RU2161503C2

RU2161503C2 - Drug

Info

Publication number: RU2161503C2
Application number: RU97120340A
Authority: RU
Inventors: О.А. Климова; В.Ю. Чеботарев
Original assignee: Открытое акционерное общество "СПб-Технология"
Priority date: 1997-11-28
Filing date: 1997-11-28
Publication date: 2001-01-10

Abstract

FIELD: medicine, pharmacy. SUBSTANCE: invention relates to drugs used for treatment of diseases complicated with inflammatory processes, presence of pus and necrotic tissues and accompanying with tissue structure changes. Drug has a complex of collagenolytic proteinases from hydrocole digestive organs including serine collagenolytic proteinases, metalloproteinases and proteinases with terminal alanine residues and acceptable carrier. EFFECT: increased activity of agent. 4 cl, 2 ex

Description

Изобретений относится к фармакологии и медицине и может найти применение при лечении заболеваний, осложненных воспалительными процессами, а также наличием гноя и некротических тканей, например: гнойно-трофических язв, обожженных и обмороженных тканей, пролежней, флегмон, воспаленных тканей (различной природы воспаления и разных органов), грибковых заболеваний кожи, гнойного лактационного мастита, переломов и воспалительных заболеваний костей и суставов, кариеса и других заболеваний. The invention relates to pharmacology and medicine and can be used in the treatment of diseases complicated by inflammatory processes, as well as the presence of pus and necrotic tissues, for example: purulent-trophic ulcers, burned and frostbite tissues, pressure sores, phlegmon, inflamed tissues (various types of inflammation and different organs), fungal skin diseases, purulent lactational mastitis, fractures and inflammatory diseases of bones and joints, caries and other diseases.

Известны лекарственные средства, включающие носитель и ферментосодержащее активное начало. В таких средствах активное начало гидролизует омертвевшие ткани и гной (девитализированные ткани), способствуя их удалению, и тем самым очищает живые ткани для их регенерации или, при необходимости, для последующего хирургического вмешательства. Medicines are known including a carrier and an enzyme-containing active principle. In such products, the active principle hydrolyzes dead tissue and pus (devitalized tissues), helping to remove them, and thereby cleanses living tissue for their regeneration or, if necessary, for subsequent surgical intervention.

Известен раствор для лечения гнойных очагов, описанный в [1], содержащий 2-3% фермента (трипсина). Ввиду недостаточно высокой некролитической активности раствора его применение требует обязательной дополнительной обработки раны, например, ультразвуком. A known solution for the treatment of purulent foci described in [1], containing 2-3% of the enzyme (trypsin). Due to the insufficiently high necrolytic activity of the solution, its use requires mandatory additional treatment of the wound, for example, by ultrasound.

Более эффективными являются ферментосодержащие препараты, полученные из гидробионтов. More effective are enzyme-containing preparations obtained from aquatic organisms.

Известен ферментный препарат коллагенолитической сериновой протеазы, полученный из гепатопанкреаса краба, применяемый в виде аморфного порошка для лечения гнойных ран у животных [2]. Доза применяемого ферментного препарата составляет 0,1 - 1,0 мг/см² поверхности раны. Повязку меняют ежедневно в течение 3-х суток. Полное заживление наступает на 7-11-е сутки. Существенным недостатком такого лечения является дороговизна препарата, т.к. выделение индивидуального фермента из гепатопанкреаса краба достаточно дорого и сложно. Кроме того, сам фермент стабилен лишь в лиофилизированном виде, и из него нельзя сделать готовые лекарственные формы, реализуемые через аптечную сеть, что сужает спектр применения средства.Known enzyme preparation of collagenolytic serine protease obtained from crab hepatopancreas, used in the form of an amorphous powder for the treatment of purulent wounds in animals [2]. The dose of the used enzyme preparation is 0.1 - 1.0 mg / cm ^{2 of the} surface of the wound. The dressing is changed daily for 3 days. Complete healing occurs on the 7-11th day. A significant disadvantage of this treatment is the high cost of the drug, because isolation of an individual enzyme from hepatopancreas crab is quite expensive and difficult. In addition, the enzyme itself is stable only in lyophilized form, and it is impossible to make finished dosage forms sold through the pharmacy network, which narrows the range of application of the drug.

В медицине известно применение ферментосодержащих препаратов, выделенных из морских животных, для лечения не только кожи и мышечных тканей, но и других органов и тканей. In medicine, the use of enzyme-containing preparations isolated from marine animals for the treatment of not only skin and muscle tissue, but also other organs and tissues is known.

Известно средство для лечения ожогов глаз, представляющее собой раствор сериновой протеазы, полученной из гепатопанкреаса камчатского краба, описанное в [3]. Непосредственно перед употреблением порошок протеазы растворяют в воде и производят инстилляции пораженных глаз (разовая доза 0,5-3,0 мг, 1-3-х кратно в течение 1-2-х суток). Кроме узкого спектра воздействия указанное средство обладает недостатками вышеуказанного аналога. Known tool for the treatment of eye burns, which is a solution of a serine protease obtained from hepatopancreas king crab described in [3]. Immediately before use, the protease powder is dissolved in water and instillation of the affected eyes is performed (single dose 0.5-3.0 mg, 1-3 times for 1-2 days). In addition to a narrow spectrum of exposure, this tool has the disadvantages of the above analogue.

Более широким спектром воздействия на некротические ткани обладают смеси протеиназ, используемые при лечении гнойно-трофических язв и пролежней [4]. Указанное средство включает в качестве активного начала смесь протеиназ различных классов, отличающихся по субстратной специфичности, известную под названием "Морикраза", а также жир, ланолин и парафин в заданном соотношении. "Морикраза" содержит смесь трипсина, химотрипсина, эластазы и карбоксипептидаз А и Б. Указанный состав наносят на девитализированную ткань в виде мази ежедневно, курс лечения составляет 6-10 дней. В результате кооперативного воздействия компонентов активного начала происходит глубокий гидролиз неколлагеновых белков некротических тканей до мелких пептидов. Это способствует быстрому удалению токсичных продуктов распада белков и вызывает улучшение биохимических показателей крови. Однако известно, что трипсин, химотрипсин, эластаза и карбоксипептидазы А и Б не способны гидролизовать нативный коллаген [5], который обязательно содержится в некротических тканях. Mixtures of proteinases used in the treatment of purulent trophic ulcers and pressure sores have a wider spectrum of effects on necrotic tissues [4]. The specified tool includes, as an active principle, a mixture of proteinases of various classes, differing in substrate specificity, known as "Moricrase", as well as fat, lanolin and paraffin in a predetermined ratio. "Morikraz" contains a mixture of trypsin, chymotrypsin, elastase and carboxypeptidases A and B. The specified composition is applied to devitalized tissue in the form of an ointment daily, the course of treatment is 6-10 days. As a result of the cooperative action of the components of the active principle, a deep hydrolysis of necrotic tissue necrotic tissues occurs to small peptides. This contributes to the rapid removal of toxic protein breakdown products and causes an improvement in blood biochemical parameters. However, it is known that trypsin, chymotrypsin, elastase and carboxypeptidases A and B are not able to hydrolyze native collagen [5], which is necessarily found in necrotic tissues.

Наличие негидролизуемого указанной смесью протеаз нативного коллагена препятствует быстрому и полному удалению некротических и очищению живых тканей. Кроме того, применяемый в составе ланолин является сильным аллергеном и может быть противопоказан. The presence of native collagen non-hydrolyzable with the indicated protease mixture prevents the rapid and complete removal of necrotic and the cleansing of living tissues. In addition, the lanolin used in the composition is a strong allergen and may be contraindicated.

Ввиду того, что коллаген является основным структурным компонентом кожи, костей, сухожилий, оболочек глаза и т.д., очевидно, что гидролиз коллагеновых белков, оставшихся в девитализированных и измененных тканях, является необходимой составляющей в процессе удаления гноя и некротических тканей при лечении заболеваний, сопровождающихся некрозом тканей и органов, а также при лечении воспаленных и измененных тканей. Due to the fact that collagen is the main structural component of the skin, bones, tendons, eye membranes, etc., it is obvious that the hydrolysis of collagen proteins remaining in devitalized and altered tissues is a necessary component in the process of removing pus and necrotic tissues in the treatment of diseases accompanied by necrosis of tissues and organs, as well as in the treatment of inflamed and altered tissues.

В качестве прототипа выбрано средство для удаления гноя и некротических тканей [6] , содержащее коллагеназу краба в смеси с сополимером винилового спирта, винилглутарата и винилацетата при заданном соотношении компонентов. Средство наносят непосредственно на рану, перевязки осуществляют ежедневно в течение 6-16-ти суток. В процессе курса лечения средство проявляет высокие сорбционные свойства и очищает рану от некротических тканей без образования корочки из некротического детрита. Однако известно, что коллагеназы - это высокоспецифичные протеиназы [7] , способные при физиологических условиях (pH, температура, ионная сила) гидролизовать тройную спираль нативного коллагена только в одной точке c образованием четырех структурных элементов, связанных между собой водородными связями. Коллагеназы не способны глубже гидролизовать получившиеся крупные белковые структуры, а также другие белки, содержащиеся в некротических тканях, и для удаления их из этих тканей необходимо применять дополнительные средства или приемы. Кроме того, коллагеназы сами легко гидролизуются другими протеиназами, всегда содержащимися в некротических и окружающих их живых тканях, что приводит к быстрой инактивации препарата. As a prototype, a means for removing pus and necrotic tissue [6] was selected, containing crab collagenase mixed with a copolymer of vinyl alcohol, vinyl glutarate and vinyl acetate at a given ratio of components. The tool is applied directly to the wound, dressings are carried out daily for 6-16 days. During the course of treatment, the drug exhibits high sorption properties and cleanses the wound from necrotic tissues without the formation of a crust from necrotic detritus. However, collagenases are known to be highly specific proteinases [7], capable of hydrolyzing the triple helix of native collagen under physiological conditions (pH, temperature, ionic strength) at only one point with the formation of four structural elements interconnected by hydrogen bonds. Collagenases are not able to more deeply hydrolyze the resulting large protein structures, as well as other proteins contained in necrotic tissues, and additional tools or techniques are necessary to remove them from these tissues. In addition, collagenases themselves are easily hydrolyzed by other proteinases, which are always found in necrotic and surrounding living tissues, which leads to rapid inactivation of the drug.

Указанные свойства препарата делают прототип недостаточно эффективным, а низкое содержание коллагеназы в гепатопанкреасе краба делает его дорогим. Кроме того, присутствие в средстве полимеров сужает область его применения, поскольку оно не может быть использовано при лечении слизистых (например, глаз) и для подкожного введения. The indicated properties of the drug make the prototype insufficiently effective, and the low collagenase content in the hepatopancreas of the crab makes it expensive. In addition, the presence of polymers in the agent narrows the scope of its application, since it cannot be used in the treatment of mucous membranes (for example, eyes) and for subcutaneous administration.

Таким образом, существует противоречие: с одной стороны, средства для удаления гноя и некротических и измененных тканей, в которых содержатся протеиназы или смеси протеиназ с различной специфичностью, позволяют эффективно удалять неколлагеновые белки, но не способны разрушить структуру тканей, поддерживаемую коллагеновыми волокнами, с другой стороны, использование коллагеназ в качестве активного начала препаратов позволяет частично гидролизовать некротические и измененные ткани, но только до крупных структурных элементов. Thus, there is a contradiction: on the one hand, means for removing pus and necrotic and altered tissues that contain proteinases or mixtures of proteinases with different specificities allow efficient removal of non-collagen proteins, but are not able to destroy the tissue structure supported by collagen fibers, on the other On the other hand, the use of collagenases as the active principle of drugs allows partial hydrolysis of necrotic and altered tissues, but only to large structural elements.

Указанное противоречие делает перечисленные (в том числе прототип) и другие известные авторам ферментосодержащие препараты недостаточно эффективными, что наряду с отмеченной выше дороговизной ограничивает возможность их использования. Другим существенным недостатком прототипа (равно и аналогов) является узкая направленность его воздействия, т.е. неуниверсальность средства. This contradiction makes the listed (including the prototype) and other enzyme-containing preparations known to the authors insufficiently effective, which, along with the high cost noted above, limits the possibility of their use. Another significant disadvantage of the prototype (as well as analogues) is the narrow focus of its impact, i.e. non-universal means.

В основу группы изобретений поставлена задача - предложить новое активное начало для лечебного средства, а также расширить спектры воздействия лечебного средства (универсализация по применению), повысить эффективность средства для лечения заболеваний, сопровождающихся образованием гноя и/или некротических (девитализированных), воспаленных и измененных тканей, уменьшить побочные эффекты, а именно предотвратить образование шрамов и рубцов. The basis of the group of inventions is the task of proposing a new active principle for a therapeutic agent, as well as expanding the spectrum of effects of the therapeutic agent (universalization in use), increasing the effectiveness of the agent for treating diseases accompanied by the formation of pus and / or necrotic (devitalized), inflamed and altered tissues , reduce side effects, namely to prevent the formation of scars and scars.

Задачей также является расширение арсенала средств (разнообразия лекарственных форм) и увеличение срока годности готовых форм при минимальной их стоимости. The objective is also to expand the arsenal of funds (variety of dosage forms) and increase the shelf life of finished forms at their minimum cost.

Поставленная комплексная задача решается тем, что в качестве активного начала лечебного средства применяется природный комплекс коллагенолитических протеиназ. The complex task posed is solved by the fact that a natural complex of collagenolytic proteinases is used as the active principle of a therapeutic agent.

Поставленная задача решается также заявляемым средством. В средстве, содержащем активное начало, обладающее коллагенолитической активностью и полученное из пищеварительных органов гидробионтов, а также приемлемый носитель, согласно изобретению, в качестве указанного активного начала используют комплекс коллагенолитических протеиназ с молекулярной массой 10-40 килодальтон, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Комплекс коллагенолитических протеиназ - 0,001 - 99,5
Приемлемый носитель - Остальное
Целесообразно использовать комплекс протеиназ, выделенный из пищеварительных органов ракообразных, моллюсков, иглокожих и кишечнополостных.The problem is also solved by the claimed means. In a tool containing an active principle, having collagenolytic activity and obtained from the digestive organs of aquatic organisms, as well as an acceptable carrier, according to the invention, a complex of collagenolytic proteinases with a molecular weight of 10-40 kilodaltons is used as the indicated active principle, in the following ratio of components, wt.% :
Collagenolytic proteinase complex - 0.001 - 99.5
Acceptable Media - Other
It is advisable to use a complex of proteinases isolated from the digestive organs of crustaceans, mollusks, echinoderms and intestinal.

Наилучший результат достигается, когда комплекс включает коллагенолитические протеиназы: сериновые коллагенолитические протеиназы, металлопротеиназы и протеиназы с аланинами на N-конце. The best result is achieved when the complex includes collagenolytic proteinases: serine collagenolytic proteinases, metalloproteinases and proteinases with alanines at the N-terminus.

В качестве приемлемого носителя можно использовать практически любые общеизвестные фармакологические небелковые основы и фармакологические растворители с pH от 5,0 до 9,5. As an acceptable carrier, you can use almost any well-known pharmacological non-protein bases and pharmacological solvents with a pH from 5.0 to 9.5.

При использовании в качестве носителя жидких и вязких средств содержание активного начала составляет 0,001-10 мас.%. When used as a carrier of liquid and viscous agents, the content of the active principle is 0.001-10 wt.%.

Применяемый впервые в качестве активного начала лечебных средств природный комплекс коллагенолитических протеиназ из пищеварительных органов гидробионтов был вначале получен авторами путем последовательных экстракций и хроматографий растворимых белков из гепатопанкреаса крабов [8]. Аналогичным образом были получены природные комплексы коллагенолитических протеиназ из пищеварительных органов головоногих моллюсков (кальмары, осьминоги, каракатицы), иглокожих (морские звезды, морские ежи, офиуры) и кишечнополостных (различные медузы). Было выявлено существенное сходство механизма их воздействия на ткани человека. The natural complex of collagenolytic proteinases from the digestive organs of aquatic organisms, used for the first time as an active principle of therapeutic agents, was initially obtained by the authors by sequential extraction and chromatography of soluble proteins from crab hepatopancreas [8]. Similarly, natural complexes of collagenolytic proteinases were obtained from the digestive organs of cephalopods (squid, octopus, cuttlefish), echinoderms (starfish, sea urchins, and ophiurs) and intestinal (various jellyfish). A significant similarity of the mechanism of their effect on human tissue was revealed.

Авторами были проведены исследования по получению наиболее активных по гидролизу азоказеина и коллагена фракций. Фракционирование проводили с помощью хроматографических методов, а именно гель-фильтрации на приборе для FPLC фирмы Pharmacia с использованием специальных колонок. Общая протеолитическая и коллагенолитическая активности измерялись по гидролизу азоказеина и нативного коллагена соответственно. В процессе исследований установлено, что молекулярная масса наиболее активных фракций составляет от 10 до 40 килодальтон. После этого были проведены испытания отдельных фракций и комплексного препарата, в которых было получено подтверждение их высокой эффективности. Статистические исследования на больных с заболеваниями различной этиологии показали, что применение природного комплекса указанных протеиназ намного более эффективно, чем применение его отдельных компонентов. Это объясняется тем, что комплекс более стабилен, чем индивидуальные ферменты и обладает синергическими свойствами. Обнаруженный синергизм позволяет снизить минимальную дозировку активного начала в воздействующем лечебном средстве. The authors conducted studies to obtain the most active in the hydrolysis of azocasein and collagen fractions. Fractionation was carried out using chromatographic methods, namely gel filtration on a Pharmacia FPLC instrument using special columns. Total proteolytic and collagenolytic activities were measured by hydrolysis of azocasein and native collagen, respectively. In the process of research it was found that the molecular weight of the most active fractions is from 10 to 40 kilodaltons. After that, tests were conducted on individual fractions and the complex preparation, in which confirmation of their high efficiency was obtained. Statistical studies on patients with diseases of various etiologies showed that the use of the natural complex of these proteinases is much more effective than the use of its individual components. This is because the complex is more stable than individual enzymes and has synergistic properties. The synergism detected makes it possible to reduce the minimum dosage of the active principle in an active therapeutic agent.

На основе экспериментальных данных, полученных в процессе исследования активного начала - комплекса указанных коллагенолитических протеиназ и его отдельных компонентов, выявлен его механизм воздействия на живые и девитализированные ткани, который заключается в следующем. Based on the experimental data obtained in the process of studying the active principle - a complex of these collagenolytic proteinases and its individual components, its mechanism of action on living and devitalized tissues was revealed, which is as follows.

При воздействии комплекса коллагенолитических протеиназ на ткани в пораженной зоне в первую очередь подвергаются гидролизу ткани с нарушенной структурой, а именно гной, воспаленные, измененные и некротические ткани. When exposed to a complex of collagenolytic proteinases on tissues in the affected area, hydrolysis of tissues with a disturbed structure is primarily subjected to hydrolysis, namely pus, inflamed, altered and necrotic tissues.

Первоначальное расщепление белковых молекул происходит в одной точке, получившиеся пептидные фрагменты продолжают оставаться субстратами для коллагенолитических протеаз, и гидролиз продолжается вплоть до образования мелких фрагментов и отдельных аминокислот. Коллагенолитические протеиназы комплекса эффективно гидролизуют остатки нативного коллагена в девитализированной ткани, устраняя тем самым препятствия для быстрого гидролиза гноя и некротическиих тканей и создавая условия для очищения поверхности живой ткани. Продукты гидролиза эффективно выводятся из организма, что снижает вероятность интоксикации при заболевании, а отдельные аминокислоты могут вновь включаться в процессы метаболизма, подпитывая регенерирующиеся ткани. The initial cleavage of protein molecules occurs at one point, the resulting peptide fragments continue to remain substrates for collagenolytic proteases, and hydrolysis continues until the formation of small fragments and individual amino acids. The collagenolytic proteinases of the complex effectively hydrolyze the residues of native collagen in devitalized tissue, thereby removing obstacles to the rapid hydrolysis of pus and necrotic tissue and creating the conditions for cleansing the surface of living tissue. Hydrolysis products are effectively excreted from the body, which reduces the likelihood of intoxication in the disease, and individual amino acids can again be included in metabolic processes, fueling regenerating tissues.

Заявляемое средство не теряет активности в организме человека в течение 1,5-72 час в зависимости от природы носителя, концентрации и состояния обрабатываемой зоны. Затем его активность постепенно снижается за счет ингибирования препарата продуктами гидролиза и воздействия на него собственных ферментов объекта лечения, поступающих в зону воздействия из живых тканей. Тем самым заявляемое средство оказывает на пораженную зону лишь очищающее воздействие, не повреждая близлежащие здоровые ткани, и позволяет применять его при воздействии как на поверхностные, так и на внутренние слои ткани (например, инъекциями или промыванием). Очищенная от гноя, некротических или воспаленных тканей поверхность готова к регенерации или, в зависимости от степени поражения, к дальнейшему традиционному консервативному или хирургическое лечению. The inventive tool does not lose activity in the human body for 1.5-72 hours, depending on the nature of the carrier, concentration and condition of the treated area. Then its activity is gradually reduced due to inhibition of the drug by hydrolysis products and exposure to it of its own enzymes of the treatment object entering the exposure zone from living tissues. Thus, the claimed tool has a cleansing effect on the affected area without damaging nearby healthy tissues, and allows it to be used when affecting both the surface and internal layers of the tissue (for example, by injection or washing). A surface cleansed of pus, necrotic or inflamed tissue is ready for regeneration or, depending on the degree of damage, for further traditional conservative or surgical treatment.

Современный уровень молекулярной биологии позволяет получить компоненты комплекса и сам коллагенолитический комплекс также с помощью генноинженерных манипуляций. The current level of molecular biology makes it possible to obtain the components of the complex and the collagenolytic complex itself also using genetic engineering manipulations.

С целью более детального изучения лечебных свойств комплекса были проведены фармакологические и биохимические исследования, в процессе которых было выявлено, что его наиболее активными компонентами являются сериновые коллагенолитические протеиназы, металлопротеиназы, выявленные ранее у лангуста, но не относящиеся к классу ЕС 3.4.24, а также не относящиеся ни к одной из известных групп (по ЕС) протеиназы с аланинами на N-конце, а именно протеиназы со следующими N-концевыми последовательностями:
A M D X T A Y X D Y D E A Q A X L K G L-
A F D X T N Y N T F E E A N S A L D G V-
Ввиду того, что активное начало средства содержит протеолитические ферменты, способные гидролизовать любые белки, в том числе белки фармакологической основы, нежелательно применение в качестве носителя белоксодержащих носителей. В противном случае метаболиты, образующиеся в процессе гидролиза белков основы, будут ухудшать свойства носителя, препятствуя процессу лечения и вызывая интоксикацию.In order to study the therapeutic properties of the complex in more detail, pharmacological and biochemical studies were carried out, during which it was revealed that its most active components are serine collagenolytic proteinases, metalloproteinases previously detected in the spiny lobster, but not belonging to the EU 3.4.24 class, and proteinases with alanines at the N-terminus that are not related to any of the known groups (according to the EU), namely, proteases with the following N-terminal sequences:
AMDXTAYXDYDEAQAXLKG L-
AFDXTNYNTFEEANSALDG V-
Due to the fact that the active principle of the agent contains proteolytic enzymes capable of hydrolyzing any proteins, including proteins of the pharmacological basis, it is undesirable to use protein-containing carriers as a carrier. Otherwise, the metabolites formed during the hydrolysis of base proteins will degrade the properties of the carrier, interfering with the treatment process and causing intoxication.

Авторами экспериментально установлено, что ферментный препарат, содержащий протеолитический комплекс, наиболее активен и стабилен при pH в указанном диапазоне. При pH ниже 5,0 и выше 9,5 активность резко снижается, а при pH ниже 3,8 и выше 11,2 протеиназы необратимо инактивируются. Оптимальным значением pH является 7,5. The authors experimentally established that the enzyme preparation containing the proteolytic complex is most active and stable at pH in the indicated range. At a pH below 5.0 and above 9.5, activity decreases sharply, and at a pH below 3.8 and above 11.2, proteinases are irreversibly inactivated. The optimum pH value is 7.5.

Пример 1. Example 1

Больная М., 60 лет. Диагноз: ожоговое поражение в районе голеностопного сустава площадью 6х9 ом, степень поражения III. Ожоговая поверхность к 8-м суткам инфицировалась с образованием гноя. Лечение начато на 8-й день после поражения. Лечение осуществлялось путем напыления на рану 0,01% водного раствора коллагенолитического природного комплекса, выделенного из пищеварительных органов кальмара, один раз в сутки в течение 3-х дней. В результате лечения санация наступила на вторые сутки, и начался процесс грануляции и эпителизации. Полное заживление раны произошло без образования заметных рубцов. Patient M., 60 years old. Diagnosis: burn lesion in the ankle joint area of 6x9 ohms, degree of damage III. By the 8th day, the burn surface was infected with the formation of pus. Treatment started on the 8th day after the lesion. The treatment was carried out by spraying a 0.01% aqueous solution of a collagenolytic natural complex isolated from the digestive organs of squid onto the wound once a day for 3 days. As a result of treatment, sanitation occurred on the second day, and the process of granulation and epithelization began. Complete wound healing occurred without the formation of visible scars.

Пример 2. Example 2

Больная С., 4 года. Диагноз: обморожение нижней правой конечности в области стопы, площадью 4х6 см, степень поражения II. Лечение мазью на вазелиновой основе, содержащей препарат из гепатопанкреаса краба с концентрацией 0,003%, начато на первый день после поражения. Повязки, пропитанные мазью, меняли ежедневно. Лечебный эффект проявился на третьи сутки - пораженная поверхность очистилась от некротической ткани; на пятый день начался процесс эпителизации. Побочных эффектов и осложнений не наблюдалось. Patient S., 4 years old. Diagnosis: frostbite of the lower right limb in the foot area, an area of 4x6 cm, degree of damage II. Treatment with a vaseline ointment containing a preparation of hepatopancreas crab with a concentration of 0.003%, started on the first day after the lesion. Ointment dressings were changed daily. The therapeutic effect was manifested on the third day - the affected surface was cleansed of necrotic tissue; on the fifth day, the process of epithelization began. Side effects and complications were not observed.

Пример 3. Example 3

Больная П. , 32 года. Диагноз: рваная рана в правой лопаточной области; рана была инфицирована и имела 4 гнойные полости общей площадью 8х3 см и глубиной 3 см и воспалительный вал 20x15 см. В качестве лечебного средства применялся препарат из пищеварительных органов морской звезды. Лечение начато на 5-ый день после образования воспалительного вала. Рану рыхло тампонировали 2 раза в сутки с использованием стерильного 0,025% раствора фермента. После третьего применения началась грануляция. Санация наступила на 4-е сутки после начала лечения ферментным средством, а на 7-й день начался процесс эпителизации. Побочных эффектов не наблюдалось, рана затянулась без образования заметных рубцов. Patient P., 32 years old. Diagnosis: laceration in the right scapular region; the wound was infected and had 4 purulent cavities with a total area of 8x3 cm and a depth of 3 cm and an inflammatory shaft of 20x15 cm. A preparation from the digestive organs of a starfish was used as a therapeutic agent. Treatment started on the 5th day after the formation of the inflammatory shaft. The wound was loosely swabbed 2 times a day using a sterile 0.025% enzyme solution. After the third application, granulation began. Remediation occurred on the 4th day after the start of treatment with the enzyme agent, and on the 7th day the epithelization process began. No side effects were observed, the wound was healed without the formation of noticeable scars.

Пример 4. Example 4

Больная Ф. , 59 лет. Диагноз: диссеминированный псориаз. Поражены левая сторона шеи, плечо и левая верхняя конечность до локтя. Лечение осуществлялось гелем на полисахаридной основе, содержащем 0,03% ферментного препарата из кальмара. Пораженную область смазывали дважды в сутки в течение 5-й дней. На третьи сутки наблюдалось отторжение чешуек и корок, полное очищение кожи произошло на 6-е сутки. Patient F., 59 years old. Diagnosis: disseminated psoriasis. The left side of the neck, shoulder and left upper limb to the elbow are affected. The treatment was carried out with a polysaccharide-based gel containing 0.03% enzyme preparation from squid. The affected area was lubricated twice a day for 5 days. On the third day, rejection of scales and crusts was observed; complete cleansing of the skin occurred on the 6th day.

Пример 5. Example 5

Больная К. , 26 лет. Диагноз: автотравма; вторично-открытый многооскольчатый перелом нижней трети левой голени; применялся чрескостный металлоостеосинтез с помощью аппарата Илизарова. Спустя месяц наблюдалась незаживающая рана голени с дефектом мягких тканей и открытой костью на дне раны, площадью 3х3 см и глубиной около 3-х см, без признаков грануляции, осложненная начальной стадией остеомиелита. После начала лечения (предваренного местной анестезией) заливкой 0,5% водным раствором препарата из пищеварительных органов кальмаров, который вводился в рану ежедневно в течение 4-х суток, одноразово, из расчета 25 мг средства за 1 раз, рана полностью очистилась в течение 4-х дней, дефект мягких тканей быстро заполнился грануляциями, на 6-е сутки начались активная краевая эпителизация и остеосинтез. Patient K., 26 years old. Diagnosis: car accident; secondary open multi-fragmented fracture of the lower third of the left tibia; transosseous metal osteosynthesis was used using the Ilizarov apparatus. A month later, a non-healing wound of the lower leg with a soft tissue defect and open bone at the bottom of the wound was observed, with an area of 3x3 cm and a depth of about 3 cm, with no signs of granulation, complicated by the initial stage of osteomyelitis. After the start of treatment (preceded by local anesthesia) by pouring a 0.5% aqueous solution of the drug from the digestive organs of squid, which was injected into the wound daily for 4 days, once, at the rate of 25 mg of the drug for 1 time, the wound was completely cleaned within 4 days, the soft tissue defect was quickly filled with granulations; on the 6th day, active marginal epithelization and osteosynthesis began.

Пример 6. Example 6

Больной Я., 51 год. Диагноз; термический ожог кисти левой руки III степени, общей площадью 6х9 см, осложненный гнойной инфекцией. Лечение ферментосодержащим средством, полученным из кальмара, начато на 6-й день после поражения. Пораженная зона обрабатывалась средством в виде аморфного порошка, включающего 99,5% активного начала, 1 раз в сутки, в течение 3-х суток из расчета 1 мг/см². Рана очистилась на 4-й день после начала лечения, после чего была проведена хирургическая операция по пересадке кожи.Patient I., 51 years old. Diagnosis; thermal burn of the left hand of the III degree, with a total area of 6x9 cm, complicated by purulent infection. Treatment with an enzyme-containing agent obtained from squid was started on the 6th day after the lesion. The affected area was treated with an agent in the form of an amorphous powder, including 99.5% of the active principle, 1 time per day, for 3 days at the rate of 1 mg / cm ² . The wound cleared on the 4th day after the start of treatment, after which a skin transplant surgery was performed.

Пример 7. Example 7

Больной В., 67 лет. Диагноз: незрелая катаракта левого глаза. Проведена экстрация катаракты по следующей методике. После удаления ядра хрусталика в капсульный мешок с помощью инъекции было введено 0,15 мл 0,001% водного раствора препарата комплекса коллагенолитических протеиназ из краба. Экспозиция составляла 7 минут. Удаление остатков кортикальных масс из капсульного мешка проводилось посредством инстилляции физиологическим раствором. Впоследствии больному была имплантировала искусственная оптическая линза. В послеоперационном периоде осложнений не отмечено, при осмотре через полгода после операции острота зрения составляла 0,8. Patient V., 67 years old. Diagnosis: immature cataract of the left eye. The cataract was extracted according to the following procedure. After removing the lens nucleus, 0.15 ml of a 0.001% aqueous solution of the collagenolytic proteinase complex preparation from the crab was injected into the capsule bag by injection. The exposure was 7 minutes. Removal of cortical mass residues from the capsular bag was carried out by means of instillation with physiological saline. Subsequently, the patient was implanted with an artificial optical lens. In the postoperative period, no complications were noted, when examined six months after the operation, visual acuity was 0.8.

Пример 8. Example 8

Больная И. , 64 года. Диагноз: контрактура Дюпютриена кисти левой руки. Лечение осуществлялось следующим образом. Инъекции производили ежедневно в три наиболее выраженные ладонные тяжа по 0,5 мл 0,03%-ного раствора препарата коллагенолитического комплекса из пищеварительных органов краба (по 0,15 мг препарата на инъекцию). Курс лечения составил 5 дней. Начиная с первого дня лечения пальцы больной фиксировали ладонной шиной в положение максимально возможного безболезненного разгибания. Существенный лечебный эффект был достигнут на 6-е сутки после начала лечения, после чего больной был назначен курс физиотерапии и лечебной физкультуры. Patient I., 64 years old. Diagnosis: Duputrien's contracture of the left hand. The treatment was carried out as follows. Injections were made daily in the three most pronounced palmar strands of 0.5 ml of a 0.03% solution of the preparation of the collagenolytic complex from the digestive organs of the crab (0.15 mg of the drug per injection). The course of treatment was 5 days. Starting from the first day of treatment, the patient's fingers were fixed with the palm splint in the position of the maximum possible painless extension. A significant therapeutic effect was achieved on the 6th day after the start of treatment, after which the patient was prescribed a course of physiotherapy and physiotherapy exercises.

Пример 9. Example 9

Больной Ж., 40 лет. Диагноз: кариозная полость в правом нижнем 6-м зубе. Обследование показало разрушение эмали и верхнего слоя дентина на жевательной поверхности. Дентин стенок и дна полости был темно-коричневого цвета, зондирование полости было безболезненным. В кариозную полость был внесена композиция из ферментного препарата, полученного из пищеварительных органов кальмаров и смоченного водой полисахарида декотрана в качестве носителя. Средство включало 1,0 мг активного начала. После обработки полости она была закрыта временной пломбой. Через сутки временная пломба и остатки композиции были убраны, кариозный дентин после обработки ферментным препаратом легко отслаивался и удалялся зубным экскаватором. Очищенная полость была закрыта постоянной пломбой. Patient J., 40 years old. Diagnosis: carious cavity in the lower right 6th tooth. Examination showed the destruction of enamel and the upper layer of dentin on the chewing surface. The dentin of the walls and bottom of the cavity was dark brown in color, the sounding of the cavity was painless. A composition from an enzyme preparation obtained from the digestive organs of squid and a polysaccharide of decotran moistened with water as a carrier was introduced into the cavity. The tool included 1.0 mg of active principle. After processing the cavity, it was closed with a temporary filling. A day later, a temporary filling and the rest of the composition were removed, carious dentin after treatment with an enzyme preparation was easily peeled off and removed by a dental excavator. The cleaned cavity was closed with a permanent seal.

Пример 10. Example 10

Больной А. , 12 лет. Диагноз: обширная гематома и глубокая ссадина на правом колене общей площадью 12х6 см. После обработки пораженной зоны раствором перекиси водорода, на рану была наложена повязка, пропитанная жидкой мазью, содержащей в качестве носителя композицию из 25%-ного водного раствора диметилсульфоксида и медицинского вазелина и ферментный препарат из пищеварительных органов кальмаров в качестве активного начала из расчета 0,05 мг на кв. см поверхности раны. Повязку меняли ежедневно в течение 5 дней. По окончании курса лечения ссадина затянулась без образования некротической корочки, гематома практически полностью рассосалась. Patient A., 12 years old. Diagnosis: extensive hematoma and deep abrasion on the right knee with a total area of 12x6 cm. After treatment of the affected area with a solution of hydrogen peroxide, a dressing was applied to the wound soaked in a liquid ointment containing, as a carrier, a composition of a 25% aqueous solution of dimethyl sulfoxide and medical vaseline and enzyme preparation from the digestive organs of squid as an active principle at the rate of 0.05 mg per square. see the surface of the wound. The dressing was changed daily for 5 days. At the end of the course of treatment, the abrasion lasted without the formation of a necrotic crust, the hematoma was almost completely resolved.

Пример 11. Example 11

Больной Н., 32 года. Диагноз: огнестрельное ранение мягких тканей верхней трети левого бедра. Рану продезинфицировали и залили 0,05% водным раствором протеолитического комплекса, полученного из кальмаров, а затем наложили тугую стерильную повязку. Через трое суток при перевязке было обнаружено, что дефект мягких тканей начал заполняться грануляциями, на 7-е сутки начались активная краевая эпителизация. Patient N., 32 years old. Diagnosis: gunshot wound of soft tissues of the upper third of the left thigh. The wound was disinfected and filled with a 0.05% aqueous solution of the proteolytic complex obtained from squid, and then a tight sterile dressing was applied. After three days during ligation, it was found that the soft tissue defect began to fill up with granulations, on the 7th day active edge epithelization began.

Пример 12. Example 12

Больной А., 45 лет. Диагноз: химический ожог роговицы и конъюктивы правого глаза (полученный, со слов больного, серной кислотой.) Глаз и веки отечные, конъюктива воспалена, роговица мутная, (помутнение достигало 6 ст. по шкале В. В. Войно-Ясенецкого), ее поверхность эродирована, светоощущение ослаблено. Лечение производилось 0,01% раствором ферментного препарата, полученного из кальмаров, в 0,9% растворе NaCl. Лечение предварялось местной анестезией и сопровождалось (через 3-5 мин) промыванием стерильным физиологическим раствором. Инстилляция ферментосодержащим средством производилась ежедневно одноразово. Через сутки после начала лечения отечность опала, через 3-е суток наступило частичное восстановление светоощущения, плотность помутнения уменьшилась до 4 ст. по шкале В.В.Войно-Ясенецкого. На четвертые сутки произошло купирование признаков, после чего больной был выписан для прохождения реабилитационного курса лечения. Patient A., 45 years old. Diagnosis: chemical burn of the cornea and conjunctiva of the right eye (obtained, according to the patient, with sulfuric acid.) The eye and eyelids are swollen, the conjunctiva is inflamed, the cornea is cloudy, (clouding reached 6 degrees on the scale of V. V. Voino-Yasenetsky), its surface eroded, light perception is weakened. The treatment was carried out with a 0.01% solution of the enzyme preparation obtained from squid in a 0.9% solution of NaCl. The treatment was preceded by local anesthesia and was accompanied (after 3-5 minutes) by washing with sterile saline. The instillation with an enzyme-containing agent was performed once daily. A day after the start of treatment, the swelling of the opal, after 3 days there was a partial restoration of light perception, the turbidity decreased to 4 tbsp. on the scale of V.V. Vojno-Yasenetsky. On the fourth day there was a relief of symptoms, after which the patient was discharged to undergo a rehabilitation course of treatment.

Аналогичным образом средство применялось для лечения острого кератита, конъюктивита и других глазных болезней, сопровождающихся девитализацией тканей. При этом для изготовления глазных капель использовали общеизвестные в офтальмологии носители (например, растворы, применяемые при изготовлении витаминных капель, альбуцида). Срок годности готовой формы определялся сроком годности носителя. Similarly, the drug was used to treat acute keratitis, conjunctivitis, and other eye diseases, accompanied by tissue devitalization. At the same time, carriers commonly known in ophthalmology were used to make eye drops (for example, solutions used in the manufacture of vitamin drops, albucide). The shelf life of the finished form was determined by the shelf life of the carrier.

Возможно применение заявляемого средства для лечения различных заболеваний, связанных с воспалением и изменением структуры тканей, в том числе воспалительных заболеваний костей и суставов (например, артриты), при которых указанный форменный препарат вводится в пораженную зону с помощью инъекций, а также грибковых заболеваний кожи и ногтей. You can use the claimed funds for the treatment of various diseases associated with inflammation and changes in the structure of tissues, including inflammatory diseases of the bones and joints (for example, arthritis), in which the specified uniform drug is injected into the affected area by injection, as well as fungal skin diseases and nails.

При осуществлении лечения указанным ферментным препаратом выбор носителя определяется только медицинскими показаниями и способом введения средства. Ферментное средство может быть выполнено практически в любой фармакологической форме: порошки, пленки, мазь, линимент, гель, раствор для наружного применения (в том числе в виде аэрозоля) или раствор для введения внутрь. В последнем случае раствор может быть введен с помощью инъекции (например, для лечения флегмон и абсцессов) или с помощью лечебного электрофореза (например, при лечении деформированных костей стопы без хирургического вмешательства). When carrying out treatment with the indicated enzyme preparation, the choice of carrier is determined only by medical indications and the route of administration of the drug. The enzyme agent can be performed in almost any pharmacological form: powders, films, ointment, liniment, gel, solution for external use (including in the form of an aerosol) or solution for oral administration. In the latter case, the solution can be administered by injection (for example, for the treatment of phlegmon and abscesses) or using therapeutic electrophoresis (for example, in the treatment of deformed bones of the foot without surgical intervention).

Применение сухого ферментосодержащего средства целесообразно как в случаях обширного или глубокого поражения тканей для ускорения подготовки к хирургическому вмешательству и предотвращения острой интоксикации продуктами распада некротических тканей (например, обширные ожоги, остеомиелит, гангрена), так и в случаях присутствия в пораженной зоне значительного количества влаги (гной, лимфа, компоненты крови и т.д.). The use of a dry enzyme-containing agent is advisable both in cases of extensive or deep tissue damage to accelerate preparation for surgical intervention and prevent acute intoxication by the decay products of necrotic tissues (for example, extensive burns, osteomyelitis, gangrene), and in cases of the presence of a significant amount of moisture ( pus, lymph, blood components, etc.).

При изготовлении сухого ферментосодержащего средства в качестве приемлемого носителя используются общеизвестные фармакологические разрыхлители, сорбенты, связующие вещества и т.д. В отдельных случаях, когда необходима максимально возможная концентрация активного начала в ферментосодержащем средстве, в качестве приемлемого носителя используют связующие вещества, содержащиеся в исходном сырье (пищеварительных органах гидробионтов) и являющиеся природными стабилизаторами активного начала. In the manufacture of a dry enzyme-containing product, well-known pharmacological disintegrants, sorbents, binders, etc. are used as an acceptable carrier. In some cases, when the maximum possible concentration of the active principle in an enzyme-containing agent is needed, binders contained in the feedstock (digestive organs of aquatic organisms) and which are natural stabilizers of the active principle are used as an acceptable carrier.

Авторами экспериментально установлено, что при концентрации носителя - природного стабилизатора активного начала - в заявляемом средстве ниже 0.5% эффективность средства существенно снижается, что является следствием частичной дестабилизации комплекса коллагенолитических протеиназ. The authors experimentally found that when the concentration of the carrier — the natural stabilizer of the active principle — in the claimed agent is lower than 0.5%, the effectiveness of the agent decreases significantly, which is a consequence of the partial destabilization of the complex of collagenolytic proteinases.

Заявляемое средство может быть изготовлено промышленным способом и реализовано через аптечную сеть. The inventive tool can be manufactured industrially and implemented through a pharmacy network.

Средство применимо для лечения людей и животных, при этом концентрация активного начала подбирается в зависимости от чувствительности обрабатываемых тканей и степени их поражения. The tool is applicable for the treatment of people and animals, while the concentration of the active principle is selected depending on the sensitivity of the treated tissues and the degree of their damage.

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ ИСТОЧНИКИ
1. АС СССР 1121005, МКИ A 61 K 37/48.USED SOURCES
1. AS of the USSR 1121005, MKI A 61 K 37/48.

2. АС СССР 1617705, МКИ A 61 K 35/56. 2. USSR AS 1617705, MKI A 61 K 35/56.

3. Патент РФ 2008866, МКИ A 61 F 9/00. 3. RF patent 2008866, MKI A 61 F 9/00.

4. Патент РФ 2074709, МКИ A 61 K 9/06. 4. RF patent 2074709, MKI A 61 K 9/06.

5. Bond J. S and Beynon R.J. Proteolysis and Physiological Regulation. -USA- "Molecular aspects of medicine", 1987, V. 9 (3), p. 175-287. 5. Bond J. S and Beynon R.J. Proteolysis and Physiological Regulation. -USA- "Molecular aspects of medicine", 1987, V. 9 (3), p. 175-287.

6. Патент РФ 2014086. МКИ A 61 L 15/12 (прототип). 6. RF patent 2014086. MKI A 61 L 15/12 (prototype).

7. Сахаров И. К. и др. Очистка и характеристика коллагенолитической протеазы A из гепатопанкреаса PARALITHODES CAMTSCHATICA. ж.л. Биохимия, 1988, Т. 53, вып. 11, 1844 стр. 7. Sakharov IK and others. Purification and characterization of collagenolytic protease A from hepatopancreas PARALITHODES CAMTSCHATICA. W.L. Biochemistry, 1988, vol. 53, no. 11, 1844 pp.

8. Klimova О. A. , et al. Isolation and purification of collagenolytic proteases from crab hepatopancreas. - Biochemical Biophysioal Research Communication, 1990, Vol. 166, N.3, P. 1411-1420. 8. Klimova O. A., et al. Isolation and purification of collagenolytic proteases from crab hepatopancreas. - Biochemical Biophysioal Research Communication, 1990, Vol. 166, N.3, P. 1411-1420.

Claims

1. A therapeutic agent for the treatment of diseases accompanied by changes in tissue structure or inflammatory or purulent-necrotic processes, containing an active principle, having proteolytic activity and obtained from the digestive organs of aquatic organisms, as well as an acceptable carrier, characterized in that the complex is used as the indicated active principle collagenolytic proteinases, including serine collagenolytic proteinases, metalloproteinases and proteinases with alanines at the N-terminus with a mol.m. 10 to 40 kilodaltons in the following ratio of components, wt.%:
Collagenolytic proteinase complex - 0.001 - 99.5
Acceptable Media - Other
2. The therapeutic agent according to claim 1, characterized in that as the specified complex of proteinases, a complex isolated from the digestive organs of crustaceans, mollusks, echinoderms and intestinal cavities is used.

3. The therapeutic agent according to claim 1, characterized in that the generally acceptable pharmacological non-protein bases and pharmacological solvents with a pH of 5.0 to 9.5 are used as an acceptable carrier.

4. The therapeutic agent according to claim 3, characterized in that liquid and viscous substances are used as an acceptable carrier in the following ratio of components, wt.%:
Collagenolytic proteinase complex - 0.001 - 10
Acceptable Media - Other