RU2146528C1 - Modulator of cellular immunity - Google Patents
Modulator of cellular immunity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2146528C1 RU2146528C1 RU97103487A RU97103487A RU2146528C1 RU 2146528 C1 RU2146528 C1 RU 2146528C1 RU 97103487 A RU97103487 A RU 97103487A RU 97103487 A RU97103487 A RU 97103487A RU 2146528 C1 RU2146528 C1 RU 2146528C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extract
- leaves
- calendula
- plantain
- plants
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинe, а конкретно к фармакологии, к классу препаратов, воздействующих на иммунную систему. The invention relates to medicine, and specifically to pharmacology, to a class of drugs that affect the immune system.
К иммуномодуляторам относят только те вещества, которые специфически воздействуют на систему клеточного или гуморального иммунитета в целом, причем это воздействие не является только фоном или одним из результатов общего воздействия на организм (как у многих адаптогенов, тонизирующих, антисептических и других средств). Immunomodulators include only those substances that specifically affect the system of cellular or humoral immunity in general, and this effect is not only a background or one of the results of a general effect on the body (like many adaptogens, tonic, antiseptic and other drugs).
Иммунная система человека постоянно является объектом пристального изучения и переосмысления новых знаний. Принято различать гуморальный (определяемый циркулирующими в крови антителами и уровнем их продукции) и клеточный (определяемый составом отдельных субпопуляций лимфоцитов и их функциональной активностью) иммунитет. The human immune system is constantly the subject of close study and rethinking of new knowledge. It is customary to distinguish between humoral (determined by circulating antibodies in the blood and the level of their production) and cellular (determined by the composition of individual subpopulations of lymphocytes and their functional activity) immunity.
Механизмы клеточного иммунитета изучены не полностью, однако во всяком случае известно, что клетки-медиаторы иммунного ответа способны к многообразным реакциям при взаимодействии с различными антигенами; они включают размножение клонов клеток со специфической чувствительностью к данному антигену, образование и размножение клеток, осуществляющих разнообразные иммунные функции, включая продукцию антител и реакции против чужеродных клеток, в том числе опухолевых. The mechanisms of cellular immunity are not fully understood, but in any case it is known that mediator cells of the immune response are capable of diverse reactions when interacting with various antigens; they include the propagation of cell clones with specific sensitivity to a given antigen, the formation and propagation of cells that perform a variety of immune functions, including the production of antibodies and reactions against foreign cells, including tumor cells.
Качественные и количественные характеристики ответа зависят от многих факторов, включая гормоны тимуса и надпочечников, интерферонов и других медиаторов клеточного ответа, таких как гистамин, серотонин, простагландины. The qualitative and quantitative characteristics of the response depend on many factors, including the hormones of the thymus and adrenal glands, interferons and other mediators of the cellular response, such as histamine, serotonin, prostaglandins.
В соответствии с изложенным и сами иммуномодуляторы принято подразделять на модуляторы клеточного гуморального ответа. In accordance with the foregoing, immunomodulators themselves are usually subdivided into modulators of the cellular humoral response.
Для полноты взгляда упомянем наиболее известные иммуномодуляторы животного происхождения, получаемые при экстракции и концентрировании тканевых культуральных жидкостей, состоящих из стимулированных митогенами лимфоидных или миелоидных клеток животных или человека. Это иммуномодуляторы, относящиеся к одной из трех групп: интерфероны, интерлейкины, кортикостероиды и лейкотриены. For completeness, we mention the most famous immunomodulators of animal origin obtained by extraction and concentration of tissue culture fluids consisting of mitogen-stimulated lymphoid or myeloid cells of animals or humans. These are immunomodulators belonging to one of three groups: interferons, interleukins, corticosteroids and leukotrienes.
В настоящее время все большее внимание уделяется препаратам растительного происхождения. Большие традиции в лечении травами, вытяжками грибов и растениями имеются в тибетской медицине, Китае, Японии и Корее, в народной медицине вообще. Currently, more and more attention is paid to herbal preparations. Great traditions in the treatment of herbs, extracts of mushrooms and plants are found in Tibetan medicine, China, Japan and Korea, in traditional medicine in general.
Из растений, обладающих общим воздействием на организм, затрагивающих иммунную систему, наиболее изучены иммуностимулирующие свойства известных адаптогенов, таких как женьшень, элеутероккок, китайский лимонник, родиола розовая. Of the plants that have a general effect on the body and affect the immune system, the most studied are the immunostimulating properties of known adaptogens such as ginseng, eleutherococcus, Chinese magnolia vine, and Rhodiola rosea.
Водные и водно-спиртовые экстракты этих растений, полученные по традиционным хорошо разработанным методикам, однако, далеко не всегда можно назвать иммуномодуляторами, только, возможно, указав какие-либо дополнительные их характеристики, при которых будет доказано, что иммунная реакция есть прямое следствие их воздействия непосредственно на иммунную систему. Water and water-alcohol extracts of these plants, obtained by traditional well-developed methods, however, it is far from always possible to call immunomodulators, only possibly indicating any additional characteristics of them that will prove that the immune response is a direct consequence of their effects directly to the immune system.
Поэтому для характеристики подобных иммуномодуляторов на основе известных компонентов наравне с традиционными характеристиками могут быть использованы новые выявленные "нетрадиционные" характеристики. Therefore, to characterize such immunomodulators based on known components, along with traditional characteristics, new identified "non-traditional" characteristics can be used.
Известны иммуномодуляторы клеточного иммунитета на основе растительного сырья, представляющие собой их водные и/или водно-спиртовые экстракты:
растения рода Buxacea (PCT N 95/23606);
растения рода Epimeduim violaceum Morr. et decne (PCT 82/03771);
растения рода Gymnospermae, Monocotyledoneae, Dicotyledoneae, Algae, Fungi (EBP пат. 0384798);
мицелий гриба Coriolus versikalov Lentinus edodes Ganoderma lucidum Ganoderma applanatum (Купин В.И. Назад в будущее, М., 111 с.) и др.Known immunomodulators of cellular immunity based on plant materials, representing their aqueous and / or aqueous-alcoholic extracts:
plants of the genus Buxacea (PCT N 95/23606);
plants of the genus Epimeduim violaceum Morr. et decne (PCT 82/03771);
plants of the genus Gymnospermae, Monocotyledoneae, Dicotyledoneae, Algae, Fungi (EBP Pat. 0384798);
mycelium of the fungus Coriolus versikalov Lentinus edodes Ganoderma lucidum Ganoderma applanatum (Kupin V.I. Back to the future, M., 111 pp.) and others.
Любой из указанных аналогов может быть принят за прототип. Any of these analogues can be taken as a prototype.
Однако имеется настоятельная задача поиска новых эффективных иммуномодуляторов из отечественного природного сырья как широкого профиля, так и для лечения определенных заболеваний, различающихся по типу воздействия на иммунную систему, в частности поиск иммуномодуляторов клеточного ответа. However, there is an urgent task of finding new effective immunomodulators from domestic natural raw materials both of a wide profile and for the treatment of certain diseases that differ in the type of effect on the immune system, in particular, the search for immunomodulators of the cellular response.
Задача решается тем, что предлагается модулятор клеточного иммунитета, представляющий собой водный экстракт растительного сырья, отличием которого является то, что водный экстракт получен из смеси растений: свежих листьев герани (Geranium), сухих листьев подорожника (Plantago) и календулы (Calendula), взятых в следующих соотношениях, вес. ч.:
Герань - 30 - 40
Подорожник - 1 - 5
Календула - 1 - 5
Вода - 300,
при этом сухой остаток экстракта составляет не менее 4,5 мг/мл, экстракт ингибирует на 50% пролиферацию делящихся клеток в разведении не менее чем 1: 50 и повышает в разведении 1:200 цитотоксическую активность T-лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов не менее чем на 20%.The problem is solved by the fact that a modulator of cellular immunity is proposed, which is an aqueous extract of plant materials, the difference of which is that the aqueous extract is obtained from a mixture of plants: fresh leaves of geranium (Geranium), dry leaves of plantain (Plantago) and calendula (Calendula) taken in the following proportions, weight. hours:
Geranium - 30 - 40
Plantain - 1 - 5
Calendula - 1 - 5
Water - 300,
the dry residue of the extract is at least 4.5 mg / ml, the extract inhibits by 50% the proliferation of dividing cells in a dilution of not less than 1: 50 and increases in a dilution of 1: 200 cytotoxic activity of T-lymphocytes, monocytes, neutrophils not less than by 20%.
Экстракт получают путем настаивания смеси указанных растений при температуре 15-25oC в течение 3-15 дней, после чего экстракт фильтруют, стерилизуют и хранят при температуре 4oC.The extract is obtained by infusing a mixture of these plants at a temperature of 15-25 o C for 3-15 days, after which the extract is filtered, sterilized and stored at 4 o C.
Используемые для экстракции растения хорошо известны. Водные настои герани используют в медицине для восстановления и повышения работоспособности как растение, обладающее успокаивающим запахом (Иванченко В.А. Растения и работоспособность.- М.: Знание, 1984 г.). Водные настои календулы и подорожника применяются в сборах и самостоятельно для лечения и профилактики многих заболеваний, таких как аритмия, блефарит, гепатит, гипертоническая болезнь, стоматит, тромбофлебит (календула), дерматит, дизентерия (подорожник), мозоли, ожоги, ранозаживление (календула, подорожник) и др. (Лекарственные растения в научной и народной медицине, Саратов: изд-во Саратовского университета, 1967 г.). Plants used for extraction are well known. Water extracts of geraniums are used in medicine to restore and increase working capacity as a plant with a soothing smell (Ivanchenko V.A. Plants and working capacity.- M .: Knowledge, 1984). Water infusions of calendula and plantain are used alone and for the treatment and prevention of many diseases, such as arrhythmia, blepharitis, hepatitis, hypertension, stomatitis, thrombophlebitis (calendula), dermatitis, dysentery (plantain), corns, burns, wound healing (calendula, plantain) and others (Medicinal plants in scientific and folk medicine, Saratov: Saratov University Press, 1967).
Указанная совокупность признаков является существенной и ранее не описанной. В частности, положительный результат достигается только при использовании свежесобранных листьев герани. The specified set of features is significant and not previously described. In particular, a positive result is achieved only when using freshly picked geranium leaves.
Неожиданно было установлено также, что вышеуказанные характеристики патентуемых составов являются их интегральными показателями качества и однозначно связаны с проявлением ими целевых свойств иммуномодуляторов. Поясним это. It was also unexpectedly found that the above characteristics of patentable compositions are their integral quality indicators and are uniquely associated with their manifestation of the target properties of immunomodulators. Let us explain this.
Иммунный ответ могут вызывать или запускать различные клетки иммунной системы, однако для данной смеси лекарственного сырья заявитель установил, что препарат будет активен in vivo, если в опытах in vitro он будет активировать цитотоксическую активность T-лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов (см. фиг. 1). Various cells of the immune system can elicit or trigger an immune response, however, for this mixture of medicinal raw materials, the applicant has determined that the drug will be active in vivo if it will activate the cytotoxic activity of T-lymphocytes, monocytes and neutrophils in vitro experiments (see Fig. 1 )
Эмпирически было установлено также, что активные препараты должны проявлять неспецифическую цитотоксическую активность (ингибируют пролиферацию делящихся клеток) в разведении не менее чем 1:50 (IC50 - 1:50) (фиг. 2), при этом сухой остаток экстрактов должен составлять не менее чем 4,5 мг/мл. It was also empirically found that active preparations should exhibit non-specific cytotoxic activity (inhibit the proliferation of dividing cells) in a dilution of not less than 1:50 (IC50 - 1:50) (Fig. 2), while the dry residue of the extracts should be at least 4.5 mg / ml.
Активаторная активность в отношении клеток иммунной системы оценивалась с использованием известных методик, описанных в (J.Immunol. Meth. 1984, 68, 205-211; 1988, 108, 255-264; 1979, 29, 17-22; Scand. J.Clin Lab. Invest., 1968, 21 (Suppl. 97), 51-71), а неспецифическая цитотоксичность измерялась по методике (Cancer Res. 1988, 48, 589-601). The activator activity against cells of the immune system was evaluated using known methods described in (J. Immunol. Meth. 1984, 68, 205-211; 1988, 108, 255-264; 1979, 29, 17-22; Scand. J. Clin Lab. Invest., 1968, 21 (Suppl. 97), 51-71), and nonspecific cytotoxicity was measured by the method (Cancer Res. 1988, 48, 589-601).
Для всех заявленных препаратов была получена острая токсичность для животных при в/б введении. Для этого препарат вводили в различных дозах и оценивали выживаемость животных через 24 ч. Было установлено, что LD50/24 лежит в диапазоне 5,5-28 мл/кг, следовательно, по классификации ВОЗ экстракты относятся к нетоксичным веществам.For all the claimed preparations, acute toxicity to animals was obtained with i.v. administration. For this, the drug was administered in various doses and the survival of animals was evaluated after 24 hours. It was found that LD 50/24 lies in the range 5.5-28 ml / kg, therefore, according to the WHO classification, the extracts are classified as non-toxic substances.
Способ получения экстракта иллюстрируется следующими примерами. The method of obtaining the extract is illustrated by the following examples.
Пример 1. Приготовление растительного экстракта. Example 1. Preparation of a plant extract.
В стеклянный сосуд вносят 360 г свежих листьев Geranium robertanium, 25 г сухих листьев Plantago lanceolata, 25 г сухих листьев Calendula officinales, и 3 л воды. 360 g of fresh leaves of Geranium robertanium, 25 g of dry leaves of Plantago lanceolata, 25 g of dry leaves of Calendula officinales, and 3 l of water are added to a glass jar.
Герметически закрыв сосуд, настаивают листья в течение 8 дней при комнатной температуре (около 23oC), при одно- или многократных ежедневных помешиваниях.Hermetically closing the vessel, the leaves are insisted for 8 days at room temperature (about 23 o C), with single or multiple daily stirring.
По окончании мaцерации смесь отжимают и полученный водный раствор подвергают центрифугированию, а затем фильтрованию через фильтр 0,22 мкм и бактериологическому контролю. After maceration, the mixture is squeezed out and the resulting aqueous solution is subjected to centrifugation, and then filtered through a 0.22 μm filter and bacteriological control.
При этом состав характеризуется следующими характеристиками:
1) сухой остаток составляет 4,5 мг/мл;
2) экстракт ингибирует пролиферацию опухолевых клеток человека различных линий (QOS, Im9, SKOV3, SKVLB и др.) и нормальных стимулированных митогенами лимфоцитов в разведении 1:10-1:50;
3) повышает цитотоксическую активность T-лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов в соотношении мишень:эффектор 1:20 на 50-100% при разведении экстракта 1:200.In this case, the composition is characterized by the following characteristics:
1) the dry residue is 4.5 mg / ml;
2) the extract inhibits the proliferation of human tumor cells of various lines (QOS, Im9, SKOV3, SKVLB, etc.) and normal mitogen-stimulated lymphocytes at a dilution of 1: 10-1: 50;
3) increases the cytotoxic activity of T-lymphocytes, monocytes, neutrophils in the ratio of target: effector 1:20 by 50-100% with a dilution of the extract 1: 200.
Приготовленный таким способом растительный экстракт хранится при температуре 4oC.Prepared in this way, the plant extract is stored at a temperature of 4 o C.
Пример 2. Готовят растительный экстракт согласно примеру 1, но соотношение растительных компонентов при этом составляет 300:10:10 соответственно. Экстракцию проводили при температуре 15oC в течение 3 дней.Example 2. Prepare a plant extract according to example 1, but the ratio of plant components in this case is 300: 10: 10, respectively. The extraction was carried out at a temperature of 15 o C for 3 days.
При этом состав характеризуется следующими характеристиками:
1) cухой остаток составляет 4,6;
2) экстракт ингибирует пролиферацию клеток в разведении 1:50;
3) повышает цитотоксическую активность T-лимфоцитов, моноцитов, нейтрофилов в соотношении мишень:эффектор 1:10 при разведении 1:200 на 75%.In this case, the composition is characterized by the following characteristics:
1) the dry residue is 4.6;
2) the extract inhibits cell proliferation at a dilution of 1:50;
3) increases the cytotoxic activity of T-lymphocytes, monocytes, neutrophils in the ratio of target: effector 1:10 with a dilution of 1: 200 by 75%.
Пример 3. Приготовление растительного экстракта то же, что и в примере 1, однако соотношение компонентов составляет 400:50:50, экстракцию проводят при 25oC в течение 15 дней.Example 3. The preparation of the plant extract is the same as in example 1, however, the ratio of the components is 400: 50: 50, the extraction is carried out at 25 o C for 15 days.
Измеряемые свойства следующие:
1) 4,7;
2) 1:40;
3) активация происходила при соотношении мишень:эффектор 1:10 - 1:40 при разведении экстракта 1:200 на 38%.The measured properties are as follows:
1) 4.7;
2) 1:40;
3) activation occurred at a ratio of target: effector 1:10 - 1:40 when the dilution of the extract 1: 200 by 38%.
Пример 4. Иммуномодулирующие свойства экстрактов, полученных по примерам 1-3. Example 4. Immunomodulating properties of the extracts obtained in examples 1-3.
Иммуномодулирующие свойства полученных экстрактов оценивались по общепринятой методике, заключающейся в предварительном воздействии препаратом на здоровых животных и оценке устойчивости действия иммунной системы организма после повреждающего воздействия. С этой целью препараты вводили мышам линии BALB/c (10 мышей в каждой группе и в контроле) ежедневно в течение трех недель, в/ж, 8 раз в день по 0,05 мл. После этого введение препарата прекращали. Затем контрольным и опытным животным вводили суспензию опухолевых клеток линии Sp 2/0 подкожно в область спины (0,5 млн в 0,1 мл). За развитием опухолей наблюдали в течение 90 суток. Результаты представлены в таблице. The immunomodulatory properties of the obtained extracts were evaluated according to the generally accepted method, which consists in the preliminary exposure of the drug to healthy animals and assessment of the stability of the immune system after a damaging effect. To this end, the preparations were administered to BALB / c mice (10 mice in each group and in the control) daily for three weeks, i./., 8 times a day, 0.05 ml. After this, the administration of the drug was stopped. Then, the control and experimental animals were injected with a suspension of tumor cells of the Sp 2/0 line subcutaneously into the back (0.5 million in 0.1 ml). The development of tumors was observed for 90 days. The results are presented in the table.
Контроль N 1 и N 2 (см. таблицу) представляют собой составы, полученные по предлагаемой рецептуре, однако их свойства составляют соответственно следующие величины: сухие остатки 3,5 и 2,4 мг/мл, неспецифическая токсичность наблюдалась только в разведении 1:10 и отсутствовала уже при разведении 1: 20, препараты оказались неактивными in vitro в отношении указанных клеток иммунной системы при разведении 1:50, 1:100 и 1:200.
Данные таблицы свидетельствуют о высокой противоопухолевой эффективности профилактического введения препаратов по предлагаемому изобретению, причем необходимо отметить, что заявителем были изучены более 50 различных рецептур по предлагаемому изобретению, при этом наблюдалась полная корреляция заявляемых параметров экстрактов с иммуномодулирующими свойствами, наблюдаемыми in vivo. These tables indicate a high antitumor efficacy of the prophylactic administration of the preparations according to the invention, it should be noted that the applicant has studied more than 50 different formulations according to the invention, while there was a complete correlation of the claimed parameters of the extracts with immunomodulating properties observed in vivo.
Предполагается, что новый экстракт может быть использован как иммуномодулятор широкого профиля, однако одна из наиболее перспективных областей его использования является онкология, т.к. патентуемый состав показал также свою иммуномодулирующую активность на животных и добровольцах на некоторых видах уже развившихся опухолей в виде ингибирования их развития и остановке роста. It is assumed that the new extract can be used as a broad-profile immunomodulator, however, one of the most promising areas of its use is oncology, as The patented composition also showed its immunomodulatory activity in animals and volunteers on some types of already developed tumors in the form of inhibition of their development and growth arrest.
Claims (1)
Свежие листья герани - 30 - 40
Сухие листья подорожника - 1 - 5
Календула - 1 - 5
Вода - 300A cellular immunity modulator, which is an aqueous extract of plant materials, characterized in that the aqueous extract is obtained from a mixture of plants: fresh leaves of geranium (Geranium), dry leaves of plantain (Plantago) and calendula (Calendula), taken in the following proportions, parts by weight :
Fresh geranium leaves - 30 - 40
Dry plantain leaves - 1 - 5
Calendula - 1 - 5
Water - 300
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97103487A RU2146528C1 (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Modulator of cellular immunity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97103487A RU2146528C1 (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Modulator of cellular immunity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU97103487A RU97103487A (en) | 1999-03-27 |
| RU2146528C1 true RU2146528C1 (en) | 2000-03-20 |
Family
ID=20190570
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97103487A RU2146528C1 (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Modulator of cellular immunity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2146528C1 (en) |
-
1997
- 1997-03-14 RU RU97103487A patent/RU2146528C1/en not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100605292B1 (en) | Active fraction having anti-cancer and anti-metastasis isolated from acanthopanax species and fruits | |
| Law et al. | Influence of thymosin on immunological competence of lymphoid cells from thymectomized mice | |
| WO2011019239A2 (en) | Composition containing a natural extract | |
| JPH09110710A (en) | Dermal preparation for external use and bathing agent | |
| JP2009538871A (en) | Walnut isolated extract, its acquisition and use | |
| JPH09157176A (en) | Antiallergic agent containing extract of hypericum erectum thunb. and tilia miqueliana maxim. | |
| DE60304447T2 (en) | Herbal composition with Angelica gigantis, Cnidium officinale and Paeonia japonica | |
| JP2022049690A (en) | Novel aureobasidium pullulans strain and use thereof | |
| KR20130078052A (en) | Antibacterial compositions containing plant extracts or fractions thereof under light intensity | |
| CN112190593A (en) | Polysaccharide composition for inhibiting TRPV1 pathway and preparation method and application thereof | |
| CN113278535A (en) | New ganoderma lucidum strain ZL167 and new application thereof | |
| KR101468819B1 (en) | Antibacterial compositions containing Ficus carica L extracts or fractions thereof under light intensity | |
| KR102348776B1 (en) | Cosmetic composition comprising colocasia esculenta biorenovate extract and method of preparing the same | |
| RU2146528C1 (en) | Modulator of cellular immunity | |
| KR102517881B1 (en) | A cosmetic composition for promoting skin beneficial bacteria | |
| KR102477052B1 (en) | Skin external composition containing a proteinpolysaccharide or oligo collagen peptide derived from an inula flower and the method for preparing the same | |
| KR20200082813A (en) | Cosmetic and pharmaceutical compositin comprising sasa quelpaertensis extract and urea | |
| TWI555529B (en) | A use of an herbal extract for manufacturing drugs against liver cancer | |
| KR100373776B1 (en) | A Composition for Cosmetics | |
| DE4138624A1 (en) | EXTRACT FROM A MIXTURE OF PLANT PARTS AND METHOD FOR OBTAINING THE EXTRACT AND MEDICAMENT COMPRISING THEREOF | |
| Sinaga et al. | Immunostimulatory activity from pirdot leaves ethanolic extract (saurauia vulcani korth.) in rats (Rattus norvegicus) | |
| KR20170040659A (en) | Composition comprising fermented extract of Halophilic microorganism | |
| KR20190119020A (en) | A composition for anti-inflammation comprising hemistepta lyrata extract | |
| Zong-zhu et al. | Inhibitory effect of boschniakia rossica on den-induced precancerous hepatic foci and its antioxidative activities in rats | |
| DE69120529T2 (en) | SUPPORTIVE USE OF LINOMIDE (R) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100315 |