RU2163123C2

RU2163123C2 - Ophthalmic drop

Info

Publication number: RU2163123C2
Application number: RU99111148/14A
Authority: RU
Inventors: М.Т. Азнабаев; С.А. Башкатов; Б.М. Азнабаев; А.Р. Имаева; Н.Р. Валишина; А.Ф. Габдрахманова
Original assignee: Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней
Priority date: 1999-05-26
Filing date: 1999-05-26
Publication date: 2001-02-20

Abstract

FIELD: medicine, ophthalmology. SUBSTANCE: ophthalmic drops have high-molecular hyaluronic acid of 95% purity isolated from human umbilical cord as biologically active substance and physiological solution in the following ratio of components, wt.-%: hyaluronic acid, 0.05-0.2 and physiological solution, the balance. Invention can be used for treatment of traumatic damages, chemical burns and trophic damages of cornea, conjunctiva, for adaptation in contact lens using, in postoperative period after keratoplasty and keratotomy operations. Preparation is available for use under ambulatory conditions. EFFECT: improved functional results, decreased treatment time. 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано при лечении травматических повреждений, химических ожогов и трофических нарушений роговицы, конъюнктивы, в послеоперационном периоде при кератопластике и кератотомии, а также для адаптации ношения контактных линз. The invention relates to medicine, in particular to ophthalmology, and can be used in the treatment of traumatic injuries, chemical burns and trophic disorders of the cornea, conjunctiva, in the postoperative period with keratoplasty and keratotomy, as well as for the adaptation of wearing contact lenses.

Известен препарат "Баларпан" (МНТК "МГ", регистрационное удостоверение МЗ РФ N 96/69/4). "Баларпан" - 0,01%-ный раствор, содержащий нативные сульфатированные гликозаминогликаны (кератан сульфат и хондроитин сульфат), выделенные из роговиц сельскохозяйственных животных. "Баларпан" активизирует регенерацию поврежденной роговицы, оказывает противовоспалительное и дегидратирующее действие на строму роговицы. Known drug "Balarpan" (MNTK "MG", registration certificate of the Ministry of Health of the Russian Federation N 96/69/4). "Balarpan" is a 0.01% solution containing native sulfated glycosaminoglycans (keratan sulfate and chondroitin sulfate) isolated from corneas of farm animals. "Balarpan" activates the regeneration of the damaged cornea, has anti-inflammatory and dehydrating effects on the stroma of the cornea.

Недостатком "Баларпана" является негомологичность тканям глаза, в результате чего возможны аллергические реакции. Кроме того, при применении вышеуказанного лекарственного препарата из "материалов риска", высок риск возникновения прионовой болезни. The disadvantage of "Balarpan" is the inhomogeneity of the tissues of the eye, as a result of which allergic reactions are possible. In addition, when using the above drug from "risk materials", the risk of prion disease is high.

Наиболее близким по технической сущности являются глазные капли (RU 2062079, A 61 F 9/00, 1966), которые приняты за прототип, содержащие выделенную из фракции роговицы свиней водорастворимую смесь гликозаминогликанов (кератан сульфат и хондроитин сульфат) при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Смесь гликозаминогликанов - 0,1-1,0
Физиологический раствор - Остальное
Водорастворимость глазных капель дает возможность быстрому проникновению лекарственного вещества в роговицу, в результате чего лечебное действие протекает более эффективно и с более высоким функциональным исходом.The closest in technical essence are eye drops (RU 2062079, A 61 F 9/00, 1966), which are taken as a prototype containing a water-soluble mixture of glycosaminoglycans (keratan sulfate and chondroitin sulfate) isolated from the pig corneal fraction in the following ratio of components, wt. %:
A mixture of glycosaminoglycans - 0.1-1.0
Saline - Rest
The water solubility of eye drops allows the rapid penetration of the drug into the cornea, as a result of which the therapeutic effect proceeds more efficiently and with a higher functional outcome.

Однако наличие хондроитин сульфата влияет на свертывающую систему крови, что может привести к увеличению кровоточивости поврежденных сосудов (Pandolfi M. , Hender U. The effect of sodium hyaluronate and sodium chondroitin sulfate on the coagulation system in vitro. Ophthalmology, 1984, 91, N 7, p. 864-866). Препарат легко смывается слезой, что снижает его эффективность. Кроме того, вышеуказанные глазные капли не содержат гиалуроновой кислоты, основного представителя гликозаминогликанов, обладающей более эффективным ранозаживляющим действием (Касавина Б.С., Музыкант Л.И. Экспер. хир. и анестезиол., 1960, 5, с. 54; Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. "Медицина", 1969). However, the presence of chondroitin sulfate affects the blood coagulation system, which can lead to increased bleeding of damaged vessels (Pandolfi M., Hender U. The effect of sodium hyaluronate and sodium chondroitin sulfate on the coagulation system in vitro. Ophthalmology, 1984, 91, No. 7 , p. 864-866). The drug is easily washed off with a tear, which reduces its effectiveness. In addition, the above eye drops do not contain hyaluronic acid, the main representative of glycosaminoglycans, which has a more effective wound healing effect (Kasavina B.S., Muzykant L.I. Expert. Chir. And anesthesiol., 1960, 5, p. 54; Slutsky L. . I. Biochemistry of normal and pathologically altered connective tissue. "Medicine", 1969).

Нами была поставлена задача разработать препарат, обладающий биорегуляторным, тканеспецифичным свойствами и пролонгированным действием из доступного сырья. We set the task to develop a drug with bioregulatory, tissue-specific properties and prolonged action from available raw materials.

Для решения поставленной задачи предложены глазные капли, содержащие биологическое активное вещество и физиологический раствор, отличающиеся тем, что в качестве биологически активного вещества используют выделенную из пупочных канатиков человека высокомолекулярную гиалуроновую кислоту 95%-ной чистоты при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гиалуроновая кислота - 0,05 - 0,2
Физиологический раствор - Остальное
Преимущество предлагаемых глазных капель состоит в том, что они обладают пролонгированным действием, то есть сохраняют фармакологическое действие в конъюнктивальной полости в течение нескольких часов, усиливают ранозаживляющую активность, сокращают сроки лечения и уменьшают частоту осложнений.To solve this problem, eye drops containing a biologically active substance and physiological solution are proposed, characterized in that as a biologically active substance, high molecular weight hyaluronic acid 95% pure isolated from human umbilical cords is used in the following ratio, wt.%:
Hyaluronic acid - 0.05 - 0.2
Saline - Rest
The advantage of the proposed eye drops is that they have a prolonged effect, that is, they maintain a pharmacological effect in the conjunctival cavity for several hours, enhance wound healing activity, shorten treatment time and reduce the frequency of complications.

Глазные капли готовят из субстанции высокомолекулярной гиалуроновой кислоты 95%-ной чистоты, полученной из пупочных канатиков человека согласно ТУ N 05/007589 от 11/XII 1997. Способ приготовления субстанции заключается в следующем: предварительно из пупочных канатиков человека путем ферментативного протеолиза с последующим осаждением в этиловый спирт выделяют смесь гликозаминогликанов (ГАГ). Из этой смеси с помощью DEAE - целлюлозы элюируют высокомолекулярную гиалуроновую кислоту (ВГК). Eye drops are prepared from high-molecular-weight hyaluronic acid substance of 95% purity obtained from human umbilical cords according to TU N 05/007589 dated 11 / XII 1997. The method of preparation of the substance is as follows: preliminary from human umbilical cords by enzymatic proteolysis followed by precipitation in ethyl alcohol secrete a mixture of glycosaminoglycans (GAG). High-molecular-weight hyaluronic acid (HCV) is eluted from this mixture using DEAE-cellulose.

Способ приготовления субстанции. Берут 1 кг пупочных канатиков, гомогенизируют и заливают экстрагентом (0,15 М NaCl). Смесь экстрагируют в течение 2-3 суток и отделяют экстракт фильтрацией через нейлоновую ткань. Комплексы гликозаминогликанов с белками (муцины) осаждают этиловым спиртом. Для избавления от белка осадок растворяют в буферном растворе (0,15 М NaCl, ЭДТА, SDS) и проводят протеолиз с помощью протеиназы "K". После протеолиза ГАГ из раствора осаждают этиловым спиртом, осадок растворяют в 0,15 М NaCl и очищают фильтрацией через активированный уголь. Фильтрат диализируют против дистиллированной воды, очищают методом ионообменной хроматографии на DEAE - целлюлозе и элюируют 0,7 М NaCl ВГК, осаждают этиловым спиртом и высушивают. The method of preparation of the substance. Take 1 kg of umbilical cords, homogenize and fill with extractant (0.15 M NaCl). The mixture is extracted for 2-3 days and the extract is separated by filtration through nylon fabric. Complexes of glycosaminoglycans with proteins (mucins) are precipitated with ethyl alcohol. To get rid of the protein, the precipitate is dissolved in a buffer solution (0.15 M NaCl, EDTA, SDS) and proteolysis is carried out using proteinase "K". After proteolysis, GAG from the solution is precipitated with ethyl alcohol, the precipitate is dissolved in 0.15 M NaCl and purified by filtration through activated carbon. The filtrate is dialyzed against distilled water, purified by DEAE cellulose by ion exchange chromatography, and eluted with 0.7 M HCV NaCl, precipitated with ethanol and dried.

Глазные капли готовят последовательным растворением в 0,9%-ном растворе натрия хлорида. Готовый раствор фильтруют через осветляющий мембранный фильтр, разливают во флаконы, герметично укупоривают и стерилизуют автоклавированием. Eye drops are prepared by sequential dissolution in a 0.9% sodium chloride solution. The finished solution is filtered through a clarifying membrane filter, poured into bottles, hermetically sealed and sterilized by autoclaving.

Для экспериментальной проверки заявляемых глазных капель были приготовлены 4 состава, содержащие различные количества гиалуроновой кислоты (0,03%; 0,05%; 0,1%; 0,2%; 0,3%). При инстилляции 0,03%-ного раствора наблюдается недостаточно быстрый ранозаживляющий эффект. 0,05, 0,1, 0,2 и 0,3%-ные растворы обладали хорошей ранозаживляющей активностью, длительным нахождением в конъюнктивальной полости, однако при приеме 0,3%-ного раствора, ввиду повышенной вязкости препарата, наблюдалось склеивание век. Оптимальными составами явились 0,05, 0,1 и 0,2%-ные растворы. For experimental verification of the claimed eye drops, 4 formulations were prepared containing various amounts of hyaluronic acid (0.03%; 0.05%; 0.1%; 0.2%; 0.3%). When instilling a 0.03% solution, an insufficiently quick wound healing effect is observed. 0.05, 0.1, 0.2 and 0.3% solutions had good wound healing activity, a long stay in the conjunctival cavity, however, when taking a 0.3% solution, due to the increased viscosity of the drug, eyelid adhesion was observed. The optimal compositions were 0.05, 0.1 and 0.2% solutions.

Пример 1. Способ приготовления. 3 мг субстанции высокомолекулярного гиалуроновой кислоты заливают 10 мл физиологического раствора и перемешивают в течение 1 часа до образования прозрачного раствора. Компоненты в соотношении
Гиалуроновая кислота - 3 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 2. Способ приготовления. 5 мг субстанции высокомолекулярного гиалуроната натрия заливают 10 мл физиологического раствора и перемешивают в течение 1 часа до образования прозрачного раствора. Компоненты в соотношении
Гиалуроновая кислота - 5 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 3. Способ приготовления аналогичен примерам 1 и 2. Глазные капли с компонентами берут в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 10 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 4. Глазные капли готовят аналогично примеру 1, но компоненты в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 20 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 5. Глазные капли готовят аналогично примеру 1, но компоненты в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 30 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Выбор оптимальных компонентов приведен в таблице.Example 1. The method of preparation. 3 mg of the substance of high molecular weight hyaluronic acid is poured into 10 ml of physiological saline and stirred for 1 hour until a clear solution is formed. Components in the ratio
Hyaluronic acid - 3 mg
Saline solution - 10 ml
Example 2. The method of preparation. 5 mg of the substance of high molecular weight sodium hyaluronate is poured into 10 ml of physiological saline and stirred for 1 hour until a clear solution is formed. Components in the ratio
Hyaluronic acid - 5 mg
Saline solution - 10 ml
Example 3. The method of preparation is similar to examples 1 and 2. Eye drops with components are taken in the following ratio
Hyaluronic acid - 10 mg
Saline solution - 10 ml
Example 4. Eye drops are prepared analogously to example 1, but the components in the following ratio
Hyaluronic acid - 20 mg
Saline solution - 10 ml
Example 5. Eye drops are prepared analogously to example 1, but the components in the following ratio
Hyaluronic Acid - 30 mg
Saline solution - 10 ml
The choice of optimal components is given in the table.

Из проведенного эксперимента можно сделать вывод, что капли приготовленные из компонентов, мас.%:
Гиалуроновая кислота - 0,05 - 0,2
Физиологический раствор - Остальное
отвечают требованиям Фармакопеи X: стерильно, лекарственное вещество растворяется в 0,9 изотоническом растворе натрия хлорида, терапевтическое действие в нетоксичных и не раздражающих глаз дозах.From the experiment we can conclude that the drops prepared from the components, wt.%:
Hyaluronic acid - 0.05 - 0.2
Saline - Rest
meet the requirements of Pharmacopoeia X: sterile, the drug is dissolved in 0.9 isotonic sodium chloride solution, therapeutic effect in doses that are non-toxic and non-irritating to the eye.

Готовые глазные капли представляют собой бесцветный, прозрачный раствор, без запаха. Препарат доступен для применения в амбулаторных условиях. Finished eye drops are a colorless, clear solution, odorless. The drug is available for use on an outpatient basis.

Способ применения: инстилляция капель в конъюнктивальную полость 3-4 раза в день по 1-2 капли. Method of application: instillation of drops into the conjunctival cavity 3-4 times a day for 1-2 drops.

Терапевтическую эффективность лечения оценивали по следующим признакам: сроки уменьшения и исчезновения явлений раздражения и стромального отека, сроки начала полной эпителизации эрозии роговицы. The therapeutic effectiveness of the treatment was evaluated according to the following criteria: the timing of the reduction and disappearance of the phenomena of irritation and stromal edema, the timing of the onset of complete epithelization of corneal erosion.

Пример 1. После получения несквозного стандартного дозированного дефекта роговицы в правый глаз кролика породы "Шиншилла" закапывают 0,3%-ный раствор гентамицина 4-6 раза в день, 1%-ный раствор атропина 1 раз в день и 0,1%-ный раствор гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день. Example 1. After receiving a non-through standard dosage defect of the cornea in the right eye of a rabbit of breed "Chinchilla" instill a 0.3% solution of gentamicin 4-6 times a day, 1% solution of atropine 1 time per day and 0.1% - solution of hyaluronic acid 3-4 times a day.

На первые сутки отмечалась умеренная инъекция сосудов конъюнктивы глазного яблока, дефект роговицы 5х5 мм, окрашивается флюоресцеином, передняя камера средней глубины. On the first day, a moderate injection of the vessels of the conjunctiva of the eyeball was noted, a corneal defect of 5x5 mm, stained with fluorescein, the anterior chamber was of medium depth.

На третьи сутки дефект роговицы уменьшился вдвое, передняя камера средней глубины, реакция зрачка на свет живая, радужка спокойная. On the third day, the corneal defect decreased by half, the anterior chamber is of medium depth, the pupil’s reaction to the light is alive, the iris is calm.

На шестые сутки наступила эпителизация раневого дефекта, что подтверждается отсутствием окрашивания флюоресцеином, в центре роговицы нежное облачковидное помутнение. On the sixth day, the wound defect was epithelized, which is confirmed by the absence of fluorescein staining, in the center of the cornea there is a gentle cloud-like clouding.

На четырнадцатые и последующие сроки роговица прозрачная. For the fourteenth and subsequent periods, the cornea is transparent.

Пример 2. Проведена стандартная дозированная радиальная кератотомия роговицы правого глаза кролика породы "Шиншилла", проведено лечение 0,3%-ным раствором гентамицина 4-6 раз в день и 0,05%-ным раствором гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день. Example 2. A standard dosed radial keratotomy of the cornea of the right eye of a rabbit of the Chinchilla breed was performed, treatment was carried out with a 0.3% solution of gentamicin 4-6 times a day and a 0.05% solution of hyaluronic acid 3-4 times a day.

На 5-6 сутки лечения глаз кролика спокойный, произошла эпителизация радиальных насечек роговицы. On the 5-6th day of treatment, the eyes of the rabbit were calm; epithelization of the radial corneal incisions occurred.

В отдаленные сроки роговица прозрачная, нежные радиальные рубцы. In the long term, the cornea is transparent, with gentle radial scars.

Пример 3. После моделирования химического щелочного ожога роговицы средней тяжести правый глаз кролика породы "Шиншилла" пролечен 0,3%-ным раствором гентамицина 4-6 раз в день, 1% раствором атропина 1 раз в день, 0,2%-ным раствором гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день. Example 3. After modeling a chemical alkaline burn of a cornea of moderate severity, the right eye of a Chinchilla rabbit was treated with 0.3% gentamicin solution 4-6 times a day, 1% atropine solution 1 time per day, 0.2% solution hyaluronic acid 3-4 times a day.

На первые сутки - умеренное сужение глазной щели, смешанная инъекция сосудов глазного яблока, диффузный отек поверхностных и средних слоев стромы, частичная эрозия роговицы в центре. On the first day - a moderate narrowing of the palpebral fissure, a mixed injection of the vessels of the eyeball, diffuse edema of the superficial and middle layers of the stroma, partial erosion of the cornea in the center.

На третьи сутки - уменьшение площади эрозии и частичная резорбция отека роговицы, влага передней камеры прозрачная, реакция зрачка живая. On the third day - a decrease in erosion area and partial resorption of corneal edema, the anterior chamber moisture is transparent, the pupil’s reaction is lively.

На седьмые сутки - перикорнеальная инъекция, умеренный отек роговицы, эрозивная поверхность уменьшилась вдвое, васкуляризация отсутствует. On the seventh day - pericorneal injection, moderate corneal edema, the erosive surface decreased by half, vascularization is absent.

На 12 сутки - полная эпителизация роговицы, в центре помутнение роговицы в поверхностных слоях стромы 2х2 мм. On the 12th day - complete corneal epithelization, in the center there is a clouding of the cornea in the surface layers of the stroma 2x2 mm.

На 30 сутки и в отдаленные сроки глаз спокоен, роговица прозрачная. On the 30th day and in the long term, the eye is calm, the cornea is transparent.

Результаты морфологического исследования подтверждают, что полная эпителизация непроникающих ранений роговицы под влиянием глазных капель происходит на седьмые сутки, ускоряется репаративная регенерация роговицы, не наблюдается врастание сосудов в роговицу. The results of a morphological study confirm that the complete epithelization of non-penetrating wounds of the cornea under the influence of eye drops occurs on the seventh day, reparative regeneration of the cornea is accelerated, and the growth of vessels in the cornea is not observed.

Таким образом, при экспериментальном доклиническом исследовании глазных капель, содержащих 0,05 - 0,2%-ные растворы гиалуроновой кислоты, выявлены стимуляция репаративной регенерации роговицы, сокращение сроков лечения и улучшение функционально-косметических результатов. Thus, in an experimental preclinical study of eye drops containing 0.05 - 0.2% solutions of hyaluronic acid, stimulation of reparative regeneration of the cornea, reduction of treatment time and improvement of functional and cosmetic results were revealed.

Claims

Eye drops containing a biologically active substance and physiological saline, characterized in that as a biologically active substance, high molecular weight hyaluronic acid of 95% purity isolated from umbilical cords of a person is used in the following ratio of components, wt.%:
Hyaluronic acid - 0.05 - 0.2
Saline - Rest