RU2188032C1

RU2188032C1 - Preparation stimulating the differentiation of t-lymphocytes

Info

Publication number: RU2188032C1
Application number: RU2001103670A
Authority: RU
Inventors: В.Л. Цепелев; С.Л. Цепелев; Н.Н. Цыбиков; С.И. Курупанов
Original assignee: Цепелев Виктор Львович; Цепелев Сергей Львович
Priority date: 2001-02-07
Filing date: 2001-02-07
Publication date: 2002-08-27

Abstract

FIELD: medicine, medicinal industry. SUBSTANCE: method could be used for treating immunodeficient states accompanied with the broken process of T-lymphocytic differentiation. The method deals with applying the peptide of Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu formula as differentiation-stimulating preparation. The peptide suggested is of high specific activity. EFFECT: decreased number of side effects. 3 ex, 3 tbl

Description

Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности и заключается в применении пептида формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в качестве средства, стимулирующего дифференцировку Т-лимфоцитов. The invention relates to medicine and the medical industry and consists in the use of a peptide of the formula Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu as a means of stimulating the differentiation of T-lymphocytes.

Дифференцировка Т-лимфоцитов представляет собой процесс образования функционально полноценных Т-лимфоцитов из клеток-предшественников, который протекает преимущественно на территории центрального органа клеточного иммунитета - тимуса. Дифференцировка заканчивается образованием зрелого Т-лимфоцита, имеющего определенные мембранные маркеры (антигены CD3, CD4, CD8), отсутствующие на ранних стадиях развития [1]. Одним из механизмов формирования иммунодефицита по Т-системе иммунитета является угнетение дифференцировки Т-лимфоцитов. Применение в таких случаях стимуляторов дифференцировки может привести к нормализации иммунного статуса организма. Differentiation of T-lymphocytes is the process of the formation of functionally complete T-lymphocytes from progenitor cells, which occurs mainly on the territory of the central organ of cellular immunity - the thymus. Differentiation ends with the formation of a mature T-lymphocyte having certain membrane markers (CD3, CD4, CD8 antigens) that are absent in the early stages of development [1]. One of the mechanisms of formation of immunodeficiency by the T-system of immunity is the inhibition of the differentiation of T-lymphocytes. The use of differentiation stimulants in such cases can lead to a normalization of the body's immune status.

Известны вещества пептидной природы, стимулирующие дифференцировку Т-лимфоцитов. К ним относятся препараты, полученные из тимуса животных, такие как тимозин [2], Т-активин [3], тималин [4]. Эти препараты состоят из комплекса веществ пептидной природы, которые способны регулировать различные этапы пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов. Использование их в качестве лекарственных средств затруднено в связи со сложностью способов получения, малым выходом активных веществ, значительной вариабельностью их физико-химических свойств, а также из-за наличия нежелательных побочных эффектов ввиду присутствия в природных препаратах тимуса балластных высокомолекулярных компонентов. Предпочтительнее использовать низкомолекулярные синтетические пептиды. Они эффективны в чрезвычайно малых дозах и не оказывают вредного воздействия на организм. Peptide substances are known that stimulate the differentiation of T-lymphocytes. These include drugs derived from animal thymus, such as thymosin [2], T-activin [3], thymalin [4]. These drugs consist of a complex of substances of peptide nature, which are able to regulate the various stages of proliferation and differentiation of T-lymphocytes. Their use as medicines is difficult due to the complexity of the preparation methods, low yield of active substances, significant variability of their physicochemical properties, and also due to the presence of undesirable side effects due to the presence of high-molecular weight ballast components in natural preparations of the thymus. It is preferable to use low molecular weight synthetic peptides. They are effective in extremely small doses and do not have a harmful effect on the body.

Известны синтетические пептиды, обладающие способностью стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов. К ним относятся пептид тимопентин Arg-Lys-Asp-Val-Thr (Goldstein G. , Audhya Т.К. Thymopoietin to Thymopentin: Experimental Studies. Survey of immunologic Research. (1985), 4: suppl. 1, pp. 1-10); аналоги тимопентина (патент ЕР 1450798, С 07 К 7/64, 1985; патент США 5013723, А 61 К 37/02, 1991); пептид Tyr-Gly (патент США 5100663, А 61 К 37/02, 1992); аналог гормона тимуса, имеющий формулу Leu-Glu-Asp-Gly-Pro-Lys-Phe-Leu (патент WO 95/01182, А 61 К 37/00, 37/02, С 07 R 5/00, 7/00, 15/00, 17/00, 1995); трипептид Arg-Lys-Glu, обладающий иммуностимулирующей активностью и действующий в основном на Т-клеточное звено иммунитета (патент США 4874844, С 07 К 5/08, 1989); аналог сывороточного тимического фактора общей формулы А-Gly-Gly-Ser-Asn-B-C-NH-R, где А - Glu, Gln, Ala-Lys-Ser или Glu-Ala-Lys-Ser; В и С - Gly, Phe, Leu, Ala (патент ЕР 0201646, С 07 К 07/06, 1986). Synthetic peptides with the ability to stimulate the differentiation of T lymphocytes are known. These include the thymopentin peptide Arg-Lys-Asp-Val-Thr (Goldstein G., Audhya T.K. Thymopoietin to Thymopentin: Experimental Studies. Survey of immunologic Research. (1985), 4: suppl. 1, pp. 1- 10); thymopentin analogues (patent EP 1450798, C 07 K 7/64, 1985; US patent 5013723, A 61 K 37/02, 1991); Tyr-Gly peptide (US Pat. No. 5,100,663, A 61 K 37/02, 1992); thymus hormone analogue having the formula Leu-Glu-Asp-Gly-Pro-Lys-Phe-Leu (patent WO 95/01182, A 61 K 37/00, 37/02, C 07 R 5/00, 7/00, 15/00, 17/00, 1995); Arg-Lys-Glu tripeptide having immunostimulatory activity and acting mainly on the T-cell immunity (US patent 4874844, C 07 K 5/08, 1989); an analogue of a serum thymic factor of the general formula A-Gly-Gly-Ser-Asn-B-C-NH-R, where A is Glu, Gln, Ala-Lys-Ser or Glu-Ala-Lys-Ser; B and C - Gly, Phe, Leu, Ala (patent EP 0201646, C 07 K 07/06, 1986).

Известно средство тимоген, обладающее способностью стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов [5,6]. Тимоген синтезирован на основе выделенной из тималина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии иммуноактивной фракции, представляющей собой дипептид Glu-Trp. Данное вещество по технической сущности и достигаемому эффекту является наиболее близким к предлагаемому решению и является его прототипом. Согласно прототипу синтетический пептид Glu-Trp дозозависимо и избирательно стимулирует дифференцировку предшественников Т-клеток в зрелые Т-клетки, но не влияет на В-клеточную дифференцировку. Однако данный пептид обладает низкой биологической активностью, что требует применения больших доз препарата и влечет появление нежелательных побочных эффектов. Known tool timogen, with the ability to stimulate the differentiation of T-lymphocytes [5,6]. Thymogen is synthesized based on the immunoactive fraction, which is a Glu-Trp dipeptide, isolated from thymalin by high performance liquid chromatography. This substance in terms of technical nature and the achieved effect is the closest to the proposed solution and is its prototype. According to the prototype, the synthetic peptide Glu-Trp dose-dependently and selectively stimulates the differentiation of T-cell precursors into mature T-cells, but does not affect B-cell differentiation. However, this peptide has low biological activity, which requires the use of large doses of the drug and entails the appearance of undesirable side effects.

Настоящее изобретение направлено на расширение арсенала и повышение биологической активности средств, стимулирующих дифференцировку Т-лимфоцитов. The present invention is directed to expanding the arsenal and increasing the biological activity of agents that stimulate the differentiation of T-lymphocytes.

Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве средства, обладающего способностью стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов, предлагается использовать синтетический пептид структурной формулы Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. Пептид синтезирован стандартной методикой твердофазного синтеза путем наращивания пептидной цепи с N-конца [7]. Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu - кислый, гидрофильный пептид с ММ 761 Д. The solution to this problem is achieved by the fact that as a tool with the ability to stimulate the differentiation of T-lymphocytes, it is proposed to use a synthetic peptide of the structural formula Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. The peptide was synthesized by the standard method of solid-state synthesis by building up the peptide chain from the N-terminus [7]. Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu is an acidic, hydrophilic peptide with an MM of 761 D.

При экспериментальном изучении специфической активности заявляемого средства, проведенном в сравнении с тимогеном, выявлена его способность стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов в значительно меньшей концентрации. Это подтверждается следующими примерами. An experimental study of the specific activity of the claimed drug, carried out in comparison with thymogen, revealed its ability to stimulate the differentiation of T-lymphocytes in a much lower concentration. This is confirmed by the following examples.

Пример 1. Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на экспрессию Е-рецепторов "трипсинизированных" тимоцитов. Example 1. The effect of the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu on the expression of E-receptors "trypsinized" thymocytes.

С целью получения суспензии лимфоидных клеток тимус интактных морских свинок-самцов гомогенизировали в среде 199. Затем полученную суспензию тимоцитов обрабатывали протеолитическим ферментом трипсином ("Sigma"), разрушающим большую часть Е-рецепторов на поверхности клеток к эритроцитам кролика, в результате чего снижается процентное содержание клеток, выявляемых в реакции розеткообразования (Т-лимфоцитов). В суспензии интактных тимоцитов и тимоцитов, обработанных трипсином, определяли процентное содержание "активных" Т-лимфоцитов (Еа-РОК) методом розеткообразования с эритроцитами кролика [8, 9]. Пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu и тимоген вносили в культуры "трипсинизированных" тимоцитов в диапазоне концентраций от 0,0004 до 0,05 мкг/мл. In order to obtain a suspension of lymphoid cells, the thymus of intact male guinea pigs was homogenized in medium 199. Then, the resulting suspension of thymocytes was treated with the trypsin proteolytic enzyme (Sigma), which destroys most of the E-receptors on the surface of the rabbit erythrocytes, resulting in a decrease in the percentage cells detected in the reaction of rosette formation (T-lymphocytes). In the suspension of intact thymocytes and thymocytes treated with trypsin, the percentage of “active” T-lymphocytes (Ea-ROCK) was determined by rosette formation with rabbit erythrocytes [8, 9]. The Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu peptide and thymogen were introduced into trypsinized thymocyte cultures in a concentration range from 0.0004 to 0.05 μg / ml.

Установлено, что обработка трипсином приводит к снижению более чем в 2 раза количества тимоцитов, имеющих на поверхности Е-рецепторы. Добавление пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu в концентрации 0,05 - 0,002 мкг/мл и тимогена в концентрации 0,05 - 0,01 мкг/мл приводило к восстановлению количества Е-рецепторов лимфоидных клеток тимуса (таблица 1). It was found that trypsin treatment leads to a more than 2-fold decrease in the number of thymocytes with E-receptors on the surface. The addition of the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu at a concentration of 0.05-0.002 μg / ml and thymogen at a concentration of 0.05-0.01 μg / ml led to the restoration of the number of E-receptors of lymphoid cells of the thymus (table 1 )

Таким образом, минимальная концентрация, в которой заявляемое средство способствует усилению экспрессии Е-рецепторов тимоцитов в 5 раз меньше, чем у тимогена, что указывает на более высокую специфическую активность пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu. Thus, the minimum concentration in which the claimed agent enhances the expression of thymocyte E-receptors is 5 times less than that of thymogen, which indicates a higher specific activity of the Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu peptide.

Пример 2. Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на экспрессию дифференцировочных антигенов Т-лимфоцитов больных с ожогами in vitro. Example 2. The effect of the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu on the expression of differentiation antigens of T-lymphocytes of patients with burns in vitro.

Специфическую активность заявляемого средства оценивали по способности последнего стимулировать экспрессию дифференцировочных антигенов, являющихся маркерами зрелого Т-лимфоцита. Уровень экспрессии дифференцировочных антигенов оценивали методом непрямой мембранной иммунофлюоресценции с моноклональными антителами LT3, LT4, LT8 к дифференцировочным антигенам CD3, CD4, CD8 ("Сорбент", Москва) [10], являющихся маркерами зрелого Т-лимфоцита и экспрессирующихся на завершающих этапах дифференцировки Т-клеток. Исследование проводили на лимфоцитах больных с ожогами, поскольку известно, что при ожоговой болезни нарушается дифференцировка Т-лимфоцитов и в периферической крови снижается количество зрелых форм Т-клеток [11,12]. Лимфоциты больных с ожогами IIIб-IV степени 15-30% поверхности тела выделяли на градиенте плотности фиколл-верографин. Полученную суспензию клеток инкубировали с пептидом Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu и тимогеном в концентрации от 0,0004 до 0,05 мкг/мл в течение 2 ч при 37^oС в полной питательной среде RPMI-1640 ("Flow") с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки ("Flow"), 2мМ L-глутамина ("Flow"), 40 мкг/мл гентамицина ("Фармахим") и 5мМ HEPES-буфера. В качестве контроля использовали физиологический раствор в соответствующем объеме. Полученные данные представлены в таблице 2.The specific activity of the claimed drug was evaluated by the ability of the latter to stimulate the expression of differentiation antigens, which are markers of mature T-lymphocyte. The level of expression of differentiating antigens was assessed by the method of indirect membrane immunofluorescence with monoclonal antibodies LT3, LT4, LT8 to differentiating antigens CD3, CD4, CD8 (Sorbent, Moscow) [10], which are markers of mature T-lymphocyte and expressed at the final stages of T-differentiation cells. The study was carried out on the lymphocytes of patients with burns, since it is known that with a burn disease, the differentiation of T-lymphocytes is disturbed and the number of mature forms of T-cells in peripheral blood is reduced [11,12]. Lymphocytes of patients with burns of IIIb-IV degree of 15-30% of the body surface were isolated on a density gradient of ficoll-verographin. The resulting cell suspension was incubated with the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu and thymogen in a concentration of from 0.0004 to 0.05 μg / ml for 2 hours at 37 ^° C in a complete nutrient medium RPMI-1640 ("Flow ") with the addition of 5% fetal calf serum (" Flow "), 2mM L-glutamine (" Flow "), 40 μg / ml gentamicin (" Farmahim ") and 5mM HEPES buffer. As a control, physiological saline was used in an appropriate volume. The data obtained are presented in table 2.

Установлено, что у больных с ожогами резко снижено количество всех изучаемых субпопуляций лимфоцитов, исключая СОВ⁺клетки. Тимоген восстанавливал содержание СD3⁺ и CD4⁺-лимфoцитoв в концентрациях 0,05 - 0,01 мкг/мл, а заявляемое средство оказалось активно в дозах 0,05 - 0,002 мкг/мл. Оба средства достоверного изменения количества CD8⁺-лимфоцитов не вызывали (табл. 2).It was found that in patients with burns, the number of all studied lymphocyte subpopulations was sharply reduced, excluding COB ⁺ cells. Timogen restored the content of CD3 ⁺ and CD4 ⁺ lymphocytes in concentrations of 0.05-0.01 μg / ml, and the claimed drug was active in doses of 0.05-0.002 μg / ml. Both means did not significantly change the number of CD8 ⁺ lymphocytes (Table 2).

Таким образом, пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu увеличивает экспрессию дифференцировочных антигенов в дозах в 5 раз меньших, чем тимоген, что является отражением его высокой специфической активности. Thus, the Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu peptide increases the expression of differentiation antigens in doses 5 times lower than thymogen, which is a reflection of its high specific activity.

Пример 3. Влияние пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu на экспрессию дифференцировочных антигенов Т-лимфоцитов у тимэктомированных мышей in vivo. Биологическую активность заявляемого средства изучали на модели тимэктомии [13] . Известно, что в тимусе происходит дифференцировка Т-лимфоцитов и его удаление сопровождается нарушением этого процесса. В трехмесячном возрасте производили оперативное удаление тимуса у мышей. Контрольная группа животных подверглась ложной операции с воспроизведением всех этапов оперативного вмешательства за исключением удаления тимуса. Через 1 месяц после оперативного вмешательства тимэктомированным животным вводили пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu и тимоген в дозах от 0,0008 до 0,1 мкг/кг веса тела в течение 7 дней. Контролем служили тимэктомированные животные, получавшие физиологический раствор в аналогичном объеме. Количество зрелых Т-лимфоцитов, имеющих кластеры дифференцировки CD4 (Т-хелперы) и CD8 (цитотоксические Т-лимфоциты), определяли в реакции прямой мембранной иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител, меченых FITC, F7400 и F7525 к молекулам CD4 и CD8 мыши соотвественно ("Sigma", Швеция). Известно, что CD4 и CD8 являются дифференцировочным маркером Т-клеток и определяются на заключительных этапах дифференцировки соответственно Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов и отсутствуют на стадии пре-Т-клеток. Полученные результаты представлены в таблице 3. Example 3. The effect of the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu on the expression of differentiation antigens of T-lymphocytes in thymectomized mice in vivo. The biological activity of the claimed drug was studied on the model of thimectomy [13]. It is known that differentiation of T-lymphocytes occurs in the thymus and its removal is accompanied by a violation of this process. At three months of age, surgical removal of the thymus was performed in mice. The control group of animals underwent a false operation with the reproduction of all stages of surgical intervention with the exception of the removal of the thymus. 1 month after surgery, thymectomized animals were injected with the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu and thymogen in doses of 0.0008 to 0.1 μg / kg body weight for 7 days. The control was thimectomized animals that received physiological saline in a similar volume. The number of mature T-lymphocytes having differentiation clusters CD4 (T-helpers) and CD8 (cytotoxic T-lymphocytes) was determined in a direct membrane immunofluorescence reaction using monoclonal antibodies labeled with FITC, F7400 and F7525 to mouse CD4 and CD8 molecules, respectively (" Sigma ", Sweden). It is known that CD4 and CD8 are a differentiating marker of T-cells and are determined at the final stages of differentiation of T-helper cells and cytotoxic T-lymphocytes, respectively, and are absent at the pre-T-cell stage. The results are presented in table 3.

Установлено, что у тимэктомированных мышей резко снижается количество Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности дифференцировочные антигены CD4 и CD8. Введение пептида Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu во всем диапазоне доз тимэктомированным животным приводит к повышению количества зрелых Т-лимфоцитов, имеющих кластеры дифференцировки на своей поверхности, причем максимальная активность предлагаемого средства зарегистрирована в концентрации 0,02 мкг/кг веса тела. Аналогичный эффект достигается и введением тимогена в дозах от 0,004 до 0,1 мкг/кг веса с максимальной активностью в дозировке 0,1 мкг/кг веса тела. Таким образом, пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu in vivo стимулирует дифференцировку Т-лимфоцитов в концентрациях в 5 раз меньших, чем известный пептид тимоген. It was found that in thimectomized mice the number of T-lymphocytes, which carry differentiation antigens CD4 and CD8 on their surface, sharply decreases. The introduction of the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu in the entire dose range of thymectomized animals leads to an increase in the number of mature T-lymphocytes with differentiation clusters on their surface, and the maximum activity of the proposed drug is registered at a concentration of 0.02 μg / kg weight body. A similar effect is achieved by the introduction of thymogen in doses from 0.004 to 0.1 μg / kg of body weight with maximum activity at a dosage of 0.1 μg / kg of body weight. Thus, the Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu peptide in vivo stimulates the differentiation of T-lymphocytes in concentrations 5 times lower than the known thymogen peptide.

Таким образом, при экспериментальном изучении специфической активности заявляемого средства установлено, что пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu обладает свойством стимулировать дифференцировку Т-лимфоцитов. По сравнению с тимогеном заявляемый пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu способен стимулировать дифференцировку Т-клеток в 5 раз меньших дозах. Уменьшение дозировки заявляемого средства для достижения аналогичного эффекта дает возможность уменьшить риск побочного влияния средства при введении его в организм. Thus, in an experimental study of the specific activity of the claimed drug it was found that the peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu has the property of stimulating the differentiation of T-lymphocytes. Compared with thymogen, the claimed peptide Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu is able to stimulate the differentiation of T cells in 5 times lower doses. Reducing the dosage of the claimed drug to achieve a similar effect makes it possible to reduce the risk of side effects of the drug when it is introduced into the body.

Предлагаемое средство может найти применение для профилактики и лечения широкого спектра иммунодефицитных состояний, сопровождающихся нарушением процесса дифференцировки Т-лимфоцитов. The proposed tool can be used for the prevention and treatment of a wide range of immunodeficiency conditions, accompanied by a violation of the process of differentiation of T-lymphocytes.

Источники информации
1. Кетлинский С. А. , Калинина Н.М. Иммунология для врача. - Спб. ТОО, изд-во "Гиппократ". 1998. - 156 с.Sources of information
1. Ketlinsky S. A., Kalinina N.M. Immunology for the doctor. - SPb. LLP, publishing house "Hippocrates". 1998 .-- 156 p.

2. Goldstein A.L., Guba A., Zatz M.M. et al. Purification and biological activity of thymosin, a hormone of the thymus gland // Proc. Nat. Acad. USA 1972. Vol. 69. N 7. P. 1800-1803. 2. Goldstein A.L., Guba A., Zatz M.M. et al. Purification and biological activity of thymosin, a hormone of the thymus gland // Proc. Nat. Acad USA 1972. Vol. 69. N 7. P. 1800-1803.

3. Арион В. Я. Т-активин и его иммунобиологические свойства: Автореф. дис. док. биол. наук. - М. - 1990. - 52 с. 3. Arion V. Ya. T-activin and its immunobiological properties: Author. dis. doc biol. sciences. - M. - 1990. - 52 p.

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1988 - т.2, гл. 9, с. 168-175. 4. Mashkovsky M.D. Medicines - M.: Medicine, 1988 - v. 2, Ch. 9, p. 168-175.

5. Яковлев Г.М., Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. и др. Сравнительное изучение биологической активности тималина и синтетического пептида тимуса // Тез. докл. науч. конф. "Биохимия медицине". - Л., 1988, с. 217 - 218. 5. Yakovlev G.M., Havinson V.Kh., Morozov V.G. et al. Comparative study of the biological activity of thymalin and a synthetic thymus peptide // Proc. doc. scientific conf. "Biochemistry of medicine." - L., 1988, p. 217 - 218.

6. Хавинсон В.Х., Синакевич Н.В., Серый С.В. Тимоген.- СПб, 1991. - 48 с. 6. Havinson V.Kh., Sinakevich N.V., Sery S.V. Timogen .-- St. Petersburg, 1991 .-- 48 p.

7. Steward J. M. , Young J.D. Solid phase peptide synthesis, San Francisco, 1969. 7. Steward J. M., Young J.D. Solid phase peptide synthesis, San Francisco, 1969.

8. Nekam К., Fudenberg H.H., Strelkanskas A.J. Identification of "activ" T-lymphocytes among effector cells in guinea pigs // Immunopharmacol. - 1982. - Vol.5. - 1.- P. 85-94. 8. Nekam K., Fudenberg H.H., Strelkanskas A.J. Identification of "activ" T-lymphocytes among effector cells in guinea pigs // Immunopharmacol. - 1982. - Vol. 5. - 1.- P. 85-94.

9. Stadecker M. J., Bishop G., Wortis H.H. Rosette formation by guinea pig thymocytes and thymus derived lymphocytes with rabbit red blood cells // J. Immunol.- 1973. Vol. 111. 6. - P. 1834-1837. 9. Stadecker M. J., Bishop G., Wortis H.H. Rosette formation by guinea pig thymocytes and thymus derived lymphocytes with rabbit red blood cells // J. Immunol .- 1973. Vol. 111. 6. - P. 1834-1837.

10. Лимфоциты: Методы: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Клауса. - М.: Мир, 1990, 395 с. 10. Lymphocytes: Methods: Trans. from English / Ed. J. Klaus. - M .: Mir, 1990, 395 p.

11. Колкер И.И., Вишневская С.М., Панова Ю.М. и др. Содержание Т- и В-лимфоцитов у больных с термическими ожогами // Клиническая медицина. - 1985. - 7. - С. 87-93. 11. Kolker I.I., Vishnevskaya S.M., Panova Yu.M. and others. The content of T- and B-lymphocytes in patients with thermal burns // Clinical medicine. - 1985. - 7. - S. 87-93.

12. Белоцкий С. М. , Борисова Т.Г., Снастина Т.И. и др. Характеристика фагоцитов, Т- и В-лимфоцитов у обожженных // Иммунология. - 1983. - 6. - С. 51-54. 12. Belotsky S. M., Borisova T.G., Snastina T.I. et al. Characterization of phagocytes, T- and B-lymphocytes in burned ones // Immunology. - 1983 .-- 6 .-- S. 51-54.

13. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. Пер. с нем. А.П. Тарасова. - М.: Медицина, 1987, 472 с. 13. Immunological methods / Ed. G. Frimel. Per. with him. A.P. Tarasova. - M.: Medicine, 1987, 472 p.

Claims

The peptide of the structural formula Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu, stimulating the differentiation of T-lymphocytes.