RU2139083C1 - Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку - Google Patents
Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку Download PDFInfo
- Publication number
- RU2139083C1 RU2139083C1 RU98100518A RU98100518A RU2139083C1 RU 2139083 C1 RU2139083 C1 RU 2139083C1 RU 98100518 A RU98100518 A RU 98100518A RU 98100518 A RU98100518 A RU 98100518A RU 2139083 C1 RU2139083 C1 RU 2139083C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fetoprotein
- concentration
- followed
- alpha
- centrifuged
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims description 12
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 13
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 10
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 claims description 23
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 6
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 2,3,7,8-tetrachloro-dibenzo-p-dioxin Chemical compound O1C2=CC(Cl)=C(Cl)C=C2OC2=C1C=C(Cl)C(Cl)=C2 HGUFODBRKLSHSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 11
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 abstract description 10
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract description 8
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract description 8
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 abstract description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 abstract description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 101000848653 Homo sapiens Tripartite motif-containing protein 26 Proteins 0.000 description 3
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 3
- 102000046101 human AFP Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034423 Delivery Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000827785 Homo sapiens Alpha-fetoprotein Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000728 Thymus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000009925 apoptotic mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N doxorubicine Natural products O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 201000001514 prostate carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 201000009377 thymus cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области химии белка и к медицине, в частности к онкологии, и может найти применение при химиотерапии онкологических пациентов. Ретроплацентарную или абортивную сыворотку подвергают тестированию, замораживанию. Размораживают перед началом выделения альфа-фетопротеина и центрифугируют, к надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сульфата аммония до 30%-ного насыщения. Повторно центрифугируют, добавляют к надосадочной жидкости сухой сульфат аммония до 70%-ного насыщения, центрифугируют. Полученный осадок растворяют в 10 мМ раствора фосфата натрия с рН 7,3, диализуют, центрифугируют и очищают с помощью аффинной, ионообменной и гельпроникающей хроматографий с последующей концентрацией очищенного альфа-фетопротеина до 1,5-5,0 мг/мл. Проводят конъюгацию альфа-фетопротеина с концентрацией 1,5-2,0 мг/мл и 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина, растворенного в диоксане с последующим добавлением маннита до 5%, лиофильным высушиванием, герметичной упаковкой и хранением при -70°С. Технический результат: повышение эффективности подавления роста раковых клеток гормон-зависимых органов и тканей.
Description
Изобретение относится к области химии белка и к медицине, в частности к онкологии и может найти применение при химиотерапии онкологических пациентов, страдающих злокачественными новообразованиями гормон-чувствительных органов.
Гормон-зависимые опухоли занимают существенную долю по количеству случаев среди злокачественных новообразований человека. Наиболее распространенными формами среди них являются рак молочной железы, яичника, матки и предстательной железы. Реже в клинической практике встречаются рак печени и вилочковой железы. Лечение гормон-зависимых опухолей часто оперативное. Однако во многих случаях из-за поздней диагностики и распространенности опухолевого процесса помимо хирургического лечения показаны лучевая и химиотерапия.
Успех лекарственной терапии во многом зависит от избирательного цитостатического/цитотоксического воздействия противоопухолевых препаратов на раковые клетки. Онкофетальный белок сыворотки крови человека α-фетопротеина (АФП) используется для этих целей уже относительно давно. Известно свойство АФП избирательно проникать в опухолевые клетки, имеющие рецепторы к этому белку; при этом нормальные клетки взрослого организма практически неспособны поглощать АФП (1, 2). Впервые АФП был использован для адресной доставки цитостатика дауномицина доктором Дейчем (3). В России в Онкологическом научном центре им. Блохина (г. Москва) успешно заканчивается II фаза клинических испытаний противоопухолевого препарата на основе АФП человека (используется в качестве транспортного белка) и ковалентного комплекса доксорубицин-эстрон (используется в качестве цитостатика) (4).
Наиболее близким является получение препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку (5), предусматривающий обработку фетального биологического материала путем его измельчения, экстракции бутиловым спиртом, диализа экстракта против 0,05 М раствора NaCl и концентрации экстракта до содержания альфа-фетопротеина 100 мкг/мл; после чего концентрат стерилизуют. Затем подвергают конъюгации противоопухолевого лекарства - доксорубицин с лигандом-эстроном. Проводят прединкубацию обработанного биологического материала с конъюгатом.
Техническим результатом предлагаемого способа является повышение эффективности подавления роста раковых клеток гормон-зависимых органов и тканей.
Для достижения указанного технического результата в способе получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку путем обработки фетального биологического материала человека, содержащего альфа-фетопротеин, химической конъюгации с противоопухолевым лекарством и инкубации конъюгата, согласно изобретению, в качестве фетального биологического материала используют ретроплацентарную или абортивную сыворотку, подвергают ее тестированию, замораживанию и хранению до использования при температуре -70oC, размораживают ее непосредственно перед началом выделения альфа-фетопротеина в течение 10-12 часов при +4oC, центрифугируют, к охлажденной надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сульфата аммония до 30%-ого насыщения с последующим выдерживанием при этой температуре до формирования осадка, повторно центрифугируют, полученный осадок растворяют в 10 мМ раствора фосфата натрия с pH 7,3, а раствор диализуют против 10 мМ фосфатного буфера, центрифугируют и очищают с помощью аффинной, ионообменной и гельпроникающей хроматографий с последующим концентрированием очищенного альфа-фетопротеина до 1,5-5,0 мг/мл, при этом в качестве противоопухолевого лекарства используют 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин, предварительно растворенный в диоксане до концентрации 0,8-0,9 мг/мл, причем конъюгацию альфа-фетопротеина с концентрацией 1,5-2,0 мг/мл, и 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин, растворенного в диоксане, проводят путем инкубирования в течение 1-6 часов при 20-35oC при концентрации диоксана не более 5 объемных процентов с последующим добавлением маннита до 5% в качестве стабилизатора, лиофильным высушиванием, герметичной упаковкой в атмосфере инертного газа и хранением до использования при -70oC.
При необходимости альфа-фетопротеин лиофильно высушивают, герметично упаковывают в атмосфере инертного газа и хранят до использования при -70oC.
Изобретение поясняется на следующем примере.
Пример. Для подавления роста раковых клеток гормон-зависимых органов и тканей, для избирательного воздействия на раковые клетки в качестве транспортного белка используют альфа-фетопротеин человека, а в качестве цитотоксического агента (противоопухолевого лекарства) - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин (ТХДД).
ТХДД представляет собой одно из самых токсичных химических соединений, когда-либо созданных человеком (6-8). Относительно недавно открыто свойство ТХДД убивать клетки по апоптотическому механизму (запрограммированная гибель клетки, PCD) (9, 10). В наибольшей степени апоптотическое действие ТХДД проявляется на клетках из зависимых от гормонов органов и тканей. В первую очередь это относится к молочной железе, тимусу, яичникам, яичкам, предстательной железе (10-13). Обнаружено, что ТХДД обладает in vitro и in vivo ярко выраженной цитотоксической активностью по отношению к клеткам рака молочной железы и яичника человека (14-16). Однако до недавнего времени не были решены две главные проблемы, связанные с клиническим использованием ТХДД:
1) увеличения растворимости ТХДД в водных растворах (ТХДД является высоко гидрофобным соединением с растворимостью в воде - 19 нг/л, что делает невозможным его системное применение);
2) избирательного воздействия ТХДД на клетки-мишени (введение ТХДД в организм стандартным способом приводит на фоне выраженной противоопухолевой активности к возникновению множественных системных токсических реакций).
1) увеличения растворимости ТХДД в водных растворах (ТХДД является высоко гидрофобным соединением с растворимостью в воде - 19 нг/л, что делает невозможным его системное применение);
2) избирательного воздействия ТХДД на клетки-мишени (введение ТХДД в организм стандартным способом приводит на фоне выраженной противоопухолевой активности к возникновению множественных системных токсических реакций).
Нами было обнаружено, что АФП человека при определенных условиях способен эффективно связывать ТХДД. В результате образуется нековалентный конъюгат АФП-ТХДД (молярное отношение 1:2). Создание этого конъюгата позволило решить две главные задачи:
1) увеличить растворимость ТХДД в водных средах примерно в 5000 раз по сравнению со свободным ТХДД;
2) значительно повысить селективное воздействие ТХДД на клетки мишени за счет использования АФП в качестве транспортного белка.
1) увеличить растворимость ТХДД в водных средах примерно в 5000 раз по сравнению со свободным ТХДД;
2) значительно повысить селективное воздействие ТХДД на клетки мишени за счет использования АФП в качестве транспортного белка.
АФП выделяли из ретроплацентарной или абортивной сыворотки по следующей оригинальной методике. Все работы с АФП (если не указано другое) проводили при 0-+4oC.
Сыворотку получали после нормальных родов при сроках беременности от 32 до 40 недель или медицинского аборта на сроках от 8 до 12 недель и после проверки на наличие антигенов гепатита В, сифилиса и СПИДа, образцы сыворотки, отрицательные по этим тестам, замораживали и до использования хранили при -70oC.
Перед началом выделения АФП сыворотку размораживали (12 час при +4oC) и нерастворимые компоненты удаляли центрифугированием (центрифуга J2-21, ротор - JA-14 Beckman, USA; 30 мин, 10000 об/мин).
К надосадочной жидкости при равномерном перемешивании и охлаждении льдом добавляли холодный насыщенный раствор сульфата аммония до достижения 30%-ного насыщения. После добавления всего необходимого объема сульфата раствор оставляли без перемешивания на ночь в холодильнике при +4oC для формирования осадка. Осадок отделяли центрифугированием (40 мин, 10000 об/мин).
К надосадочной жидкости при равномерном перемешивании и охлаждении льдом медленно добавляли сухой сульфат аммония до 70%-ного насыщения. Суспензию оставляли на ночь в холодильнике при +4oC для формирования осадка. Осадок отделяли центрифугированием (45 мин, 10 000 об/мин).
Полученный осадок растворяли в 10 мМ фосфате натрия, pH 7.3 (конечный объем обычно составлял 65-70% от исходного объема сыворотки) и для удаления сульфата аммония диализовали против 10 л 10 мМ фосфатного буфера в проточной волоконной ячейке для диализа типа "искусственная почка". Раствор после диализа центрифугировали (45 мин, 10000 об/мин и полученный осветленный раствор наносили на аффинную колонку с моноклональными антителами, специфичными к АФП.
Сульфат-аммонийную фракцию, содержащую АФП, после диализа наносили на аффинную колонку в течение 12-14 часов. Белок в элюате детектировали с помощью проточного фотометра при 280 нм. После нанесения образца колонку промывали 0.1 М трис-хлоридным буфером, pH 8.2 до горизонтальной базовой линии и целевой белок элюировали этим же буфером, содержащим 4 М мочевину.
Пик белка после аффинной колонки и коррекции pH (при необходимости) непосредственно наносили на ионообменную колонку (1.6х15 см) с DEAE-ToyoPearl М650 (Toyo Soda, Japan), уравновешенную 0.1 М трис-хлоридным буфером, pH 8.2. После нанесения всего объема образца колонку элюировали этим же буфером в режиме линейного возрастания концентрации хлористого калия (от 0 до 0.6 М).
Пик белка, содержащий очищенный АФП после ионообменной колонки, концентрировали в ультрафильтрационной ячейке с мембраной РМ-10 (Amicon, Netherland) и наносили на колонку (2.6х150 см), заполненную матрицей Sephacryl S200 HR (LKB-Pharmacia, Sweden) и уравновешенную 20 мМ фосфата натрия и 150 мМ хлоридом натрия (ФСБ) с 0.02% азида натрия. Этот же буфер использовали для элюции колонки. Белок отбирали в соответствии с фотометрическим профилем фракции, содержащие АФП в мономерной форме, объединяли, концентрировали на мембране РМ-10 до концентрации белка 1,5-5,0 мг/мл, и при необходимости замораживали, лиофильно высушивали, флаконы герметично закрывали в атмосфере азота и до использования хранили при -70oC.
ТХДД (0,85 мг/мл) растворяли в диоксане и раствор хранили в атмосфере азота при +4oC.
К водному раствору АФП в стеклянном флаконе с концентрацией белка 1.5 - 2.0 мг/мл в ФСБ при встряхивании медленно добавляли раствор ТХДД в диоксане с таким расчетом, чтобы конечная концентрация диоксана не превышала 5% (об/об). Реакционную массу инкубировали от 1 до 6 час при 20 - 35oC. После окончания инкубации образовавшийся комплекс АФП:ТХДД отделяли от низкомолекулярных примесей на колонке с Sephadex G-25sf (Pharmacia, Sweden), уравновешенной ФСБ, содержащим 10% ацетонитрила (об/об). Фракции, содержащие целевой комплекс, объединяли и хранили при +4oC до проведения качественного и количественного анализа (обычно - не более суток).
Для длительного хранения к раствору комплекса добавляли сухой маннит (до 5%), раствор фильтровали в стерильных условиях через ультрафильтр (0.22 мкм), разливали в стеклянные ампулы, замораживали и лиофильно высушивали. После окончания сушки ампулы заполняли стерильным азотом или аргоном, запаивали на водородной горелке и хранили при -70oC.
Качественное и количественное определение ТХДД проводили в режиме обращенно-фазовой ВЭЖХ на жидкостном хроматографе "GOLD" (Beckman, USA). Хроматографическая система состояла из двухголовочного градиентного насоса М-126 (Beckman, USA), петлевого инжектора М-7125 с петлей объемом 500 мкл; (Rheodyne, USA), колонки Ultrasphere Octyl, 3 μ, 0.46х7.5 cm и проточного спектрофотометрического детектора М-167 (Beckman, USA). Определение площадей хроматографических пиков и обработку результатов анализа проводили при использовании хроматографической программы "GOLD Personal Chromatograph" (Beckman, USA).
Разделение проводили в системе: A = 0.1 М ацетат аммония, pH 6.0, 10% ацетонитрила (об/об);
B = 50:50 = ацетонитрил:изопропанол
Анализ проводили при скорости потока 1.5 мл/мин в режиме градиентной элюции от 65 до 85% компонента В при времени разделения 10 минут.
B = 50:50 = ацетонитрил:изопропанол
Анализ проводили при скорости потока 1.5 мл/мин в режиме градиентной элюции от 65 до 85% компонента В при времени разделения 10 минут.
Для количественного определения на колонку наносили от 5 до 500 мкл раствора комплекса ТХДД: АФП. Определение проводили по методу внешнего стандарта с использованием раствора ТХДД в диоксане с концентрацией 0.1 мг/мл.
Среднее значение получали на основании трех параллельных определений концентрации в растворах как образца, так и стандарта. Ошибку рассчитывали по методу наименьших квадратов.
В результате создан препарат, обладающий выраженной цитотоксической активностью in vitro по отношению к клеткам Т-клеточной лимфомы человека СЕМ, клеткам рака молочной железы человека MCF-7 и клеткам гепатомы человека HepG2.
Испытание биологической активности in vitro.
Культивирование клеток
Для биологического тестирования ТХДД и его конъюгата с АФП были использованы Т-клеточная лимфома человека линии СЕМ, карцинома молочной железы человека линии MCF-7 и гепатома человека линии HepG2. Клетки линии СЕМ культивировали в пластиковых культуральных флаконах (Costar, USA) в среде RPMI 1640 (Sigma, USA), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Gibco, USA), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, при 37oC в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2. Клетки линии MCF-7 культивировали в тех же условиях, но с использованием среды DMEM (Sigma).
Для биологического тестирования ТХДД и его конъюгата с АФП были использованы Т-клеточная лимфома человека линии СЕМ, карцинома молочной железы человека линии MCF-7 и гепатома человека линии HepG2. Клетки линии СЕМ культивировали в пластиковых культуральных флаконах (Costar, USA) в среде RPMI 1640 (Sigma, USA), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Gibco, USA), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, при 37oC в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO2. Клетки линии MCF-7 культивировали в тех же условиях, но с использованием среды DMEM (Sigma).
Определение цитотоксической активности.
Для оценки цитотоксичности ТХДД и его нековалентного комплекса с АФП клетки высевали в 96-луночные планшеты для микротитрования (Costar) по 15 тысяч клеток в лунку, добавляли исследуемые соединения в различных концентрациях и инкубировали в стандартных условиях для культивирования в течение 72 часов. Жизнеспособность клеток определяли с помощью МТТ-теста по методу Mosmann.
За 2 часа до окончания инкубации в каждую лунку добавляли по 50 мкл раствора МТТ-бромида 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия (Sigma, USA) в среде для культивирования клеток в концентрации 1 мг/мл. После развития окраски среду удаляли, выпавшие кристаллы формазана растворяли в 150 мкл диметилсульфоксида и измеряли интенсивность окраски по поглощению при 540 нм на многоканальном спектрофотометре (Labsystem, Finland). Выживаемость клеток оценивали в процентах от соответствующего контроля.
Реализация способа подавления роста раковых клеток гормон-зависимых органов и тканей при помощи полученного комплекса ТХДД:АФП заключается во внутривенных инъекциях.
Список используемой литературы
1. Suzuki Y.H., Taga H., Ishizuki H. et al. Immunohistochemical study of AFP in rat embryos during ontogenesis, Ann. NY Acad. Sci, 417, 224-239 (1983).
1. Suzuki Y.H., Taga H., Ishizuki H. et al. Immunohistochemical study of AFP in rat embryos during ontogenesis, Ann. NY Acad. Sci, 417, 224-239 (1983).
2. Uriel J. , Laborda J., Naval J. et al. AFP receptors in malignant cells: an overview, CRC Press, "Biological Activities of AFP", 113-116, 1989, II.
3. Deutsch H.F., Tsukada Y., Sasaki T. et al. Cytotixic effects of daunomycin-fatty acid complex on rat hepatoma cells, Cancer Res., 43, 2668-2672 (1983).
4. Тихонов А. В. , Щербаков В.М., Володарский В.И. Способ лечения первичного рака печени и набор для лечения первичного рака печени, патент РФ N 2065307 от 20.08.1996.
5. Патент RU N 2026688, кл. A 61 K 38/00, 47/00, 1995. Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку - прототип.
6. Safe S. PCBs, PCDDs PCDFs, and related compounds: environmental and mechanistic considerations which support the development of toxic equivalency factors (TFFs), Toxicology, 21, 51-88 (1990).
7. Poland A., Knutson J.C. TCDD action, Annu Rev. Pharmacol. Toxicol., 30, 251-277 (1970).
8. Poland A., Greenlee W.F., Kende A.S. Studies on the mechanism of the chlorinated dibenzo-p-dioxins and related compounds, New York Acad.Sci., 320, 214-230 (1979).
9. McConkey D. J. and Orrenius S. TCDD kills glucocoticoid-sesitive thymocytes in vivo, Biochem.Biophys.Res.Commun., 160, 1003- 1008 (1989).
10. McConkey D. J., Hartzell P., Duddy S.K. et al. TCDD kills immature thymocytes by C2+-mediated endonuclease activation, Science, 242, 256-259 (1988).
11. Korach К. S. , Sarver P., Chae К et al. Estrogen receptor-binding activity of PCBs: conformationally restricted structural probes, Mol.Pharmacol., 33, 120-126 (1988).
12. Astroff В., and Safe S. TCDD as an antiestrogen: effect on rat uterine peroxidase activity, Biochem. Pharmacol., 39, 485-488 (1990).
13. Keeping H.S., and Lyttle C.R. Modulation of rat uterine progesterone receptor levels and peroxidase activity by tamoxifen citrate LY 117018 and estradiol, Endocrinology, III, 2046-2054 (1982).
14. Gierthy J. F. and Lincoln D.W. Inhibition of postconfluent focus production in cultures of MCF-7 breast cancer cells by TCDD, Breast Cancer Res., 12, 227-233 (1988).
15. Gierthy J. F. , Lincoln D.W., Gillespie M.B. et al. Suppression of estrogen-regulated extracellular tissue plasminogen activator activity of MCF-7 cells by TCDD, Cancer Res., 47, 6198-6203 (1987).
16. Rowlands C. , Krishnan V., Wang X. et al. Characterization of the aryl hydrocarbon receptor and aryl hydrocarbon responsiveness in human ovarian carcinoma cell lines, Cancer Res., 53, 1802-1807 (1993).
Claims (1)
- Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку путем обработки фетального биологического материала человека, содержащего альфа-фетопротеин, химической конъюгации с противоопухолевым лекарством и инкубации конъюгата, отличающийся тем, что в качестве фетального биологического материала используют ретроплацентарную или абортивную сыворотку, подвергают ее тестированию, замораживанию и хранению до использования при температуре -70oC, размораживают ее непосредственно перед началом выделения альфа-фетопротеина в течение 10 - 12 ч при +4oC, центрифугируют, к охлажденной надосадочной жидкости добавляют насыщенный раствор сульфата аммония до 30%-ного насыщения с последующим выдерживанием при этой же температуре до формирования осадка, повторно центрифугируют, добавляют к надосадочной жидкости сухой сульфат аммония до 70%-ого насыщения при одновременном перемешивании и охлаждении до +4oC с последующим выдерживанием до получения осадка, еще раз центрифугируют, полученный осадок растворяют в 10 мм раствора фосфата натрия с pH 7,3, а раствор диализуют против 10 л 10 мм фосфатного буфера, центрифугируют и очищают с помощью аффинной, ионообменной и гельпроникающей хроматографией с последующей концентрацией очищенного альфа-фетопротеина до 1,5 - 5,0 мг/мл, при этом в качестве противоопухолевого лекарства используют 2,3,7,8-тетра-хлордибензо-p-диоксин, предварительно растворенный в диоксане до концентрации 0,8 - 0,9 мг/мл, причем конъюгацию альфафетопротеина с концентрацией 1,5 - 2,0 мг/мл и 2,3,7,8-тетрахлордибензо-p-диоксина, растворенного в диоксане, проводят путем инкубирования в течение 1 - 6 ч при 20 - 35oC при концентрации диоксана не более 5 об.% с последующим добавлением маннита до 5% в качестве стабилизатора, лиофильным высушиванием, герметичной упаковкой в атмосфере инертного газа и хранением до использования при -70oC.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98100518A RU2139083C1 (ru) | 1998-01-22 | 1998-01-22 | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98100518A RU2139083C1 (ru) | 1998-01-22 | 1998-01-22 | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2139083C1 true RU2139083C1 (ru) | 1999-10-10 |
Family
ID=20201115
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98100518A RU2139083C1 (ru) | 1998-01-22 | 1998-01-22 | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2139083C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317065C1 (ru) * | 2006-12-05 | 2008-02-20 | Владимир Андрианович Алешкин | Способ определения целевой доставки в желудочно-кишечном тракте твердой лекарственной формы с защитным покрытием |
| RU2337358C1 (ru) * | 2007-04-03 | 2008-10-27 | Некоммерческая организация Учреждение "ПРОГРЕССИВНЫЕ МЕДИЦИНСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ" | Способ спектрофотометрического определения концентрации липосомально инкапсулированных фармацевтических препаратов |
| RU2431639C1 (ru) * | 2010-02-05 | 2011-10-20 | Автономная некоммерческая организация "Институт молекулярной диагностики" (АНО "ИнМоДи") | Способ получения конъюгата фрагмента альфа-фетопротеина человека с ципрофлоксацином |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026687C1 (ru) * | 1993-05-24 | 1995-01-20 | Тихонов Александр Васильевич | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку |
| RU2095084C1 (ru) * | 1996-04-29 | 1997-11-10 | Сергей Андреевич Гусев | Способ получения препарата для направленной доставки лекарственного средства |
-
1998
- 1998-01-22 RU RU98100518A patent/RU2139083C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026687C1 (ru) * | 1993-05-24 | 1995-01-20 | Тихонов Александр Васильевич | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку |
| RU2095084C1 (ru) * | 1996-04-29 | 1997-11-10 | Сергей Андреевич Гусев | Способ получения препарата для направленной доставки лекарственного средства |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2317065C1 (ru) * | 2006-12-05 | 2008-02-20 | Владимир Андрианович Алешкин | Способ определения целевой доставки в желудочно-кишечном тракте твердой лекарственной формы с защитным покрытием |
| RU2337358C1 (ru) * | 2007-04-03 | 2008-10-27 | Некоммерческая организация Учреждение "ПРОГРЕССИВНЫЕ МЕДИЦИНСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ" | Способ спектрофотометрического определения концентрации липосомально инкапсулированных фармацевтических препаратов |
| RU2431639C1 (ru) * | 2010-02-05 | 2011-10-20 | Автономная некоммерческая организация "Институт молекулярной диагностики" (АНО "ИнМоДи") | Способ получения конъюгата фрагмента альфа-фетопротеина человека с ципрофлоксацином |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Supramolecular nitric oxide depot for hypoxic tumor vessel normalization and radiosensitization | |
| Skovsgaard et al. | Membrane transport of anthracyclines | |
| US4886780A (en) | Conjugates of apotransferrin proteins with anti-tumor agents | |
| JP2004532245A (ja) | 癌を治療するための生体影響性化合物の標的送達 | |
| Wolpert et al. | A study on the mechanism of resistance to nitrogen mustard (HN2) in Ehrlich ascites tumor cells: Comparison of uptake of HN2-14C into sensitive and resistant cells | |
| Yeh et al. | Killing of human tumor cells in culture with adriamycin conjugates of human transferrin | |
| Morré et al. | Is the drug-responsive NADH oxidase of the cancer cell plasma membrane a molecular target for adriamycin? | |
| Hughes et al. | Serotonin storage mechanism and its interaction with reserpine | |
| Li et al. | Discovery of novel antibody-drug conjugates bearing tissue protease specific linker with both anti-angiogenic and strong cytotoxic effects | |
| SEIKI et al. | In VivoUptake of Progesterone by the Hypothalamus and Pituitary of the Female Ovariectomized Rat and its Relationship to Cytoplasmic Progesterone-Binding Protein | |
| RU2139083C1 (ru) | Способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку | |
| Arnold et al. | Cellular localization of intestinal calcium-binding protein in pig duodenum | |
| Worwood et al. | Absorption of 59Fe in the rat: iron binding substances in the soluble fraction of intestinal mucosa | |
| JPS62502549A (ja) | 生物学的活性物質を担持する巨大分子担体の製造方法 | |
| Deutsch et al. | Cytotoxic effects of daunomycin-fatty acid complexes on rat hepatoma cells | |
| Tötterman et al. | Cytological and functional analysis of inflammatory infiltrates in human malignant tumors: III. Further functional investigations using cultured autochthonous tumor cell lines and freeze-thawed infiltrating inflammatory cells | |
| Stahl | (Na++ K+)‐ATPase: function, structure, and conformations | |
| GROSSBARD et al. | Decreased α globin messenger RNA activity associated with polyribosomes in α thalassaemia | |
| CN118373920B (zh) | 具有pd-l1靶向性和细胞穿透性的融合肽及其与紫杉醇的偶联物以及制备方法与应用 | |
| Hofmann et al. | Photoaffinity labeling of the insulin receptor in H4 hepatoma cells: lack of cellular receptor processing | |
| EP1414299B1 (en) | Method for making a homogenous doxorubicin -transferrin conjugate | |
| Bentzel et al. | Bidirectional transport of horseradish peroxidase in proximal tubule of Necturus kidney | |
| Egorin et al. | Cellular pharmacology of N, N-dimethyl daunorubicin and N, N-dimethyl adriamycin | |
| Ramanathan‐Girish et al. | Contradistinction between doxorubicin and epirubicin: in‐vitro interaction with blood components | |
| Larsen et al. | Uptake, cytofluorescence, and cytotoxicity of oxazolopyridocarbazoles (amino acid-ellipticine conjugates) in murine sarcoma cells |