RU2169195C2 - Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis - Google Patents

Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis Download PDF

Info

Publication number
RU2169195C2
RU2169195C2 RU99117160A RU99117160A RU2169195C2 RU 2169195 C2 RU2169195 C2 RU 2169195C2 RU 99117160 A RU99117160 A RU 99117160A RU 99117160 A RU99117160 A RU 99117160A RU 2169195 C2 RU2169195 C2 RU 2169195C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
wild animals
fur
foxes
pseudomonas aeruginosa
Prior art date
Application number
RU99117160A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU99117160A (en
Inventor
Н.А. Балакирев
О.Б. Литвинов
А.Н. Семикрасова
Original Assignee
Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева filed Critical Научно-исследовательский институт пушного звероводства и кролиководства им. В.А. Афанасьева
Priority to RU99117160A priority Critical patent/RU2169195C2/en
Publication of RU99117160A publication Critical patent/RU99117160A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2169195C2 publication Critical patent/RU2169195C2/en

Links

Abstract

FIELD: biotechnology, veterinary science. SUBSTANCE: invention relates to production of vaccine preparations against pyocyanic infection in fur wild animals, preferably in polar foxes and foxes. Strain of bacterium Pseudomonas aeruginosa 5271 is deposited in collection of strains that are pathogens of diseases in fur wild animals of museum of bacterial and viral cultures of Science-Research institute of fur farming and rabbit breeding (NIIPZK) named for V. A. Afanasiev and has registration number 5271. Strain relates to serovariant 06. Strain is cultured in Marten's broth or synthetic medium at 32 C for 18-20 h at constant shaking. After control of grown culture for toxicogenicity and proteolytic activity bacterial mass is separated and inactivated and then aluminum hydroxide is added as an adjuvant and packaged. Invention ensures to prevent the concealed loss in reproduction of fur wild animals in farms with pyocyanic infection being independently of serological pattern of pathogen. EFFECT: strain indicated above, enhanced effectiveness of vaccine. 3 ex

Description

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против синегнойной инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц. The invention relates to the field of biotechnology and veterinary medicine and is intended for the production of vaccines against pseudomonas infection of fur animals, mainly arctic foxes and foxes.

Синегнойная инфекция распространена повсеместно, наносит значительный экономический ущерб звероводству и представляет опасность здоровью людей. В зверосовхозах ежегодно регистрируются энзоотипии среди норок, песцов и лисиц. Зарегистрированы случаи болезни у кроликов, нутрий, хорей. В последние годы стали отмечать синегнойную инфекцию у собак домашнего содержания. Pseudomonas infection is ubiquitous, causing significant economic damage to animal farming and poses a danger to human health. In fur farms, enzootypes among minks, arctic foxes and foxes are recorded annually. Cases of the disease have been reported in rabbits, nutria, trochees. In recent years, a Pseudomonas infection has been observed in dogs of domestic maintenance.

Патология при синегнойной инфекции как у людей, так у животных очень разнообразна - поражение репродуктивной системы, септические процессы в организме, поражение желудочно-кишечного тракта у молодых животных, поражение молочных желез и т.д. У лисиц и песцов она протекает с поражениями гениталий и сопровождается нарушением процесса беременности - абортами, рассасыванием эмбрионов, пропустованием самок. The pathology of Pseudomonas infection in humans and animals is very diverse - damage to the reproductive system, septic processes in the body, damage to the gastrointestinal tract in young animals, damage to the mammary glands, etc. In foxes and arctic foxes, it occurs with lesions of the genitals and is accompanied by a violation of the pregnancy process - abortion, resorption of embryos, and the passage of females.

Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабельностью, поэтому эффективность специфической профилактики определяется полнотой антигенного состава входящих в вакцину компонентов. The causative agent of pseudomonosis has serotypic variability, therefore the effectiveness of specific prophylaxis is determined by the completeness of the antigenic composition of the components included in the vaccine.

Известен вакцинный штамм Pseudomonas aeruginosa PA-7 второго серотипа, используемый для изготовления анатоксин-вакцины против синегнойной инфекции (SU N 1202109, опубл. 15.06.86). Known vaccine strain Pseudomonas aeruginosa PA-7 of the second serotype used for the manufacture of toxoid vaccines against Pseudomonas infection (SU N 1202109, publ. 15.06.86).

Однако известный штамм не содержит антигены возбудителя псевдомоноза пушных зверей и не обеспечивает формирование иммунитета против синегнойной инфекции пушных зверей. However, the known strain does not contain antigens of the pathogen pseudomonosis of fur animals and does not provide the formation of immunity against Pseudomonas infection of fur animals.

Наиболее близким аналогом является штамм Pseudomonas aeruginosa N 202 шестого серотипа, входящий в состав инактивированной вакцины против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок ("Ветеринарные препараты". Справочник, под ред. Д.Ф. Осидзе., М., Колос, 1981, с. 306-308). The closest analogue is the sixth serotype strain Pseudomonas aeruginosa N 202, which is part of the inactivated vaccine against pseudomonosis of fur animals, mainly minks ("Veterinary preparations". Handbook, edited by DF Osidze., M., Kolos, 1981, p. . 306-308).

Однако известный производственный штамм имеет нестабильные вирулентные и иммуногенные свойства и, более того, не позволяет профилактировать псевдомоноз песцов и лисиц, вызываемый возбудителями других серовариантов. However, the known production strain has unstable virulent and immunogenic properties and, moreover, does not prevent the pseudomonosis of arctic foxes and foxes caused by pathogens of other serovariants.

Задачей изобретения является получение штамма Pseudomonas aeruginosa для изготовления эффективной вакцины против псевдомоноза пушных зверей независимо от серологического профиля возбудителя. The objective of the invention is to obtain a strain of Pseudomonas aeruginosa for the manufacture of an effective vaccine against pseudomonosis of fur animals, regardless of the serological profile of the pathogen.

Технический результат изобретения заключается в получении нового штамма Psendomonas aeruginosa 5271, способного продуцировать основные факторы патогенности в оптимальных значениях и позволяющий изготовить вакцину против любых серовариантов синегнойной палочки не только для песцов и лисиц, но и других восприимчивых к данной инфекции зверей и животных.The technical result of the invention is to obtain a new strain of Psendomonas aeruginosa 527 1 , capable of producing the main pathogenicity factors in optimal values and allowing to produce a vaccine against any serovariants of Pseudomonas aeruginosa not only for arctic foxes and foxes, but also other animals and animals susceptible to this infection.

Сущность изобретения: штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5271 выделен от самки песца з/с "Беломорский" и депонирован в коллекции штаммов-возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А. Афанасьева и имеет регистрационный номер 5271.The inventive bacterial strain Pseudomonas aeruginosa 527 1 isolated from female foxes s / s Belomorsky and deposited in the collection of strains of pathogens of diseases of fur-bearing animals of the Museum of Bacterial and Viral Cultures of the Scientific Research Institute of Fur Breeding and Rabbits (NIIPZK) them. V.A. Afanasyev and has a registration number 527 1 .

Штамм Ps. aeruginosa 5271 предназначен в качестве продуцента протеолитических ферментов (щелочной протеазы и эластазы) при изготовлении специфического иммунного препарата против синегнойной инфекции песцов и лисиц.Strain Ps. aeruginosa 527 1 is intended as a producer of proteolytic enzymes (alkaline protease and elastase) in the manufacture of a specific immune preparation against pseudomonas infection of arctic foxes and foxes.

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa НИИПЗК N 5271 характеризуется следующими признаками и свойствами:
Генетические маркеры:
Серовариант 06 (Habs)
Штамм 5271 протеолитический.
The bacterial strain Pseudomonas aeruginosa NIIPZK N 527 1 is characterized by the following features and properties:
Genetic markers:
Serovariant 06 (Habs)
Strain 527 1 proteolytic.

Морфологические свойства. Производственная культура представляет собой тонкие прямые грамотрицательные палочки, размером 2-3 х 0,5 мкм. Палочки подвижные, монотрихи, спор не образуют, в мазках располагаются поодиночке и рядами. Morphological properties. Industrial culture is a thin straight gram-negative sticks, 2-3 x 0.5 microns in size. The rods are movable, monotrichi, do not form a spore, in strokes are located singly and in rows.

Культуральные свойства. Аэроб, оптимальная температура роста при 32-37oC, сохраняет способность к росту и размножению при 42oC. Растет почти на всех питательных средах с pH 8,0. На поверхности МПБ образует характерную серовато-серебристую пленку. Образует пигмент пиоцианин. Лучшей средой культивирования является среда Iensen'a, обогащенная солями и аминопептидом. На МПА образует S- и R-формы с преобладанием S-форм.Cultural properties. Aerob, the optimum growth temperature at 32-37 o C, retains the ability to grow and reproduce at 42 o C. It grows on almost all nutrient media with a pH of 8.0. On the surface of the MPB forms a characteristic grayish-silver film. Forms pigment pyocyanin. The best culture medium is Iensen's, enriched with salts and aminopeptide. On MPA forms S- and R-forms with a predominance of S-forms.

Биохимическая активность. Высокая кислотообразующая активность в отношении глюкозы и галактозы; в аэробных условиях расщепляет сахара с образованием глюконовой кислоты без газа, разжижает желатин, свертывает молоко, не вызывает образования индола и сероводорода. Образует цитохромоксидазу, вызывает гидролиз ацетамида. Biochemical activity. High acid-forming activity against glucose and galactose; under aerobic conditions it breaks down sugars to form gluconic acid without gas, liquefies gelatin, coagulates milk, and does not cause the formation of indole and hydrogen sulfide. It forms cytochrome oxidase, causes hydrolysis of acetamide.

Вирулентные свойства. При внутрибрюшинном введении белым мышам LD/50 составляет 1,28 х 10 ^ 7 КОЕ/мл. Virulent properties. When administered intraperitoneally to white mice, the LD / 50 is 1.28 x 10 ^ 7 CFU / ml.

Антигенные свойства. Штамм вырабатывает щелочную протеазу, эластазу, экзотоксин A. Antigenic properties. The strain produces alkaline protease, elastase, exotoxin A.

Токсигенные свойства. В жидкой питательной среде вырабатывает щелочную протеазу (показатель гидролиза казеина 320), эластазу (РП 1:4), экзотоксин A (РПГА 1:16). Toxigenic properties. In a liquid nutrient medium it produces an alkaline protease (casein hydrolysis index 320), elastase (RP 1: 4), exotoxin A (RPGA 1:16).

Хранение штамма. При (6±2)oC в ампулах в лиофилизированном состоянии более трех лет; в пробирках в столбике полужидкого агара, приготовленного на бульоне Мартена с добавлением 0,5%-ного глютамата натрия и 1%-ного глицерина, под вазелиновым маслом в течение трех месяцев; в пробирках на скошенном агаре не более 14 дней.Strain storage. At (6 ± 2) o C in ampoules in a lyophilized state for more than three years; in test tubes in a column of semi-liquid agar prepared on Marten broth with the addition of 0.5% sodium glutamate and 1% glycerol, under liquid paraffin for three months; in test tubes on mowed agar no more than 14 days.

Контроль за состоянием штамма. Контролируют морфологические, биохимические, культуральные и вирулентные свойства не реже 1 раза в три месяца. Антигенные свойства (протеазу и эластазу) проверяют перед производством иммунного препарата. Штамм предварительно культивируют в среде lensen'a. Показатель гидролиза казеина щелочной протеазой в реакции диффузии в казеиновый агар должен быть не менее 320, а титр эластазы в реакции супернатанта с моновалентной антиэластазной сывороткой в 1%-ном агаре Пурифайта должен быть не менее 1:4. Monitoring the status of the strain. Morphological, biochemical, cultural and virulent properties are monitored at least once every three months. Antigenic properties (protease and elastase) are tested before production of the immune preparation. The strain is pre-cultured in lensen medium. The rate of casein hydrolysis with an alkaline protease in the diffusion reaction to casein agar should be at least 320, and the elastase titer in the reaction of the supernatant with monovalent antelastase serum in 1% Purifait agar should be at least 1: 4.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5271 культивируют на бульоне Мартена или синтетической среде при 32oC в течение 18-20 ч при постоянном встряхивании на шуттель-аппарате. По истечении срока инкубации культуру проверяют на чистоту роста в мазках, окрашенных по Грамму.
The invention is illustrated by the following examples:
Example 1. The bacterial strain Pseudomonas aeruginosa 527 1 is cultivated on Marten broth or synthetic medium at 32 o C for 18-20 hours with constant shaking on a shuttle machine. After the incubation period, the culture is checked for cleanliness of growth in smears stained by Gram.

Далее из выросшей культуры отбирают пробу, центрифугируют ее при 6000 об/мин в течение 20 мин. Next, a sample is taken from the grown culture, centrifuged at 6000 rpm for 20 minutes.

Надосадочную жидкость сливают и исследуют на содержание: экзотоксина A в реакции преципитации (РП) с антитоксической сывороткой и/или на щелочную протеазу в реакции гидролиза казеина и/или на эластазу в РП с моновалентной антиэластазной сывороткой. Титры должны составлять: экзотоксина A - не ниже 1:4, щелочной протеазы не ниже 1:32, эластазы не ниже 1:16. The supernatant is drained and examined for the content of: exotoxin A in a precipitation reaction (RP) with antitoxic serum and / or an alkaline protease in casein hydrolysis and / or elastase in a RP with monovalent antelastase serum. The titers should be: exotoxin A - not lower than 1: 4, alkaline protease not lower than 1:32, elastase not lower than 1:16.

После контроля выросшей культуры на токсигенность и протеолитическую активность отделенную бакмассу подвергают инактивации любым известным способом и добавляют адъювант, например гидроокись алюминия. After controlling the grown culture for toxigenicity and proteolytic activity, the separated bacmass is inactivated by any known method and an adjuvant, for example aluminum hydroxide, is added.

Пример 2. Полученную по примеру 1 вакцину проверяют на безвредность на 9 песцах. Вакцину вводят внутримышечно в область бедра правой лапы в дозах: трем песцам по 1 мл, трем - по 2 мл и трем по 3 мл. Example 2. Obtained in example 1, the vaccine is checked for harmlessness on 9 Arctic foxes. The vaccine is administered intramuscularly in the thigh area of the right paw in doses: three foxes 1 ml each, three 2 ml each and three 3 ml each.

Проводят ежедневное наблюдение за песцами в течение 7 дней с индивидуальным прощупыванием места инъекции. Термометрию песцов проводят дважды на 2-й и 4-й дни после введения препарата. Conduct daily monitoring of Arctic foxes for 7 days with individual probing of the injection site. Thermometry of foxes is carried out twice on the 2nd and 4th days after administration of the drug.

Результаты исследования показали, что все песцы вели себя обычно, корм поедали полностью, агрессивность не наблюдалась. Температура тела была в пределах нормы - 37-39oC. При прощупывании места инъекции вакцины не было обнаружено опухания конечности, болезненности.The results of the study showed that all Arctic foxes behaved normally, completely ate food, and aggressiveness was not observed. Body temperature was within the normal range - 37-39 o C. When probing the injection site of the vaccine, no swelling of the limb or soreness was detected.

Пример 3. Полученной вакциной иммунизируют песцов на ферме, неблагополучной по синегнойной инфекции, для исследования влияния иммунизации на результаты воспроизводства, поскольку основная патология при синегнойной инфекции проявляется именно в период воспроизводства. Example 3. The resulting vaccine is used to immunize Arctic foxes on a farm unsuccessful for Pseudomonas aeruginosa to study the effect of immunization on the results of reproduction, since the main pathology in Pseudomonas infection manifests itself during the reproduction period.

В данном хозяйстве среди песцов отмечаются случаи абортов, пропустования самок, рождение мертвых щенков. При этом у абортированных самок на последних сроках беременности (за неделю до срока щенности) при бактериологическом исследовании была выделена культура синегнойной палочки 03 и 09 сероваров. In this household, there are cases of abortion, omission of females, and the birth of dead puppies among arctic foxes. Moreover, in aborted females in the last stages of pregnancy (one week before the gestation period), bacteriological examination revealed a culture of Pseudomonas aeruginosa 03 and 09 serovars.

Полученной по примеру 1 вакциной иммунизируют 50 самок песцов внутримышечно в дозе 1,5 мл. В качестве контроля служат другие 50 самок, аналогичные по возрасту, окрасу и условиям содержания и кормления. Obtained according to example 1, the vaccine is immunized with 50 female foxes intramuscularly at a dose of 1.5 ml. Another 50 females, similar in age, color, and conditions of keeping and feeding, serve as control.

Установлено, что применение вакцины повысило плодовитость песцов опытной группы на 0,7 щенка. Вакцина предотвратила рассасывание плодов у некоторых самок опытной группы, в то время как у некоторых самок контрольной группы был зарегистрирован приплод всего в 4-5 щенков. Это чаще всего обусловлено рассасыванием плодов в первой половине беременности. It was found that the use of the vaccine increased the fecundity of the foxes of the experimental group by 0.7 puppies. The vaccine prevented the resorption of the fruit in some females of the experimental group, while in some females of the control group the offspring was registered in only 4-5 puppies. This is most often due to resorption of the fetus in the first half of pregnancy.

Таким образом, вакцина на основе штамма 5271 позволит предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, неблагополучных по синегнойной инфекции.Thus, the vaccine based on strain 527 1 will prevent latent losses in the reproduction of fur animals in farms that are disadvantageous with Pseudomonas aeruginosa.

Claims (1)

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 5271, используемый для изготовления вакцины против псевдомоноза пушных зверей.The bacterial strain Pseudomonas aeruginosa 527 1 used for the manufacture of a vaccine against pseudomonosis of fur animals.
RU99117160A 1999-08-12 1999-08-12 Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis RU2169195C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99117160A RU2169195C2 (en) 1999-08-12 1999-08-12 Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99117160A RU2169195C2 (en) 1999-08-12 1999-08-12 Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU99117160A RU99117160A (en) 2001-05-20
RU2169195C2 true RU2169195C2 (en) 2001-06-20

Family

ID=20223576

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99117160A RU2169195C2 (en) 1999-08-12 1999-08-12 Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2169195C2 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ГВОЗДЯК Р.И., ЯКОВЛЕВА Л.М. Об особенностях патогенности Pseudomonas Aeruginosa. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - М.: МЕДИЦИНА, 1987, № 3, с.3-6. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Brown et al. Infectious bovine keratoconjunctivitis: a review
RU2169193C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5142 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis
RU2403063C1 (en) Inactivated combined vaccine against viral diarrhea, rota-, corona-virus diseases and escherichiosis of cattle
RU2428202C1 (en) Associated vaccine against anaerobic enterotoxemia and colibacillosis diarrhea in calves
RU2169195C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5271 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis
RU2169194C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5211 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis
RU2169189C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 4762 used for making vaccine against pseudomonosis in fur wild animals
RU2169191C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5291 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis
RU2169764C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5132 used for preparing vaccine against fur wild animal pseudomonosis
RU2169765C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5002 used for preparing vaccine against fur wild animal pseudomonosis
RU2169188C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 4492 used for making vaccine against fur wild animal pseudomonosis
RU2169190C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5292 used for making vaccine against pseudomonosis in fur wild animals
RU2169192C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa ло3 used for preparing vaccine against fur wild animals pseudomonosis
RU2147317C1 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 4992, used for preparing vaccine against pseudomonosis in fur wild animals
RU2169766C2 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa лo1 used for preparing vaccine against fur wild animal pseudomonosis
RU2147318C1 (en) Strain of bacterium pseudomonas aeruginosa 5241 used for preparing vaccine against pseudomonosis in fur wild animals
RU2263143C2 (en) Strain of bacterium streptococcus pyogenes 289 used for preparing vaccine against streptococcosis in fur animal
RU2650628C1 (en) Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets
RU1092947C (en) Strain pseudomonas acruginosa sepotype 11 n 48 used for obtaining pseudomonous antigen
RU2521651C1 (en) STRAINS OF BACTERIA Moraxella bovoculi "SH-CH6 N-DEP" USED TO MANUFACTURE DIAGNOSTIC PREPARATIONS AND VACCINES AGAINST INFECTIOUS KERATOCONJUNCTIVITIS OF CATTLE
CN110124022A (en) A kind of mycoplasma hyopneumoniae and haemophilus parasuis, Streptococcus suis, Actinobacillus pleuropneumoniae tetrad inactivated vaccine and its application
US3980523A (en) Method of propagating microorganisms
RU2098127C1 (en) Mixed vaccine for control over cattle necrobacteriosis
RU2098128C1 (en) Mixed vaccine for control over sheep limb illness
RU2109519C1 (en) Method of preparing vaccine for necrobacteriosis control in animals