RU2179579C2 - Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers - Google Patents
Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers Download PDFInfo
- Publication number
- RU2179579C2 RU2179579C2 RU2000104372/13A RU2000104372A RU2179579C2 RU 2179579 C2 RU2179579 C2 RU 2179579C2 RU 2000104372/13 A RU2000104372/13 A RU 2000104372/13A RU 2000104372 A RU2000104372 A RU 2000104372A RU 2179579 C2 RU2179579 C2 RU 2179579C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biopolymers
- hydrolysis
- solution
- cellular
- biologically active
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии, биохимии, биотехнологии и фармакологии, а именно к способам проведения ферментативного гидролиза биополимеров клетки с получением продуктов белковой, нуклеотидной, липидной и углеводной природы и может быть использовано в пищевой, медицинской, химической и микробиологической промышленности и других отраслях. The invention relates to microbiology, biochemistry, biotechnology and pharmacology, and in particular to methods for the enzymatic hydrolysis of cell biopolymers to produce products of protein, nucleotide, lipid and carbohydrate nature and can be used in food, medical, chemical and microbiological industries and other industries.
Одним из основных способов получения низкомолекулярных продуктов белковой, нуклеотидной, липидной и углеводной природы является ферментативный гидролиз клеточных биополимеров соответствующими гидролитическими ферментами [1, 2, 3]. One of the main ways to obtain low molecular weight products of protein, nucleotide, lipid and carbohydrate nature is the enzymatic hydrolysis of cell biopolymers with the corresponding hydrolytic enzymes [1, 2, 3].
Основным недостатком ферментативного гидролиза является его длительность и необходимость поддержания асептических условий. The main disadvantage of enzymatic hydrolysis is its duration and the need to maintain aseptic conditions.
Скорость ферментативного катализа и выход конечного продукта в гидролитических реакциях может зависеть как от увеличения активности ферментов, так и от изменения структурной организации субстрата, что определяющим образом влияет на фермент-субстратные взаимодействия. Известны способы увеличения активности ферментов путем введения в реакционную среду катионов поливалентных металлов. При этом катион металла может изменять конформацию как фермента, так и субстрата. Например, активность сериновой протеазы увеличивается при добавлении ионов Cа2+, поскольку ион кальция изменяет пространственную организацию данного фермента. При введении ионов Mg2+ в инкубационную смесь РНК и РНК-полимеразы скорость ферментативной реакции увеличивается, поскольку магний изменяет конформацию субстрата (РНК), что увеличивает ее сродство к ферменту.The rate of enzymatic catalysis and the yield of the final product in hydrolytic reactions may depend both on an increase in the activity of enzymes and on a change in the structural organization of the substrate, which affects the enzyme-substrate interactions in a decisive way. Known methods for increasing the activity of enzymes by introducing into the reaction medium cations of polyvalent metals. In this case, the metal cation can change the conformation of both the enzyme and the substrate. For example, the activity of a serine protease increases with the addition of Ca 2+ ions , since calcium ion changes the spatial organization of this enzyme. When Mg 2+ ions are introduced into the incubation mixture of RNA and RNA polymerase, the rate of the enzymatic reaction increases, since magnesium changes the conformation of the substrate (RNA), which increases its affinity for the enzyme.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к предлагаемому методу является способ обработки клеток Kluyveromyces fragilis в присутствии активирующей добавки, в качестве которой используется 0.1-8.2% раствор цетилтриметиламмонийбромида в фосфатном буфере при 4oС в течение 30 мин. Внесение в реакционную среду вышеуказанной активирующей добавки приводит к увеличению активности внутриклеточного фермента β-галактозидазы на 20-30%, что вызывает соответствующее увеличение выхода, продуктов гидролиза [4].The closest in technical essence and the achieved effect to the proposed method is a method of treating Kluyveromyces fragilis cells in the presence of an activating additive, which is used as a 0.1-8.2% solution of cetyltrimethylammonium bromide in phosphate buffer at 4 o C for 30 min. The introduction of the above activating additives into the reaction medium leads to an increase in the activity of the intracellular β-galactosidase enzyme by 20-30%, which causes a corresponding increase in the yield of hydrolysis products [4].
Недостатком данного способа является то, что цетилтриметиламмонийбромид способен увеличивать выход продуктов гидролиза только при воздействии только на β-галактозидазу и не оказывает влияния на другие группы гидролитических ферментов, причем увеличение выхода продуктов происходит не более, чем в 1.3 раза. The disadvantage of this method is that cetyltrimethylammonium bromide is able to increase the yield of hydrolysis products only when it acts only on β-galactosidase and does not affect other groups of hydrolytic enzymes, and the yield of products increases by no more than 1.3 times.
Задачей настоящего изобретения является увеличение выхода низкомолекулярных фракций биологически активных веществ при ферментативном гидролизе биополимеров клетки и (или) сокращение времени процесса. The objective of the present invention is to increase the yield of low molecular weight fractions of biologically active substances by enzymatic hydrolysis of cell biopolymers and (or) reducing the process time.
Поставленная задача решается тем, что в реакционную среду, содержащую субстрат и фермент, добавляют водорастворимую форму химического аналога фактора d-4-метилтирозол, взятого в количестве 5-1.5 г/л. Это приводит к увеличению выхода продуктов гидролиза биоподимеров в 1.5-2.0 раза и (или) сокращению времени процесса в 1.5 раза. The problem is solved in that a water-soluble form of the chemical analogue of factor d-4-methyl tyrosol, taken in an amount of 5-1.5 g / l, is added to the reaction medium containing the substrate and the enzyme. This leads to an increase in the yield of biopolymer hydrolysis products by 1.5–2.0 times and / or a 1.5-fold reduction in the process time.
Применение способа проиллюстрировано ниже на следующих примерах. The application of the method is illustrated below in the following examples.
Пример 1. Для приготовления опытной суспензии дрожжей Kluyveromyces fragilis в 100 мл дистиллированной воды суспендируют 14 г сухой биомассы, охлаждают до 4oС, добавляют цетилтриметиламмонийбромид в концентрации 2 г/л.Example 1. To prepare an experimental suspension of Kluyveromyces fragilis yeast in 100 ml of distilled water, 14 g of dry biomass are suspended, cooled to 4 o C, cetyltrimethylammonium bromide is added at a concentration of 2 g / l.
Контрольную суспензию готовят так же, но не добавляют цетилтриметиламмонийбромид. A control suspension is prepared in the same way, but cetyltrimethylammonium bromide is not added.
Контрольную и опытную суспензии выдерживают при 4oС в течение 2 ч. Реакцию останавливают путем добавления в реакционную смесь 2 н. раствора гидроксида натрия. Далее разделяют жидкую и твердую фракции центрифугированием при 6000 об./мин в течение 10 мин. В жидкой фракции определяют концентрацию углеводов по реакции с фенолом [5]. Степень гидролиза оценивают как отношение концентрации углеводов в жидкой фазе к общему содержанию углеводов в исходном материале.The control and experimental suspensions were kept at 4 ° C. for 2 hours. The reaction was stopped by adding 2N to the reaction mixture. sodium hydroxide solution. The liquid and solid fractions are then separated by centrifugation at 6000 rpm for 10 minutes. In the liquid fraction, the concentration of carbohydrates is determined by reaction with phenol [5]. The degree of hydrolysis is estimated as the ratio of the concentration of carbohydrates in the liquid phase to the total content of carbohydrates in the starting material.
Степень гидролиза в контрольной суспензии составила 20%, а в опытной - 26%, т.е. выход продуктов гидролиза увеличился в 1.3 раза. The degree of hydrolysis in the control suspension was 20%, and in the experimental - 26%, i.e. the yield of hydrolysis products increased by 1.3 times.
Пример 2. Для приготовления опытного раствора в 100 мл дистиллированной воды растворяют 10 г яичного альбумина. Раствор нагревают до 60oС, устанавливают значение рН среды в интервале 7.2 -7.6. В прогретый раствор вносят 0.20 г протосубтилина Г3х и 0.15 г 4-метилтирозола.Example 2. To prepare a test solution in 100 ml of distilled water, 10 g of egg albumin is dissolved. The solution is heated to 60 o C, set the pH of the medium in the range of 7.2 -7.6. 0.20 g of protosubtilin G3x and 0.15 g of 4-methyl tyrosol are added to the heated solution.
Контрольный раствор готовят таким же образом, но не добавляют замещенный 4-метилтирозол. A control solution is prepared in the same manner, but substituted 4-methyl tyrosol is not added.
Контрольный и опытный растворы выдерживают при 60oС в течение 3 ч, после чего реакцию останавливают добавлением 50%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В полученных гидролизатах оценивают содержание высоко- и низкомолекулярных белковых фракций по модифицированному методу Лоури [5]. Степень гидролиза белка оценивают как отношение концентрации низкомолекулярных белковых фракций к общему содержанию белка в растворе.The control and experimental solutions were kept at 60 ° C for 3 hours, after which the reaction was stopped by the addition of 50% trichloroacetic acid (TCA). In the obtained hydrolysates, the content of high and low molecular weight protein fractions is estimated by the modified Lowry method [5]. The degree of protein hydrolysis is estimated as the ratio of the concentration of low molecular weight protein fractions to the total protein content in the solution.
Степень гидролиаз белка в контрольном растворе составила 50%, в опытном - 80%, т.е. в присутствии химического аналога фактора d 4-метилтирозола выход продуктов гидролиза увеличивается в 1.6 раза. The degree of protein hydrolyases in the control solution was 50%, in the experimental - 80%, i.e. in the presence of a chemical analogue of factor d 4-methyl tyrosol, the yield of hydrolysis products increases 1.6 times.
Пример 3. Для приготовления опытного раствора в 100 мл дистиллированной воды растворяют 10 г яичного альбумина. Раствор нагревают до 55oС, устанавливают значение рН среды в интервале 6.3 -6.6. В прогретый раствор вносят 3 г препарата поджелудочной железы крупного рогатого скота в виде 20%-ной суспензии в 1.5%-ном водном растворе этилового спирта и 0.15 г 4-метилтирозола.Example 3. To prepare a test solution in 100 ml of distilled water, 10 g of egg albumin is dissolved. The solution is heated to 55 o C, set the pH of the medium in the range of 6.3 -6.6. 3 g of the preparation of the cattle pancreas are added to the heated solution in the form of a 20% suspension in a 1.5% aqueous solution of ethyl alcohol and 0.15 g of 4-methyl tyrosol.
Контрольный раствор готовят так же, как и опытный, за исключением добавления 4-метилтирозола. The control solution is prepared in the same way as the experimental one, with the exception of the addition of 4-methyl tyrosol.
Контрольный и опытный растворы выдерживают при 55oС в течение 3 ч, после чего реакцию останавливают добавлением 50%-ной ТХУ, В полученных гидролизатах оценивают содержание аминного азота методом формольного титрования [5]. Степень гидролиза определяют как отношение концентрации аминного азота к содержанию общего азота в исходном растворе.The control and experimental solutions were kept at 55 ° C for 3 hours, after which the reaction was stopped by the addition of 50% TCA. The content of amine nitrogen was evaluated in the obtained hydrolysates by the method of formal titration [5]. The degree of hydrolysis is defined as the ratio of the concentration of amine nitrogen to the content of total nitrogen in the initial solution.
Степень гидролиза в исходном растворе составила 25%, в опытном растворе - 40%, т.е. выход продуктов гидролиза увеличился в 1.6 раза. The degree of hydrolysis in the initial solution was 25%, in the experimental solution - 40%, i.e. the yield of hydrolysis products increased 1.6 times.
Пример 4. Для приготовления опытного раствора панкреатического гидролизата FHK, как субитанции, используемой в приготовлении фармацевтического препарата для лечения тапеторетинальных абитрофий [5], в 100 мл дистиллированной воды растворяют 15 г натриевой соли дрожжевой РНК. Раствор нагревают до 65oС и устанавливают значение рН среды в интервале 5.0-5.5. В прогретый раствор вносят 60 мг лиофильно высушенной панкреатической РНК-азы с активностью 10000 ед./г и 0.15 г 4-метилтирозола.Example 4. For the preparation of an experimental solution of pancreatic hydrolyzate FHK, as a substitutum used in the preparation of a pharmaceutical preparation for the treatment of tapetoretinal abitrophies [5], 15 g of yeast RNA sodium salt are dissolved in 100 ml of distilled water. The solution is heated to 65 o C and set the pH of the medium in the range of 5.0-5.5. 60 mg of freeze-dried pancreatic RNAase with an activity of 10,000 units / g and 0.15 g of 4-methyl tyrosol are added to the heated solution.
Контрольный раствор готовят аналогичным образом, но без добавления 4-метилтирозола. A control solution is prepared in a similar manner, but without the addition of 4-methyl tyrosol.
Контрольный раствор выдерживают при 65oС в течение 3 ч, а опытный раствор - в течение 2 ч. Из полученных гидроливатов удаляют негидролизованную высокомолекулярную фракцию добавлением этилового спирта в количестве 20 мл. Выпавший осадок отделяют центрифугированием. Получают 110 мл раствора, который ультраконцентрируют на мембране УАМ-100 в 5 раз. В результате получают 86 мл пермеата, в который добавляют 880 мл этилового спирта (10-кратный объем) и осаждают панкреатический гидролизат РНК. Осадок отделяют центрифугированием и высушивают на воздухе.The control solution was kept at 65 o C for 3 hours, and the test solution for 2 hours. From the obtained hydrolysates, the non-hydrolyzed high molecular weight fraction was removed by adding ethyl alcohol in an amount of 20 ml. The precipitate formed is separated by centrifugation. Get 110 ml of solution, which is ultraconcentrated on the UAM-100 membrane 5 times. The result is 86 ml of permeate, to which 880 ml of ethyl alcohol (10-fold volume) is added and pancreatic RNA hydrolyzate is precipitated. The precipitate was separated by centrifugation and dried in air.
Полученные панкреатические гидролизаты РНК в контрольном и опытном образцах имеют следующие показатели: содержание основного вещества - 75; соотношение длин волн А260/А230 - 1.60; соотношение длин волн A260/A280 - 3.15; выход продукта в расчете на массу натриевой соли дрожжевой РНК - 51%.The obtained pancreatic RNA hydrolysates in the control and experimental samples have the following indicators: the content of the main substance is 75; the ratio of wavelengths A 260 / A 230 - 1.60; the ratio of wavelengths A 260 / A 280 - 3.15; the product yield based on the weight of the sodium salt of yeast RNA is 51%.
Как видно из приведенных данных, введение в реакционную среду 4-метилтирозола не вызывает ухудшения качества конечного продукта. Выход продукта не увеличивается, однако время гидролиза сокращается в 1,5 раза. As can be seen from the above data, the introduction of 4-methyl tyrosol into the reaction medium does not cause a deterioration in the quality of the final product. The product yield does not increase, however, the hydrolysis time is reduced by 1.5 times.
Пример 5. Для приготовления опытной суспензии в 100 мл дистиллированной воды суспендируют 14 г зерновых отходов пивоваренного производства, содержащих 75%. клетчатки. Суспензию нагревают до 55oС, устанавливают значение рH среды равным 5.0, вносят 0.70 г целловиридина Г 10х активностью 2000 ед./г и 0.15 г 4-метилтирозола.Example 5. To prepare an experimental suspension in 100 ml of distilled water, 14 g of grain brewing waste containing 75% are suspended. fiber. The suspension is heated to 55 ° C. , the pH of the medium is set to 5.0, 0.70 g of celloviridine G 10x with an activity of 2000 units / g and 0.15 g of 4-methyl tyrosol are added.
Контрольную суспензию готовят так же, но не добавляют 4-метилтирозол. A control suspension is prepared in the same way, but 4-methyl tyrosol is not added.
Контрольную и опытную суспензию выдерживают при 55oС в течение 2 ч. Реакцию останавливают путем добавления в реакционную смесь 2 н. раствора гидроксида натрия. Далее разделяют жидкую и твердую фракции центрифугированием при 6000 об./мин в течение 10 мин. В жидкой фракции определяют концентрацию углеводов по реакции с фенолом [5]. Степень гидролиза оценивают как отношение концентрации углеводов в жидкой фазе к общему содержанию углеводов в исходном материале.The control and experimental suspension is maintained at 55 ° C. for 2 hours. The reaction is stopped by adding 2N to the reaction mixture. sodium hydroxide solution. The liquid and solid fractions are then separated by centrifugation at 6000 rpm for 10 minutes. In the liquid fraction, the concentration of carbohydrates is determined by reaction with phenol [5]. The degree of hydrolysis is estimated as the ratio of the concentration of carbohydrates in the liquid phase to the total content of carbohydrates in the starting material.
Степень гидролиза в контрольной суспензии составила 20%, а в опытной - 45%, т.е. выход продуктов гидролиза увеличился в 2.25 раза. The degree of hydrolysis in the control suspension was 20%, and in the experimental - 45%, i.e. the yield of hydrolysis products increased 2.25 times.
Пример 6. Для приготовления опытной суспензии в 100 мл дистиллированной воды суспендируют 10 г распылительно высушенной биомассы дрожжей р.Candida maltosa. Суспензию нагревают до 45oС, устанавливают значение рН среды на уровне 7.5-8.0. В подготовленную суспензию вносят 0.2 г лиофильно высушенной липазы Г10х с активностью 2500 ед./г и 0.15 г 4-метилтирозола.Example 6. To prepare an experimental suspension in 100 ml of distilled water, 10 g of spray dried biomass of the yeast of Candida maltosa are suspended. The suspension is heated to 45 o With, set the pH of the medium at the level of 7.5-8.0. 0.2 g of lyophilically dried G10x lipase with an activity of 2500 units / g and 0.15 g of 4-methyl tyrosol are added to the prepared suspension.
Контрольную суспензию готовят аналогичным образом за исключением добавления 4-метилтирозола. A control suspension was prepared in a similar manner except for the addition of 4-methyl tyrosol.
Контрольную и опытную суспензию выдерживают при 45oС в течение 2 ч. Реакцию останавливают путем добавления в реакционную смесь 1 мл соляной кислоты и помещения на 1 ч в морозильную камеру. Далее разделяют жидкую и твердую фракции центрифугириванием при 6000 об./мин в течение 10 мин. В твердой фракции определяют концентрацию липидов по методу Соколетта [5]. Степень гидролиза оценивают как отношение содержания липидов в жидкой фазе к общему содержанию липидов в исходном материале.The control and experimental suspension is maintained at 45 ° C. for 2 hours. The reaction is stopped by adding 1 ml of hydrochloric acid to the reaction mixture and placing it in the freezer for 1 hour. The liquid and solid fractions are then separated by centrifugation at 6000 rpm for 10 minutes. In the solid fraction, the lipid concentration is determined by the Sokoletta method [5]. The degree of hydrolysis is estimated as the ratio of the lipid content in the liquid phase to the total lipid content in the starting material.
Степень гидролиза в контрольной пробе составила 40%, а в опытной - 70%, т.е. выход продуктов гидролиза увеличивается в 1.75 раза. The degree of hydrolysis in the control sample was 40%, and in the experimental sample - 70%, i.e. the yield of hydrolysis products increases by 1.75 times.
Таким образом, сравнение приведенных способов с прототипом показывает, что внесение в реакционную среду активирующей добавки в виде водорастворимой формы химического аналога фактора d-4-метилтирозола приводит к увеличению выхода низкомолекулярных фракций биологически активных веществ, получаемых ферментативным гидролизом клеточных биополимеров в 1.5-2.0 раза, или к сокращению времени процесса гидролиза в 1.5 раза. Thus, a comparison of the above methods with the prototype shows that the introduction of an activating additive into the reaction medium in the form of a water-soluble form of a chemical analogue of the d-4-methyl tyrosol factor leads to an increase in the yield of low molecular weight fractions of biologically active substances obtained by enzymatic hydrolysis of cell biopolymers by 1.5-2.0 times, or to reduce the time of the hydrolysis process by 1.5 times.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ф. Гаурович - Химия и функции белков. /Москва, издательство "Mир", 1965 г., 532 с.LITERATURE
1. F. Gaurovich - Chemistry and protein functions. / Moscow, Mir Publishing House, 1965, 532 p.
2. Фукс Б. Шабанова М. Е., Федоров С.Н., Краснопольский Ю.М. и др. - Способ получения рибонуклеотидов. - А.с. 157359 - опубл. 01.03.90. 2. Fuchs B. Shabanova M.E., Fedorov S.N., Krasnopolsky Yu.M. and others. - A method of producing ribonucleotides. - A.S. 157359 - publ. 03/01/90.
3. Введение в прикладную энзимологию /под ред. чл-корр. И.В. Березина и проф. К. Мартинек. 3. Introduction to applied enzymology / ed. Corr. I.V. Berezina and prof. K. Martinek.
4. Joshi M. S. , Gowda L.R., Bhat S.G. Permeabilization of yeast cells (kluyveromyces fragilis) to lactose by cetyltrimethylammonium bromide. - biotechnol. Left, 1987, v.9, 8, p. 549-554. 4. Joshi M. S., Gowda L.R., Bhat S.G. Permeabilization of yeast cells (kluyveromyces fragilis) to lactose by cetyltrimethylammonium bromide. - biotechnol. Left, 1987, v. 9, 8, p. 549-554.
5. Практикум по биохимии. /Под ред. Северина С.Е./ / М.:МГУ, 1989, 509 с. 5. Workshop on biochemistry. / Ed. Severina S.E. / / M.: Moscow State University, 1989, 509 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000104372/13A RU2179579C2 (en) | 2000-02-24 | 2000-02-24 | Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000104372/13A RU2179579C2 (en) | 2000-02-24 | 2000-02-24 | Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000104372A RU2000104372A (en) | 2001-12-10 |
| RU2179579C2 true RU2179579C2 (en) | 2002-02-20 |
Family
ID=20230972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000104372/13A RU2179579C2 (en) | 2000-02-24 | 2000-02-24 | Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2179579C2 (en) |
-
2000
- 2000-02-24 RU RU2000104372/13A patent/RU2179579C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOSHI M.S. et all. Permeabilization of yeast cells (kluyveromyces fragilis) to lactose by cetiltrimethylammonium bromide. Biotechnol. Left. - 1987, v.9., № 8, p.549-554. ГАУРОВИЦ Ф. Химия и функции белков. - М.: Мир, 1965, с.366-374. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Martinek et al. | The principles of enzyme stabilization: II. Increase in the thermostability of enzymes as a result of multipoint noncovalent interaction with a polymeric support | |
| Oberholzer et al. | The use of liposomes for constructing cell models | |
| DE69133258T2 (en) | USE OF CROSS-LINKED CRYSTALS AS A NEW METHOD FOR IMMOBILIZING ENZYMES | |
| KR101123062B1 (en) | Method of producing uridine 5'-diphospho-N-acetylgalactosamine | |
| Artyukhov et al. | Thermal inactivation of free and immobilized inulinase | |
| RU2179579C2 (en) | Method to obtain low-molecular fractions of biologically active substances originated out of cellular biopolymers | |
| Cuenda et al. | Quantification and removal of glycogen phosphorylase and other enzymes associated with sarcoplasmic reticulum membrane preparations | |
| RU2381273C2 (en) | Method for production of heterogeneous biocatalyst, biocatalyst based on hydrolase of alpha-aminoacid ethers and method for synthesis of aminobeta-lactam antibiotic under action of this biocatalyst | |
| Lichko et al. | Properties of partially purified endopolyphosphatase of the yeast Saccharomyces cerevisiae | |
| Hochkoeppler et al. | Kinetic properties of myrosinase in hydrated reverse micelles | |
| JPS5974984A (en) | Preparation of immobilized enzyme or microorganism | |
| Remy et al. | Microenvironmental effects on enzyme catalysis. A kinetic study of hydrophobic derivatives of chymotrypsin | |
| RU2495003C1 (en) | Method of preparing protein-based foaming agent | |
| CN113151377A (en) | Enzymatic preparation method for preparing glucosamine from glucose and enzyme application | |
| US5250305A (en) | Process for enzymatic ultrafiltration of deamidated protein | |
| RU2128218C1 (en) | Method of preparing microorganism biomass at low nucleic acid content | |
| RU2691611C1 (en) | Method of producing bromelain in gel based on food chitosan and chitosan succinate | |
| RU2054481C1 (en) | Method of immobilized enzyme preparing | |
| Antov et al. | Effect of some inorganic salts on the partitioning of pectinase of Polyporus squamosus in polyethylene glycol/crude dextran aqueous two-phase system | |
| RU2773954C1 (en) | Method for producing recombinant protein of serratia marcescens bacteria nuclease for hydrolysis of nucleic acids | |
| Karube et al. | Bacteriolysis by immobilized enzymes | |
| Strinska et al. | Isolation and purification of lipase from Rhizopus arrhizus by ultrafiltration and fractional precipitation | |
| Rama Devi et al. | Purification and characterization of protease enzyme from sea weed, Gracilaria fergusonii | |
| RU2093575C1 (en) | Method of hydrolysis of biological substrates | |
| Gudzenko et al. | Thermal stability of Cryptococcus albidus α-L-rhamnosidase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040225 |