RU2169732C1

RU2169732C1 - Derivatives of 5-oxo-5h-[1]-benzopyrano-[5,6-b]-4-oxo-4h- -[1,2]-pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine

Info

Publication number: RU2169732C1
Application number: RU99123433A
Authority: RU
Inventors: Р.И. Ашкинази; К.А. Краснов
Original assignee: Ашкинази Римма Ильинична
Priority date: 1997-04-02
Filing date: 1997-04-02
Publication date: 2001-06-27

Abstract

FIELD: organic chemistry. SUBSTANCE: invention describes novel derivatives of 5-oxo-5H-[1]-benzopyrano-[5,6-b]-4-oxo-[1,2]- -pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine of the formula (I)

where R¹ is H or halogen atom; R² is H or halogen atom or nitro-group or hydroxy-group or methoxy-group showing antibacterial activity. These derivatives can be used in medicine for treatment of patients with tuberculosis and other viral diseases and diseases accompanying with immunodeficiency. EFFECT: new compounds indicated above, valuable medicinal properties. 11 cl, 11 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицине, точнее к фармакологии, ветеринарии, косметологии, конкретно к синтетическим биологически активным соединениям гетероциклического ряда, обладающим антимикробной, противовирусной, антихламидийной и иммуностимулирующей активностями: производным 5-оксо-5Н-[1]бензопирано-[5,6-b] -4-оксо- 4Н-[1,2]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина. Указанные производные имеют высокую антимикробную активность по отношению к различным микобактериям, значительную противовирусную активность по отношению к вирусам простого герпеса, высокую антихламидийную активность, а также активность как индукторы интерферона. Соединения предназначены в основном для использования в медицинской практике для лечения туберкулеза, микобактериозов, вирусных заболеваний, инфекций, вызванных хламидиями, а также заболеваний, сопровождающихся иммунодефицитом, в частности злокачественных новообразований. Кроме того, указанные соединения могут быть использованы для тех же целей в ветеринарии и косметологии. The invention relates to medicine, more specifically to pharmacology, veterinary medicine, cosmetology, specifically to synthetic biologically active compounds of the heterocyclic series having antimicrobial, antiviral, antichlamydia and immunostimulating activities: 5-oxo-5H- [1] benzopyrano-derivative [5,6-b ] -4-oxo-4H- [1,2] -pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine. These derivatives have high antimicrobial activity against various mycobacteria, significant antiviral activity against herpes simplex viruses, high antichlamydia activity, as well as activity as interferon inducers. The compounds are intended mainly for use in medical practice for the treatment of tuberculosis, mycobacteriosis, viral diseases, infections caused by chlamydia, as well as diseases accompanied by immunodeficiency, in particular malignant neoplasms. In addition, these compounds can be used for the same purposes in veterinary medicine and cosmetology.

Уровень техники
Как известно, в современной химиотерапии инфекционных заболеваний существует много нерешенных задач. Среди бактериальных инфекций одну из серьезнейших проблем представляет туберкулез, лечение которого особенно затруднено из-за высокой устойчивости туберкулезных микобактерий к воздействию химиотерапевтических агентов (Grosset J., Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology, 1996, Vol. 147, N 10-16). Кроме того, имеющимся препаратам присущ существенный недостаток - широкое распространение устойчивости к ним у циркулирующих микобактерий.State of the art
As you know, in modern chemotherapy of infectious diseases there are many unresolved problems. Among bacterial infections, one of the most serious problems is tuberculosis, the treatment of which is especially difficult due to the high resistance of tuberculous mycobacteria to chemotherapeutic agents (Grosset J., Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology, 1996, Vol. 147, N 10-16 ) In addition, the existing drugs have a significant drawback - the widespread resistance to them in circulating mycobacteria.

Исторически первыми противотуберкулезными препаратами были производные фенолов, бензойных кислот (Дайсон Г., Мей П. Химия синтетических лекарственных средств. - Пер. с англ., М.: Мир, 1964 г.), меркаптобензимидазолы (Bockmuhl, Persch, патент США N 2323445. ), п-аминосалициловая кислота (Bernhiem H. , J. of Bacteriology, 1941, Vol. 41, стр.387.). Наиболее активными противотуберкулезными агентами оказались открытые в конце 40-х годов нашего столетия производные изоникотиновой кислоты, такие как изониазид и его аналоги, применяемые по настоящее время, этионамид, этамбутол, аминогликозиды, рифампицин, фторхинолоны (Grosset J., Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology. 1996, Vol. 147, N 10-16). При терапии туберкулеза и микобактериозов обычно назначают одновременно 2-3 препарата, что замедляет появление резистентных форм микобактерий, но не решает проблемы привыкания и резистентности полностью. Поэтому поиск новых активных противотуберкулезных агентов, в том числе действующих на резистентные к изониазиду формы микобактерий, остается актуальным. Не менее серьезную проблему для современной медицины представляют вирусные заболевания. Как правило, вирусные инфекции, например, вызываемые вирусами группы герпеса, крайне плохо поддаются лечению, что связано как с недостаточной эффективностью существующих препаратов, так и быстрой изменчивостью вирусов, мутации которых приводят к появлению устойчивых форм (Pharmaceutical microbiology, Ed. by W. B. Hugo and A.D.Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987; Benson C. A. Treatment of disseminated Mycobacterium avium complex disease: a clinician's perspective, Res. Microbiology, 1996, Vol. 147, P. 16-24; Saltzman R. , Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Aritimicrobiaf agents and Chemotheraphy, 1994, Vol. 38, N 10, P. 2454-2457). Из синтетических препаратов для лечения заболеваний, вызванных вирусами группы герпеса, применяют ацикловир, ганцикловир, ретровир (Pharmaceutical microbiology, Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987) и другие, эффективность которых не всегда достаточна. Historically, the first anti-TB drugs were derivatives of phenols, benzoic acids (Dyson G., May P. Chemistry of Synthetic Medicines. - Transl. From English, Moscow: Mir, 1964), mercaptobenzimidazoles (Bockmuhl, Persch, U.S. Patent No. 2,323,445 .), p-aminosalicylic acid (Bernhiem H., J. of Bacteriology, 1941, Vol. 41, p. 387.). The most active anti-TB agents were derivatives of isonicotinic acid discovered at the end of the 1940s, such as isoniazid and its analogues, which are still used today, ethionamide, ethambutol, aminoglycosides, rifampicin, fluoroquinolones (Grosset J., Current problems with tuberculosis treatment, Res. Microbiology. 1996, Vol. 147, N 10-16). In the treatment of tuberculosis and mycobacteriosis, 2-3 drugs are usually prescribed at the same time, which slows down the appearance of resistant forms of mycobacteria, but does not completely solve the problem of addiction and resistance. Therefore, the search for new active anti-TB agents, including those acting on isoniazid-resistant forms of mycobacteria, remains relevant. No less serious problem for modern medicine is viral diseases. Typically, viral infections, such as those caused by herpes viruses, are extremely difficult to treat, due to both the insufficient effectiveness of existing drugs and the rapid variability of viruses, mutations of which lead to the emergence of resistant forms (Pharmaceutical microbiology, Ed. By WB Hugo and ADRussel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987; Benson CA Treatment of disseminated Mycobacterium avium complex disease: a clinician's perspective, Res. Microbiology, 1996, Vol. 147, P. 16-24; Saltzman R., Jurewicz R., Boon B , Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Aritimicrobiaf agents and Chemotheraphy, 1994, Vol. 38, No. 10, P. 2454-2457). Of the synthetic drugs for the treatment of diseases caused by herpes viruses, acyclovir, ganciclovir, and retrovir are used (Pharmaceutical microbiology, Ed. By W. B. Hugo and A. D. Russell Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987) and others whose effectiveness is not always sufficient.

Много проблем существует при лечении заболеваний, вызванных хламидиями, включая широко распространенные урогенитальные инфекции (Fenelon L.E., Mumtaz G., Ridgway G.L. The in-vitro susceptibility of Chlamydia pneumoniae, J. of Antimicrobial Chemotherahy, 1990, Vol. 26, P. 763-767). Хламидии, являясь внутриклеточными паразитами, мало доступны для большинства существующих препаратов и, кроме того, распространившаяся устойчивость к последним привела к появлению большого числа хронических форм заболевания. Для лечения хламидийных инфекций используют обычно препараты тетрациклинового ряда, макролиды и фторхинолоны, например ципрофлоксацин (там же). Many problems exist in the treatment of diseases caused by chlamydia, including widespread urogenital infections (Fenelon LE, Mumtaz G., Ridgway GL The in-vitro susceptibility of Chlamydia pneumoniae, J. of Antimicrobial Chemotherahy, 1990, Vol. 26, P. 763- 767). Chlamydia, being intracellular parasites, is not widely available for most existing drugs and, in addition, the widespread resistance to the latter has led to the emergence of a large number of chronic forms of the disease. Tetracycline drugs, macrolides and fluoroquinolones, such as ciprofloxacin (ibid.), Are usually used to treat chlamydial infections.

Часто заболевания вирусной и бактериальной природы протекают на фоне снижения активности иммунной системы организма, поэтому проблема создания эффективных препаратов для лечения иммунодефицитных состояний различного происхождения также является одной из актуальнейших. Кроме того стимуляция активности иммунной системы способствует в борьбе организма против опухолевых процессов, при которых также наблюдается множественная устойчивость к существующим лечебным препаратам (Boyd M.R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22). Необходимо отметить, что в настоящее время проводится интенсивный поиск новых биологически активных соединений среди производных пиримидинового ряда. В частности, в ряду пиримидина известно немало производных, используемых в качестве лекарственных препаратов (Negwer M., Organic-chemical drugs and their synonyms, Akademic-Verlag, Berlin, 1987.). Моноциклические производные пиримидина, в частности барбитуровые кислоты, обладают универсальным антибактериальным действием за счет антагонизма с пиримдиновыми основаниями ДНК (Biswas C. Dissert. Abstracts 1964, Vol. 24, N 9, P. 3501). Активные бактерицидные препараты обнаружены среди гидразиновых производных пиримидина (Langley B.W. , патент Великобритании N 845378 от 24.08.60; Спасов А.В., Райков З.Д., авт. св. Болгарии N 17122, Мкл C 07 D 51/22, заявл. 5.06.71), тиопиримидинов (Davies G. D. , Robins P.K., Cheng C.C., J. of American Chemical Society., 1962, Vol. 82, N 9, P. 1724-1729), алкокси- и аминопиримидинов (Minchle H., Milzher K., Keisser F. Заявка Германии N 2412854, Мкл C 07 D от 26.09. 1974. ). Эфиры пиримидокарбоновых кислот проявляют противоопухо левую активность (Krepelka J. , Kotva R. , Pijman V., Semonsky M., патенты Чехословакии NN 215554; 215593; 215580, Мкл C 07 D 239/54 от 15.04. 1984). Многие производные барбитуровых кислот обладают значительной противовирусной активностью (Спасов А. В., Райков З.Д., авт.св. Болгарии N 17122, Мкл C 07 D 51/22, заявл. 5.06.71., 17-Ueda T., Kato S., патент Японии 11832 ('62), Aug. 23, заявлен 10.05.1958). Often, diseases of a viral and bacterial nature occur against the background of a decrease in the activity of the body's immune system, therefore the problem of creating effective drugs for the treatment of immunodeficiency states of various origin is also one of the most relevant. In addition, stimulation of the activity of the immune system contributes to the body's fight against tumor processes, in which multiple resistance to existing therapeutic drugs is also observed (Boyd M.R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22). It should be noted that an intensive search is currently underway for new biologically active compounds among the derivatives of the pyrimidine series. In particular, in the pyrimidine series, many derivatives are known that are used as medications (Negwer M., Organic-chemical drugs and their synonyms, Akademic-Verlag, Berlin, 1987.). Monocyclic pyrimidine derivatives, in particular barbituric acids, have a universal antibacterial effect due to antagonism with pyrimidine bases of DNA (Biswas C. Dissert. Abstracts 1964, Vol. 24, No. 9, P. 3501). Active bactericidal drugs were found among hydrazine derivatives of pyrimidine (Langley BW, UK patent N 845378 from 08.24.60; Spasov A.V., Raikov Z.D., ed. St. Bulgaria N 17122, Ml C 07 D 51/22, declared 5.06.71), thiopyrimidines (Davies GD, Robins PK, Cheng CC, J. of American Chemical Society., 1962, Vol. 82, N 9, P. 1724-1729), alkoxy and aminopyrimidines (Minchle H., Milzher K., Keisser F. German Application N 2412854, Mcl C 07 D from 09/26/1974.). The esters of pyrimidocarboxylic acids exhibit antitumor activity (Krepelka J., Kotva R., Pijman V., Semonsky M., Czechoslovak patents NN 215554; 215593; 215580, Ml C 07 D 239/54 from 04.15. 1984). Many derivatives of barbituric acids have significant antiviral activity (Spasov A.V., Raikov Z.D., Auth. Of Bulgaria N 17122, Mcl C 07 D 51/22, decl. 5.06.71., 17-Ueda T., Kato S., Japanese Patent 11832 ('62), Aug. 23, filed May 10, 1958).

Производные [4,2-b]пиримидопирана обладают противовоспалительными свойствами (Sigao S. , Hirosi I., J. of Pharmaceutical Society of Japan, 1969, Vol. 89, N 2, P. 266-271.). Это же действие обнаружено у многих N-арил и N-циклогексил-барбитуровых кислот (Senda S., Fujimura H., Izumi I., патенты Японии NN 7912; 7913; 7914; 7915; 7916; April 22, заявлены в 5.10.1961). Все приведенные выше примеры объединяет общность химической структуры, т.к. они являются моноциклическими производными пиримидина (содержат один пиримидиновый гетероцикл, не сопряженный с другими циклическими системами). Derivatives of [4,2-b] pyrimidopyran have anti-inflammatory properties (Sigao S., Hirosi I., J. of Pharmaceutical Society of Japan, 1969, Vol. 89, No. 2, P. 266-271.). The same effect was found in many N-aryl and N-cyclohexyl-barbituric acids (Senda S., Fujimura H., Izumi I., Japan Patent NN 7912; 7913; 7914; 7915; 7916; April 22, filed October 5, 1961 ) All the above examples are united by a common chemical structure, because they are monocyclic derivatives of pyrimidine (contain one pyrimidine heterocycle not conjugated with other cyclic systems).

Известен пример обнаружения биологических свойств у трициклических производных пиримидинового ряда, однако их действие ограничено антиаллергической активностью (Blythin D. J. , Coldwell N. J., патент США N 4272535 опубл. 09.071981, заявлен 27.07.1979), не распространяется на область антимикробного и антивирусного действия. Наиболее близкими по химическому строению заявляемым соединениям являются производные 2,4-[1Н, 3Н, 5Н]-[1]бензопирано[2,3-d] пиримидина, запатентованные в качестве анти-аллергических агентов (там же). A known example of the detection of biological properties in tricyclic derivatives of the pyrimidine series, however, their effect is limited by antiallergic activity (Blythin D. J., Coldwell N. J., U.S. Patent No. 4,272,535 publ. 09/07/1981, filed July 27, 1979), does not apply to the field of antimicrobial and antiviral effects. Closest to the chemical structure of the claimed compounds are derivatives of 2,4- [1H, 3H, 5H] - [1] benzopyrano [2,3-d] pyrimidine, patented as anti-allergic agents (ibid.).

В качестве прототипа выбран гидразид изоникотиновой кислоты (изониазид) (Boyd M. R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22). Выбор основан на его совпадении с заявляемым веществом по наиболее важному назначению - противотуберкулезному действию. Изониазид является одним из наиболее эффективных противотуберкулезных препаратов, может использоваться в любых лекарственных формах (таблетки, инъекции, ингаляции), при этом по своему химическому строению объект изобретения и прототип принадлежат к классу азотистых гетероциклов. Isonicotinic acid hydrazide (isoniazid) was selected as a prototype (Boyd M. R. The Future of new drug development. Current therapy in oncology 1992, P. 11-22). The choice is based on its coincidence with the claimed substance for the most important purpose - anti-tuberculosis action. Isoniazid is one of the most effective anti-TB drugs, can be used in any dosage form (tablets, injections, inhalations), while the chemical structure of the object of the invention and the prototype belong to the class of nitrogen heterocycles.

Задача изобретения
Задачей изобретенья является получение новых химических соединений, обладающих высокой противомикробной активностью (особенно в отношении штаммов микобактерий, резистентных к прототипу - изониазиду), одновременно обладающих противовирусной активностью (по отношению к вирусам простого герпеса), антихламидийной активностью, а также стимулирующих выработку эндогенных интерферонов в организме. Другими словами, задача изобретения сводится к химическому синтезу биологически активных веществ, превосходящих прототип не только по широте воздействия на штаммы туберкулезных и других микобактерий, но обладающих противовирусным, антихламидийным и иммуностимулирующим действием.Object of the invention
The objective of the invention is to obtain new chemical compounds with high antimicrobial activity (especially against strains of mycobacteria resistant to the prototype isoniazid), simultaneously possessing antiviral activity (against herpes simplex viruses), antichlamydia activity, and also stimulating the production of endogenous interferons in the body . In other words, the objective of the invention is reduced to the chemical synthesis of biologically active substances that exceed the prototype not only in the breadth of exposure to strains of tuberculosis and other mycobacteria, but also have antiviral, antichlamydial and immunostimulating effects.

Сущность изобретения
Поставленная задача решается путем синтеза нового класса гетероциклических соединений - производных 5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]-пиримидо-1,4,5,6- тетрагидро-1,3-тиазина (I) общей формулы (1)

(I-X) Где: R1 - H или галоген; R2 - H, или галоген, или нитрогруппа, или гидроксигруппа, или метоксигруппа.SUMMARY OF THE INVENTION
The problem is solved by synthesis of a new class of heterocyclic compounds - derivatives of 5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5 , 6- tetrahydro-1,3-thiazine (I) of the general formula (1)

(IX) Where: R1 is H or halogen; R 2 is H, or halogen, or nitro, or hydroxy, or methoxy.

Поставленная задача может быть решена при R1 = R2 = H (I); R1 = H и R2 = Cl (II); R1 = R2 = Cl (III); R1 = H и R2 = Br (IV); R1 = R2 = Br (V): R1 = H и R2 = NO₂ (VI); R1 = Cl и R2 = NO₂ (VII); R1 = Br и R2 = NO₂ (VIII); R1 = H и R2 = OCH₃ (IX); R1 = H и R2 = OH (X).The problem can be solved with R1 = R2 = H (I); R1 = H and R2 = Cl (II); R1 = R2 = Cl (III); R1 = H and R2 = Br (IV); R1 = R2 = Br (V): R1 = H and R2 = NO ₂ (VI); R1 = Cl and R2 = NO ₂ (VII); R1 = Br and R2 = NO ₂ (VIII); R1 = H and R2 = OCH ₃ (IX); R1 = H and R2 = OH (X).

Заявляемое вещество является новым, поскольку оно не известно из доступных источников информации. The inventive substance is new because it is not known from available sources of information.

Заявляемое решение является неочевидным. Как известно, практически невозможно заранее предсказать биологическую активность новых конденсированных гетероциклических систем. Поэтому получение группы заявляемых соединений, которые являются сложными тетрациклическими системами, включающими 4 гетероатома (2 атома азота, 1 кислород и 1 сера) и обнаружение у них антимикробных, иммуностимулирующих и противовирусных свойств никак не вытекает очевидным образом из современного уровня техники. The claimed solution is not obvious. As you know, it is practically impossible to predict in advance the biological activity of new condensed heterocyclic systems. Therefore, obtaining a group of the claimed compounds, which are complex tetracyclic systems, including 4 heteroatoms (2 nitrogen atoms, 1 oxygen and 1 sulfur) and the detection of antimicrobial, immunostimulating and antiviral properties in them does not follow in any obvious way from the current state of the art.

Раскрытие изобретения
Предлагаемый нами синтез заявляемых веществ состоит из двух основных этапов:
1) синтезируют 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6- тетрагидро-1,3-тиазин (XI) из 2-тиобарбитуровой кислоты (XII) и 1,3-дигалогенпропана (XIII).Disclosure of Invention
Our proposed synthesis of the claimed substances consists of two main stages:
1) synthesize 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (XI) from 2-thiobarbituric acid (XII) and 1,3-dihalogenopropane (XIII).

2) получают целевое соединение (I-X) из полученного на первом этапе промежуточного вещества (XI) и соответствующего производного салицилового альдегида (XIV). Способ является общим для всех членов группы. 2) receive the target compound (I-X) from the intermediate obtained at the first stage (XI) and the corresponding derivative of salicylic aldehyde (XIV). The method is common to all members of the group.

Сущность изобретения поясняется приведенными ниже двумя примерами синтеза промежуточного вещества и тремя примерами синтеза заявленных веществ, двумя таблицами выходов промежуточного и целевых продуктов, двумя таблицами характеристик целевых продуктов и данными семи серий экспериментов по определению их биологических свойств где:
примеры 1 и 2 - конкретные варианты выполнения 1-го этапа синтеза заявляемого вещества (получение промежуточного вещества (XI), т.е. 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d] -пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина, причем пример 2 содержит обобщенный множественный вариант;
примеры 3, 4, и 5 - конкретные варианты выполнения второго этапа синтеза заявляемых веществ (получение целевых продуктов (I-X), т.е. производных 5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] -пиримидо- 1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина);
таблица 1 - выход промежуточного вещества (XI), т.е. 4-оксо-4Н-6-окси[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина.The invention is illustrated by the following two examples of the synthesis of an intermediate substance and three examples of the synthesis of the claimed substances, two tables of the outputs of the intermediate and target products, two tables of characteristics of the target products and the data of seven series of experiments to determine their biological properties where:
examples 1 and 2 are specific embodiments of the 1st stage of the synthesis of the claimed substance (obtaining an intermediate substance (XI), i.e. 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4 , 5,6-tetrahydro-1,3-thiazine, wherein Example 2 contains a generalized plural version;
examples 3, 4, and 5 are specific embodiments of the second stage of the synthesis of the claimed substances (obtaining the target products (IX), ie derivatives of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4 -oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine);
table 1 - the output of the intermediate substance (XI), i.e. 4-oxo-4H-6-hydroxy [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine.

таблица 2 - методы синтеза и выход целевых продуктов (I-X), т.е. производных 5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] -пиримидо- 1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина;
таблица 3 - температуры плавления и данные спектров ПМР целевых продуктов (I-X), т.е. производных 5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4- оксо-4Н-[1,2]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина;
таблица 4 - данные элементного анализа целевых продуктов (I-X), т.е. производных 5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2]- пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина.table 2 - methods of synthesis and yield of target products (IX), i.e. derivatives of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine ;
table 3 - melting temperature and data of the PMR spectra of the target products (IX), i.e. derivatives of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine ;
table 4 - data of elemental analysis of the target products (IX), i.e. derivatives of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine .

Данные семи серий экспериментов по определению биологической активности заявляемых соединений содержат:
эксперимент 1 - определение антимикробного действия;
эксперимент 2 - определение действия заявляемых соединений на патогенные микобактерии;
эксперимент 3 - определение острой токсичности;
эксперимент 4 - терапевтическая эффективность при экспериментальном туберкулезе;
эксперимент 5 - определение действия на вирус герпеса;
эксперимент 6 - определение интерферониндуцирующей активности;
эксперимент 7 - определение действия на C.trachomatis.Data from seven series of experiments to determine the biological activity of the claimed compounds contain:
experiment 1 - determination of antimicrobial action;
experiment 2 - determination of the effect of the claimed compounds on pathogenic mycobacteria;
experiment 3 - determination of acute toxicity;
experiment 4 - therapeutic efficacy in experimental tuberculosis;
experiment 5 - determination of the effect on the herpes virus;
experiment 6 - determination of interferon-inducing activity;
experiment 7 - determination of action on C.trachomatis.

Пример 1. Вариант выполнения 1-го этапа синтеза заявляемых веществ (получение промежуточного вещества, т.е. 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина) (XI)

14,4 г (0,1 моль) 2-тиобарбитуровой кислоты (XII) прибавляют к 100-150 мл водно-спиртового раствора 0,2 моль щелочи и перемешивают. Затем прибавляют 0,1 моль 1-бром-3-хлорпропана (XIII) и перемешивают смесь при нагревании. В процессе реакции pH раствора понижается. После завершения реакции охлаждают раствор, выпавший осадок отделяют и промывают. Для очистки продукт растворяют в водной щелочи и высаживают соляной кислотой. Выход 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d] -пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина 9,7 г (43,8%), Т пл. 250-260^oC (с разл.)
Найдено, %: C 45,02; H 5,27; N 14,09; S 17,11; C₇H₈N₂O₂S
Вычислено, %: C 45,07; H 5,21; N 14,15; S 17,02
Спектр ПМР, ДМСО-d6, δ, м.д.: 2,18, м (2H, CH₂); 3,19 т (2H, SCH₂); 3,90 т (2H, NCH₂); 5,08 с (1H, CH); 11,06 с (1H, OH).Example 1. An embodiment of the 1st stage of the synthesis of the claimed substances (obtaining an intermediate substance, ie 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro -1,3-thiazine) (XI)

14.4 g (0.1 mol) of 2-thiobarbituric acid (XII) are added to 100-150 ml of an aqueous-alcoholic solution of 0.2 mol of alkali and mixed. Then 0.1 mol of 1-bromo-3-chloropropane (XIII) was added and the mixture was stirred under heating. During the reaction, the pH of the solution decreases. After completion of the reaction, the solution is cooled, the precipitate formed is separated and washed. For purification, the product is dissolved in aqueous alkali and planted with hydrochloric acid. The yield of 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine 9.7 g (43.8%), T pl. 250-260 ^o C (decomp.)
Found,%: C 45.02; H 5.27; N, 14.09; S 17.11; C ₇ H ₈ N ₂ O ₂ S
Calculated,%: C 45.07; H 5.21; N, 14.15; S 17.02
PMR spectrum, DMSO-d6, δ, ppm: 2.18, m (2H, CH ₂ ); 3.19 t (2H, SCH ₂ ); 3.90 t (2H, NCH ₂ ); 5.08 s (1H, CH); 11.06 s (1H, OH).

Пример 2. Вариант выполнения 1-го этапа синтеза заявляемых веществ (получение промежуточного вещества, т.е. 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина) (XI):

Производят алкилирование 2-тиобарбитуровой кислоты (XII) 1,3-дигалогенпроизводными пропана общей формулы X-CH₂-CH₂-CH₂-X' (XIII) (где X, X' - Cl, Br или J). Процесс ведут аналогично примеру 1. Выходы продукта приведены в табл.1.Example 2. An embodiment of the 1st stage of the synthesis of the claimed substances (obtaining an intermediate substance, ie 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro -1,3-thiazine) (XI):

The 2-thiobarbituric acid (XII) is alkylated with 1,3-dihalo derivatives of propane of the general formula X-CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -X '(XIII) (where X, X' is Cl, Br or J). The process is carried out analogously to example 1. The product yields are given in table 1.

Пример 3. Вариант выполнения второго этапа синтеза заявляемого вещества (получение целевого продукта, а именно 5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]-пиримидо-1,4,5,6- тетрагидро-1,3-тиазина (1):

Смесь 1,84 г (0,01 моль) 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (XI) и 1,83 г (0,015 моль) салицилового альдегида (XV), (R1 = R2 = H) нагревают до прекращения выделения паров образующейся в ходе реакции воды. Затем тщательно промывают образовавшуюся реакционную массу спиртом для удаления исходных и побочных продуктов, в остаток перекристаллизовывают из уксусной кислоты, получая целевой продукт - 5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] - пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин. Выход приведен в табл. 2, характеристики - в табл. 3, данные элементного анализа - в табл. 4.Example 3. An embodiment of the second stage of the synthesis of the claimed substance (obtaining the target product, namely 5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido -1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (1):

A mixture of 1.84 g (0.01 mol) of 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (XI) and 1.83 g (0.015 mol) of salicylic aldehyde (XV), (R1 = R2 = H) are heated until the vapor evolution of the water formed during the reaction ceases. Then, the resulting reaction mass is thoroughly washed with alcohol to remove the starting and by-products, and the residue is recrystallized from acetic acid to obtain the desired product - 5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H - [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine. The output is given in table. 2, the characteristics are in table. 3, the data of elemental analysis are shown in table. 4.

Пример 4. Вариант выполнения второго этапа синтеза заявляемого вещества (получение целевого продукта, а именно 3-хлор-5-оксо-6Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]-пиримидо- 1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (11):

(R1 = H, R2 = Cl) (R1 = H, R2 = Cl). Смесь 1,84 г (0,01 моль) 4-оксо-4Н-6-окси-] [1,2-d] -пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (XI) и 2,35 г (0,015 моль) 5-хлорсалицилового альдегида (XV), (R1 = H, R2 = Cl) в высококипящем инертном растворителе (хлорбензол, анизол, диглим, этиленгликоль) нагревают до исчезновения исходного пиримидотиазина. После этого отделяют осадок, тщательно промывают и сушат. Получают целевой продукт - 3-хлор-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] -пиримидо- 1,4,5,6- тетрагидро-1,3-тиазин. Выход приведен в табл. 2, характеристики - в табл. 3, данные элементного анализа - в табл. 4.Example 4. An embodiment of the second stage of synthesis of the claimed substance (obtaining the target product, namely 3-chloro-5-oxo-6H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1, 2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (11):

(R1 = H, R2 = Cl) (R1 = H, R2 = Cl). A mixture of 1.84 g (0.01 mol) of 4-oxo-4H-6-hydroxy] [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (XI) and 2.35 g (0.015 mol) of 5-chlorosalicylic aldehyde (XV), (R1 = H, R2 = Cl) in a high boiling inert solvent (chlorobenzene, anisole, diglyme, ethylene glycol) are heated until the starting pyrimidothiazine disappears. After this, the precipitate is separated, washed thoroughly and dried. The desired product is obtained - 3-chloro-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine. The output is given in table. 2, the characteristics are in table. 3, the data of elemental analysis are shown in table. 4.

Пример 5. Вариант выполнения второго этапа синтеза заявляемого вещества (получение целевого продукта, а именно 1,3-дихлор-5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]-пиримидо- 1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (III). Example 5. An embodiment of the second stage of synthesis of the claimed substance (obtaining the target product, namely 1,3-dichloro-5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [ 1,2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (III).

Смесь 1,84 г (0,01 моль) 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (XI) и 1,93 г (0,01 моль) 3,5-дихлорсалицилового альдегида (XV), (R1 = R2 = Cl) кипятят в этаноле 6-8 часов. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают горячим этанолом и сушат. Получают целевой продукт - 1,3-дихлор-5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b]-4-оксо- 4Н-[1,2]-пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин. Выход приведен в табл. 2, характеристики - в табл. 3, данные элементного анализа - в табл. 4. A mixture of 1.84 g (0.01 mol) of 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (XI) and 1.93 g (0.01 mol) of 3,5-dichlorosalicylic aldehyde (XV), (R1 = R2 = Cl) are boiled in ethanol for 6-8 hours. The precipitate formed is filtered off, washed with hot ethanol and dried. The desired product is obtained - 1,3-dichloro-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5, 6-tetrahydro-1,3-thiazine. The output is given in table. 2, the characteristics are in table. 3, the data of elemental analysis are shown in table. 4.

Остальные целевые соединения - производные 5-оксо-5Н-[1]-бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] -пиримидо-1,4,5,6- тетрагидро-1,3-тиазина (IV-X), где:
3-бром-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] - пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (IV), R1 = H, R2 = Br;
1,3-дибром-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] - пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (V), R1 = R2 = Br;
3-нитро-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] - пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (VI), R1 = H, R2 = NO₂;
1-хлор-3-нитро-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]- пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (VII), R1 = Cl, R2 = NO₂;
1-бром-3-нитро-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]- пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (VIII), R1 = Br,R2 = NO₂;
3-метокси-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b]-4-оксо-4Н-[1,2]- пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (IX), R1 = H, R2 = OCH₃;
3-окси-5-оксо-5Н-[1] -бензопирано-[5,6-b] -4-оксо-4Н-[1,2] - пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазин (X), R1 = H, R2 = OH
- получают из 4-оксо-4Н-6-окси-[1,2-d] -пиримидо-1,4,5,6-тетрагидро-1,3-тиазина (XI) и соответствующих салициловых альдегидов (XV) по приведенным выше примерам 3, 4 или 5. Методы синтеза и выходы продуктов приведены в табл. 2, характеристики - в табл. 3, данные элементного анализа - в табл. 4.The remaining target compounds are derivatives of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] -pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1 , 3-thiazine (IV-X), where:
3-bromo-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1, 3-thiazine (IV), R1 = H, R2 = Br;
1,3-dibromo-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro 1,3-thiazine (V), R1 = R2 = Br;
3-nitro-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1, 3-thiazine (VI), R1 = H, R2 = NO ₂ ;
1-chloro-3-nitro-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine (VII), R1 = Cl, R2 = NO ₂ ;
1-bromo-3-nitro-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine (VIII), R1 = Br, R2 = NO ₂ ;
3-methoxy-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1, 3-thiazine (IX), R1 = H, R2 = OCH ₃ ;
3-hydroxy-5-oxo-5H- [1] benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] - pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1, 3-thiazine (X), R1 = H, R2 = OH
- get from 4-oxo-4H-6-hydroxy- [1,2-d] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3-thiazine (XI) and the corresponding salicylic aldehydes (XV) according to the above examples 3, 4 or 5 above. Synthesis methods and product yields are given in table. 2, the characteristics are in table. 3, the data of elemental analysis are shown in table. 4.

Экспериментальная проверка биологической активности заявляемых соединений
Эксперимент 1
Определение антимикробного действия соединений
Для определения антимикробной активности были использованы стандартные штаммы Mycobacteium smegmatis ATCC607 и Mycobacterium tuberculosis H37RV, чувствительные ко всем антимикробным препаратам.Experimental verification of the biological activity of the claimed compounds
Experiment 1
Determination of antimicrobial action of compounds
To determine the antimicrobial activity, standard strains of Mycobacteium smegmatis ATCC607 and Mycobacterium tuberculosis H37RV were used, which are sensitive to all antimicrobial agents.

Оценку антимикобактериального действия проводили методом серийных разведений (Pharmaceutical microbiology, Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.) M.smegmatis ATCC607 для засева выращивали на жидкой синтетической среде N-1. Evaluation of the antimycobacterial effect was carried out by the method of serial dilutions (Pharmaceutical microbiology, Ed. By W. B. Hugo and A. D. Russell Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.) M. smegmatis ATCC607 for inoculation was grown on liquid synthetic medium N-1.

Соединения растворяли в диметил-сульфокисиде (ДМСО) и титровали в среде N-1 так, что данный препарат содержался в отдельных пробирках со средой в концентрациях от 200 до 0,025 мг/л. Концентрация препарата в среде соседних пробирок отличалась в два раза. В контроле использовали ДМСО, который титровали так же, как и препарат. Тест-штамм бактерий добавляли в количестве 1-2•10⁶ мл. Результат учитывали после 72-часового культивирования пробирок при 37^oC.Compounds were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and titrated in N-1 medium so that this preparation was contained in separate tubes with the medium in concentrations from 200 to 0.025 mg / L. The concentration of the drug in the environment of neighboring tubes was two times different. DMSO was used in the control, which was titrated in the same way as the preparation. The test strain of bacteria was added in an amount of 1-2 • 10 ⁶ ml. The result was taken into account after 72-hour cultivation of the tubes at 37 ^o C.

Для M. tuberculosis H37Rv условия постановки опыта были идентичными, за исключением того, что бактерии выращивали на среде Сотона, содержащей 10% лошадиной сыворотки, и плотность микробной суспензии при засеве составляла 50•10⁶.For M. tuberculosis H37Rv, the experimental conditions were identical, except that the bacteria were grown in Soton medium containing 10% horse serum, and the density of the microbial suspension during inoculation was 50 • 10 ⁶ .

В качестве контроля в обоих случаях были использованы известные туберкулостатические препараты. Результаты, полученные для использованных штаммов, суммированы в таблице 5. In both cases, known tuberculostatic drugs were used as a control. The results obtained for the strains used are summarized in table 5.

Приведенные в табл. 5 данные показывают, что заявляемые соединения обладают антимикробной активностью по отношению к использованным штаммам микобактерий в концентрациях от 100,0 до 0,1 мг/л. Активность действия на микобактерии ряда заявляемых соединений in vitro не уступает, а порой и превосходит таковую у известных противотуберкулезных препаратов. Given in the table. 5 data show that the claimed compounds have antimicrobial activity in relation to the used strains of mycobacteria in concentrations from 100.0 to 0.1 mg / L. The activity on mycobacteria of a number of the claimed compounds in vitro is not inferior, and sometimes even surpasses that of known anti-tuberculosis drugs.

Эксперимент 2
Определение действия соединений на патогенные микобактерии
В работе использованы штаммы, выделенные от больных в клиниках С.Петербурга (Россия) в 1996 году; M. tuberculosis 61(S) - чувствительный к действию известных антимикробных препаратов (аминогликозидов, рифампицина, изониазида, этамбутола); M. tuberculosis 16(R) - устойчивый к основным антимикобактериальным препаратам; Mycobacterium avium 84 - микобактерия, вызывающая заболевания и гибель лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека. Исследование проводили на среде Левенштейна-Йенсена. Препараты, растворенные в (ДМСО), добавляли в отдельные пробирки со средой в конечной концентрации 10 мг/л. После засева тест-штаммов на поверхность среды пробирки инкубировали в течение 30 суток. В контроле использовали ДМСО в соответствующих концентрациях и стандартные препараты, используемые для лечения туберкулеза и микобактериозов (табл. 6).Experiment 2
Determination of the effect of compounds on pathogenic mycobacteria
The work used strains isolated from patients in the clinics of St. Petersburg (Russia) in 1996; M. tuberculosis 61 (S) - sensitive to the action of known antimicrobial agents (aminoglycosides, rifampicin, isoniazid, ethambutol); M. tuberculosis 16 (R) - resistant to major antimycobacterial drugs; Mycobacterium avium 84 is a mycobacterium that causes diseases and death of people infected with human immunodeficiency virus. The study was performed on Levenshtein-Jensen medium. Drugs dissolved in (DMSO) were added to separate tubes with medium at a final concentration of 10 mg / L. After seeding of test strains on the surface of the medium, the tubes were incubated for 30 days. DMSO in appropriate concentrations and standard preparations used to treat tuberculosis and mycobacteriosis were used in the control (Table 6).

Полученные данные свидетельствуют, что указанные в таблице 6 заявляемые соединения угнетают рост всех использованных в опыте видов и штаммов микобактерий. Таким образом, in vitro они действуют и на штамм микобактерий, выделенный от больных, устойчивый к основным препаратам, используемым для лечения туберкулеза. Кроме того эти соединения в данных условиях угнетают рост M.avium. Остальные заявляемые соединения обладают в аналогичных условиях меньшей антимикобактериальной активностью. The data obtained indicate that the claimed compounds listed in table 6 inhibit the growth of all species and strains of mycobacteria used in the experiment. Thus, in vitro, they act on a strain of mycobacteria isolated from patients that is resistant to the main drugs used to treat tuberculosis. In addition, these compounds under these conditions inhibit the growth of M.avium. The rest of the claimed compounds have in similar conditions less antimycobacterial activity.

Эксперимент 3
Определение острой токсичности
Определение острой токсичности проведено на беспородных белых мышах массой 18-20 г. Эмульсии заявляемых соединений вводили в различных концентрациях: 1500, 700, 500, 100, 20 и 5 мг/кг. Для исследования каждой концентрации соединения использовали по 5 животных. Препарат вводили один раз в сутки через рот или внутрибрюшинно. Период наблюдения составил 14 дней. На 1, 8 и 15 день проводили взвешивание животных в каждой группе. Для контроля использовали животных, которым вводили эмульсию, приготовленную без испытуемых соединений.Experiment 3
Acute toxicity determination
The determination of acute toxicity was carried out on outbred white mice weighing 18-20 g. Emulsions of the claimed compounds were administered in various concentrations: 1500, 700, 500, 100, 20 and 5 mg / kg. Five animals were used to study each concentration of the compound. The drug was administered once a day through the mouth or intraperitoneally. The observation period was 14 days. On days 1, 8 and 15, animals were weighed in each group. For control, animals were used that were injected with an emulsion prepared without test compounds.

Для макроскопического исследования внутренних органов проводили вскрытие всех животных, умерших в ходе опыта и выживших к концу эксперимента. For macroscopic examination of internal organs, all animals that died during the experiment and survived by the end of the experiment were autopsied.

В ходе проведенных исследований не наблюдалось потери веса, изменения в поведении и внешнем виде, а также гибели животных. По результатам вскрытия макроскопической патологии со стороны внутренних органов животных как в опытной так и в контрольной группах обнаружено не было (табл. 7). In the course of the studies, no weight loss, changes in behavior and appearance, as well as death of animals were observed. According to the results of opening a macroscopic pathology from the internal organs of animals, both in the experimental and in the control groups were not found (Table 7).

Полученные результаты свидетельствуют, что при приеме через рот или внутрибрюшинно заявляемые соединения в концентрации 1500 мг/кг не обладают острой токсичностью для мышей. The results obtained indicate that when taken orally or intraperitoneally, the claimed compounds at a concentration of 1500 mg / kg do not have acute toxicity to mice.

Эксперимент 4
Терапевтическая эффективность действия заявляемых соединений при экспериментальном туберкулезном процессе у мышей
Исследование проведено на беспородных мышах-самцах массой 18-20 г. Туберкулезный процесс вызывали у мышей введением в хвостовую вену M. bovis bovinus 8 в дозе 0,1 мг/мышь в виде бактериальной суспензии (0,2 мл). Испытуемые соединения использовали в трех дозах (10, 20 и 30 мг/кг). В качестве препарата сравнения использовали стрептомицин. Испытуемые соединения вводились животным один раз в сутки внутрь, через рот, стрептомицин - внутримышечно. Выведение животных из опыта (путем декапитации) производили на 42 день после инфицирования, когда в группе контроля заражения (нелеченные мыши) погибло 45% животных.Experiment 4
Therapeutic efficacy of the claimed compounds in the experimental tuberculosis process in mice
The study was conducted on outbred male mice weighing 18-20 g. The tuberculosis process was induced in mice by injecting M. bovis bovinus 8 into the tail vein at a dose of 0.1 mg / mouse in the form of a bacterial suspension (0.2 ml). The test compounds were used in three doses (10, 20 and 30 mg / kg). Streptomycin was used as a reference drug. The test compounds were administered to animals once a day orally, by mouth, streptomycin - intramuscularly. The animals were removed from the experiment (by decapitation) 42 days after infection, when 45% of the animals died in the infection control group (untreated mice).

Эффективность терапии оценивали по выживаемости животных, относительной массе легких, индексам поражения легких и высеваемости микобактерий из селезенки. В последнем случае гомогенат органа засевали на плотную яичную среду Левенштейна-Йенсена. Подсчет колоний проводили через 25-30 дней культивирования. Рассчитывали среднюю высеваемость микобактерий на одну пробу, что выражали как число колониеобразующих единиц (КОЕ) на 100 мг (табл. 8). The effectiveness of therapy was evaluated by the survival of animals, the relative mass of the lungs, the indexes of lung damage and the seeding rate of mycobacteria from the spleen. In the latter case, the organ homogenate was seeded on a dense Levenshtein-Jensen egg medium. Colony counting was performed after 25-30 days of cultivation. The average inoculation of mycobacteria per one sample was calculated, which was expressed as the number of colony forming units (CFU) per 100 mg (Table 8).

Проведенные исследования показали, что у экспериментальных животных с генерализованным туберкулезным процессом заявляемые соединения показывают терапевтический эффект, по проявленной активности не уступающий таковому у стрептомицина. Studies have shown that in experimental animals with a generalized tuberculosis process, the claimed compounds show a therapeutic effect that is not inferior in activity to that of streptomycin.

Эксперимент 5
Определение действия заявляемых соединений на вирус герпеса
Антивирусная активность изучалась по отношению к вирусу герпеса I типа (ВПГ-I /Ленинград/248/88) по общепринятому методу (Gentry G.A., Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomonas vaginalis in cell culture, J. of Clinical Microbiology 1985, Vol. 22, N 2, P. 199-204).Experiment 5
Determination of the effect of the claimed compounds on the herpes virus
Antiviral activity was studied in relation to the type I herpes virus (HSV-I / Leningrad / 248/88) according to the generally accepted method (Gentry GA, Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomonas vaginalis in cell culture, J . of Clinical Microbiology 1985, Vol. 22, No. 2, P. 199-204).

Вирусы выращивали на перевиваемой культуре клеток Vero, полученной из банка клеточных культур Института цитологии РАН. Viruses were grown on a Vero transplantable cell culture obtained from a cell culture bank of the Institute of Cytology RAS.

Схема постановки опыта
К клеткам, выращенным на среде RPMI-1640 с 10% телячьей сыворотки и помещенным в лунки 96 луночного плато, добавляли вирус в конечной концентрации 10 частиц/мл и заявляемые соединения, растворенные в ДМСО, в конечной концентрации 100, 10 и 1 мг/л. Для каждой испытанной концентрации препарата использовали 5 независимых лунок. Плато инкубировали в течение 60 мин при 38^oC в CO₂-инкубаторе. После инкубации вирус удаляли и снова вносили свежую среду, содержащую заявляемые соединения в использованных концентрациях.Test setup
To cells grown on RPMI-1640 medium with 10% calf serum and placed in wells of 96 wells, virus was added at a final concentration of 10 particles / ml and the claimed compounds dissolved in DMSO at a final concentration of 100, 10 and 1 mg / L . For each tested drug concentration, 5 independent wells were used. The plateau was incubated for 60 min at 38 ^° C in a CO ₂ incubator. After incubation, the virus was removed and fresh medium was added again containing the claimed compounds in the used concentrations.

Результаты оценивали по наличию цитопатогенного действия вируса на клетки через 36 часов инкубации при 38^oC в CO₂-инкубаторе.The results were evaluated by the presence of the cytopathogenic effect of the virus on the cells after 36 hours of incubation at 38 ^o C in a CO ₂ incubator.

В опыте были использованы следующие контроли:
1. Контроль культуры клеток (способность к нормальному росту)
2. Контроль вируса (оценка способности к репродукции)
3. Контроль антивирусной активности противовирусного препарата - ацикловира
4. Контроль соединений (токсичность соединений)
5. Контроль растворителя (ДМСО) на токсичность.The following controls were used in the experiment:
1. Control of cell culture (ability to normal growth)
2. Virus control (reproductive capacity assessment)
3. Control of antiviral activity of the antiviral drug - acyclovir
4. Control of compounds (toxicity of compounds)
5. Solvent control (DMSO) for toxicity.

Для оценки цитопатического действия вируса подсчитывали число неизмененных клеток в 100 полях, образованных специальной сеткой окуляра инвертированного микроскопа. Полученные результаты представлены в таблице 9. To assess the cytopathic effect of the virus, the number of unchanged cells was counted in 100 fields formed by a special grid of an inverted microscope eyepiece. The results are presented in table 9.

Полученные результаты указывают, что приведенные в таблице 9 заявляемые соединения обладают антегерпетической активностью, сравнимой с таковой у стандартного препарата ацикловира. Остальные заявляемые соединения имели менее выраженную активность в процессе подавления репродукции вируса герпеса в выбранных условиях эксперимента. The obtained results indicate that the claimed compounds shown in table 9 have an antherpetic activity comparable to that of the standard preparation of acyclovir. The remaining claimed compounds had less pronounced activity in the process of suppressing the reproduction of the herpes virus in the selected experimental conditions.

Эксперимент 6
Определение интерферониндуцирующей активности заявляемых соединений
Индукцию синтеза интерферонов заявляемыми препаратами проводили на первичной культуре человеческих лимфоцитов (именно данные клетки в организме человека являются основными продуцентами интерферонов). Для получения культуры лимфоцитов использовали свежую (12 часов после забора) кровь здоровых доноров (не второй группы). Для выделения лимфоцитов гепаринизированная кровь, полученная от здорового донора, подвергалась центрифугированию в градиенте плотности фиколл-верографин 1.71 г/см³ для выделения фракции иммунокомпетентных клеток. Указанная фракция отбиралась и разводилась питательной средой RPMI-1640, содержащей 5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 0.3 мг/мл L-глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 50 мг/мл стрептомицина. Концентрацию лимфоцитов учитывали после окрашивания метиленовым синим и подсчета количества клеток в камере Горяева. Исходные растворы заявляемых веществ разводили питательной средой RPMI-1640 так, чтобы конечные концентрации веществ составляли ряд: 100, 10, 1 мг/л после внесения суспензии лимфоцитов. Конечная концентрация лимфоцитов в индукционной смеси составила 3•10⁶ клеток/мл. Параллельно с опытными пробами проставлялись следующие контроли:
1) контроль спонтанной продукции интерферонов (ИФН) лимфоцитами;
2) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН N-метил-N-(a, D-глюкопиранозил)аммоний-10-метиленкарбоксилат акридона (циклоферон).Experiment 6
Determination of interferon-inducing activity of the claimed compounds
Induction of the synthesis of interferons by the claimed drugs was carried out on the primary culture of human lymphocytes (these cells in the human body are the main producers of interferons). To obtain a culture of lymphocytes, fresh (12 hours after collection) blood of healthy donors (not of the second group) was used. To isolate lymphocytes, heparinized blood obtained from a healthy donor was centrifuged in a density gradient of ficoll-verographin 1.71 g / cm ³ to isolate a fraction of immunocompetent cells. The specified fraction was selected and diluted with RPMI-1640 nutrient medium containing 5% fetal bovine serum, 0.3 mg / ml L-glutamine, 100 units / ml penicillin, 50 mg / ml streptomycin. The concentration of lymphocytes was taken into account after staining with methylene blue and counting the number of cells in the Goryaev chamber. The initial solutions of the claimed substances were diluted with RPMI-1640 nutrient medium so that the final concentrations of the substances were a number: 100, 10, 1 mg / L after making a suspension of lymphocytes. The final concentration of lymphocytes in the induction mixture was 3 • 10 ⁶ cells / ml. In parallel with the experimental samples, the following controls were affixed:
1) control of spontaneous production of interferons (IFN) by lymphocytes;
2) control of the process when exposed to a standardized IFN inducer N-methyl-N- (a, D-glucopyranosyl) ammonium-10-methylenecarboxylate acridone (cycloferon).

3) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН - Неовира (натрия 10-метиленкарбоксилат-9-акридон) с соответствующим содержанием DMCO в опытных пробах. 3) control of the process under the influence of a standardized IFN inducer - Neovir (sodium 10-methylenecarboxylate-9-acridone) with the corresponding content of DMCO in the experimental samples.

4) контроль спонтанной продукции интерферонов в присутствии DMCO, в количестве, соответствующем испытуемым образцам. 4) control of the spontaneous production of interferons in the presence of DMCO, in an amount corresponding to the test samples.

Контрольные и опытные образцы инкубировали 24 часа при 37^oC. После инкубации пробы центрифугировались при 2000 g для осаждения клеточных элементов и из проб отбирался ИФН-содержащий супернатант, который анализировали на количественное содержание ИФН. Осадок клеток ресуспендировали в прежнем объеме питательной среды, окрашивали витальным красителем - трипановым синим - и подсчитывали число клеток в камере Горяева (как описано выше) для определения цитотоксического действия препаратов.Control and experimental samples were incubated for 24 hours at 37 ^o C. After incubation, the samples were centrifuged at 2000 g to precipitate cell elements and IFN-containing supernatant was taken from the samples, which were analyzed for the quantitative content of IFN. Cell pellet was resuspended in the same volume of culture medium, stained with vital dye - trypan blue - and the number of cells in the Goryaev chamber (as described above) was counted to determine the cytotoxic effect of the preparations.

Количественное определение содержания ИФН в контрольных и опытных образцах производили с использованием иммуноферментной тест-системы на ИФН-а производства ТОО "Протеиновый контур" ProCon IF2 plus. Для определения количества интерферона в пробе использовали твердофазный иммуноферметный метод с использованием пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Активность связанной пероксидазы измеряли с использованием автоматического фотометра для микропланшетов с микропроцессором при длине волны - 450 нм. Quantitative determination of the content of IFN in the control and experimental samples was carried out using an enzyme-linked immunosorbent assay system on IFN-a produced by Protein circuit LLP ProCon IF2 plus. To determine the amount of interferon in the sample, the solid phase immunofermet method was used using horseradish peroxidase as an indicator enzyme. The activity of bound peroxidase was measured using an automatic photometer for microplates with a microprocessor at a wavelength of 450 nm.

Для подсчета результатов параллельно определяли активность ИФН у стандартных растворов ИФН, содержащих известное количество препарата. На основании полученных результатов строилась калибровочная кривая, позволяющая при использовании микропроцессора автоматического фотометра получать данные, выраженные в Международных Единицах активности (МЕ). Результаты анализа выражаются в МЕ активности ИФН на мл в данной индукционной системе, содержащей 3•10⁶ лимфоцитов/мл. Каждая опытная и контрольная точка исследовалась в 4 параллелях.To calculate the results, IFN activity was determined in parallel for standard IFN solutions containing a known amount of the drug. Based on the results obtained, a calibration curve was constructed that allows using data from the International Activity Units (ME) when using the microprocessor of an automatic photometer. The analysis results are expressed in IU of IFN activity per ml in this induction system containing 3 • 10 ⁶ lymphocytes / ml. Each experimental and control point was studied in 4 parallels.

Контроли иммуноферментной реакции
1. Контроль DMCO с питательной средой.Enzyme immunoassay controls
1. Control of DMCO with culture medium.

2. Контроль компонентов системы (согласно инструкции). 2. Control of system components (according to the instructions).

3. Все результаты учитывались только при соответствии контролей паспортным данным системы. 3. All results were taken into account only if the controls corresponded to the system passport data.

Полученные результаты подвергались статистическому анализу по критерию и расчетом доверительного интервала при p = 0.05. Произведен анализ сходимости результатов в параллельных опытах. The results were subjected to statistical analysis by the criterion and calculation of the confidence interval at p = 0.05. An analysis of the convergence of the results in parallel experiments is performed.

В результате проведенных исследований установлено, что среди заявляемых соединений имеются пробы, обладающие способностью индуцировать синтез ИФН (таблица 10). As a result of the studies, it was found that among the claimed compounds there are samples with the ability to induce the synthesis of IFN (table 10).

Эксперимент 7
Определение действия заявляемых соединений на Chlamydia trachomatis
Антимикробную активность заявляемых соединений изучали по отношению к C. trachomatis D323 - стандартному штамму из коллекции кафедры микробиологии С. Петербургского Государственного университета им. ак. И.П.Павлова. Данный штамм был выделен от больного с хламидийным уретритом, имеет морфологию и физиологическую активность, характерную для представителей данного вида, чувствителен к действию препаратов, используемых для лечения хламидийной инфекции.Experiment 7
Determination of the effect of the claimed compounds on Chlamydia trachomatis
The antimicrobial activity of the claimed compounds was studied in relation to C. trachomatis D323, a standard strain from the collection of the Department of Microbiology of St. Petersburg State University. ac. I.P. Pavlova. This strain was isolated from a patient with chlamydial urethritis, has a morphology and physiological activity characteristic of representatives of this species, is sensitive to the action of drugs used to treat chlamydial infection.

В работе использованы клеточные культуры McCoy и L929, полученные из института Цитологии РАН. The cell cultures McCoy and L929 obtained from the Institute of Cytology RAS were used.

Схема постановки опыта
Клетки выращивали во флаконах из нейтрального стекла в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Опыт ставили в стеклянных (лишенных токсичности) плоскодонных флаконах с покровными стеклами. Клетки вносили в среду в конечной концентрации 1•10 кл/мл. После получения монослоя в пробирки вносили стандартные заражающие дозы хламидий, хранящиеся в замороженном состоянии при -70^oC. Одновременно к клеткам добавляли испытуемые соединения в конечной концентрации 100 мг/л. Пробу центрифугировали при 2400g в течении 60 минут при комнатной температуре и инкубировали при 37^oC в течение 2 часов. После этого меняли питательную среду на новую, содержащую 5% эмбриональной телячьей сыворотки и циклогексимид (2 мкг/мл) с повторным внесением заявляемых соединений в той же концентрации. Параллельно дублировали пробы, используя среду без циклогексемида, чтобы исключить его влияние на изучаемые субстанции. Пробы инкубировали в течение 48 часов в CO₂-инкубаторе.Test setup
Cells were grown in neutral glass vials in RPMI-1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum. The experiment was set in glass (deprived of toxicity) flat-bottomed vials with coverslips. Cells were introduced into the medium at a final concentration of 1 • 10 cells / ml. After receiving the monolayer in the test tubes, standard infectious doses of chlamydia were added, stored in a frozen state at -70 ^° C. At the same time, test compounds were added to the cells at a final concentration of 100 mg / L. The sample was centrifuged at 2400g for 60 minutes at room temperature and incubated at 37 ^o C for 2 hours. After this, the nutrient medium was changed to a new one containing 5% fetal calf serum and cycloheximide (2 μg / ml) with repeated application of the claimed compounds in the same concentration. Samples were duplicated in parallel using a medium without cyclohexemide in order to exclude its effect on the studied substances. Samples were incubated for 48 hours in a CO ₂ incubator.

Контроли включили: контроли культур клеток, контроль действия растворителей, контроль действия хламидий в отсутствии каких бы-то ни было препаратов, контроль чувствительности хламидий к стандартному антимикробному препарату - ципрофлоксацину (19), контроль испытуемых соединений на токсичность по отношению к культурам клеток. The controls included: control of cell cultures, control of the action of solvents, control of the action of chlamydia in the absence of any drugs, control of the sensitivity of chlamydia to the standard antimicrobial drug - ciprofloxacin (19), control of the tested compounds for toxicity to cell cultures.

Оценку результатов проводили путем выявления хламидийных цитоплазматических включений с помощью метода иммунофлюоресценции (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) и хламидийных антигенов с помощью CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Parc Road London NW1 7SX) (Wang S-P., Grayston J.T. Serotyping of Clamydia trachomatis by inderect fluorescent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, Vol. 29, N 7, P. 1295-1298. и Judson B. A. , Lambert P.P. Improved Syva MicroTrac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, Vol. 26, N 12, P. 2657-2658). Эффект действия препарата определяли, анализируя состояние монослоя и число клеток с ЦПВ по сравнению с контролем (культура клеток, зараженная C.trachomatis D323), при этом учитывали число неизмененных клеток в 100 полях зрения, полученных при использовании специальной сетки окуляра микроскопа. Evaluation of the results was carried out by detecting chlamydial cytoplasmic inclusions using the method of immunofluorescence (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) and chlamydial antigens using CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Parc Road London NW1 7SX) (Wang SP. Clitia Dotyping Graystyping trachomatis by inderect fluorescent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, Vol. 29, N 7, P. 1295-1298. and Judson BA, Lambert PP Improved Syva MicroTrac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, Vol. 26, No. 12, P. 2657-2658). The effect of the drug was determined by analyzing the state of the monolayer and the number of cells with CPV compared with the control (cell culture infected with C.trachomatis D323), taking into account the number of unchanged cells in 100 fields of view obtained using a special microscope eyepiece grid.

Результаты контрольных проб, удовлетворяющие требованиям эксперимента: контроль культуры клеток - морфология клеток и состояние монослоя соответствуют данному типу клеток, контроль роста хламидий в культуре клеток - наличие ЦПВ в монослое, контроль действия стандартного антимикробного препарата - уменьшение числа ЦПВ в монослое по сравнению с предыдущим контролем, контроль токсичности заявляемых соединении - токсичность отсутствует, контроль действия растворителей - токсическое действие на клетки отсутствует. Результаты проведенных испытаний представлены в таблице 11. The results of control samples that meet the requirements of the experiment: control of cell culture — cell morphology and monolayer state correspond to this type of cell, control of chlamydia growth in cell culture — presence of CPV in a monolayer, control of the action of a standard antimicrobial drug — decrease in the number of CPV in a monolayer , toxicity control of the claimed compound - no toxicity, solvent control - no toxic effect on cells. The results of the tests are presented in table 11.

Полученные данные свидетельствуют, что заявляемые соединения, приведенные в таблице 11, обладают выраженной активностью против хламидий, превосходящей таковую у стандартного препарата - ципрофлоксацина. The data obtained indicate that the claimed compounds are shown in table 11, have a pronounced activity against chlamydia, superior to that of the standard drug - ciprofloxacin.

Остальные заявляемые соединения обладают менее выраженной активностью по защите клеток от хламидий в выбранных условиях эксперимента. The rest of the claimed compounds have less pronounced activity to protect cells from chlamydia in the selected experimental conditions.

Промышленная применимость
Примеры 1-5 и результаты практического синтеза и анализа заявляемых соединений, приведенные в таблицах 1-4, подтверждают возможность лабораторного и промышленного синтеза всех десяти заявляемых соединений средствами, освоенными современной фармацевтической промышленностью, а также их четкую идентификацию общепринятыми методами контроля.Industrial applicability
Examples 1-5 and the results of practical synthesis and analysis of the claimed compounds shown in tables 1-4, confirm the possibility of laboratory and industrial synthesis of all ten of the claimed compounds by means developed by the modern pharmaceutical industry, as well as their clear identification by generally accepted control methods.

Серия экспериментов по определению биологической активности, приведенная в семи представленных отчетах, показала, что заявляемые соединения обладают биологической активностью по отношению к различным микроорганизмам, включая микобактерии (чувствительные и устойчивые к существующим препаратам), хламидии, вирус простого герпеса, а также интерферониндуцирующей активностью. Последнее указывает на возможность их использования в лечении некоторых раковых заболеваний. A series of experiments to determine the biological activity given in the seven reports presented showed that the claimed compounds have biological activity against various microorganisms, including mycobacteria (sensitive and resistant to existing drugs), chlamydia, herpes simplex virus, as well as interferon-inducing activity. The latter indicates the possibility of their use in the treatment of certain cancers.

Приведенные факты доказывают достижение задач, поставленных изобретением: синтезирован новый класс гетероциклических соединений, обладающих высокой и широкой биологической активностью, в частности антимикобактериальной (возбудители туберкулеза и микобактериозов), иммуностимулирующей, противохламидийной и противовирусной. The above facts prove the achievement of the objectives set by the invention: a new class of heterocyclic compounds with high and wide biological activity, in particular antimycobacterial (pathogens of tuberculosis and mycobacteriosis), immunostimulating, anti-chlamydial and antiviral, has been synthesized.

Таким образом, по нашему мнению, заявляемые средства (вещества) (удовлетворяют всем требованиям, предъявляемым к изобретению: они новы, неочевидны и промышленно применимы. Thus, in our opinion, the claimed means (substances) (satisfy all the requirements for the invention: they are new, non-obvious and industrially applicable.

Claims

1. Derivative of 5-oxo-5H- [1] -benzopyrano [5,6-b] -4-oxo-4H- [1,2] pyrimido-1,4,5,6-tetrahydro-1,3 -thiazine (I), General formula I

where R1 is H or halogen;
R 2 is H, or halogen, or nitro, or hydroxy, or methoxy.

2. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = R2-H (I).

3. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = R2-H and R2-Cl (II).

4. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = R2-Cl (III).

5. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = H and R2 = Br (IV).

6. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = R2 = Br (V).

7. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = H and R2 = NO ₂ (VI).

8. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = Cl and R2 = NO ₂ (VII).

9. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = Br and R2 = NO ₂ (VIII).

10. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = H and R2 = OCH ₃ (IX).

11. The compound of formula 1 according to claim 1, where R1 = H and R2 = OH (X).