RU2192461C1

RU2192461C1 - Nutrient medium for accumulation of salmonella

Info

Publication number: RU2192461C1
Application number: RU2001105513/13A
Authority: RU
Inventors: М.М. Меджидов; А.А. Аджиева; М.И. Курбанова; З.С. Сайбудинова
Original assignee: Научно-производственное объединение "Питательные среды"
Priority date: 2001-02-26
Filing date: 2001-02-26
Publication date: 2002-11-10

Abstract

FIELD: medicinal microbiology. SUBSTANCE: nutrient medium may be used for bacteriologic diagnosis of abdominal typhoid, paratyphoids, and salmonollosis. Nutrient medium contains, g/l: pancreatic hydrolysate of fish, 6.6-8.8; dry enzymatic peptone, 4.9-5.1; extract of fodder yeast, 2.4-2.6; sodium chloride, 3.2-3.4; sodium thiosulfate, 39.0-41.0; green brilliantine, 0.009-0.011; Lugol's solution, 18.0-22.0; sodium carbonate, 0.45-0.55; distilled water, up to one liter. EFFECT: fully inhibition of growth of accompanying microflora at maintaining high accumulating properties. 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики брюшного тифа, паратифов, сальмонеллеза. The invention relates to medical microbiology and can be used for bacteriological diagnosis of typhoid fever, paratyphoid fever, salmonellosis.

В настоящее время для данного целевого назначения используется сухая селенитовая среда для накопления сальмонелл и шигелл [1]. Currently, for this purpose, dry selenite medium is used to accumulate salmonella and shigella [1].

Недостатком данной среды является незначительное накопление культур и слабая ингибиция кишечной палочки. The disadvantage of this medium is a slight accumulation of cultures and weak inhibition of Escherichia coli.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является Тетратионатный бульон (Tetrationate broth), содержащий в качестве азотистого питания пептон из мяса, мясной и дрожжевой экстракты, а также хлорид натрия, тиосульфат натрия, карбонат кальция, селективные агенты - бриллиантовый зеленый, сухую желчь и раствор Люголя [2]. The closest solution to the problem of the same purpose to the claimed invention in terms of features is Tetrationate broth, which contains meat peptone, meat and yeast extracts, as well as sodium chloride, sodium thiosulfate, calcium carbonate, diamond selective agents as a nitrogenous food green, dry bile and Lugol's solution [2].

Отечественный вариант Тетратионатного бульона - среда Мюллера-Кауфмана, готовится на мясопептонном бульоне, содержащем 0,5% хлорида натрия с добавлением тех же ингредиентов, а вместо сухой желчи в среду вводят нативную бычью желчь [3]. The domestic version of the tetrathionate broth, Müller-Kaufmann medium, is prepared on meat and peptone broth containing 0.5% sodium chloride with the addition of the same ingredients, and instead of dry bile, native bile bile is introduced into the medium [3].

К причинам, препятствующим достижению нижеуказанного технического результата при использовании известной среды, принятой за прототип, является то, что среда Мюллера-Кауфмана недостаточно селективная среда, кроме того, в состав среды входит нерастворимая углекислая соль кальция, образующая плотный белый осадок, вследствие чего возникают неудобства в ее использовании. The reasons that impede the achievement of the following technical result when using the known medium adopted as a prototype is that the Muller-Kaufmann medium is not a sufficiently selective medium, in addition, the medium contains an insoluble carbonic salt of calcium, which forms a dense white precipitate, resulting in inconvenience in its use.

Задача предлагаемого изобретения - повышение селективных свойств среды, улучшение ее прозрачности и растворимости. The objective of the invention is to increase the selective properties of the medium, improving its transparency and solubility.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что в качестве источника азотистого питания она содержит панкреатический гидролизат рыбы и пептон ферментативный, в качестве углекислой соли - карбонат натрия, хлорид натрия, придающий среде изотонические свойства, в качестве ингибитора посторонней микрофлоры - раствор Люголя, тиосульфат натрия, бриллиантовый зеленый, в качестве стимулятора роста и источника витаминов группы В - дополнительно содержит экстракт кормовых дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбы - 6,6-6,8
Хлорид натрия - 3,2-3,4
Пептон ферментативный, сухой - 4,9-5,1
Экстракт кормовых дрожжей - 2,4-2,6
Тиосульфат натрия - 39,0-41,0
Карбонат натрия - 0,45-0,55
Бриллиантовый зеленый - 0,009-0,011
Раствор Люголя - 18,0-22,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Содержание в данной среде тиосульфата натрия, раствора Люголя и бриллиантового зеленого полностью подавляет рост сопутствующей флоры (кишечная палочка, грамположительные кокки). Среда обладает высокой чувствительностью, отмечается рост и накопление культур при посеве из разведения 10^-7. Эффективность накопления в среде составляет 10⁶ раз. Время генерации культуры от 30 до 40 минут. Среда сконструирована из отечественных гостированных ингредиентов на основе сухого питательного бульона, имеющего промышленный выпуск на предприятии НПО "Питательные среды" [4].The specified technical result during the implementation of the invention is achieved by the fact that it contains fish pancreatic hydrolyzate and enzyme peptone as a nitrogenous source, sodium carbonate as sodium carbonate, sodium chloride, which imparts isotonic properties to the medium, and Lugol's solution, thiosulfate as an inhibitor of extraneous microflora sodium, brilliant green, as a growth promoter and a source of B vitamins - additionally contains extract of fodder yeast, in the following ratio mponentov, g / l:
Pancreatic hydrolyzate of fish - 6.6-6.8
Sodium Chloride - 3.2-3.4
Peptone is enzymatic, dry - 4.9-5.1
Fodder Yeast Extract - 2.4-2.6
Sodium thiosulfate - 39.0-41.0
Sodium carbonate - 0.45-0.55
Diamond Green - 0.009-0.011
Lugol's solution - 18.0-22.0
Distilled water - Up to 1 L
The content in this medium of sodium thiosulfate, Lugol's solution and brilliant green completely inhibits the growth of concomitant flora (E. coli, gram-positive cocci). The medium has a high sensitivity, there is a growth and accumulation of crops when sowing from breeding 10 ^-7 . The accumulation efficiency in the medium is 10 ⁶ times. Culture generation time from 30 to 40 minutes. The medium is constructed from domestic guest ingredients based on dry nutrient broth, which is commercially available at NPO Nutrient Sredy [4].

Среду получают следующим образом. The medium is prepared as follows.

Пример 1. В колбу с 0,6 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, взятые в количестве: панкреатический гидролизат рыбы - 6,6 г, хлорид натрия - 3,2 г, пептон ферментативный, сухой - 4,9 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,40 г, тиосульфат натрия - 39,0 г, карбонат натрия - 0,45 г, бриллиантовый зеленый - 0,009 г. Навески сухих ингредиентов тщательно размешивают, объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, полученную суспензию доводят до кипения, pН среды 7,6±0,2, что соответствует минимальной концентрации ингредиентов. Среду разливают во флаконы, стерилизуют при 110^oС 20 минут. Охлаждают до температуры 45-50^oС и вносят 18 мл раствора Люголя (йод металлический - 4,0 г, йодистый калий - 5,0 г, вода дистиллированная - 20 мл). Тщательно перемешивают, разливают в стерильные пробирки по 9 мл. Среда после внесения раствора Люголя засевается сразу тест-культурами и не подлежит хранению. После посева микробной взвеси тест-штамма пробирки с питательным бульоном перемешивают и инкубируют при температуре 37^oС в течение 22±2 часа.Example 1. The following ingredients are taken in a flask with 0.6 l of distilled water, taken in amounts: pancreatic hydrolyzate of fish - 6.6 g, sodium chloride - 3.2 g, enzyme peptone, dry - 4.9 g, fodder yeast extract - 2.40 g, sodium thiosulfate - 39.0 g, sodium carbonate - 0.45 g, brilliant green - 0.009 g. Samples of dry ingredients are thoroughly mixed, the volume of the mixture is brought to 1 liter with distilled water, the resulting suspension is brought to a boil, pH medium 7.6 ± 0.2, which corresponds to the minimum concentration of ingredients. The medium is poured into vials, sterilized at 110 ^{° C. for} 20 minutes. Cool to a temperature of 45-50 ^o C and add 18 ml of Lugol's solution (metal iodine - 4.0 g, potassium iodide - 5.0 g, distilled water - 20 ml). Mix thoroughly, pour into 9 ml sterile tubes. The medium after making the Lugol solution is seeded immediately with test cultures and is not subject to storage. After inoculation of the microbial suspension of the test strain, the tubes with nutrient broth are mixed and incubated at a temperature of 37 ^o C for 22 ± 2 hours.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,7 г, хлорид натрия - 3,3 г, пептон ферментативный, сухой - 5,0 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,5 г, тиосульфат натрия - 40,0 г, карбонат натрия - 0,5 г, бриллиантовый зеленый - 0,01 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН среды 7,6±0,2, что соответствует оптимальной концентрации ингредиентов. Example 2. It differs from example 1 in that 6.7 g of fish pancreatic hydrolyzate is dissolved in 0.6 l of distilled water, 3.3 g of sodium chloride, fermentative peptone, dry 5.0 g of peptone, 2 g of yeast extract 5 g, sodium thiosulfate - 40.0 g, sodium carbonate - 0.5 g, brilliant green - 0.01 g. The volume of the mixture is adjusted with distilled water to 1 l, pH of the medium is 7.6 ± 0.2, which corresponds to the optimal concentration of ingredients.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что в 0,6 л дистиллированной воды растворяют панкреатический гидролизат рыбы - 6,8 г, хлорид натрия - 3,4 г, пептон ферментативный - 5,1 г, экстракт кормовых дрожжей - 2,6 г, тиосульфат натрия - 41,0 г, карбонат натрия - 0,55 г, бриллиантовый зеленый - 0,011 г. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л, pН 7,6±0,2, что соответствует максимальной концентрации ингредиентов. Example 3. It differs from examples 1 and 2 in that 6.8 g of fish pancreatic hydrolyzate is dissolved in 0.6 l of distilled water, sodium chloride is 3.4 g, enzyme peptone is 5.1 g, yeast extract is 2 6 g, sodium thiosulfate - 41.0 g, sodium carbonate - 0.55 g, brilliant green - 0.011 g. The volume of the mixture was adjusted with distilled water to 1 l, pH 7.6 ± 0.2, which corresponds to the maximum concentration of ingredients.

Биологические показатели предлагаемой и известных питательных сред для накопления сальмонелл представлены в таблице. Biological indicators of the proposed and known nutrient media for the accumulation of Salmonella are presented in the table.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда имеет преимущество по сравнению с контрольной средой (прототипом - средой Мюллера-Кауфмана). На среде Мюллера-Кауфмана ингибиция кишечной палочки составляет 10%, на селенитовой среде - 20%, тогда как на предлагаемой питательной среде наблюдается полная 100% ингибиция кишечной палочки, при сохранении высоких накопительных свойств. Эффективность накопления на предлагаемой и контрольной среде составляет 10⁶ paз.The table shows that the proposed environment has an advantage over the control environment (the prototype is the Muller-Kaufman environment). In Müller-Kaufman medium, inhibition of E. coli is 10%, in selenitic medium - 20%, while in the proposed nutrient medium there is a complete 100% inhibition of E. coli, while maintaining high cumulative properties. The efficiency of accumulation in the proposed and control environment is 10 ⁶ times.

Питательная среда разработана на основе сухих отечественных ингредиентов, проста в применении, дешевле среды прототипа. The nutrient medium is developed on the basis of dry domestic ingredients, easy to use, cheaper than the prototype environment.

Источники информации
1. ВФС 42-4ВС-85 Питательная среда для накопления сальмонелл, сухая (селенитовая среда Лейфсона).Sources of information
1. VFS 42-4BC-85 Nutrient medium for the accumulation of Salmonella, dry (selenite Leifson medium).

2. Г.П. Калина, В.Л. Шиганова. Среда с хлористым магнием для обнаружения сальмонелл. Лаб. дело, 1972, 4, с. 240-243. 2. G.P. Kalina, V.L. Shiganova. Salmonella detection medium with magnesium chloride. Lab business, 1972, 4, p. 240-243.

3. А. С. Лабинская. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978, с. 348-349, 361. 3. A. S. Labinskaya. Microbiology with the technique of microbiological research. M .: Medicine, 1978, p. 348-349, 361.

4. ФС 42-224ВС-88. Питательный бульон для культивирования микроорганизмов, сухой. 4. FS 42-224BC-88. Nutrient broth for the cultivation of microorganisms, dry.

Claims

Salmonella accumulation medium containing a nutrient base, carbonate salt, sodium chloride, sodium thiosulfate, brilliant green, Lugol's solution, distilled water, characterized in that it contains fish pancreatic hydrolyzate and dry enzyme peptone as carbonate salt as a nutrient base - sodium carbonate, additionally contains extract of fodder yeast as a growth promoter in the following ratio of components, g / l:
Pancreatic hydrolyzate of fish - 6.6-6.8
Sodium Chloride - 3.2-3.4
Dry Peptone - 4.9-5.1
Fodder Yeast Extract - 2.4-2.6
Sodium thiosulfate - 39.0-41.0
Sodium carbonate - 0.45-0.55
Diamond Green - 0.009-0.011
Lugol's solution - 18.0-22.0
Distilled water - Up to 1 L