPLC 92%, the mass content of the peptide material 76%. Mass spectrum: (M + H) + 3432.8 (calculated: 3433.15); amino acid composition: Asx 2.01 (2); Glx 3.22 (3); Ser 3.58 (4); Thr 4.63 (5); Gly 3.04 (3); Val 0.94 (1); Leu 5.00 (5); Pro 2.11 (2); Tur 0.94 (1); His 1.07 (1); Lys 2.01 (2); Arg 1.05 (1); Cys is not detected.

Пример 10. Получение кальцитонина лосося (с использованием сегмента IVb). Example 10. Obtaining salmon calcitonin (using segment IVb).

360 мг сегмента IVb растворяют в 3 мл ТФУ, через 30 мин при 20oС упаривают досуха и обрабатывают остаток эфиром. Получают 360 мг трис-трифторацетата сегмента IVb со свободной α-аминогруппой, (М+Н)+ 3249.3. Его растворяют в 3 мл диметилсульфоксида, добавляют 130 мг сегмента VII и далее проводят конденсацию и обработку реакционной смеси, как описано в примере 9. Получают 510 мг сырого защищенного 32-пептида VIIIb. Его обрабатывают ТФУ для удаления Вос-защиты, как описано выше, затем деблокируют гидроксидом натрия, как описано в примере 9, в течение 20 мин. Хроматографией на целлюлозе СМ-52 выделяют 131 мг кальцитонина лосося, идентичного полученному в примере 9; хроматографическая чистота по ВЭЖХ 91%, массовое содержание пептидного материала 78%.360 mg of segment IVb was dissolved in 3 ml of TFA, after 30 minutes at 20 ° C, evaporated to dryness and the residue was taken up in ether. 360 mg of tris-trifluoroacetate segment IVb with a free α-amino group are obtained, (M + H) + 3249.3. It is dissolved in 3 ml of dimethyl sulfoxide, 130 mg of segment VII is added and then the reaction mixture is condensed and treated as described in Example 9. 510 mg of crude protected 32-peptide VIIIb is obtained. It is treated with TFA to remove the Boc protection as described above, then it is released with sodium hydroxide as described in Example 9 for 20 minutes. Chromatography on cellulose CM-52 isolated 131 mg of salmon calcitonin, identical to that obtained in example 9; chromatographic purity by HPLC 91%, the mass content of the peptide material 78%.

Claims (1)

Защищенные пептиды общей формулы
Х1-Ley-His-Lys(R1)-Leu-Gln-Thr-Tyr(R2)-Pro-Y,
где Х1= H-, A1O-CO-, H-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-, A1O-CO-Lys(R3)-Leu-Ser-Gln-Glu(B4)-;
Y= -OH, -Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2;
А1 есть треть-бутил;
R1 - защитная группа формулы В1О-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys;
R2 - защитная группа В2О-СО- для гидроксильной группы остатка Туr;
R3 - защитная группа формулы В3О-СО- для эпсилон-аминогруппы остатка Lys;
В4 - защитная группа для гамма-карбоксильной группы остатка Glu,
причем В1, В2, В3 и В4 могут быть одинаковыми или разными и выбираются из ряда: 2-алкилсульфонилэтил, 2-фенилсульфонилэтил, 2-(замещенный арил)сульфонилэтил.Protected Peptides of the General Formula
X 1 -Ley-His-Lys (R 1 ) -Leu-Gln-Thr-Tyr (R 2 ) -Pro-Y,
where X 1 = H-, A 1 O-CO-, H-Lys (R 3 ) -Leu-Ser-Gln-Glu (B 4 ) -, A 1 O-CO-Lys (R 3 ) -Leu-Ser -Gln-Glu (B 4 ) -;
Y = -OH, -Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH 2 ;
And 1 is third-butyl;
R 1 is a protecting group of formula B 1 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue;
R 2 is a protecting group B 2 O — CO— for the hydroxyl group of the Tur residue;
R 3 is a protecting group of formula B 3 O — CO— for the epsilon amino group of the Lys residue;
In 4 - a protective group for the gamma-carboxyl group of the residue Glu,
moreover, B 1 , B 2 , B 3, and B 4 may be the same or different and are selected from the series: 2-alkylsulfonylethyl, 2-phenylsulfonylethyl, 2- (substituted aryl) sulfonylethyl.
RU2000123696/04A 2000-09-14 2000-09-14 Protected calcitonine peptides RU2193567C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000123696/04A RU2193567C2 (en) 2000-09-14 2000-09-14 Protected calcitonine peptides

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000123696/04A RU2193567C2 (en) 2000-09-14 2000-09-14 Protected calcitonine peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2000123696A RU2000123696A (en) 2002-11-10
RU2193567C2 true RU2193567C2 (en) 2002-11-27

Family

ID=20240090

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000123696/04A RU2193567C2 (en) 2000-09-14 2000-09-14 Protected calcitonine peptides

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2193567C2 (en)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0477885B1 (en) Parathyroid hormone derivatives
EP0561412B1 (en) Parathyroid hormone derivatives
CA2846680C (en) Solid phase synthesis of h[gly2]glp-2
JP2002525376A (en) Auxiliary groups for amide bond formation
JPH06510028A (en) Lanthionine cross-linked peptide
CA1255850A (en) Peptides with disulfide bridges and method
Nomizu et al. Synthesis of phosphonomethyl-phenylalanine and phosphotyrosine containing cyclic peptides as inhibitors of protein tyrosine kinase/SH2 interactions.
WAKIMASU et al. 4-Methoxy-2, 3, 6-trimethylbenzenesulfonyl (Mtr): a new amino and imidazole protecting group in peptide synthesis
RU2193567C2 (en) Protected calcitonine peptides
US3870694A (en) Peptide synthesis with n-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide
CA1292841C (en) Peptide derivatives, their production and use
KR100241948B1 (en) N alpha-2-(4-nitrophenulsulfonyl)ethoxycarbonyl-amino acids
Le Nguyen et al. Renin substrates. Part 1. Liquid-phase synthesis of the equine sequence with benzotriazolyloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (BOP)
EP0033976B1 (en) Method for protecting guanidino group and restoring the same
EP0078498B1 (en) Method for protecting amino group and restoring the same
US6448031B1 (en) Process for producing LH-RH derivatives
FUJII et al. Studies on Peptides. CLVI. Synthesis of Second Human Calcitonin Gene-Related Peptide (β-hCGRP) by Application of a New Disulfide-Bonding Reaction with Thallium (III) Trifluoroacetate
US6075141A (en) N.sup.α -α, α-dimethyl-3,5-dialkoxybenzylcarbonyl amino acid 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazin-3-yl and pentafluorophenyl esters
Torres et al. The incorporation of sugar moieties to neuropeptides: comparative study of different methods
US5252705A (en) Peptide derivatives
RU2442791C1 (en) Way of buserelin production and intermediate compounds for its production
FUJII et al. Studies on Peptides. CLXII.: Synthesis of Chicken Calcitonin-Gene-Related Peptide (cCGRP) by Application of Sulfoxide-Directed Disulfide-Bond-Forming Reaction
EP0311391B1 (en) New process for preparing an octapeptide
RU2123498C1 (en) Protected derivatives of vasopressin
RU2125062C1 (en) Protected oxytocin derivatives

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20140915