RU2188195C2 - 5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect - Google Patents
5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect Download PDFInfo
- Publication number
- RU2188195C2 RU2188195C2 RU2000112001/04A RU2000112001A RU2188195C2 RU 2188195 C2 RU2188195 C2 RU 2188195C2 RU 2000112001/04 A RU2000112001/04 A RU 2000112001/04A RU 2000112001 A RU2000112001 A RU 2000112001A RU 2188195 C2 RU2188195 C2 RU 2188195C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cat
- pyridinium
- thiobarbituric
- bis
- arylidene
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области органической химии и медицины, конкретно к барбитуровым кислотам и их производным и предназначено для использования в качестве противовирусных средств по отношению к вирусам герпеса и средств, обладающих антихламидийной и иммуномодулирующей активностью. The invention relates to the field of organic chemistry and medicine, specifically to barbituric acids and their derivatives, and is intended for use as antiviral agents against herpes viruses and agents having antichlamydia and immunomodulatory activity.
Многие производные пиримидина являются биологически активными веществами. Спектр биологической активности соединений этого класса весьма широк Производные пиримидина являются нуклеиновыми основаниями (урацил, тимин, цитозин), витаминами (тиамин, фосфотиамин), коферментами (кокарбоксилаза), используются как фармацевтические препараты, обладающие снотворным, противосудорожным (барбитураты, гексамидин, бензонал), диуретическим (меркузал), противовоспалительным (пентоксил, метилурацил), антитиреоидным (метилтиоурацил) действием, являются синтетическими аналогами витаминов (бефотиамин), анаболическим (оротовая кислота), противовоспалительным и антибактериальным (сульфазин, сульфадимезин, сульфамонометоксин, сульфадиметоксин, бактрим, салазодиметоксин), антималярийным (хлоридин), противораковым (допан, фосфемид, этимидин, фторурацил, фторафур, цитарабин) действием [1, 2]. Many pyrimidine derivatives are biologically active substances. The spectrum of biological activity of compounds of this class is very wide. Pyrimidine derivatives are nucleic bases (uracil, thymine, cytosine), vitamins (thiamine, phosphothiamine), coenzymes (cocarboxylase), are used as pharmaceuticals with hypnotics, anticonvulsants (barbiturates, hexamidine, benzonal), diuretic (mercusal), anti-inflammatory (pentoxyl, methyluracil), antithyroid (methylthiouracil) action, are synthetic analogues of vitamins (befotiamine), anabolic (orotovy islota), anti-inflammatory and antibacterial (sulfazin, sulfadimezin, sulfamonomethoxine, sulfadimethoxine, Bactrim, salazodimetoksina), antimalarial (hloridin), anticancer (DOPA fosfemid, etimidin, fluorouracil, ftorafur, cytarabine) activity [1, 2].
В последние десятилетия значительный интерес проявляется к системам, в которых пиримидиновый цикл сконденсирован с другими гетероциклами. Зачастую такие гетероциклические системы являются аналогами природных биологически активных веществ. К ним относятся пурины, входящие в состав природных и синтетических биологически активных веществ: нуклеиновых кислот (аденин, гуанин), АТФ, препаратов, возбуждающих центральную нервную систему, действующие на сердечно-сосудистую систему (кофеин, теобромин, теофиллин, нигексин, дипрофиллин, ксантинола никотинат), применяемые для подавления тканевой несовместимости при пересадке органов (азатиоприн) (цитостатический и иммунодепрессивный эффект), обладающие анаболическим (инозин), антилейкемическим (меркаптопурин) действием, пиразоло[3,4-d]пиримидины, используемые для лечения заболеваний, сопровождающихся гиперурикемией (аллопуринол), птеридины, используемые как диуретики (триамтрен), витамины (рибофлавин, фолиевая кислота), противораковые (метотрексат) препараты, пиримидо[5,4-d]пиримидины, обладающие сосудорасширяющим действием (дипиридамол) [1, 2]. In recent decades, considerable interest has been shown in systems in which the pyrimidine ring is condensed with other heterocycles. Often, such heterocyclic systems are analogues of natural biologically active substances. These include purines, which are part of natural and synthetic biologically active substances: nucleic acids (adenine, guanine), ATP, drugs that excite the central nervous system, act on the cardiovascular system (caffeine, theobromine, theophylline, nigexin, diprofillin, xanthinol nicotinate) used to suppress tissue incompatibility during organ transplantation (azathioprine) (cytostatic and immunosuppressive effects), possessing anabolic (inosine), antileukemic (mercaptopurine) action, pyrazolo [3,4-d] irimidins used to treat diseases accompanied by hyperuricemia (allopurinol), pteridins used as diuretics (triamtren), vitamins (riboflavin, folic acid), anticancer (methotrexate) drugs, pyrimido [5,4-d] pyrimidines with vasodilating effect ( dipyridamole) [1, 2].
Данные о биологической активности ряда производных 5-илиденбарбитуровых кислот суммированы в обзоре [3] , в котором отмечены антиконвульсантное, антимикробное, спазмолитическое, жаропонижающее, противоопухолевое действие этих веществ Материал этого обзора можно дополнить некоторыми новыми данными о пестицидной, инсектицидной [4], жаропонижающей [5,6], анальгезирующей [7], противовирусной [8-10] и фунгицидной [11-13] активностях, показанных у соединений этой группы химических веществ. The data on the biological activity of a number of derivatives of 5-ylidene barbituric acids are summarized in the review [3], in which the anticonvulsant, antimicrobial, antispasmodic, antipyretic, antitumor effects of these substances are noted. The material in this review can be supplemented with some new data on pesticidal, insecticidal [4], antipyretic [ 5,6], analgesic [7], antiviral [8-10] and fungicidal [11-13] activities shown in compounds of this group of chemicals.
Таким образом, имеющиеся в литературе сведения о биологической активности 5-замещенных барбитуровых кислот и конденсированных систем, содержащих фрагмент пиримидиндиона, обладают пестицидным, инсектицидным, фунгицидным действием, противовоспалительной, противоопухолевой, противовирусной, антимикробной, антиаллергической активностью, действием на сердечно-сосудистую и иммуннную систему. Однако эффективность большинства уже известных веществ недостаточно высока, многие из них токсичны и обладают побочными эффектами. Кроме того, большая часть микробов, вызывающих заболевания человека и домашних животных, устойчивы к основным из существующих препаратов. Указанная устойчивость не позволяет эффективно справляться с такими опасными для жизни людей инфекциями, как туберкулез, герпес, хламидиозы [14-16]. Хорошо известна и высокая устойчивость опухолевых клеток к существующим противоопухолевым препаратам [17]. Thus, the literature data on the biological activity of 5-substituted barbituric acids and condensed systems containing a pyrimidinedione fragment have a pesticidal, insecticidal, fungicidal, anti-inflammatory, anti-tumor, antiviral, antimicrobial, anti-allergic activity, and an effect on the cardiovascular immune system. . However, the effectiveness of most already known substances is not high enough, many of them are toxic and have side effects. In addition, most microbes that cause diseases in humans and domestic animals are resistant to the main existing drugs. The indicated resistance does not allow to cope effectively with such life-threatening infections as tuberculosis, herpes, chlamydia [14-16]. The high resistance of tumor cells to existing antitumor drugs is well known [17].
В литературе имеется лишь несколько примеров конденсации барбитуровой и 2-тиобарбитуровой кислот с карбонильными соединениями в соотношении 2 : 1 [18-22]. Так, барбитутуровая кислота с изатином и 1-метилизатином реагирует, образуя бисбарбитурилизатин [18], 2-тиобарбитуровая кислота при нагревании с бензальдегидом в анилине превращается в дианилиниевую соль 5,5'-бензилиденбис(2-тиобарбитуровой) кислоты [19], при нагревании 5-салицилиденбарбитуровой кислоты в этаноле она превращается, по данным авторов работ [19-22], в 5,5'-салицилиденбис(2-тиобарбитуровую) кислоту. Однако в работах [23,24] было показано, что барбитуровые и 2-тиобарбитуровые кислоты дают с салициловыми альдегидами 5-(4,6-диоксо-5-пиримидинил)хромено[2,3-d]пиримидины. Описание синтеза 5,5'-или-денбисбарбитуровых или 5,5'-илиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот из алифатических альдегидов и кетонов [6,25], а также 5,5'-бензилиденбисбарбитуровой кислоты [26] является, по-видимому, ошибочным. In the literature there are only a few examples of condensation of barbituric and 2-thiobarbituric acids with carbonyl compounds in a ratio of 2: 1 [18-22]. Thus, barbitucuric acid with isatin and 1-methylisatin reacts to form bisbarbiturilizatin [18], when heated with benzaldehyde in aniline, it turns into the 5.5-benzylidenebis (2-thiobarbituric) acid dianilinium salt [19] when heated 5-salicylidene barbituric acid in ethanol, it is converted, according to the authors of [19-22], into 5,5'-salicylidene bis (2-thiobarbituric) acid. However, it was shown in [23,24] that barbituric and 2-thiobarbituric acids give 5- (4,6-dioxo-5-pyrimidinyl) chromeno [2,3-d] pyrimidines with salicylic aldehydes. The synthesis of 5,5'-or-denbisbarbituric or 5,5'-ylidenebis (2-thiobarbituric) acids from aliphatic aldehydes and ketones [6,25], as well as 5,5'-benzylidenebisbarbituric acid [26] is a description of the synthesis of apparently erroneous.
Известна также 5,5'-салицилиденбис(2-тиобарбитуровая) кислота. Ее химическое строение и свойства подробно описаны в [27]. Она малотоксична и продлевает сон, вызванный барбитуратами, но не другими симпатомиметиками; кроме того, она проявляет вазопрессорный эффект. Другой биологической активности у нее не обнаружено. Последнее соединение - наиболее близкое к заявляемым по своей химической природе. Поэтому оно выбрано в качестве прототипа изобретения. 5.5'-salicylidenebis (2-thiobarbituric) acid is also known. Its chemical structure and properties are described in detail in [27]. It has low toxicity and prolongs sleep caused by barbiturates, but not by other sympathomimetics; in addition, it exhibits a vasopressor effect. No other biological activity was found in her. The last compound is the closest to the claimed in its chemical nature. Therefore, it is selected as a prototype of the invention.
Приведенный выше материал свидетельствует о перспективности поиска и создания новых эффективных биологически активных веществ путем конденсации барбитуровых кислот с карбонильными соединениями, приводящей, в частности, к 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровым) кислотам или солям 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот. The above material demonstrates the promise of the search and creation of new effective biologically active substances by condensation of barbituric acids with carbonyl compounds, leading, in particular, to 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids or salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5 , 5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids.
Задача изобретения
Задачей изобретения является создание новой группы химических веществ, обладающих противомикробной, противовирусной, иммуномодулирующей и противоопухолевой активностями.Object of the invention
The objective of the invention is the creation of a new group of chemicals with antimicrobial, antiviral, immunomodulating and antitumor activities.
Сущность изобретения
Поставленная задача решается синтезом новых веществ - 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот или солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5 5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот общей формулы
где: Х выбран из группы КИСЛОРОД, СЕРА,
R1 выбран из группы ВОДОРОД, НИТРОГРУППА. АЛКОКСИГРУППА,
R2 выбран из группы ВОДОРОД, НИТРОГРУППА, ГИДРОКСИГРУППА, АЛКОКСИГРУППА, ГАЛОГЕН,
Cat+ выбран из группы ПРОТОН, ПИРИДИНИЙ- или 2-ГИДРОКСИЭТИЛАММОНИЙ - КАТИОН
При этом лучшие известные заявителю варианты заявляемых веществ - при:
Х=O (кислород), Cat+ - пиридиний, R1=H (водород), R2=C1 (галоген) (I),
Х= O (кислород), Cat+ - пиридиний, R1=H (водород), R2=NO2(нитpoгpyппa) (II),
Х= O (кислород), Cat+ - Н3N+СН2СН2ОН (2-гидроксиэтиламмоний ), R1=H (водород), R2=NO2 (нитрогруппа) (III);
X=S (сера), Cat+ - пиридиний, R1=H (водород), R2=Cl (галоген) (IV);
X=S(cepa), Cat+ - пиридиний, R1=H(водород), R2=OH (гидроксигруппа) (V),
X=S (сера), Cat+ - пиридиний, R1=NO2 (нитрогруппа), R2=H (водород) (VI),
X=S (сера), Cat+ - пиридиний, R1=R2=MeO (алкоксигруппа) (VII);
Х= O (кислород), Cat+ - пиридиний, R1= H (водород), R2=Br (галоген) (VIII);
Х= O (кислород), Cat+ - H+ (протон), R1=H (водород), R2=Cl (галоген) (IX);
Х=O (кислород), Cat+ - H+ (протон), R1=H (водород), R2=NO2 (нитрогруппа) (X).SUMMARY OF THE INVENTION
The problem is solved by the synthesis of new substances - 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric acid) and salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5 5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids of the general formula
where: X is selected from the group OXYGEN, SERA,
R 1 is selected from the group HYDROGEN, NITRO GROUP. Alcoxy Group,
R 2 is selected from the group HYDROGEN, NITROGROUP, HYDROXYGROUP, ALCOXYGROUP, HALOGEN,
Cat + is selected from the group PROTON, Pyridinium or 2-Hydroxyethylammonium - Cation
In this case, the best known to the applicant options for the claimed substances - with:
X = O (oxygen), Cat + - pyridinium, R 1 = H (hydrogen), R 2 = C1 (halogen) (I),
X = O (oxygen), Cat + - pyridinium, R 1 = H (hydrogen), R 2 = NO 2 (nitro group) (II),
X = O (oxygen), Cat + - H 3 N + CH 2 CH 2 OH (2-hydroxyethylammonium), R 1 = H (hydrogen), R 2 = NO 2 (nitro group) (III);
X = S (sulfur), Cat + - pyridinium, R 1 = H (hydrogen), R 2 = Cl (halogen) (IV);
X = S (cepa), Cat + - pyridinium, R 1 = H (hydrogen), R 2 = OH (hydroxy group) (V),
X = S (sulfur), Cat + - pyridinium, R 1 = NO 2 (nitro group), R 2 = H (hydrogen) (VI),
X = S (sulfur), Cat + - pyridinium, R 1 = R 2 = MeO (alkoxy group) (VII);
X = O (oxygen), Cat + - pyridinium, R 1 = H (hydrogen), R 2 = Br (halogen) (VIII);
X = O (oxygen), Cat + - H + (proton), R 1 = H (hydrogen), R 2 = Cl (halogen) (IX);
X = O (oxygen), Cat + - H + (proton), R 1 = H (hydrogen), R 2 = NO 2 (nitro group) (X).
Следует отметить, что использование остальных представителей алкоксигруппы и галогенов не ведет к принципиальным отличиям в процессах синтеза и биологических свойств заявляемых веществ, т.е. существенное значение имеют не конкретные элементы, а их принадлежность к указанным в общей формуле химическим группам. It should be noted that the use of the remaining representatives of the alkoxy group and halogens does not lead to fundamental differences in the synthesis processes and biological properties of the claimed substances, i.e. not specific elements are essential, but their belonging to the chemical groups indicated in the general formula.
Предложенные лучшие варианты для наглядности представлены в таблице А. The proposed best options for clarity are presented in table A.
Приведенная выше общая формула и все перечисленные конкретные варианты соединений являются новыми, они неизвестны заявителям из доступных источников информации. The above general formula and all of the specific compounds listed above are new; they are unknown to applicants from available sources of information.
Раскрытие изобретения
Сущность изобретения поясняется приведенными ниже восемью примерами синтеза заявляемых веществ, тремя таблицами физико-химических характеристик полученных веществ и результатами пяти серий экспериментов по определению сравнительных биологических свойств (с соответствующими таблицами количественных исследований), где
Пример 1 - вариант синтеза пиридиниевых солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (I, II, IV-VIII).Disclosure of invention
The invention is illustrated by the following eight examples of the synthesis of the claimed substances, three tables of physico-chemical characteristics of the obtained substances and the results of five series of experiments to determine comparative biological properties (with the corresponding tables of quantitative studies), where
Example 1 - a variant of the synthesis of the pyridinium salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (I, II, IV-VIII).
Пример 2 - вариант синтеза пиридиниевых солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (I, II, IV-VIII). Example 2 - a variant of the synthesis of the pyridinium salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (I, II, IV-VIII).
Пример 3 - вариант синтеза 2-гидроксиэтиламмониевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден) бисбарбитуровой кислоты (III). Example 3 - a variant of the synthesis of 2-hydroxyethylammonium salt of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bisbarbituric acid (III).
Пример 4 - вариант синтеза 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (IХ, Х). Example 4 - a variant of the synthesis of 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (IX, X).
Пример 5 - лучший известный авторам вариант синтеза пиридиниевой соли 5,5'-(n-бромбензилиден) бисбарбитуровой кислоты (VIII). Example 5 is the best known to the authors version of the synthesis of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-bromobenzylidene) bisbarbituric acid (VIII).
Пример 6 - лучший известный авторам вариант синтеза пиридиниевой соли 5,5'-(n-хлорбензилиден) бис(2-тиобарбитуровой) кислоты (IV). Example 6 - the best known to the authors version of the synthesis of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-chlorobenzylidene) bis (2-thiobarbituric) acid (IV).
Пример 7 - лучший известный авторам вариант синтеза 2-гидроксиэтиламмониевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден)бисбарбитуровой кислоты (III). Example 7 - the best known to the authors version of the synthesis of 2-hydroxyethylammonium salt of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bisbarbituric acid (III).
Пример 8 - лучший известный авторам вариант синтеза 5,5'-(n-нитробензилиден) бис(2-тиобарбитуровой) кислоты (X). Example 8 - the best known to the authors version of the synthesis of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bis (2-thiobarbituric) acid (X).
Таблица 1 - Спектры ПМР растворов полученных веществ в ДМСО-d6 (δ, м.д.)
Таблица 2 - Спектры ЯМР 13С растворов солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых, 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот в ДМСО-d6 (δ, м.д.).Table 1 - PMR spectra of solutions of the obtained substances in DMSO-d 6 (δ, ppm)
Table 2 - NMR 13 spectra of solutions of salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric, 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids in DMSO-d 6 (δ, ppm).
Таблица 3 - Выходы, температуры разложения и данные элементного анализа 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот, солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-иобарбитуровых) кислот. Table 3 - Yields, decomposition temperatures, and elemental analysis of 5.5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids, salts of 5.5'-arylidenebisbarbituric and 5.5'-arylidenebis (2-iobarbituric) acids.
Эксперимент 1 - Определение действия соединений на патогенные микобактерии. Experiment 1 - Determination of the effect of compounds on pathogenic mycobacteria.
Эксперимент 2 - Определение острой токсичности заявляемых соединений. Experiment 2 - Determination of acute toxicity of the claimed compounds.
Эксперимент 3 - Определение действия заявляемых соединений на вирус герпеса. Experiment 3 - Determination of the effect of the claimed compounds on the herpes virus.
Эксперимент 4 - Определение интерферониндуцирующей активности заявляемых соединений. Experiment 4 - Determination of interferon-inducing activity of the claimed compounds.
Эксперимент 5 - Определение действия заявляемых соединений на Chlamydia trachomatis. Experiment 5 - Determination of the effect of the claimed compounds on Chlamydia trachomatis.
Пример 1. Вариант синтеза пиридиниевых солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (I, II, IV-VIII). Example 1. A variant of the synthesis of the pyridinium salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (I, II, IV-VIII).
Смесь 4.6 ммоль 5-арилиденбарбитуровой кислоты и 46 ммоль барбитуровой кислоты в 10-15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 1-2 ч. После охлаждения реакционной массы осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат при 55-60oС при остаточном давлении 30 мм рт.ст. Для выделения тиопроизводных из реакционной массы к ней добавляют 10-20 мл диоксана или воды, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этанолом и сушат.A mixture of 4.6 mmol of 5-arylidene barbituric acid and 46 mmol of barbituric acid in 10-15 ml of pyridine is refluxed for 1-2 hours. After cooling the reaction mixture, the precipitate is filtered off, washed with acetone and dried at 55-60 ° C at a residual pressure of 30 mmHg. To isolate thio derivatives from the reaction mixture, 10-20 ml of dioxane or water are added to it, the precipitate formed is filtered off, washed with ethanol and dried.
Пример 2. Вариант синтеза пиридиниевых солей 5,5'-арилиденбисбарбитуровых и 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (I, II, IV-VIII). Example 2. A variant of the synthesis of the pyridinium salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (I, II, IV-VIII).
Смесь 3 ммоль барбитуровой кислоты и 1.5 ммоль соответствующего альдегида в 10-15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 1-2 ч. После охлаждения реакционной массы осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат при 55-60oС при остаточном давлении 30 мм рт.ст. Для выделения тиопроизводных из реакционной массы к ней добавляют 10-20 мл диоксана или воды, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этанолом и сушат. Для проведения реакций используют 3 ммоля барбитуровой кислоты и 1,5 ммоля соответствующего альдегида. Синтез и выделение продуктов проводят аналогично предыдущей методике.A mixture of 3 mmol of barbituric acid and 1.5 mmol of the corresponding aldehyde in 10-15 ml of pyridine is refluxed for 1-2 hours. After cooling the reaction mass, the precipitate is filtered off, washed with acetone and dried at 55-60 ° C at a residual pressure of 30 mm RT .art. To isolate thio derivatives from the reaction mixture, 10-20 ml of dioxane or water are added to it, the precipitate formed is filtered off, washed with ethanol and dried. For reactions using 3 mmol of barbituric acid and 1.5 mmol of the corresponding aldehyde. Synthesis and isolation of products is carried out similarly to the previous method.
Пример 3. Вариант синтеза 2-гидроксиэтиламмониевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден)бисбарбитуровой кислоты (III). Example 3. Variant of synthesis of 2-hydroxyethylammonium salt 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bisbarbituric acid (III).
2 г пиридиниевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден)бисбарбитуровой кислоты добавляют к раствору 0,4 г 2-аминоэтанола в 50 мл этанола. Смесь перемешивают при 20oС в течение 10 мин. Выпавший ярко-красный осадок отфильтровывают, промывают этанолом 3х40 мл, сушат при 50oС в вакууме. Выход количественный.2 g of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bisbarbituric acid is added to a solution of 0.4 g of 2-aminoethanol in 50 ml of ethanol. The mixture was stirred at 20 ° C. for 10 minutes. The precipitated bright red precipitate is filtered off, washed with ethanol 3x40 ml, dried at 50 o C in vacuum. The output is quantitative.
Пример 4. Вариант синтеза 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровых) кислот (IХ, Х). Example 4. Variant of synthesis of 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids (IX, X).
К смеси 1 г 2-тиобарбитуровой кислоты и 10 мл этанола добавляют раствор 0.5 г бензальдегида в 10 мл этанола. После перемешивания реакционной массы при 20oС в течение 20-30 мин осадок отфильтровывают и сушат. Очистку можно проводить нагреванием осадка в ацетоне, в котором 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровые) кислоты не растворяются.To a mixture of 1 g of 2-thiobarbituric acid and 10 ml of ethanol, a solution of 0.5 g of benzaldehyde in 10 ml of ethanol is added. After stirring the reaction mass at 20 o C for 20-30 minutes, the precipitate is filtered off and dried. Cleaning can be carried out by heating the precipitate in acetone, in which 5.5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids do not dissolve.
Примеры лучших известных авторам вариантов синтеза заявляемых веществ формулы (I)
Пример 5. Лучший известный авторам вариант синтеза пиридиниевой соли 5,5'-(n-бромбензилиден)бисбарбитуровой кислоты (VIII).Examples of the best known to the authors of the options for the synthesis of the claimed compounds of formula (I)
Example 5. The best known to the authors version of the synthesis of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-bromobenzylidene) bisbarbituric acid (VIII).
Смесь 4.6 ммоль 5-n-бромбензилиденбарбитуровой кислоты и 4.6 ммоль барбитуровой кислоты в 10-15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 1-2 ч. После охлаждения реакционной массы осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат при 55-60oС при остаточном давлении 30 мм рт. ст.A mixture of 4.6 mmol of 5-n-bromobenzylidene barbituric acid and 4.6 mmol of barbituric acid in 10-15 ml of pyridine is refluxed for 1-2 hours. After cooling the reaction mixture, the precipitate is filtered off, washed with acetone and dried at 55-60 ° C with a residual a pressure of 30 mm RT. Art.
Пример 6. Лучший известный авторам вариант синтеза пиридиниевой соли 5,5'-(n-хлорбензилиден)бис(2-тиобарбитуровой) кислоты (IV). Example 6. The best known to the authors version of the synthesis of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-chlorobenzylidene) bis (2-thiobarbituric) acid (IV).
Смесь 3 ммоль 2-тиобарбитуровой кислоты и 1.5 ммоль n-хлорбензальдегида в 10-15 мл пиридина кипятят с обратным холодильником в течение 1-2 ч. После охлаждения реакционной массы к ней добавляют 10-20 мл диоксана или воды, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этанолом и сушат при 55-60oС.A mixture of 3 mmol of 2-thiobarbituric acid and 1.5 mmol of n-chlorobenzaldehyde in 10-15 ml of pyridine is refluxed for 1-2 hours. After cooling the reaction mixture, 10-20 ml of dioxane or water are added to it, the precipitate formed is filtered off, washed ethanol and dried at 55-60 o C.
Пример 7. Лучший известный авторам пример синтеза 2-гидроксиэтиламмониевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден)-бисбарбитуровой кислоты (III). Example 7. The best known to the authors an example of the synthesis of 2-hydroxyethylammonium salt of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) -bisbarbituric acid (III).
2 г пиридиниевой соли 5,5'-(n-нитробензилиден)бисбарбитуровой кислоты добавляют к раствору 0.4 г 2-аминоэтанола в 50 мл этанола. Смесь перемешивают при 20oС в течение 10 мин. Выпавший ярко-красный осадок отфильтровывают, промывают этанолом 3х40 мл, сушат при 50oС в вакууме. Выход количественный.2 g of the pyridinium salt of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bisbarbituric acid is added to a solution of 0.4 g of 2-aminoethanol in 50 ml of ethanol. The mixture was stirred at 20 ° C. for 10 minutes. The precipitated bright red precipitate is filtered off, washed with ethanol 3x40 ml, dried at 50 o C in vacuum. The output is quantitative.
Пример 8. Лучший известный авторам пример синтеза 5,5'-(n-нитробензилиден)бис(2-тио-барбитуровой) кислоты (X). Example 8. The best known to the authors an example of the synthesis of 5.5 '- (n-nitrobenzylidene) bis (2-thio-barbituric) acid (X).
К смеси 1 г 2-тиобарбитуровой кислоты и 10 мл этанола добавляют раствор 0.5 г бензальдегида в 10 мл этанола. После перемешивания реакционной массы при 20oС в течение 20-30 мин осадок отфильтровывают и сушат. Очистку можно проводить нагреванием осадка в ацетоне, в котором 5,5'-арилиденбис(2-тиобарбитуровые) кислоты не растворяются.To a mixture of 1 g of 2-thiobarbituric acid and 10 ml of ethanol, a solution of 0.5 g of benzaldehyde in 10 ml of ethanol is added. After stirring the reaction mass at 20 o C for 20-30 minutes, the precipitate is filtered off and dried. Cleaning can be carried out by heating the precipitate in acetone, in which 5.5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids do not dissolve.
Экспериментальная проверка биологической активности заявляемых соединений
Эксперимент 1. Определение действия соединений на патогенные микобактерии
В эксперименте использованы штаммы, выделенные от больных в клиниках С. Петербурга (Россия) в 1996 году M.tuberculosis 61 (S), чувствительный к действию известных антимикробных препаратов (аминогликозидов, рифампицина, изониазида, этамбутола), M.tuberculosis 16®, устойчивый к основным антимикобактериальным препаратам; исследование проводили на среде Левенштейна-Йенсена. Препараты, растворенные в (ДМСО), добавляли в отдельные пробирки со средой в конечной концентрации 10 мг/л. После засева тест-штаммов на поверхность среды пробирки инкубировали в течение 30 суток. В контроле использовали ДМСО в соответствующих концентрациях и стандартные препараты, используемые для лечения туберкулеза и микобактериозов (таблица 4).Experimental verification of the biological activity of the claimed compounds
The experiment used strains isolated from patients in clinics in St. Petersburg (Russia) in 1996 M. tuberculosis 61 (S), sensitive to the action of known antimicrobial agents (aminoglycosides, rifampicin, isoniazid, ethambutol), M. tuberculosis 16 ® , stable to the main antimycobacterial drugs; the study was performed on Levenshtein-Jensen medium. Drugs dissolved in (DMSO) were added to separate tubes with medium at a final concentration of 10 mg / L. After seeding of test strains on the surface of the medium, the tubes were incubated for 30 days. DMSO at appropriate concentrations and standard preparations used to treat tuberculosis and mycobacteriosis were used in the control (table 4).
Полученные данные свидетельствуют, что указанные в таблице заявляемые соединения угнетают рост всех использованных в опыте видов и штаммов микобактерий. Таким образом, in vitro они действуют и на штамм микобактерий, выделенный от больных, устойчивый к основным препаратам, используемым для лечения туберкулеза. Остальные заявляемые соединения обладают в аналогичных условиях меньшей антимикобактериальной активностью. The data obtained indicate that the claimed compounds indicated in the table inhibit the growth of all species and strains of mycobacteria used in the experiment. Thus, in vitro, they act on a strain of mycobacteria isolated from patients that is resistant to the main drugs used to treat tuberculosis. The rest of the claimed compounds have in similar conditions less antimycobacterial activity.
Эксперимент 2. Определение острой токсичности заявляемых веществ
Определение острой токсичности проведено на беспородных белых мышах массой 18-20 г. Заявляемые соединения вводили в различных концентрациях: 1500, 700, 500, 100, 20 и 5 мг/кг. Для исследования каждой концентрации соединения использовали по 5 животных Препарат вводили один раз в сутки через рот или внутрибрюшинно. Период наблюдения составил 14 дней. На 1, 8 и 15 день проводили взвешивание животных в каждой группе. Для контроля использовали животных, которым вводили эмульсию, приготовленную без испытуемых соединений. Для макроскопического исследования внутренних органов проводили вскрытие всех животных, умерших в ходе опыта и выживших к концу эксперимента. В ходе проведенных исследований не наблюдалось: потери веса, изменения в поведении и внешнем виде, а также гибели животных. По результатам вскрытия макроскопической патологии со стороны внутренних органов животных как в опытной, так и в контрольной группах, обнаружено не было. Острая токсичность (LD 50) заявляемого вещества - соединения Х - 1000 мг/кг.
The determination of acute toxicity was carried out on outbred white mice weighing 18-20 g. The inventive compounds were administered in various concentrations: 1500, 700, 500, 100, 20 and 5 mg / kg. Five animals were used to study each concentration of the compound. The drug was administered once a day through the mouth or intraperitoneally. The observation period was 14 days. On
Полученные результаты свидетельствуют, что при приеме через рот или внутрибрюшинно некоторые заявляемые соединения в концентрации 1000 мг/кг не обладают острой токсичностью для мышей. The results obtained indicate that when taken by mouth or intraperitoneally, some of the claimed compounds at a concentration of 1000 mg / kg do not have acute toxicity to mice.
Эксперимент 3. Определение действия заявляемых соединений на вирус герпеса
Антивирусная активность определялась по отношению к вирусу герпеса I типа (ВПГ-I /Ленинград/248/88) по общепринятому методу (21).Вирусы выращивали на перевиваемой культуре клеток Vero, полученной из банка клеточных культур Института цитологии Российской Академии Наук.
Antiviral activity was determined in relation to the type I herpes virus (HSV-I / Leningrad / 248/88) according to the generally accepted method (21). The viruses were grown on a transplantable Vero cell culture obtained from the cell culture bank of the Institute of Cytology of the Russian Academy of Sciences.
Схема постановки опыта
К клеткам, выращенным на среде RPMI-1640 с 10% телячей сыворотки и помещенным в лунки 96 луночного плато, добавляли вирус в конечной концентрации 10 частиц/мл и заявляемые соединения, растворенные в ДМСО, в конечной концентрации 100, 10 и 1 мг/л. Для каждой испытанной концентрации препарата использовали 5 независимых лунок. Плато инкубировали в течение 60 мин при 38oС в СО2-инкубаторе. После инкубации вирус удаляли и снова вносили свежую среду, содержащую заявляемые соединения в использованных концентрациях. Результаты оценивали по наличию цитопатогенного действия вируса на клетки через 36 часов инкубации при 38oС в СО2-инкубаторе.Test setup
To cells grown on RPMI-1640 medium with 10% calf serum and placed in wells of 96 wells, virus was added at a final concentration of 10 particles / ml and the inventive compounds dissolved in DMSO at a final concentration of 100, 10 and 1 mg / L . For each tested drug concentration, 5 independent wells were used. The plateau was incubated for 60 min at 38 ° C in a CO2 incubator. After incubation, the virus was removed and fresh medium was added again containing the claimed compounds in the used concentrations. The results were evaluated by the presence of the cytopathogenic effect of the virus on the cells after 36 hours of incubation at 38 ° C in a CO2 incubator.
В опыте были использованы следующие контроли:
1. Контроль культуры клеток (способность к нормальному росту).The following controls were used in the experiment:
1. Control of cell culture (ability to normal growth).
2. Контроль вируса (оценка способности к репродукции). 2. Virus control (reproductive capacity assessment).
3. Контроль антивирусной активности противовирусного препарата - ацикловира. 3. Control of antiviral activity of the antiviral drug - acyclovir.
4. Контроль соединений (токсичность соединений). 4. Control of compounds (toxicity of compounds).
5. Контроль растворителя (ДМСО) на токсичность. 5. Solvent control (DMSO) for toxicity.
Для оценки цитопатического действия вируса подсчитывали число неизмененных клеток в 100 полях, образованных специальной сеткой окуляра инвертированного микроскопа. Полученные результаты представлены в таблице 5. To assess the cytopathic effect of the virus, the number of unchanged cells was counted in 100 fields formed by a special grid of an inverted microscope eyepiece. The results are presented in table 5.
Полученные результаты указывают, что все заявляемые соединения обладают антигерпетической активностью, сравнимой с таковой у стандартного препарата ацикловира. The results obtained indicate that all of the claimed compounds have antiherpetic activity comparable to that of the standard preparation of acyclovir.
Эксперимент 4. Определение интерферониндуцирующей активности заявляемых соединений
Индукцию синтеза интерферонов заявляемыми препаратами проводили на первичной культуре человеческих лимфоцитов (именно данные клетки в организме человека являются основными продуцентами интерферонов). Для получения культуры лимфоцитов использовали свежую (12 часов после забора) кровь здоровых доноров (не второй группы). Для выделения лимфоцитов гепаринизированная кровь, полученная от здорового донора, подвергалась центрифугированию в градиенте плотности фиколл-верографин 1.71 г/см3 для выделения фракции иммунокомпетентных клеток. Указанная фракция отбиралась и разводилась питательной средой RPMI-1640, содержащей 5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 0.3 мг/мл L-глутамина, 100 ед./мл пенициллина, 50 мг/мл стрептомицина. Концентрацию лимфоцитов учитывали после окрашивания метиленовым синим и подсчета количества клеток в камере Горяева. Исходные растворы заявляемых веществ разводили питательной средой RPMI-1640 так, чтобы конечные концентрации веществ составляли ряд: 100 мг/л, 10 мг/л, 1 мг/л после внесения суспензии лимфоцитов. Конечная концентрация лимфоцитов в индукционной смеси составила 3х106 клеток/мл.
Induction of the synthesis of interferons by the claimed drugs was carried out on the primary culture of human lymphocytes (these cells in the human body are the main producers of interferons). To obtain a culture of lymphocytes, fresh (12 hours after collection) blood of healthy donors (not of the second group) was used. To isolate lymphocytes, heparinized blood obtained from a healthy donor was centrifuged in a density gradient of ficoll-verographin 1.71 g / cm 3 to isolate a fraction of immunocompetent cells. The specified fraction was selected and diluted with RPMI-1640 nutrient medium containing 5% fetal bovine serum, 0.3 mg / ml L-glutamine, 100 units / ml penicillin, 50 mg / ml streptomycin. The concentration of lymphocytes was taken into account after staining with methylene blue and counting the number of cells in the Goryaev chamber. Stock solutions of the claimed substances were diluted with RPMI-1640 nutrient medium so that the final concentrations of the substances were a number: 100 mg / l, 10 mg / l, 1 mg / l after application of the suspension of lymphocytes. The final concentration of lymphocytes in the induction mixture was 3x10 6 cells / ml.
Параллельно с опытными пробами проставлялись следующие контроли:
1) контроль спонтанной продукции интерферонов (ИФН) лимфоцитами;
2) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН N-метил-N-(α-D-глюкопиранозил)аммоний-10-метилен-карбоксилат акридона (циклоферон);
3) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН - Неовира (натрия 10-метиленкарбоксилат-9-акридон) с соответствующим содержанием ДМСО в опытных пробах;
4) контроль спонтанной продукции интерферонов в присутствии ДМСО в количестве, соответствующем испытуемым образцам.In parallel with the experimental samples, the following controls were affixed:
1) control of spontaneous production of interferons (IFN) by lymphocytes;
2) control of the process under the influence of a standardized IFN inducer N-methyl-N- (α-D-glucopyranosyl) ammonium-10-methylene-carboxylate acridone (cycloferon);
3) control of the process under the influence of a standardized IFN inducer - Neovir (sodium 10-methylenecarboxylate-9-acridone) with the corresponding content of DMSO in experimental samples;
4) control of the spontaneous production of interferons in the presence of DMSO in an amount corresponding to the test samples.
Контрольные и опытные образцы инкубировали 24 часа при 37oС. После инкубации пробы центрифугировались при 2000 g для осаждения клеточных элементов и из проб отбирался ИФН-содержащий супернатант, который анализировали на количественное содержание ИФН. Осадок клеток ресуспендировали в прежнем объеме питательной среды, окрашивали витальным красителем - трипановым синим и подсчитывали число клеток в камере Горяева (как описано выше) для определения цитотоксического действия препаратов.Control and experimental samples were incubated for 24 hours at 37 o C. After incubation, the samples were centrifuged at 2000 g to precipitate the cell elements and IFN-containing supernatant was taken from the samples, which were analyzed for the quantitative content of IFN. The cell pellet was resuspended in the same volume of the nutrient medium, stained with vital dye, trypan blue, and the number of cells in the Goryaev chamber was counted (as described above) to determine the cytotoxic effect of the preparations.
Количественное определение содержания ИФН в контрольных и опытных образцах производили с использованием иммуноферментной тест-системы на ИФН-а производства ТОО "Протеиновый контур" ProCon IF2 plus. Для определения количества интерферона в пробе использовали твердофазный иммуноферментный метод с использованием пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Активность связанной пероксидазы измеряли с использованием автоматического фотометра для микропланшетов с микропроцессором при длине волны 450 нм. Для подсчета результатов параллельно определяли активность ИФН у стандартных растворов ИФН, содержащих известное количество препарата. На основании полученных результатов строилась калибровочная кривая, позволяющая при использовании микропроцессора автоматического фотометра получать данные, выраженные в Международных единицах активности (ME). Результаты анализа выражаются в ME активности ИФН на мл в данной индукционной системе, содержащей 3•106 лимфоцитов/мл. Каждая опытная и контрольная точка исследовалась в 4-х параллелях.Quantitative determination of the content of IFN in the control and experimental samples was carried out using an enzyme-linked immunosorbent assay system on IFN-a produced by Protein circuit LLP ProCon IF2 plus. The enzyme-linked immunosorbent assay using horseradish peroxidase as an indicator enzyme was used to determine the amount of interferon in the sample. Bound peroxidase activity was measured using an automatic microplate photometer with a microprocessor at a wavelength of 450 nm. To calculate the results, IFN activity was determined in parallel for standard IFN solutions containing a known amount of the drug. Based on the results obtained, a calibration curve was constructed that, when using the microprocessor of an automatic photometer, obtain data expressed in International Activity Units (ME). The analysis results are expressed in ME IFN activity per ml in this induction system containing 3 • 10 6 lymphocytes / ml. Each experimental and control point was investigated in 4 parallels.
Контроли иммуноферментной реакции:
1. Контроль ДМСО с питательной средой.Enzyme immunoassay controls:
1. Control of DMSO with a nutrient medium.
2. Контроль компонентов системы (согласно инструкции). Все результаты учитывались только при соответствии контролей паспортным данным системы. 2. Control of system components (according to the instructions). All results were taken into account only if the controls corresponded to the system passport data.
Полученные результаты подвергались статистическому анализу по t-критерию и расчетам доверительного интервала при р=0.05. Произведен анализ сходимости результатов в параллельных опытах. The results were subjected to statistical analysis by the t-criterion and the calculation of the confidence interval at p = 0.05. An analysis of the convergence of the results in parallel experiments is performed.
Проведенные исследования установили, что фактически все заявляемые вещества обладают способностью индуцировать синтез ИФН, что указывает на их эффективность против вирусных инфекций и противоопухолевую активность (Таблица 6). Studies have shown that virtually all of the claimed substances have the ability to induce the synthesis of IFN, which indicates their effectiveness against viral infections and antitumor activity (table 6).
Эксперимент 5. Определение действия заявляемых соединений на Chlamydia trachomatis
Антимикробную, активность заявляемых соединений определяли по отношению к C. trachomatis D323 - стандартному штамму из коллекции кафедры микробиологии С. Петербургского Государственного университета им. ак. И.П. Павлова. Данный штамм был выделен от больного с хламидийным уретритом, имеет морфологию и физиологическую активность, характерную для представителей данного вида, чувствителен к действию препаратов, используемых для лечения хламидийной инфекции. В работе использованы клеточные культуры МсСоу и L929, полученные из Института цитологии Российской Академии Наук.
Antimicrobial activity of the claimed compounds was determined in relation to C. trachomatis D323 - a standard strain from the collection of the Department of Microbiology of St. Petersburg State University. ac. I.P. Pavlova. This strain was isolated from a patient with chlamydial urethritis, has a morphology and physiological activity characteristic of representatives of this species, is sensitive to the action of drugs used to treat chlamydial infection. The cell cultures MsSou and L929 obtained from the Institute of Cytology of the Russian Academy of Sciences were used in the work.
Схема постановки опыта
Клетки выращивали во флаконах из нейтрального стекла в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Опыт ставили в стеклянных (лишенных токсичности) плоскодонных флаконах с покровными стеклами. Клетки вносили в среду в конечной концентрации 1х10 кл/мл. После получения монослоя в пробирки вносили стандартные заражающие дозы хламидий, хранящиеся в замороженном состоянии при -70oС. Одновременно к клеткам добавляли испытуемый соединения в конечной концентрации 100 мг/л. Пробу центрифугировали при 2400g в течение 60 минут при комнатной температуре и инкубировали при 37oС в течение 2 часов. После этого меняли питательную среду на новую, содержащую 5% эмбриональной телячьей сыворотки и циклогексимид (2 мкг/мл) с повторным внесением заявляемых соединений в той же концентрации. Параллельно дублировали пробы, используя среду без циклогексемида, чтобы исключить его влияние на изучаемые субстанции. Пробы инкубировали в течение 48 часов в С02-инкубаторе.Test setup
Cells were grown in neutral glass vials in RPMI-1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum. The experiment was set in glass (deprived of toxicity) flat-bottomed vials with coverslips. Cells were introduced into the medium at a final concentration of 1x10 cells / ml. After receiving the monolayer, standard infectious doses of chlamydia were stored in the tubes, stored in a frozen state at -70 o C. At the same time, the test compound was added to the cells at a final concentration of 100 mg / L. The sample was centrifuged at 2400g for 60 minutes at room temperature and incubated at 37 ° C for 2 hours. After this, the nutrient medium was changed to a new one containing 5% fetal calf serum and cycloheximide (2 μg / ml) with repeated application of the claimed compounds in the same concentration. Samples were duplicated in parallel using a medium without cyclohexemide in order to exclude its effect on the studied substances. Samples were incubated for 48 hours in a CO2-incubator.
Контроли включали: контроли культур клеток, контроль действия растворителей, контроль действия хламидий в отсутствии каких бы-то ни было препаратов, контроль чувствительности хламидий к стандартному антимикробному препарату - ципрофлоксацину [29], контроль испытуемых соединений на токсичность по отношению к культурам клеток. The controls included: control of cell cultures, control of the action of solvents, control of the action of chlamydia in the absence of any drugs, control of the sensitivity of chlamydia to the standard antimicrobial drug - ciprofloxacin [29], control of the tested compounds for toxicity to cell cultures.
Оценку результатов проводили путем выявления хламидийных цитоплазматических включений с помощью метода иммунофлюоресценции (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) и хламидийных антигенов с помощью CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Parc Road London NW1 7SX) [30,31]. Эффект действия препарата определяли, анализируя состояние монослоя и число клеток с ЦПВ по сравнению с контролем (культура клеток, зараженная С. trachomatis D323), при этом учитывали число неизмененных клеток в 100 полях зрения, полученных при использовании специальной сетки окуляра микроскопа. The results were evaluated by detecting chlamydial cytoplasmic inclusions using the immunofluorescence method (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) and chlamydial antigens using CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Parc Road London NW1 7SX) [30,31]. The effect of the drug was determined by analyzing the state of the monolayer and the number of cells with CPV compared with the control (cell culture infected with C. trachomatis D323), taking into account the number of unchanged cells in 100 fields of view obtained using a special microscope eyepiece grid.
Результаты контрольных проб, удовлетворяющие требованиям эксперимента: контроль культуры клеток - морфология клеток и состояние монослоя соответствуют данному типу клеток, контроль роста хламидий в культуре клеток - наличие ЦПВ в монослое, контроль действия стандартного антимикробного препарата - уменьшение числа ЦПВ в монослое по сравнению с предыдущим контролем, контроль токсичности заявляемых соединений - токсичность отсутствует, контроль действия растворителей - токсическое действие на клетки отсутствует. Результаты проведенных испытаний представлены в таблице 7. The results of control samples that meet the requirements of the experiment: control of cell culture — cell morphology and monolayer state correspond to this type of cell, control of chlamydia growth in cell culture — presence of CPV in a monolayer, control of the action of a standard antimicrobial drug — decrease in the number of CPV in a monolayer compared to the previous control , toxicity control of the claimed compounds - no toxicity, solvent control - no toxic effect on cells. The results of the tests are presented in table 7.
Полученные данные свидетельствуют, что заявляемые соединения, приведенные в таблице 7, обладают выраженной активностью против хламидий, превосходящей таковую у стандартного препарата - ципрофлоксацина. The data obtained indicate that the claimed compounds are shown in table 7, have a pronounced activity against chlamydia, superior to that of the standard drug - ciprofloxacin.
Остальные заявляемые соединения обладают менее выраженной активностью по защите клеток от хламидий в выбранных условиях эксперимента. The rest of the claimed compounds have less pronounced activity to protect cells from chlamydia in the selected experimental conditions.
Промышленная применимость
Примеры 1-8 синтеза, практической идентификации и анализа заявляемых соединений, приведенные в таблицах 1-3, подтверждают возможность лабораторного и промышленного синтеза всех десяти заявляемых соединений средствами, освоенными современной фармацевтической промышленностью, а также их четкую идентификацию общепринятыми методами контроля.Industrial applicability
Examples 1-8 of the synthesis, practical identification and analysis of the claimed compounds, are shown in tables 1-3, confirm the possibility of laboratory and industrial synthesis of all ten of the claimed compounds by means developed by the modern pharmaceutical industry, as well as their clear identification by generally accepted control methods.
Приведенные выше результаты 5 серий экспериментов по определению биологической активности показали, что заявляемые соединения обладают биологической активностью по отношению к различным микроорганизмам, включая микобактерии, хламидии, вирус простого герпеса, а также интерферониндуцирующей активностью. Последнее указывает на возможность их использования в лечении герпеса, других вирусных и некоторых раковых заболеваний. The above results of 5 series of experiments on the determination of biological activity showed that the claimed compounds have biological activity against various microorganisms, including mycobacteria, chlamydia, herpes simplex virus, as well as interferon-inducing activity. The latter indicates the possibility of their use in the treatment of herpes, other viral and some cancers.
Приведенные факты доказывают достижение задач, поставленных изобретением: синтезирован новый класс гетероциклических соединений, обладающих высокой и широкой биологической активностью, в частности - антимикобактериальной, иммуностимулирующей, противохламидийной и противовирусной. The above facts prove the achievement of the objectives set by the invention: a new class of heterocyclic compounds with high and wide biological activity, in particular, antimycobacterial, immunostimulating, antichlamydial and antiviral, has been synthesized.
Таким образом, по нашему мнению, заявляемые средства (вещества) удовлетворяют всем требованиям, предъявляемым к изобретению: они новы, неочевидны и промышленно применимы. Thus, in our opinion, the claimed means (substances) satisfy all the requirements for the invention: they are new, non-obvious and industrially applicable.
Литература
1. Pharmaceutical microbiology, Ed. by W.B. Hugo and A.D. Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.Literature
1. Pharmaceutical microbiology, Ed. by WB Hugo and AD Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.
2. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие по фармакологии для врачей. Вильнюс, Гамта, 1993, ч.2, стр.528. 2. Mashkovsky M.D. Medicines A guide to pharmacology for doctors. Vilnius, Gamta, 1993,
3. Sans R.G., Chosas M.G. // Pharmazie. 1988. Bd 43. N 12. S. 827-829. 3. Sans R.G., Chosas M.G. // Pharmazie. 1988. Bd 43.
4. Kratt G. , Salbeck G. , Bonin W., Duewel D. Заявка Германии DE N 3903404, МКИ C 07 D 239/62, опубл 09.08.1990 (Chemical Abstracts, vol.114, 23984k). 4. Kratt G., Salbeck G., Bonin W., Duewel D. German application DE N 3903404, MKI C 07 D 239/62, published 09.08.1990 (Chemical Abstracts, vol. 114, 23984k).
5. Cowden W.B., Clark I.A., Hunt N.H. // Journal of Medical Chemistry, 1988. Vol. 31. N 4. P. 799-801. 5. Cowden W. B., Clark I. A., Hunt N. H. // Journal of Medical Chemistry, 1988. Vol. 31.
6. Quijano M. L. , Nogueras M., Melguizo M., Alvarez de Cienfuegos G., Melgarejo M., Sanches A. // Nucleosides & Nucleotides. 1989. Vol. 8. N 8. P. 1519-1528. 6. Quijano M. L., Nogueras M., Melguizo M., Alvarez de Cienfuegos G., Melgarejo M., Sanches A. // Nucleosides & Nucleotides. 1989. Vol. 8.
7. Joshi K. C., Jain R., Sharma K., Bhattacharya S.K., Goel R.K. // J. Indian Chem. Soc. 1988. Vol. 65. N 3. P. 202-204. 7. Joshi K. C., Jain R., Sharma K., Bhattacharya S.K., Goel R.K. // J. Indian Chem. Soc. 1988. Vol. 65.
8. Motawia M.S., Joergensen P.T., Larnkjaer A., Pedersen E.B., Nielsen С. //Monatsh. Chem. 1993. Bd 124. Н. 1. S. 55-64. 8. Motawia M.S., Joergensen P.T., Larnkjaer A., Pedersen E. B., Nielsen C. // Monatsh. Chem. 1993. Bd 124. N. 1. S. 55-64.
9. Nagamatsu Т., Yamasaki И., Hirota Т., Yamato M., Kido Y., Shibata M., Yoneda F. // Chem. Pharm. Bull. 1993, Vol. 41. N 2. P. 363-368. 9. Nagamatsu T., Yamasaki I., Hirota T., Yamato M., Kido Y., Shibata M., Yoneda F. // Chem. Pharm. Bull. 1993, Vol. 41.
10. Ahluwalia V. K., Batla R., Khurana A., Kumar R. // Indian J. Chem. 1990. Vol. 29B. N 12. P. 1141-1142. 10. Ahluwalia V. K., Batla R., Khurana A., Kumar R. // Indian J. Chem. 1990. Vol. 29B.
11. Yoneda F., Sasaki Т. Заявка Японии JP 03. 81.276, МКИ C 07 D 471/04, опубликована 05.04.1991 (С.А Vol. 115. 255902F.)
12. Заявка Японии JP 05.213.755, МКИ А 61 К 3/505,опубл. 24.08.1993(С.А. 1993. Vol. 119.262520г.).11. Yoneda F., Sasaki T. Japanese application JP 03. 81.276, MKI C 07 D 471/04, published 04/05/1991 (C. A Vol. 115. 255902F.)
12. Japanese application JP 05.213.755, MKI A 61
13. Jiang J.B., Isaacson D. Патент США 4656274, МКИ C 07 D 471/04, НКИ 544-250, (С.A. Vol. 107. 39643g.)
14. Saltzman R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, Vol.38, No. 10, P. 2454-2457.13. Jiang JB, Isaacson D. US Pat. No. 4,656,274, MKI C 07 D 471/04, NCI 544-250, (C. A. Vol. 107. 39643g.)
14. Saltzman R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, Vol. 38, No. 10, P. 2454-2457.
15. Fenelon L.E., Mumtaz G., Ridgway G.L. The in-vitro susceptbility of Chlamydia pneumoniae, J. of Antimicrobial Chemotheraphy, 1990, vol.26, p. 763-767. 15. Fenelon L.E., Mumtaz G., Ridgway G.L. The in-vitro susceptbility of Chlamydia pneumoniae, J. of Antimicrobial Chemotheraphy, 1990, vol. 26, p. 763-767.
16. Grosset J. Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology. 1996, Vol. 147, No. 10-16. 16. Grosset J. Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology. 1996, Vol. 147, No. 10-16.
17. Boyd M. R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22. 17. Boyd M. R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22.
18. King F. E. , King T.J. Thompson G.B. //J. Chem. Soc.1948. N 4. P. 2855-2862. 18. King F. E., King T.J. Thompson G.B. // J. Chem. Soc. 1948.
19. Ridi M. // Gazz. chim. ital., 1949. Vol.79. N 2-3. P. 2855-2862. 19. Ridi M. // Gazz. chim. ital., 1949. Vol. 79. N 2-3. P. 2855-2862.
20. Sans R. G., Chozas M.G. // Pharmazie. 1988. Vol. 43. H. 6. P. 415-417. 20. Sans R. G., Chozas M.G. // Pharmazie. 1988. Vol. 43. H. 6. P. 415-417.
21. Введенский В.М. // Химия гетероциклических соединений. 1969. 6. С. 1092-1095. 21. Vvedensky V.M. // Chemistry of heterocyclic compounds. 1969. 6. S. 1092-1095.
22. Введенский В.М., Макуха М.П., Макарина-Кибак Л.Я. // Химия гетероциклических соединений. 1969. 6. С. 1096-1098. 22. Vvedensky V.M., Makukha M.P., Makarina-Kibak L.Ya. // Chemistry of heterocyclic compounds. 1969. 6. S. 1096-1098.
23. Ahluwalia V. K. , Sharma M.K., Aggarwal R., Chauhan A., Sharma R. Jndian J. Chem. Sec.B.,Vol.30, N 6, р.598-599. 23. Ahluwalia V. K., Sharma M.K., Aggarwal R., Chauhan A., Sharma R. Jndian J. Chem. Sec.B., Vol. 30, No. 6, p. 598-599.
24. Figueroa-Villar J.D., Cruz E.R., Tetrahedron., 1993,Vol.49, N 14, p. 2855-2862. 24. Figueroa-Villar J.D., Cruz E.R., Tetrahedron., 1993, Vol. 49, No. 14, p. 2855-2862.
25. Cowden W. B. , Clark I.A. Заявка. PCT WO 88-04658 (C.A. Vol. 109. 210800f.)
26. Бузыкин Б.И., Лонщакова Т.Р., Киселева С.А., Китаев Ю.П. Материалы научной конференции ИОФХ им. Арбузова АН СССР, Казань. 1971, с.38-41.25. Cowden WB, Clark IA Application. PCT WO 88-04658 (CA Vol. 109.210800f.)
26. Buzykin B.I., Lonshchakova T.R., Kiseleva S.A., Kitaev Yu.P. Materials of the scientific conference IOFH im. Arbuzov Academy of Sciences of the USSR, Kazan. 1971, p. 38-41.
27. Москвин А. В., Полковникова И.И. и Ивин Б.А. Исследование азолов и азинов, сообщение 92. Конденсация барбитуровой кислоты с ароматическими альдегидами при мольном соотношении реагентов 2:1. "Журнал общей химии", 1955, том 65. N 3, стр.507 - прототип. 27. Moskvin A.V., Polkovnikova I.I. and Ivin B.A. Investigation of azoles and azines, communication 92. Condensation of barbituric acid with aromatic aldehydes at a molar ratio of reagents 2: 1. "Journal of General Chemistry", 1955,
28. Gentry G.A., Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomonas vaginalis in cell culture, J. of Clinical Microbiology 1985. Vol. 22. No. 2, P. 199-204. 28. Gentry G.A., Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomonas vaginalis in cell culture, J. of Clinical Microbiology 1985. Vol. 22. No. 2, P. 199-204.
29. Senda S. , Fujimura H. Izumi I., заявки Японии NN 7912 - 7916 от 05.10.1961, опубликованы 22.04.1963. 29. Senda S., Fujimura H. Izumi I., Japanese applications NN 7912 - 7916 dated 10/05/1961, published on 04/22/1963.
30. Wang S.P., Grayston J.T. Serotyping of Clamydia trachomatis by inderect fluorescent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, Vol.29. No. 7, P. 1295-1298. 30. Wang S.P., Grayston J.T. Serotyping of Clamydia trachomatis by inderect fluorescent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, Vol. 29. No. 7, P. 1295-1298.
31. Judson B.A., Lambert P.P. Improved Syva MicroTrac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, Vol.26, No. 12, P.2657-2658. 31. Judson B.A., Lambert P.P. Improved Syva MicroTrac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, Vol. 26, No. 12, P.2657-2658.
Claims (11)
где Х выбран из кислорода или серы;
R1 выбран из группы: водород, нитрогруппа, алкоксигруппа;
R2 выбран из группы: водород, нитрогруппа, алкоксигруппа, галоген;
Cat+ выбран из группы: протон, пиридиний- или 2-гидроксиэтиламмонийкатион,
обладающие противомикробным, противовирусным, иммуномодулирующим и противоопухолевым действием.1. Salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids and 5,5'-arylidenebis (2-thiobarbituric) acids of the general formula
where X is selected from oxygen or sulfur;
R 1 is selected from the group: hydrogen, nitro group, alkoxy group;
R 2 is selected from the group: hydrogen, nitro group, alkoxy group, halogen;
Cat + is selected from the group: proton, pyridinium or 2-hydroxyethylammonium cation,
possessing antimicrobial, antiviral, immunomodulating and antitumor effects.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000112001/04A RU2188195C2 (en) | 1997-11-19 | 1997-11-19 | 5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000112001/04A RU2188195C2 (en) | 1997-11-19 | 1997-11-19 | 5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2188195C2 true RU2188195C2 (en) | 2002-08-27 |
RU2000112001A RU2000112001A (en) | 2004-03-20 |
Family
ID=20234615
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000112001/04A RU2188195C2 (en) | 1997-11-19 | 1997-11-19 | 5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2188195C2 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2702114C1 (en) * | 2019-06-11 | 2019-10-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" | Immunomodulator |
-
1997
- 1997-11-19 RU RU2000112001/04A patent/RU2188195C2/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2702114C1 (en) * | 2019-06-11 | 2019-10-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фундаментальной и клинической иммунологии" | Immunomodulator |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2000112001A (en) | 2004-03-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20060035909A1 (en) | Azapurine derivatives | |
EP1083172A1 (en) | N-substituted derivatives of 5-oxyiminobarbituric acid | |
EP3315501B1 (en) | Drug with antiviral activity | |
EP0877022B1 (en) | Sulfonylpyrimidine derivatives with anticancer activity | |
ES2754403T3 (en) | Pririmidine derivatives useful as selective inhibitors of JAK3 and / or JAK1 | |
S Shehab et al. | Synthesis and antitumor/antiviral evaluation of 6-thienyl-5-cyano-2-thiouracil derivatives and their thiogalactosides analogs | |
Kilic-Kurt et al. | Cytotoxic and apoptotic effects of novel pyrrolo [2, 3-d] pyrimidine derivatives containing urea moieties on cancer cell lines | |
RU2188195C2 (en) | 5,5'-arylidene-bis-barbituric and 5,5'-arylidene-bis-2-thiobarbituric) acid salts and 5,5'-arylidene-bis-(2-thiobarbituric) acids showing antibacterial, antiviral, immunomodulating and antitumor effect | |
RU2628456C1 (en) | New pyrimidine inhibitors of human adenovirus replication | |
RU2198166C2 (en) | 2,4-dioxo-5-arylideneimino-1,3-pyrimidines | |
RU2188201C2 (en) | Derivatives of 5h-pyrano[2,3-d:6,5-d]dipyrimidine showing antibacterial, antiviral and immunomodulating effect | |
US6340755B1 (en) | 5H-Pyrano[2,3-d: 6,5-d']dipyrimidine derivatives having an antibacterial, antiviral and immuno-modulating activity | |
RU2188196C2 (en) | N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid | |
Tatar et al. | Synthesis, characterization and antiviral evaluation of 1, 3-Thiazolidine-4-one derivatives bearing L-Valine side chain | |
AU6125898A (en) | Salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids having an antibacterial, anti-chlamydial, antiviral and immuno-modulating activity | |
US6071905A (en) | Biologically active substance on the basis of tetracyclic nitrogen heterocycles of pyrimidine row | |
RU2169732C1 (en) | Derivatives of 5-oxo-5h-[1]-benzopyrano-[5,6-b]-4-oxo-4h- -[1,2]-pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine | |
Kano et al. | Synthesis of Potential Anticancer Agents. I. 5-Substituted 7-Methyl-s-triazolo [4, 3-α]-and-tetrazolo [1, 5-α]-pyrimidines. | |
RU2199526C2 (en) | Aryl- and heterylamides of carboalkoxy-sulfanilic acids | |
RU2500400C2 (en) | Using purine derivatives for preparing drug preparation | |
Rajappan et al. | Synthesis and guanase inhibition studies of a novel ring-expanded purine analogue containing a 5: 7-fused, planar, aromatic heterocyclic ring system | |
Modi et al. | The physiological and medicinal potential pyrimidines & different scheme to synthesize pyrimidine heterocycles: An update | |
RU2815137C1 (en) | 3-butylthio-1-(beta-d-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4h)-1,2,4-triazole, synthesis, anti-herpes virus action | |
RU2815045C1 (en) | (e)-5-amino-2-oxo-1-((e)-2-oxo-4-phenylbut-3-en-1-ylidene)-1,2,6,7,8,9-hexahydrobenzo[4,5]thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine-3-carboxamide, having anticancer activity in pulmonary melanoma therapy | |
EP1669357A1 (en) | SUBSTANCE WHICH EXHIBITS ANTIVIRAL AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY AND IS BASED ON DERIVATIVES OF 2,8-DITHIOXO-1H-PYRANO 2,3D&cedi l;6,5-D DIPYRIMIDYNE AND 10-AZA-ANALOGUE THEREOF |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20050926 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20051120 |