RU2815137C1 - 3-butylthio-1-(beta-d-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4h)-1,2,4-triazole, synthesis, anti-herpes virus action - Google Patents
3-butylthio-1-(beta-d-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4h)-1,2,4-triazole, synthesis, anti-herpes virus action Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815137C1 RU2815137C1 RU2023118286A RU2023118286A RU2815137C1 RU 2815137 C1 RU2815137 C1 RU 2815137C1 RU 2023118286 A RU2023118286 A RU 2023118286A RU 2023118286 A RU2023118286 A RU 2023118286A RU 2815137 C1 RU2815137 C1 RU 2815137C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- triazole
- phenyl
- butylthio
- compound
- beta
- Prior art date
Links
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 15
- 230000003602 anti-herpes Effects 0.000 title description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 title description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 34
- ZVXPQZSVJLNPCT-UHFFFAOYSA-N 3-butylsulfanyl-5-phenyl-1h-1,2,4-triazole Chemical compound N1C(SCCCC)=NN=C1C1=CC=CC=C1 ZVXPQZSVJLNPCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- JRLMMJNORORYPO-UHFFFAOYSA-N 5-phenyl-1,2-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione Chemical compound N1C(S)=NC(C=2C=CC=CC=2)=N1 JRLMMJNORORYPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- OWKWAVBMKKZMHE-UHFFFAOYSA-N benzamidothiourea Chemical compound NC(=S)NNC(=O)C1=CC=CC=C1 OWKWAVBMKKZMHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000002585 base Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 108010019092 Uridine phosphorylase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- KMGBZBJJOKUPIA-UHFFFAOYSA-N butyl iodide Chemical compound CCCCI KMGBZBJJOKUPIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 4
- 101710101148 Probable 6-oxopurine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000030764 Purine-nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000006405 Uridine phosphorylase Human genes 0.000 claims abstract 2
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 21
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 23
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 18
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 18
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 18
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 4
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 4
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 125000004862 thiobutyl group Chemical group 0.000 description 4
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 4
- -1 Azidotimidine Chemical compound 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- 102100020892 Uridine phosphorylase 1 Human genes 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 208000030925 respiratory syncytial virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- ZEWJFUNFEABPGL-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-triazole-3-carboxamide Chemical compound NC(=O)C=1N=CNN=1 ZEWJFUNFEABPGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- FSPQCTGGIANIJZ-UHFFFAOYSA-N 2-[[(3,4-dimethoxyphenyl)-oxomethyl]amino]-4,5,6,7-tetrahydro-1-benzothiophene-3-carboxamide Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C(=O)NC1=C(C(N)=O)C(CCCC2)=C2S1 FSPQCTGGIANIJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 4H-1,2,4-triazole Chemical compound C=1N=CNN=1 NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NYMLZIFRPNYAHS-UHFFFAOYSA-N 5-phenyl-1h-1,2,4-triazole Chemical compound C1=NNC(C=2C=CC=CC=2)=N1 NYMLZIFRPNYAHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010073931 Genital herpes simplex Diseases 0.000 description 1
- 208000032982 Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701027 Human herpesvirus 6 Species 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O.N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N 0.000 description 1
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100036286 Purine nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 description 1
- 101710151245 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 1
- 101150118251 UL23 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150068034 UL30 gene Proteins 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000002921 anti-spasmodic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 229940124575 antispasmodic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethanol Chemical compound CCO.ClC(Cl)Cl UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940113983 lopinavir / ritonavir Drugs 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 229940035363 muscle relaxants Drugs 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003158 myorelaxant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 108010009099 nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000002718 pyrimidine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 102200089608 rs1553619431 Human genes 0.000 description 1
- 102220182705 rs191061766 Human genes 0.000 description 1
- 102200078354 rs41307846 Human genes 0.000 description 1
- 102220071724 rs794728408 Human genes 0.000 description 1
- 229940125723 sedative agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960002063 sofosbuvir Drugs 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005918 transglycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003211 trypan blue cell staining Methods 0.000 description 1
- 229960003636 vidarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940100050 virazole Drugs 0.000 description 1
- 229940107931 zovirax Drugs 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности к получению нуклеозида 3-бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола (соединение (1), фиг. 1) (БДФТ) и обнаружению его противовирусного действия. Изобретение может быть использовано для лечения и профилактики герпетической инфекции человека, в научно-исследовательских лабораториях, химико-фармацевтической промышленности, лечебных учреждениях.The invention relates to biotechnology and medicine, in particular to the production of 3-butylthio-1-(beta-D-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole nucleoside (compound (1), Fig. 1) (BDFT) and the detection of its antiviral effect. The invention can be used for the treatment and prevention of human herpes infection in research laboratories, the chemical and pharmaceutical industry, and medical institutions.
Модифицированные нуклеозиды, по своей природе являющиеся антиметаболитами, проявляют широкий спектр антивирусной активности. В современной лечебной практике активно используются препараты Ацикловир, Видарабин, Азидотимидин, и Рибавирин в комплексной терапии герпетических инфекций, ВИЧ и гепатита С, соответственно [Looking Back in 2009 at the Dawning of Antiviral Therapy Now 50 Years Ago: An Historical Perspective. Erik De Clercq. Advances in Virus Research, Volume 73. 2009 Elsevier Inc.]. Отдельного внимания заслуживают нуклеозиды 1,2,4-триазола, проявляющие антивирусную активность широкого спектра против гриппа А и В, респераторно-синтициальной вирусной инфекции, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса герпеса простого 1 и 2 типов, вируса герпеса 6 типа. Среди всех синтезированных нуклеозидов 1,2,4-триазол-3-карбоксамида только рибавирин (1-бета-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид) последние 40 лет используется в моно- и комплексных схемах терапии вирусного гепатита С, респераторно-синтициальной вирусной инфекции и гемморагической лихорадки с почечным синдромом [Witkowski J. T., Robins R. K., Sidwell R. W., and Simon L. N. Design, Synthesis, and Broad Spectrum Antiviral Activity of 1-β-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide and Related Nucleosides. // Journal of Medicinal Chemistry. 1972. V. 15, No. 11. P. 1150-1154; Pol S., Corouge M., Vallet-Pichard A. Daclatasvir-sofosbuvir combination therapy with or without ribavirin for hepatitis C virus infection: from the clinical trials to real life // Hepatic medicine: evidence and research. 2016. P. 21-26; Kim, Uh Jin, et al. "Combination therapy with lopinavir/ritonavir, ribavirin and interferon-α for Middle East respiratory syndrome." Antiviral therapy 21.5 (2016): 455-459; Хронический вирусный гепатит С (2021) . Клинические рекомендации. https://medi.ru/klinicheskie-rekomendatsii/khronicheskij-virusnyj-gepatit-s-khvgs-u-vzroslykh_14028/#t16]. Однако рибавирин обладает тератогенностью, мутагенностью и гемолитической активностью, что инициирует поиск среди его структурных аналогов соединений с лучшим терапевтическим индексом [Asahina, Yasuhiro, et al. "Mutagenic effects of ribavirin and response to interferon/ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C." Journal of hepatology 43.4 (2005): 623-629; Kowdley, Kris V. "Hematologic side effects of interferon and ribavirin therapy." Journal of clinical gastroenterology 39 (2005): S3-S8; Koh, Christopher, and T. Jake Liang. "What is the future of ribavirin therapy for hepatitis C?." Antiviral research 104 (2014): 34-39]. Работы по созданию новых нуклеозидов на основе 1,2,4-триазола, обладающих низкой цитотоксичностью и высокой противовирусной активностью носят актуальный характер.Modified nucleosides, which are antimetabolites in nature, exhibit a wide range of antiviral activity. In modern medical practice, the drugs Acyclovir, Vidarabine, Azidotimidine, and Ribavirin are actively used in the complex therapy of herpetic infections, HIV and hepatitis C, respectively [Looking Back in 2009 at the Dawning of Antiviral Therapy Now 50 Years Ago: An Historical Perspective. Erik De Clercq. Advances in Virus Research, Volume 73. 2009 Elsevier Inc.]. 1,2,4-triazole nucleosides deserve special attention, exhibiting broad-spectrum antiviral activity against influenza A and B, respiratory syncytial virus infection, cytomegalovirus (CMV), herpes simplex virus types 1 and 2, and herpes virus type 6. Among all the synthesized nucleosides of 1,2,4-triazole-3-carboxamide, only ribavirin (1-beta-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide) has been used for the last 40 years in mono- and complex regimens for the treatment of viral hepatitis C, respiratory syncytial virus infection, and hemorrhagic fever with renal syndrome [Witkowski JT, Robins RK, Sidwell RW, and Simon LN Design, Synthesis, and Broad Spectrum Antiviral Activity of 1- β -D-Ribofuranosyl-1,2,4 -triazole-3-carboxamide and Related Nucleosides. // Journal of Medicinal Chemistry . 1972. V. 15, No. 11. P. 1150-1154; Pol S., Corouge M., Vallet-Pichard A. Daclatasvir-sofosbuvir combination therapy with or without ribavirin for hepatitis C virus infection: from the clinical trials to real life // Hepatic medicine: evidence and research. 2016. P. 21-26; Kim, Uh Jin, et al. "Combination therapy with lopinavir/ritonavir, ribavirin and interferon-α for Middle East respiratory syndrome." Antiviral therapy 21.5 (2016): 455-459; Chronic viral hepatitis C (2021). Clinical recommendations. https://medi.ru/klinicheskie-rekomendatsii/khronicheskij-virusnyj-gepatit-s-khvgs-u-vzroslykh_14028/#t16]. However, ribavirin has teratogenicity, mutagenicity and hemolytic activity, which initiates a search among its structural analogues for compounds with a better therapeutic index [Asahina, Yasuhiro, et al. "Mutagenic effects of ribavirin and response to interferon/ribavirin combination therapy in chronic hepatitis C." Journal of hepatology 43.4 (2005): 623-629; Kowdley, Kris V. "Hematologic side effects of interferon and ribavirin therapy." Journal of clinical gastroenterology 39 (2005): S3-S8; Koh, Christopher, and T. Jake Liang. "What is the future of ribavirin therapy for hepatitis C?." Antiviral research 104 (2014): 34-39]. Work on the creation of new nucleosides based on 1,2,4-triazole, which have low cytotoxicity and high antiviral activity, is current.
Изобретение иллюстрируют рисунки: Фиг. 1. Структура 3-бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола (БДФТ); Фиг. 2. Схема получения 3-бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола.The invention is illustrated by drawings: Fig. 1. Structure of 3-butylthio-1-(beta-D-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (BDFT); Fig. 2. Scheme for the preparation of 3-butylthio-1-(beta-D-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole.
Технической задачей изобретения является получение нуклеозида 2’-дезоксирибозида 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола, (соединение (1), БДФТ, фиг. 1) и изучение его противогерпесвирусной активности.The technical objective of the invention is to obtain the nucleoside 2'-deoxyriboside 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole, (compound (1), BDFT, Fig. 1) and the study of its antiherpesvirus activity.
Агликон - 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол - упоминается в патентах WO2005/097758A1 (25.03.2005) и US 2005/0288347A1 (29.12.2005) (C.N.Hodge, «Certaine triazole-based compounds, composition, and uses thereof»,) как препарат, активный в отношение киназ AURORA-A, FLT-3, c-TAK1, пособ синтеза не описан. Известен способ получения группы 3-арил-5-алкилтио-(4Н)-1,2,4-триазолов, проявляющих свойства миорелаксантов, антиконвульсантов, спазмолитиков, седативных препаратов (патент PT86623B, Португалия, 26.01.1988. «Processo para a preparacao de derivados de 3-aril-5-alquiltio-4H-1,2,4-triazo»). Aglycone - 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole - is mentioned in patents WO2005/097758A1 (03/25/2005) and US 2005/0288347A1 (12/29/2005) (C.N.Hodge, “Certaine triazole -based compounds, composition, and uses thereof",) as a drug active against the kinases AURORA-A, FLT-3, c-TAK1, the method of synthesis is not described. There is a known method for obtaining a group of 3-aryl-5-alkylthio-(4H)-1,2,4-triazoles exhibiting the properties of muscle relaxants, anticonvulsants, antispasmodics, sedatives (patent PT86623B, Portugal, 01/26/1988. “Processo para a preparacao de derivados de 3-aril-5-alquiltio-4H-1,2,4-triazo").
Синтез нуклеозидов на основе 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола не описан. The synthesis of nucleosides based on 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole has not been described.
Химический синтез 2'-дезоксирибозида 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола, не описан, по всей вероятности, в силу трудности его реализации по схеме классической реакции гликозилирования, в результате которой возможно образование плохо разделимой смеси альфа и бета-аномеров целевого соединения. Также возможно образование побочных N2 и N4 региоизомерных продуктов гликозилирования основания.The chemical synthesis of 2'-deoxyriboside 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole has not been described, most likely due to the difficulty of its implementation according to the classical glycosylation reaction scheme, as a result of which the formation of poor a separable mixture of alpha and beta anomers of the target compound. The formation of side N2 and N4 regioisomeric products of base glycosylation is also possible.
Технический результат получен за счет разработки химико-ферментативного способа синтеза БДФТ. Проблема синтеза нуклеозида решена за счет использования регио- и стерео- селективного химико-ферментативного подхода на стадии гликозилирования основания (4), (Схема приведена на фиг. 2). The technical result was obtained through the development of a chemical-enzymatic method for the synthesis of BDFT. The problem of nucleoside synthesis was solved through the use of a regio- and stereo-selective chemo-enzymatic approach at the stage of base glycosylation (4), (Scheme is shown in Fig. 2).
Для получения 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола используется традиционный способ синтеза триазолтионов. В качестве исходного соединения на первой стадии синтеза используют бензоилтиосемикарбазид (соединение 2) (фиг. 2). На первой стадии проводят циклизацию бензоилтиосемикарбазида (2) обработкой 20%-ным раствором натриевой щелочи при температуре реакционной смеси 90-95°С. После нейтрализации реакционной смеси соляной кислотой продукт 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тион (3) отделяют простой фильтрацией. Выход 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тиона (соединение 3, фиг. 2) составляет 84 %. To obtain 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole, a traditional method for the synthesis of triazolethiones is used. Benzoylthiosemicarbazide (compound 2) is used as the starting compound in the first stage of the synthesis (Fig. 2). At the first stage, benzoylthiosemicarbazide (2) is cyclized by treatment with a 20% sodium alkali solution at a reaction mixture temperature of 90-95°C. After neutralizing the reaction mixture with hydrochloric acid, the product 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione (3) was separated by simple filtration. The yield of 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione (compound 3, Fig. 2) is 84%.
На следующей стадии синтеза 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тион (3) обрабатывают йодистым бутилом с K2CO3 в сухом ацетоне. После удаления растворителя 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол (4) промывают последовательно водой, раствором NaOH и снова водой до нейтральной реакции. Выход 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола (соединение 4, фиг. 2) 73 %.At the next stage of the synthesis, 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione (3) is treated with butyl iodide with K 2 CO 3 in dry acetone. After removing the solvent, 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (4) is washed successively with water, NaOH solution and again with water until neutral. The yield of 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (compound 4, Fig. 2) is 73%.
На последней стадии синтеза для осуществления переноса остатка 2-дезоксирибозы с природного нуклеозида 2'-дезоксиуридина (соединение 5, фиг. 2) на модифицированное основание (соединение 4, фиг. 2) используют генно-инженерные ферменты нуклеозидфосфорилазы: пуриннуклеозидфосфорилазу (PNP, КФ 2.4.2.1) и уридинфосфорилазу (UP, КФ 2.4.2.3). Использование реакции ферментативного трансгликозилирования позволяет синтезировать 3-бутилтио-1-(бета-D-2-дезоксирибофуранозил)-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол (соединение 1, фиг. 2) с выходом 32 % чистотой > 92 %. Данные об использовании PNP для синтеза нуклеозидов 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола в открытой печати отсутствуют.At the last stage of the synthesis, to transfer the 2-deoxyribose residue from the natural nucleoside 2'-deoxyuridine (compound 5, Fig. 2) to the modified base (compound 4, Fig. 2), genetically engineered nucleoside phosphorylase enzymes are used: purine nucleoside phosphorylase (PNP, EC 2.4 .2.1) and uridine phosphorylase (UP, EC 2.4.2.3). The use of enzymatic transglycosylation reaction allows the synthesis of 3-butylthio-1-(beta-D-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (compound 1, Fig. 2) with a yield of 32% purity >92%. There are no publicly available data on the use of PNP for the synthesis of 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole nucleosides.
Таким образом, способ получения соединения БДФТ, включает циклизацию бензоилтиосемикарбазида обработкой раствором натриевой щелочи, реакцию алкилирования полученного 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тиона с иодистым бутилом, реакцию ферментативного гликозилирования полученного основания 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола с 2’-дезоксиуридином в К-фосфатном буферном растворе в присутствии каталитических количеств уридинфосфорилазы (80-200 ед.) и пуриннуклеозидфосфорилазы (80-200 ед.).Thus, the method for obtaining the BDFT compound includes the cyclization of benzoylthiosemicarbazide by treatment with a sodium alkali solution, the alkylation reaction of the resulting 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione with butyl iodide, the enzymatic glycosylation reaction of the resulting base 3 -butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole with 2'-deoxyuridine in K-phosphate buffer solution in the presence of catalytic amounts of uridine phosphorylase (80-200 units) and purine nucleoside phosphorylase (80-200 units) .
Противовирусное действие БДФТ впервые изучено на примере двух штаммов вируса герпеса простого типа 1 (ВПГ-1), включая штамм, устойчивый к действию базового противогерпетического препарата ацикловира. Установлен антигерпесвирусный эффект, выражающийся в ингибировании развития вирусиндуцированного цитопатического эффекта в культуре клеток Vero E6, инфицированных различными штаммами ВПГ-1. Соединение (1) может входить в эффективной терапевтической дозе в качестве действующего вещества в фармацевтическую композицию для использования в виде лекарственного средства, обладающего антигерпетической противовирусной активностью.The antiviral effect of BDFT was studied for the first time using two strains of herpes simplex virus type 1 (HSV-1), including a strain resistant to the action of the basic antiherpetic drug acyclovir. An antiherpesviral effect has been established, expressed in inhibition of the development of a virus-induced cytopathic effect in a culture of Vero E6 cells infected with various strains of HSV-1. Compound (1) can be included in an effective therapeutic dose as an active ingredient in a pharmaceutical composition for use as a drug having antiherpetic antiviral activity.
Изобретение иллюстрируют примеры.The invention is illustrated by examples.
Пример 1. Example 1.
Синтез 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тиона (соединение 3, фиг. 2).Synthesis of 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione (compound 3, Fig. 2).
Бензоилтиосемикарбазид (2) 1.95 г (10 ммоль) растворяют в 20 мл 20% -ного раствора NaOH, смесь нагревают при 90-95°С в течение 3 ч, затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры (25°С) и подкисляют HCl до рН 7.0. Полученный белый осадок отфильтровывают, промывают холодной водой (5×20 мл), сушат на воздухе. Выход 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тиона (3) составляет 1.48 г (84%), т.пл. 253-255°С, Rf 0.59 (ТСХ на пластинах «Silicagel 60 F254» («Merck») в системе хлороформ - этанол, 10:1). Масс-спектр, m/z: C8H7N3S, [M+H]+= 178.0442, расч.=178.0435.Benzoylthiosemicarbazide (2) 1.95 g (10 mmol) is dissolved in 20 ml of 20% NaOH solution, the mixture is heated at 90-95°C for 3 hours, then the reaction mixture is cooled to room temperature (25°C) and acidified with HCl to pH 7.0. The resulting white precipitate is filtered off, washed with cold water (5×20 ml), and air dried. The yield of 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazole-3-thione (3) was 1.48 g (84%), m.p. 253-255°C, R f 0.59 (TLC on Silicagel 60 F 254 plates (Merck) in a chloroform-ethanol system, 10:1). Mass spectrum, m/z: C 8 H 7 N 3 S, [M+H] + = 178.0442, calculated = 178.0435.
1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д., (J, Гц)): 7.51 (3Н, м, ArH-3′,4′,5′), 7.91 (2Н, д, J=6.2, ArH-2', 6'), 13.68 (1Н, уш.с. NH триазол), 13.84 (1Н, уш.с. NH триазол). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , δ, ppm, (J, Hz)): 7.51 (3H, m, ArH-3′,4′,5′), 7.91 (2H, d, J=6.2, ArH-2', 6'), 13.68 (1H, br.s. NH triazole), 13.84 (1H, br.s. NH triazole).
Пример 2.Example 2.
Синтез 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола (соединение 4, фиг. 2).Synthesis of 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (compound 4, Fig. 2).
Смесь, состоящую из 0.88 г (5 ммоль) 5-фенил-2,4-дигидро-1,2,4-триазол-3-тиона, 0.92 г (0.56 мл, 5 ммоль) бутила йодистого и 0.68 г (5 ммоль) К2СО3 нагревают в 15 мл сухого ацетона в течение 5 ч. Ход реакции контролируют методом ТСХ (Rf продукта 0.89 (ТСХ на пластинах «Silicagel 60 F254» («Merck») в системе хлороформ - метанол, 5:1). После удаления растворителя, остаток промывают поочередно 3×20 мл Н2О, 20 мл 2%-ного раствора NaOH и снова 100 мл воды до нейтральной реакции. Остаток высушивают на воздухе. Получают 0.85 г (73%) 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола (4) в виде порошка бледно молочного цвета, т.пл. 96-97°С. Масс-спектр, m/z: C12H15N3S, [M+H]+= 234.1075, расч.=234.1061.A mixture consisting of 0.88 g (5 mmol) 5-phenyl-2,4-dihydro-1,2,4-triazol-3-thione, 0.92 g (0.56 ml, 5 mmol) butyl iodide and 0.68 g (5 mmol) K 2 CO 3 is heated in 15 ml of dry acetone for 5 hours. The progress of the reaction is monitored by TLC (R f product 0.89 (TLC on Silicagel 60 F254 plates (Merck) in the system chloroform - methanol, 5:1). After removing the solvent, the residue is washed alternately with 3x20 ml of H 2 O, 20 ml of 2% NaOH solution and again with 100 ml of water until neutral. The residue is dried in air. 0.85 g (73%) of 3-butylthio-5- is obtained. phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (4) in the form of a pale milky powder, mp 96-97° C. Mass spectrum, m/z: C 12 H 15 N 3 S, [ M+H] + = 234.1075, calc.=234.1061.
1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6+CCl4, δ, м.д., (J, Гц)): 0.95 (3Н, т, J=7.4, CH3), 1.48 (2Н, секстет, J=7.4, CH2-CH3), 1.71 (2Н, квинтет, J=7.2, -СН2-CH2-CH3), 3.14 (2Н, т, J=7.3, S-CH2,), 7.37 (1Н, т, J=7.1, ArH-4'), 7.42 (2Н, т, J=7.4, ArH-3',5'), 7.98 (2H, д, J=7.1, ArH-2',6'), 14.04 (1Н, уш.с., 4-NH триазол). 13С ЯМР (100 МГц, DMSO-d6+CCl4, δ, м.д.): 13.29 (C-10), 21.19 (C-9), 31.09 (C-7), 31.33 (С-8), 125.73 (С-1',2',6'), 128.18 (C-3',5'), 128.99 (C-4'), 154.77 (С-5), 159.39 (С-3). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 +CCl 4 , δ, ppm, (J, Hz)): 0.95 (3H, t, J=7.4, CH 3 ), 1.48 (2H, sextet, J =7.4, CH 2 -CH 3 ), 1.71 (2H, quintet, J=7.2, -CH 2 -CH 2 -CH 3 ), 3.14 (2H, t, J=7.3, S-CH 2 ), 7.37 ( 1H, t, J=7.1, ArH-4'), 7.42 (2H, t, J=7.4, ArH-3',5'), 7.98 (2H, d, J=7.1, ArH-2',6' ), 14.04 (1H, br.s., 4-NH triazole). 13 C NMR (100 MHz, DMSO-d 6 +CCl 4 , δ, ppm): 13.29 (C-10), 21.19 (C-9), 31.09 (C-7), 31.33 (C-8) , 125.73 (C-1',2',6'), 128.18 (C-3',5'), 128.99 (C-4'), 154.77 (C-5), 159.39 (C-3).
Пример 3.Example 3.
3-Бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазол (4) (55.6 мг, 0.238 ммоль), 2'-дезоксиуридин (325 мг, 1.424 ммоль) и KH2PO4 (170 мг, 1.249 ммоль) растворяют в 135 мл воды при перемешивании и нагревании до 50°C. Смесь нейтрализовают добавлением 5N KOH. Затем в реакционную смесь добавляют EcPNP (1.68 мг, 84 ед.) и EcUP (0.84 мг, 84 ед.) и термостатируют при 50°C в течение 7.5 ч. Реакцию проводят до тех пор, пока конверсия основания (4) в целевое соединение (1) не составит 93 %. По окончании процесса реакционную смесь концентрируют в вакууме (15 мм. рт. ст.) до объема 30 мл, выпавший осадок удаляют фильтрованием. Остаток хроматографируют на обращеннофазовом сорбенте октадецилсиликагель (Supelco-60), размеры колонки: 40×140 мм. Целевое соединение элюируют в градиенте этанола от 0 до 50%. Фракции содержащие продукт объединяют, растворитель удаляют в вакууме (15 мм. рт. ст.). Выход продукта составляет 26.2 мг (0.075 ммоль; 32 %), чистота 92.1% (ВЭЖХ: Rt = 14.3 мин, градиент элюента B 0-100 % за 20 минут). λ max 248 нм. Масс-спектр, m/z: C17H23N3O3S, [M+H]+= 350.1551, расч.=350.1534.3-Butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole (4) (55.6 mg, 0.238 mmol), 2'-deoxyuridine (325 mg, 1.424 mmol) and KH 2 PO 4 (170 mg, 1.249 mmol) is dissolved in 135 ml of water with stirring and heating to 50°C. The mixture is neutralized by adding 5N KOH. Then Ec PNP (1.68 mg, 84 units) and Ec UP (0.84 mg, 84 units) are added to the reaction mixture and thermostated at 50°C for 7.5 hours. The reaction is carried out until the conversion of base (4) to the target compound (1) will not be 93%. At the end of the process, the reaction mixture is concentrated in vacuum (15 mmHg) to a volume of 30 ml, the precipitate that forms is removed by filtration. The residue is chromatographed on a reverse-phase sorbent octadecylsilica gel (Supelco-60), column dimensions: 40×140 mm. The target compound is eluted in an ethanol gradient from 0 to 50%. The fractions containing the product are combined, the solvent is removed in vacuum (15 mmHg). The product yield is 26.2 mg (0.075 mmol; 32%), purity 92.1% (HPLC: R t = 14.3 min, gradient of eluent B 0-100% in 20 minutes). λ max 248 nm. Mass spectrum, m/z: C 17 H 23 N 3 O 3 S, [M+H] + = 350.1551, calculated = 350.1534.
1H ЯМР (700 МГц): δ = 7.98 (d, JH2,H3 = JH6,H5 = 7.9, 2H, H2 & H6 фенила), 7.49 (м, 2H, H3 & H5 фенила), 7.45 (м, 1H, H4 фенила), 6.13 (т, JH1,H2a = JH1,H2b = 6.2, 1 H, H-1'), 5.30 (д, JOH3',H3' = 4.7, 1 H, OH-3'), 4.73 (т, JOH5',H5'a = JOH5',H5'b = 5.6, 1 H, OH-5'), 4.46 (м, 1 H, H-3'), 3.84 (м, 1 H, H-4), 3.53 (м, 1 H, H-5a), 3.41 (м, 1 H, H-5'b), 3.29 (м, 2 H, H2 тиобутила), 2.78 (м, 1 H, H-2a), 2.31 (м, 1 H, H-2a), 1.70 (м, 2 H, H3 тиобутила), 1.43 (м, 2 H, H4 фенила), 13C ЯМР (176 МГц): δ = 161.31 (C-1 фенила), 154.37 (C-5 триазола), 130.88 (C-3 триазола), 130.04 (C-4 фенила), 129.15 (C-3 и C-5 фенила), 126.12 (C-2 и C-6 фенила), 88.55 (C-4'), 85.99 (C-1'), 71.46 (C-3'), 62.49 (C-5'), 38.45 (C-2), 32.91 (C-2 тиобутила), 31.57 (C-3 тиобутила), 21.54 (C-4 тиобутила), 13.64 (C-5 тиобутила). 15N ЯМР (71 МГц): δ = 284.2 (N-2), 225.5 (N-1). 1H NMR (700 MHz): δ = 7.98 (d, J H2,H3 = J H6,H5 = 7.9, 2H, H2 & H6 phenyl), 7.49 (m, 2H, H3 & H5 phenyl), 7.45 (m, 1H, H4 phenyl), 6.13 (t, J H1,H2a = J H1,H2b = 6.2, 1 H, H-1'), 5.30 (d, J OH3',H3' = 4.7, 1 H, OH-3 '), 4.73 (t, J OH5',H5'a = J OH5',H5'b = 5.6, 1 H, OH-5'), 4.46 (m, 1 H, H-3'), 3.84 (m , 1 H, H-4), 3.53 (m, 1 H, H-5a), 3.41 (m, 1 H, H-5'b), 3.29 (m, 2 H, thiobutyl H2), 2.78 (m, 1 H, H-2a), 2.31 (m, 1 H, H-2a), 1.70 (m, 2 H, thiobutyl H3), 1.43 (m, 2 H, phenyl H4), 13 C NMR (176 MHz): δ = 161.31 (C-1 phenyl), 154.37 (C-5 triazole), 130.88 (C-3 triazole), 130.04 (C-4 phenyl), 129.15 (C-3 and C-5 phenyl), 126.12 (C- 2 and C-6 phenyl), 88.55 (C-4'), 85.99 (C-1'), 71.46 (C-3'), 62.49 (C-5'), 38.45 (C-2), 32.91 (C -2 thiobutyl), 31.57 (C-3 thiobutyl), 21.54 (C-4 thiobutyl), 13.64 (C-5 thiobutyl). 15 N NMR (71 MHz): δ = 284.2 (N-2), 225.5 (N-1).
Пример 4.Example 4.
Антигерпесвирусное действие БДФТ изучалось в отношении двух различных штаммов вируса герпеса простого типа 1, включая штамм вируса, резистентный к действию ацикловира (ациклогуанозина).The antiherpesviral effect of BDFT was studied against two different strains of herpes simplex virus type 1, including a virus strain resistant to the action of acyclovir (acycloguanosine).
Пример 4.1. Генотипическая характеристика штаммов вируса герпеса простого типа 1, использованных для оценки антивирусной активности соединения 1.Example 4.1. Genotypic characteristics of herpes simplex virus type 1 strains used to evaluate the antiviral activity of compound 1.
Для определения антигерпесвирусной активности использовали эталонный штамм L2 вируса герпеса простого типа 1 ( ВПГ-1/ L 2 ), полученный из Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановского (ФГНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ). Штамм ВПГ-1 с лекарственной резистентностью получен путем проведения серийного пассирования вируса в присутствии ацикловира ( ВПГ-1/L 2 /R АЦ В ) с последующим клонированием.To determine antiherpesviral activity, we used the reference strain L 2 of herpes simplex virus type 1 ( HSV-1/ L 2 ), obtained from the State Collection of Viruses of the Institute of Virology named after. D.I. Ivanovsky (FGNITsEM named after N.F. Gamaleya, Ministry of Health of the Russian Federation). A drug-resistant HSV-1 strain was obtained by serial passage of the virus in the presence of acyclovir ( HSV-1/L 2 /R AC B ) followed by cloning.
Таблица 1. Аминокислотные замены в ДНК-полимеразе и тимидинкиназе штамма вируса простого герпеса типа 1 относительно эталонного штамма L2.Table 1. Amino acid substitutions in DNA polymerase and thymidine kinase of herpes simplex virus type 1 strain relative to the reference strain L2 .
Примечание: жирным шрифтом выделены аминокислотные замены, которые могут быть ассоциированы с изменением лекарственной чувствительности, локализованные в консервативных участках фермента и описанные в литературе (Andrei G, Georgala A, Topalis D, Fiten P, Aoun M, Opdenakker G, Snoeck R. Heterogeneity and evolution of thymidine kinase and DNA polymerase mutants of herpes simplex virus type 1: implications for antiviral therapy. J Infect Dis. 2013; 207(8):1295-305; Coen N., Singh U., Vuyyuru V., Van den Oord J.J., Balzarini J., Duraffour S., Snoeck R., Cheng Y.C., Chu C.K., Andrei G. Activity and mechanism of action of HDVD, a novel pyrimidine nucleoside derivative with high levels of selectivity and potency against gammaherpesviruses. J Virol. 2013; 87(7):3839-51; J Virol. 2005;79(9):5863-9; LeGoff J., Péré H., Bélec L. Diagnosis of genital herpes simplex virus infection in the clinical laboratory. Virol J. 2014;11(1):83; Burrel S., C. Deback H. Agut, Boutolleau D. Genotypic characterization of UL23 thymidine kinase and UL30 DNA polymerase of clinical isolates of herpes simplex virus: natural polymorphism and mutations associated with resistance to antivirals. Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 54(11):4833-4842.) Note : amino acid substitutions that may be associated with changes in drug sensitivity, localized in conserved regions of the enzyme and described in the literature (Andrei G, Georgala A, Topalis D, Fiten P, Aoun M, Opdenakker G, Snoeck R. Heterogeneity and evolution of thymidine kinase and DNA polymerase mutants of herpes simplex virus type 1: implications for antiviral therapy. J Infect Dis. 2013; 207(8):1295-305; Coen N., Singh U., Vuyyuru V., Van den Oord JJ, Balzarini J., Duraffour S., Snoeck R., Cheng YC, Chu CK, Andrei G. Activity and mechanism of action of HDVD, a novel pyrimidine nucleoside derivative with high levels of selectivity and potency against gammaherpesviruses. J Virol. 2013 ; 87(7):3839-51; J Virol . 2005; 79(9):5863-9; LeGoff J., Péré H., Bélec L. Diagnosis of genital herpes simplex virus infection in the clinical laboratory. Virol J. 2014;11(1):83; Burrel S., C. Deback H. Agut, Boutolleau D. Genotypic characterization of UL23 thymidine kinase and UL30 DNA polymerase of clinical isolates of herpes simplex virus: natural polymorphism and mutations associated with resistance to antivirals . Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 54(11):4833-4842.)
Пример 4.2. Изучение цитотоксического действия соединения (1) на культуру клеток Vero E6.Example 4.2. Study of the cytotoxic effect of compound (1) on Vero E6 cell culture.
При изучении токсического действия соединения (1) в культуре клеток Vero Е6 с использованием метода окрашивания клеток трипановым голубым, основанного на способности мертвых клеток окрашиваться красителем, после 72-часовой инкубации клеточной монослойной культуры в присутствии изучаемого соединения клетки подсчитывали с помощью гемоцитометра и определяли величину ЦД50 - концентрацию соединения, в присутствии которой погибает не более 50% клеток по сравнению с контролем, инкубируемым без препарата.When studying the toxic effect of compound (1) in Vero E6 cell culture using the trypan blue cell staining method, based on the ability of dead cells to be stained with the dye, after 72-hour incubation of the cell monolayer culture in the presence of the studied compound, the cells were counted using a hemocytometer and the CD value was determined 50 is the concentration of the compound in the presence of which no more than 50% of the cells die compared to the control incubated without the drug.
Пример 4.3. Биологическая активность соединения (1).Example 4.3. Biological activity of compound (1).
Изучение противовирусной активности соединения (1) проводили in vitro в культуре клеток Vero Е6. При изучении противогерпетической активности соединения 1 in vitro культуру клеток Vero Е6 инфицировали различными штаммами ВПГ-1 с множественностью 0.1 и 0.01 БОЕ/кл (где БОЕ - бляшкообразующая единица) и инкубировали под жидкой средой поддержки, состоящей из сред Игла и 199, соединенных в равных соотношениях, содержащей соединение (1) в известных концентрациях. После 48 часов инкубации, когда в контроле вируса развивался 95-100% цитопатический эффект (ЦПЭ), определяли концентрации, ингибирующие развитие вирусиндуцированного цитопатического эффекта по сравнению с контролем на 50% (ИД50) и практически полностью (ИД95).The antiviral activity of compound (1) was studied in vitro in Vero E6 cell culture. When studying the antiherpetic activity of compound 1 in vitro, a culture of Vero E6 cells was infected with various strains of HSV-1 with a multiplicity of 0.1 and 0.01 PFU/cell (where PFU is a plaque-forming unit) and incubated under a liquid support medium consisting of Eagle and 199 media, combined in equal amounts ratios containing compound (1) in known concentrations. After 48 hours of incubation, when a 95-100% cytopathic effect (CPE) developed in the control virus, concentrations were determined that inhibited the development of the virus-induced cytopathic effect compared to the control by 50% (ID 50 ) and almost completely (ID 95 ).
В качестве референс-препаратов использовали ацикловир (АЦВ, ациклогуанозин, АЦГ, 9-[(2-гидроксиэтокси)-метил]гуанин, acyclovir, зовиракс) производства Sigma Aldrich, США (брутто-формула: CAcyclovir (ACV, acycloguanosine, ACG, 9-[(2-hydroxyethoxy)-methyl]guanine, acyclovir, Zovirax) produced by Sigma Aldrich, USA (gross formula: C) was used as reference drugs 88 HH 11eleven NN 55 OO 33 , Mr:225.20, кат. номер: 59277-89-3), рибавирин (Ribavirin, виразол, 1-β-D-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид) производства Sigma Aldrich, США (брутто-формула: C, Mr:225.20, cat. number: 59277-89-3), ribavirin (Ribavirin, virazole, 1-β-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide) produced by Sigma Aldrich, USA (gross formula: C 88 HH 1212 NN 44 OO 55 , 244.20, кат. номер: 36791-04-5)., 244.20, cat. number: 36791-04-5).
Синтезированный нуклеозид исследовали на противовирусную активность в отношении вируса простого герпеса первого типа двух штаммов (ВПГ-1/L2).The synthesized nucleoside was tested for antiviral activity against herpes simplex virus type 1 of two strains (HSV-1/L 2 ).
Результаты исследования показали, что 2'-дезоксирибозид 3-бутилтио-5-фенил-(4Н)-1,2,4-триазола является более токсичным для нормальных (Vero E6) клеток, чем рибавирин (Таблица 2), но при этом IC50 дезоксирибозида ниже в >1521 раз, чем у рибавирина (Таблицы 3-4) и соотношение CD50 к ID50 (индекс селективности ИС) составляет 16, то есть БДФТ по противовирусному эффекту превосходит Рибавирин в 4 раза.The results of the study showed that 3-butylthio-5-phenyl-(4H)-1,2,4-triazole 2'-deoxyriboside is more toxic to normal ( Vero E6 ) cells than ribavirin (Table 2), but has an IC The 50 of deoxyriboside is >1521 times lower than that of ribavirin (Tables 3-4) and the ratio of CD 50 to ID 50 (IS selectivity index) is 16, that is, BDFT is 4 times superior to Ribavirin in its antiviral effect.
Таблица 2. Цитотоксичность нуклеозида на культуре клеток Vero E6.Table 2. Nucleoside cytotoxicity on Vero E6 cell culture.
1 CC50 - 50% цитотоксическая концентрация соединения, необходимая для снижения жизнеспособности клеток на 50% (мкг/мл). Количество мертвых клеток в контроле - 4.74±0.13 %. 1 CC 50 - 50% cytotoxic concentration of the compound required to reduce cell viability by 50% (µg/ml). The number of dead cells in the control is 4.74±0.13%.
Таблица 3. Противовирусная активность нуклеозида в отношении ВПГ-1/L2 (ТК+) дикого типа в культуре клеток Vero E6*.Table 3. Antiviral activity of the nucleoside against wild-type HSV-1/L 2 (TK + ) in Vero E6* cell culture.
1 IC50 и IC95 - 50% или 95% ингибирующие концентрации соединения, вызывающие 50% или 95-100% ингибирование развития, вирус-индуцированного цитопатического эффекта, соответственно, по отношению к полному цитопатическому эффекту в инфицированном, но необработанном контроле.
2 Индекс селективности (ИС) определяли, как отношение CD50 к ID50.* Note : multiplicity of infection - 0.01 PFU/cell.
1 IC 50 and IC 95 are 50% or 95% inhibitory concentrations of the compound causing 50% or 95-100% inhibition of the development of virus-induced cytopathic effect, respectively, relative to the full cytopathic effect in the infected but untreated control.
2 The selectivity index (SI) was determined as the ratio of CD 50 to ID 50 .
Таблица 4. Противовирусная активность нуклеозидов в отношении ВПГ-1/L2/RAЦВ дикого типа в культуре клеток Vero E6*Table 4. Antiviral activity of nucleosides against wild-type HSV-1/L 2 /R ACV in Vero E6 cell culture *
*Примечание: множественность инфицирования - 0.01 БОЕ/кл.* Note : multiplicity of infection - 0.01 PFU/cell.
1 IC50 и IC95 - 50% или 95% ингибирующие концентрации соединения, вызывающие 50% или 95-100% ингибирование развития, вирус-индуцированного цитопатического эффекта, соответственно, по отношению к полному цитопатическому эффекту в инфицированном, но необработанном контроле. 1 IC 50 and IC 95 are 50% or 95% inhibitory concentrations of the compound causing 50% or 95-100% inhibition of the development of virus-induced cytopathic effect, respectively, relative to the full cytopathic effect in the infected but untreated control.
2 Индекс селективности (ИС) определяли, как отношение CD50 к ID50. 2 The selectivity index (SI) was determined as the ratio of CD 50 to ID 50 .
Существенно, что соединение (1) обладает выраженным противовирусным действием в отношении вируса простого герпеса первого типа (ВПГ-1). Селективность противогерпесвирусного действия соединения (1) сравнима или превосходит активность известного лекарственного препарата рибавирин.It is significant that compound (1) has a pronounced antiviral effect against the herpes simplex virus type 1 (HSV-1). The selectivity of the antiherpesviral effect of compound (1) is comparable to or superior to the activity of the well-known drug ribavirin.
Фармацевтические композиции на основе соединения (1) могут быть перспективны для создания новых противовирусных средств.Pharmaceutical compositions based on compound (1) may be promising for the creation of new antiviral agents.
Claims (4)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2815137C1 true RU2815137C1 (en) | 2024-03-11 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6495677B1 (en) * | 2000-02-15 | 2002-12-17 | Kanda S. Ramasamy | Nucleoside compounds |
| WO2008067002A2 (en) * | 2006-09-11 | 2008-06-05 | Southern Research Institute | Azole nucleosides and use as inhibitors of rna and dna varial polymerases |
| RU2567553C1 (en) * | 2014-09-18 | 2015-11-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России) | 2-[3-(5-nitrofuran-2-yl)-1-phenyl-1h-1,2,4-triazole-5-yl] hexanoic acid and method of its manufacturing |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6495677B1 (en) * | 2000-02-15 | 2002-12-17 | Kanda S. Ramasamy | Nucleoside compounds |
| WO2008067002A2 (en) * | 2006-09-11 | 2008-06-05 | Southern Research Institute | Azole nucleosides and use as inhibitors of rna and dna varial polymerases |
| RU2567553C1 (en) * | 2014-09-18 | 2015-11-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СПХФА Минздрава России) | 2-[3-(5-nitrofuran-2-yl)-1-phenyl-1h-1,2,4-triazole-5-yl] hexanoic acid and method of its manufacturing |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| WITKOWISKI, J.T., et al. Design, Synthesis, and Broad Spectrum Antiviral Activity of 1 -P-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carboxamide and Related Nucleosides. Journal of Medicinal Chemistry, 1972, 15 (11), p.1150-1154. ZHURILO, N. et al. Isosteric ribavirin analogues: synthesis and antiviral activities. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2018, 28 (1), p.11-14. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20030061792A (en) | Nucleoside derivatives | |
| AU784374C (en) | Synthesis of 2'-deoxy-L-nucleosides | |
| JP3001972B2 (en) | 5-benzyl barbiturate derivative | |
| US6069132A (en) | Phosphazole compounds | |
| Deev et al. | 1, 2, 4-Triazoloazine derivatives as a new type of herpes simplex virus inhibitors | |
| US20050119286A1 (en) | Beta-2'-or 3'-halonucleosides | |
| Tuttle et al. | Purine 2'-deoxy-2'-fluororibosides as antiinfluenza virus agents | |
| KR20110115601A (en) | Purine nucleoside monophosphate prodrugs for treatment of cancer and viral infections | |
| CA2064024A1 (en) | Nucleoside derivatives and their use as medicaments | |
| WO2006063281A2 (en) | 2' and 3' - substituted cyclobutyl nucleoside analogs for the treatment of viral infections and abnormal cellular proliferation | |
| Huryn et al. | Synthesis and anti-HIV activity of isonucleosides | |
| Krawczyk et al. | Synthesis and antiproliferative and antiviral activity of 2'-deoxy-2'-fluoroarabinofuranosyl analogs of the nucleoside antibiotics toyocamycin and sangivamycin | |
| JPH02180894A (en) | Antiviral agent | |
| US20060241065A1 (en) | Ring-expanded nucleosides and nucleotides | |
| Martin et al. | Acyclic analogs of 2'-deoxynucleosides related to 9-[(1, 3-dihydroxy-2-propoxy) methyl] guanine as potential antiviral agents | |
| RU2815137C1 (en) | 3-butylthio-1-(beta-d-2-deoxyribofuranosyl)-5-phenyl-(4h)-1,2,4-triazole, synthesis, anti-herpes virus action | |
| CA1336430C (en) | Therapeutic nucleosides | |
| EP0724587B1 (en) | Ring-expanded nucleosides and nucleotides | |
| Burns et al. | Novel 6-alkoxypurine 2', 3'-dideoxynucleosides as inhibitors of the cytopathic effect of the human immunodeficiency virus | |
| RU2644351C1 (en) | -4-[6-(purine-6-ylamino)hexanoyl]-3,4-dihydro-3-methyl-7,8-difluor-2h-[1,4]benzoxazine and (3r)-4-[6-(purine-6-ylamino)hexanoyl]-3,4-dihydro-3-methyl-7,8-difluor-2h-[1,4]benzoxazine with antiviral activity | |
| Kulikowski et al. | Synthesis and antiviral activities of arabinofuranosyl-5-ethylpyrimidine nucleosides. Selective antiherpes activity of 1-(. beta.-D-arabinofuranosyl)-5-ethyluracil | |
| JP2001335592A (en) | 4'-c-ethynylpurine nucleoside compound | |
| Griffon et al. | Stereospecific synthesis and biological evaluations of β-L-pentofuranonucleoside derivatives of 5-fluorouracil and 5-fluorocytosine | |
| Zou et al. | Design, synthesis, and antiviral evaluation of 2-deoxy-D-ribosides of substituted benzimidazoles as potential agents for human cytomegalovirus infections | |
| Pierra et al. | Synthesis and antiviral evaluation of some β-l-2′, 3′-dideoxy-5-chloropyrimidine nucleosides and pronucleotides |