RU2125608C1 - Method of l-lysine producing - Google Patents
Method of l-lysine producing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2125608C1 RU2125608C1 RU96105202A RU96105202A RU2125608C1 RU 2125608 C1 RU2125608 C1 RU 2125608C1 RU 96105202 A RU96105202 A RU 96105202A RU 96105202 A RU96105202 A RU 96105202A RU 2125608 C1 RU2125608 C1 RU 2125608C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lysine
- culture fluid
- biomass
- concentration
- carbohydrates
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к технологии получения L-лизина микробиологическим синтезом с использованием штаммов-продуцентов преимущественно типа Brevibacterium sp. ВНИИгенетика-90, Brevibacterium lactofermentum НИТИА-88 и им подобных и подходящих произвольных питательных сред. The invention relates to a technology for the production of L-lysine by microbiological synthesis using producer strains predominantly of the type Brevibacterium sp. All-Russian Research Institute of Genetics-90, Brevibacterium lactofermentum NITIA-88 and similar and suitable arbitrary culture media.
При этом термин "получение L-лизина" здесь и далее обозначает преимущественно процесс получения культуральных жидкостей, содержащих L-лизин как целевой продукт в смеси с остатками питательной среды, микроорганизмами-продуцентами и иными продуктами их жизнедеятельности независимо от того, будет ли L-лизин впоследствии выделен в чистом виде или после упаривания и сушки культуральной жидкости использован иным образом, например, в виде концентрированной добавки в комбикорма для сельскохозяйственных животных, птиц и рыб. Moreover, the term "production of L-lysine" hereinafter primarily refers to the process of obtaining culture fluids containing L-lysine as a target product mixed with residues of the nutrient medium, producer microorganisms and other products of their vital activity, regardless of whether L-lysine subsequently isolated in pure form or after evaporation and drying of the culture fluid used in another way, for example, in the form of a concentrated additive in compound feeds for farm animals, birds and fish.
Общеизвестно, что L-лизин относится к числу незаменимых аминокислот, производство которых в мировой экономике уже давно стало крупнотоннажным. It is well known that L-lysine is one of the essential amino acids whose production in the world economy has long become large-capacity.
Поэтому к технологическим процессам производства лизина предъявляется комплекс систематически ужесточающихся трудносовместимых требований. Действительно, весьма желательно, чтобы эти процессы были:
как можно более производительными и
как можно менее материало- и энергоемкими.Therefore, a set of systematically tightening difficult incompatible requirements is presented to the technological processes of lysine production. Indeed, it is highly desirable that these processes are:
as productive and
as less material and energy intensive as possible.
Выполнение указанных требований может быть достигнуто различными средствами. The fulfillment of these requirements can be achieved by various means.
Одно из наиболее активно разрабатываемых направлений поиска таких средств предусматривает использование штаммов-продуцентов, способных к так называемому сверхсинтезу L-лизина, под которым подразумевают их способность обеспечивать концентрацию целевого продукта в культуральной жидкости свыше 10 (предпочтительно-свыше 20) г/л. One of the most actively developed areas for the search for such agents involves the use of producer strains capable of the so-called L-lysine super synthesis, which means their ability to provide the concentration of the target product in the culture fluid of more than 10 (preferably more than 20) g / l.
Штаммы такого типа обычно являются:
ауксотрофными мутантами, то есть способными к росту только в присутствии в питательных средах специфических ростовых веществ, преимущественно некоторых аминокислот, способность к внутриклеточному синтезу которых была утрачена вследствие мутации (см. Бекер В.Ф., Бекер М.Е. Лизин микробного синтеза - Рига: Зинатне, 1974, с.17 ), или
более приемлемыми аналог-резистентными ауксотрофными мутантами, синтез L-лизина которыми не ингибируется по мере нарастания его концентрации в культуральной жидкости (см. Жданова Н.И., Гусятинер М.М. Методы селекции и свойства штаммов микроорганизмов-продуцентов аминокислот// Обзорная информация// Сер. 11. Селекция и генетика промышленных микроорганизмов.-М.: ВНИИ-СЭНТИ, 1985, с. 4-17), или наконец, leaky-мутантами (то есть "ослабленными" мутантами) микроорганизмов, зависимыми от концентрации в питательных средах специфических ростовых веществ, способность к внутриклеточному синтезу которых была лишь понижена, но не утрачена вследствие мутации (см. в том же обзоре с.6).Strains of this type are usually:
auxotrophic mutants, that is, capable of growth only in the presence of specific growth substances, mainly certain amino acids, in the nutrient media, the ability to intracellular synthesis of which was lost due to mutations (see Becker V.F., Becker M.E. Lysine of microbial synthesis - Riga : Zinatne, 1974, p.17), or
more acceptable analog-resistant auxotrophic mutants, the synthesis of L-lysine of which is not inhibited as its concentration in the culture fluid increases (see Zhdanova N.I., Gusyatiner M.M. Selection Methods and Properties of Amino Acid-Producing Microorganism Strains // Overview // Ser. 11. Selection and genetics of industrial microorganisms.-M .: VNII-SENTI, 1985, p. 4-17), or finally, leaky-mutants (that is, "weakened" mutants) of microorganisms that depend on the concentration in nutrient environments of specific growth substances, spos bnost to intracellular synthesis of which was only reduced, but not lost due to mutation (see. in the same review p.6).
Мутанты таких типов обычно принадлежат к родам Brevibacterium, Micrococcus и Corinebacterium. Mutants of these types usually belong to the genera Brevibacterium, Micrococcus and Corinebacterium.
Другое направление поиска средств снижения издержек на производство L-лизина, очевидно связанное с первым, предусматривает разработку и применение все более совершенных питательных сред, наиболее полно учитывающих потребности указанных штаммов в питательных веществах. Another direction in the search for means of reducing the cost of producing L-lysine, obviously associated with the first, involves the development and use of increasingly advanced nutrient media that most fully take into account the nutrient needs of these strains.
Примером может служить применение белково-витаминного концентрата (БВК или паприна) в качестве основы питательных сред для культивирования микроорганизмов-продуцентов аминокислот (см., соответственно: 1. Бекер В.Ф., Бекер М. Е. Лизин микробного синтеза - Рига: Зинатне, 1974, с.37-38; 2. Панкова Т. А. Применение кислотного гидролизата БВК при производстве лизина//Микробиологическая промышленность, 1983, N 3. с.9). An example is the use of protein-vitamin concentrate (BVK or paprine) as the basis of nutrient media for the cultivation of microorganisms producing amino acids (see, respectively: 1. Becker V.F., Becker M.E. Lysin of microbial synthesis - Riga: Zinatne , 1974, p. 37-38; 2. Pankova, T. A. Use of BVK acid hydrolyzate in the production of lysine // Microbiological Industry, 1983, N 3. p. 9).
Однако БВК, получаемый микробиологическим синтезом с использованием культивируемых на парафинах нефти грибков рода Candida, в условиях систематического роста цен на энергоносители становится все менее доступным для промышленного микробиологического синтеза аминокислот. Кроме того, он опасен как аллерген для промышленного персонала, пожаро- и взрывоопасен при транспортировке и хранении и, наконец, служит источником трудноудаляемых балластных примесей в производстве высокоочищенного кристаллического L-лизина как целевого продукта. However, BVK obtained by microbiological synthesis using Candida fungi cultivated on paraffin oil under conditions of a systematic increase in energy prices is becoming less and less accessible for industrial microbiological synthesis of amino acids. In addition, it is dangerous as an allergen for industrial personnel, fire and explosion hazard during transportation and storage, and, finally, serves as a source of hard to remove ballast impurities in the production of highly purified crystalline L-lysine as the target product.
Если же учесть, что синтез БВК экологически вреден, то ясно, что совершенствование процессов микробиосинтеза L-лизина не может ограничиваться лишь улучшением питательных сред. If we take into account that the synthesis of BVK is environmentally harmful, it is clear that the improvement of the processes of microbiosynthesis of L-lysine cannot be limited only to the improvement of nutrient media.
Тем не менее, по мере решения проблемы утилизации отходов различных отраслей пищевой (в особенности, мясоперерабатывающей и молочной) промышленности проблема сбалансированного питания штаммов-продуцентов L-лизина решается все более эффективно и экологически рационально. Nevertheless, as the problem of waste disposal in various branches of the food industry (in particular, meat processing and dairy) is solved, the problem of a balanced diet of strains producing L-lysine is solved more and more efficiently and environmentally rationally.
Примером может служить использование в процессах микробиологического синтеза частичного (по лактозе) гидролизата концентрированной молочной сыворотки как источника конвертируемых в аминокислоты моносахаридов (патент Франции 2526808). An example is the use in the processes of microbiological synthesis of partial (lactose) hydrolyzate of concentrated whey as a source of monosaccharides convertible into amino acids (French patent 2526808).
Соответственно все большее значение приобретает дальнейшее совершенствование технологии микробиологического синтеза L-лизина как таковой. Accordingly, further improvement of the technology of microbiological synthesis of L-lysine as such is becoming increasingly important.
В общих чертах эта наиболее близкая к предлагаемому способу технология широко известна специалистам из многочисленных промышленных регламентов (см. , например, пусковой регламент ПР-64-186-84 Трипольского биохимического завода) предусматривает приготовление и подачу в ферментер периодического действия порции комплексной по содержанию питательных веществ стерильной питательной среды, посев избранного штамма-продуцента L-лизина и ферментацию, включающую (обычно периодическую) подпитку ферментируемой биомассы питательными веществами, аэрацию и перемешивание культуральной жидкости, поддержание заданных значений температуры и pH среды. In general terms, this technology closest to the proposed method is widely known to specialists from numerous industrial regulations (see, for example, starting regulations PR-64-186-84 of the Tripoli Biochemical Plant) provides for preparing and feeding to the batch fermenter a portion of a complex nutrient content sterile nutrient medium, inoculation of a selected producer strain of L-lysine and fermentation, including (usually periodic) feeding of the fermented biomass with nutrients, aero mixing and mixing the culture fluid, maintaining the set temperature and pH of the medium.
После достижения максимально возможной концентрации целевого продукта в культуральной жидкости или после заполнения ферментера такой жидкостью до заданного уровня, смотря по тому, что наступит раньше, ферментацию прекращают, культуральную жидкость из ферментера удаляют на последующую переработку и процесс повторяют. After reaching the maximum possible concentration of the target product in the culture fluid or after filling the fermenter with such a fluid to a predetermined level, whichever comes first, the fermentation is stopped, the culture fluid from the fermenter is removed for further processing and the process is repeated.
Однако суммарная продуктивность такого процесса и, особенно, удельный выход L-лизина в расчете на единицу питательного субстрата не соответствуют современным требованиям к ресурсосбережению, что обусловлено следующими причинами:
во-первых, конкуренцией двух направлений потребления питательных веществ лизин-продуцирующими микроорганизмами на стадии ферментации, первое из которых внешне выражается преимущественно в приросте биомассы и в меньшей степени в синтезе L-лизина, а второе - преимущественно в конверсии моносахаридов (в особенности глюкозы) в L-лизин и некоторые сопутствующие аминокислоты: глутаминовую кислоту, валин, аланин, изолейцин и др.;
во-вторых, существенной зависимостью направленности процесса от концентрации растворенного в культуральной жидкостью кислорода, недостаток которого из-за неполного окисления углеводов приводит к переключению биосинтеза на продуцирование слабых карбоновых кислот типа молочной, яблочной и некоторых других, а избыток стимулирует расход углеводов на дыхание микроорганизмов и соответственно активирует прирост биомассы и биосинтез сопутствующих аминокислот, что в обоих случаях ослабляет биосинтез L-лизина (см., например, Руклиша М. П. Физиолого-биохимическая характеристика продуцента лизина Brevibacterium sp.22 в периодическом и непрерывном процессе культивирования. -Рига, 1974, Канд.диссертация); и
в-третьих, существенной зависимостью направленности процесса от концентрации углеводов в используемой для подпитки свежей питательной среде (и соответственно в культуральной жидкости). Действительно, явный недостаток углеводов обуславливает прекращение синтеза лизина сверх необходимого для самообеспечения бактеральных клеток физиологического минимума, а явный избыток углеводов приводит к увеличению их расхода на синтез сопутствующих L-лизину аминокислот. Если же концентрация углеводов в культуральной жидкости превышает 15% по массе, то наблюдается известное специалистам угнетение развития микроорганизмов (см. Куцева Л.С., Клюева Н.М., Прикладная биохимия и микробиология, 1966, т.2, N 6, с.729).However, the total productivity of this process and, especially, the specific yield of L-lysine per unit of nutrient substrate does not meet modern requirements for resource conservation, due to the following reasons:
firstly, by the competition of two directions of nutrient consumption by lysine-producing microorganisms at the fermentation stage, the first of which is externally expressed mainly in the growth of biomass and to a lesser extent in the synthesis of L-lysine, and the second - mainly in the conversion of monosaccharides (especially glucose) to L-lysine and some associated amino acids: glutamic acid, valine, alanine, isoleucine, etc .;
secondly, a significant dependence of the direction of the process on the concentration of oxygen dissolved in the culture fluid, the lack of which due to incomplete oxidation of carbohydrates leads to biosynthesis switching to the production of weak carboxylic acids such as lactic, malic, and some others, and the excess stimulates the consumption of carbohydrates for respiration of microorganisms and accordingly, it activates the growth of biomass and the biosynthesis of concomitant amino acids, which in both cases weakens the biosynthesis of L-lysine (see, for example, Ruklisha M.P. Fiz Ologo-lysine producing biochemical characteristic Brevibacterium sp.22 in batch and continuous cultivation process -Riga 1974, Kand.dissertatsiya).; and
thirdly, a significant dependence of the direction of the process on the concentration of carbohydrates in the fresh nutrient medium used for replenishment (and, accordingly, in the culture fluid). Indeed, a clear deficiency of carbohydrates causes the cessation of lysine synthesis beyond the physiological minimum necessary for bacterial self-sufficiency, and a clear excess of carbohydrates leads to an increase in their consumption for the synthesis of amino acids accompanying L-lysine. If the concentration of carbohydrates in the culture fluid exceeds 15% by mass, then inhibition of the development of microorganisms is known to specialists (see Kutseva L.S., Klyueva N.M., Applied Biochemistry and Microbiology, 1966, v. 2, No. 6, p. .729).
Однако по имеющимся данным в практике промышленного биосинтеза L-лизина указанные факторы до сих пор системно не регулируются. However, according to available data in the practice of industrial biosynthesis of L-lysine, these factors are still not systematically regulated.
В связи с изложенным в основу изобретения положена задача путем изменения порядка и режимов подпитки ферментируемой биомассы свежей питательной средой создать такой стабилизированный одновременно по двум критериям: скорости прироста биомассы и скорости синтеза L-лизина - способ получения L-лизина, который обеспечивал бы совместное повышение как суммарной продуктивности биосинтеза, так и повышение удельного выхода L-лизина (в расчете на единицу питательного субстрата). In connection with the foregoing, the invention is based on the task, by changing the order and feeding regimes of the fermented biomass with fresh nutrient medium, to create such stabilized simultaneously according to two criteria: the rate of growth of biomass and the rate of synthesis of L-lysine - a method for producing L-lysine, which would provide a joint increase the total productivity of biosynthesis, as well as an increase in the specific yield of L-lysine (per unit of nutrient substrate).
Поставленная задача решена тем, что в способе получения L-лизина, предусматривающем приготовление и подачу в ферментер периодического действия порции комплексной по содержанию питательных веществ стерильной питательной среды, посев избранного штамма-продуцента L-лизина и ферментацию, включающую подпитку ферментируемой биомассы питательными веществами, аэрацию и перемешивание культуральной жидкости, поддержание заданных значений температуры и pH среды, согласно изобретению, подпитку после посева подают непрерывно в течение всего цикла ферментации, при этом ростовые вещества и углеводы подают раздельно с расходами, учитывающими соотношение скоростей прироста биомассы и синтеза L-лизина. The problem is solved in that in a method for producing L-lysine, which involves preparing and supplying to the batch fermenter a portion of a complex nutrient-containing sterile nutrient medium, inoculating a selected producer strain of L-lysine and fermentation, including feeding the fermented biomass with nutrients, aeration and mixing the culture fluid, maintaining the set temperature and pH of the medium, according to the invention, the feed after sowing is served continuously throughout the cycle and fermentation with growth substances and carbohydrates are fed separately to the costs that account for velocity ratio biomass growth and synthesis of L-lysine.
Раздельная и осуществляемая с разными (обусловленными указанным соотношением) скоростями подпитка ростовыми веществами и источниками углерода позволяет существенно сузить интервал фактических колебаний их концентраций в культуральной жидкости. Тем самым удается поддерживать физиологическую активность микроорганизмов на уровне, близком к максимально возможному для используемого штамма, и соответственно оптимизировать биосинтез L-лизина. Separate and carried out with different (due to the indicated ratio) feed rates with growth substances and carbon sources can significantly narrow the range of actual fluctuations in their concentrations in the culture fluid. Thus, it is possible to maintain the physiological activity of microorganisms at a level close to the maximum possible for the strain used, and accordingly to optimize the biosynthesis of L-lysine.
Первое дополнительное отличие состоит в том, что для используемого штамма-продуцента предварительно определяют минимально допустимую для его развития концентрацию углеводов и подпитку, содержащую углеводы, подают с расходом, обеспечивающим в культурной жидкости их концентрацию с интервале 1,2 - 2,8 от упомянутого минимума, интенсивность дыхания биомассы непрерывно оценивают по парциальному давлению (или, что то же самое, по напряжению) кислорода в культуральной жидкости и подачей подпитки, содержащей ростовые вещества, поддерживают упомянутое напряжение на уровне не менее 12 мм рт.ст. При соблюдении указанных условий скорость биосинтеза L-лизина и его удельный выход приближают к максимально возможным для избранного штамма-продуцента. The first additional difference is that for the producer strain used, the minimum concentration of carbohydrates acceptable for its development is preliminarily determined and the carbohydrate-containing recharge is fed at a rate that ensures their concentration in the culture fluid with an interval of 1.2 - 2.8 from the minimum , the respiration rate of biomass is continuously evaluated by the partial pressure (or, which is the same, by the voltage) of oxygen in the culture fluid and the feeding of growth-containing substances support this -mentioned voltage at a level not less than 12 mm Hg Under these conditions, the rate of L-lysine biosynthesis and its specific yield are brought closer to the maximum possible for the selected producer strain.
Второе дополнительное отличие состоит в том, что в процессе ферментации в пробах культуральной жидкости периодически определяют отношение массы L-лизина к сухой биомассе штамма-продуцента и изменением расхода подпитки, содержащей ростовые вещества, поддерживают упомянутое отношение в интервале 2,4 - 2,9 г/г. The second additional difference is that in the fermentation process in samples of the culture fluid, the ratio of the mass of L-lysine to the dry biomass of the producer strain is periodically determined and the feed rate containing growth substances is changed by maintaining the ratio in the range of 2.4 - 2.9 g / g
Далее сущность изобретения поясняется:
описанием предложенного способа в общем виде, включая описание методов измерения и контроля, со ссылками на прилагаемый чертеж, на котором приведены характерные для процессов периодической ферментации зависимости:
- парциального давления (напряжения) кислорода в культуральной жидкости от времени культивирования (кривая 1);
- концентрации сахара (т.е. источника углерода) в культуральной жидкости от времени культивирования (кривая 2);
конкретными примерами:
- определения минимально допустимых концентраций углеводов в культуральной жидкости и
- биосинтеза L-лизина предложенным способом;
результатами испытаний.Further, the invention is illustrated:
a description of the proposed method in general terms, including a description of the measurement and control methods, with links to the attached drawing, which shows the dependencies characteristic of the processes of periodic fermentation:
- partial pressure (tension) of oxygen in the culture fluid from the time of cultivation (curve 1);
- the concentration of sugar (i.e. carbon source) in the culture fluid from the time of cultivation (curve 2);
specific examples:
- determining the minimum allowable concentrations of carbohydrates in the culture fluid and
- biosynthesis of L-lysine by the proposed method;
test results.
Предложенный способ в общем виде предусматривает:
предварительное определение критической, то есть минимально допустимой для развития избранного штамма-продуцента L-лизина концентрации углеводов в культуральной жидкости, для чего:
- готовят основную питательную среду, отличающуюся от ферментационной среды, предусмотренной для избранного штамма-продуцента, L-лизина тем, что концентрация источника углерода (т.е. углеводов) снижена в два раза,
- готовят дополнительную питательную среду, отличающуюся от основной тем, что в ней отсутствует источник углерода,
- лабораторный ферментер, снабженный датчиком парциального давления кислорода, заполняют основной питательной средой на 35% от его объема, устанавливают значения температуры, pH, аэрации и перемешивания, соответствующие режиму ферментации, вносят посевной материал в количестве 10% от объема питательной среды и далее непрерывно регистрируют показания датчика парциального давления кислорода и периодически определяют концентрацию источника углерода в культуральной жидкости,
- в культуральной жидкости непрерывно контролируют напряжение кислорода и строят (записывают) кривую 1,
- периодически, например, через каждый час, считая от момента посева штамма, в пробирки с антисептиком (например: хлороформом или формалином) отбирают пробы культуральной жидкости и определяют в них остаточную концентрацию углеводов и строят кривую 2,
- через два часа после наступления фазы стационарного роста культуры, которому соответствует участок РВ на кривой 1, приступают к разбавлению культуральной жидкости в лабораторном ферментере вышеуказанной дополнительной питательной средой со скоростью 0,3 объема на объем культуральной жидкости в час (началу разбавления соответствует точка C кривой 2), что приводит к прогрессирующему снижению концентрации углеводов в культуральной жидкости на фоне стабильности концентрации прочих питательных веществ,
- в момент резкого повышения напряжения кислорода в культуральной жидкости (обозначенный стрелкой вблизи точки B на кривой 1) в пробирку с антисептиком отбирают пробу (10-15 мл) культуральной жидкости и определенную в этой пробе остаточную концентрацию углеводов фиксируют как "минимально допустимую" для развития избранного штамма-продуцента L-лизина;
приготовление стерильной питательной среды определенного состава и ее внесение в ферментер;
посев избранного штамма-продуцента L-лизина;
ферментацию, включающую:
- раздельную подпитку ферментируемой биомассы свежей питательной средой, содержащей (отдельно) ростовые вещества и (отдельно) источники углерода (углеводы), проводимую с соблюдением следующих условий:
- во всех случаях биосинтеза L-лизина контролируют скорость прироста биомассы и скорость синтеза L-лизина и расходы указанных подпиток устанавливают с учетом соотношения указанных скоростей,
- предпочтительно подпитку, содержащую углеводы, подают с расходом, обеспечивающим их концентрацию в культуральной жидкости в интервале 1,2 - 2,8 от упомянутого минимума, а подпитку, содержащую ростовые вещества, подают с учетом результатов контроля напряжения кислорода в культуральной жидкости с таким расходом, чтобы упомянутое напряжение было не менее 12 мм рт.ст. ,
- еще более предпочтительно в процессе ферментации в пробах культуральной жидкости периодически определяют отношение массы L-лизина к сухой биомассе штамма-продуцента и расход подпитки, содержащей ростовые вещества, регулируют таким образом, что упомянутое отношение поддерживают в интервале 2,4 - 2,9 г/г;
- аэрацию и перемешивание культуральной жидкости,
- поддержание заданных значений температуры и pH среды;
прекращение ферментации;
удаление культуральной жидкости из ферментера и повторение процесса.The proposed method in General provides:
preliminary determination of the critical, that is, the minimum acceptable for the development of the selected producer strain L-lysine concentration of carbohydrates in the culture fluid, for which:
- prepare the main nutrient medium, different from the fermentation medium provided for the selected producer strain, L-lysine in that the concentration of the carbon source (i.e. carbohydrates) is halved,
- prepare an additional nutrient medium that differs from the main one in that it does not have a carbon source,
- a laboratory fermenter equipped with a partial oxygen pressure sensor is filled with the main nutrient medium at 35% of its volume, the temperature, pH, aeration and mixing values are set corresponding to the fermentation mode, seed is introduced in the amount of 10% of the volume of the nutrient medium and then continuously recorded the oxygen partial pressure sensor readings and periodically determine the concentration of the carbon source in the culture fluid,
- in the culture fluid, the oxygen tension is continuously monitored and curve 1 is built (recorded),
- periodically, for example, every hour, counting from the moment the strain is seeded, samples of the culture fluid are taken in test tubes with an antiseptic (for example: chloroform or formalin) and the residual concentration of carbohydrates is determined in them and curve 2 is built,
- two hours after the onset of the phase of stationary growth of the culture, to which the PB section on curve 1 corresponds, they begin to dilute the culture fluid in the laboratory fermenter with the above additional nutrient medium at a rate of 0.3 volume per volume of culture fluid per hour (point C of the curve corresponds to the beginning of dilution 2), which leads to a progressive decrease in the concentration of carbohydrates in the culture fluid against the background of the stability of the concentration of other nutrients,
- at the time of a sharp increase in the oxygen tension in the culture fluid (indicated by an arrow near point B on curve 1), a sample (10-15 ml) of the culture fluid is taken into a test tube with an antiseptic and the residual concentration of carbohydrates determined in this sample is fixed as “the minimum allowable” for development selected producer strain of L-lysine;
preparation of a sterile nutrient medium of a certain composition and its introduction into the fermenter;
seeding a selected producer strain of L-lysine;
fermentation, including:
- separate feeding of fermentable biomass with fresh nutrient medium containing (separately) growth substances and (separately) carbon sources (carbohydrates), carried out subject to the following conditions:
- in all cases of L-lysine biosynthesis, the growth rate of biomass and the rate of L-lysine synthesis are controlled and the costs of these recharge are determined taking into account the ratio of these speeds,
- preferably, the feed containing carbohydrates is fed at a rate that ensures their concentration in the culture fluid in the range of 1.2 - 2.8 of the minimum, and the feed containing growth substances is fed taking into account the results of monitoring the oxygen tension in the culture fluid with such a flow so that the mentioned voltage was not less than 12 mm Hg ,
- even more preferably, in the fermentation process in samples of the culture fluid, the ratio of the mass of L-lysine to the dry biomass of the producer strain and the feed rate containing growth substances are periodically determined so that the ratio is maintained in the range of 2.4 - 2.9 g / g;
- aeration and mixing of the culture fluid,
- maintaining the set temperature and pH of the medium;
fermentation cessation;
removing the culture fluid from the fermenter and repeating the process.
Примеры определения минимально допустимых концентраций углеводов в культуральной жидкости. Examples of determining the minimum allowable concentration of carbohydrates in the culture fluid.
Пример 1 мк. Определение минимально допустимой концентрации углеводов в культуральной жидкости для штамма Brevibacterium sp. ВНИИгенетика-90
В качестве источника углеводов использовали свекловичную мелассу с содержанием сахаров 46%. Были приготовлены:
а) основная питательная среда следующего состава (г/л):
меласса - 125 (по сырому весу)
кукурузный экстракт - 25 (по сухому весу)
аммоний хлористый - 13
диаммоний фосфат - 1
б) дополнительная питательная среда такого состава (г/л):
кукурузный экстракт - 25 (по сухому весу)
аммоний хлористый - 13
диаммоний фосфат - 1
В лабораторный ферментер емкостью 1 л внесли 350 мл стерильной основной питательной среды. Стерильным концентрированным раствором аммиака установили pH в пределах 7,0 - 7,0. Температура питательной среды 30oC, расход воздуха на аэрацию 0,5 л/мин, избыточное давление воздуха 0,02 МПа, скорость мешалки 600 мин-1.Example 1 mk. Determination of the minimum allowable concentration of carbohydrates in the culture fluid for strain Brevibacterium sp. VNIIgenetika-90
Beet molasses with a sugar content of 46% was used as a source of carbohydrates. Have been cooked:
a) the main nutrient medium of the following composition (g / l):
molasses - 125 (by wet weight)
corn extract - 25 (by dry weight)
ammonium chloride - 13
diammonium phosphate - 1
b) additional nutrient medium of this composition (g / l):
corn extract - 25 (by dry weight)
ammonium chloride - 13
diammonium phosphate - 1
350 ml of sterile basic culture medium was added to a laboratory 1-liter fermenter. A sterile concentrated ammonia solution was adjusted to pH between 7.0 and 7.0. The temperature of the nutrient medium 30 o C, the air flow for aeration of 0.5 l / min, excess air pressure of 0.02 MPa, the speed of the mixer 600 min -1 .
После достижения указанных параметров в питательную среду внести 30 мл посевного материала. Культивирование продолжали до начала фазы стационарного роста, что соответствует в данном примере 14-му часу (точка P на кривой 1 прилагаемого чертежа). Еще 2 ч продолжали ферментацию в том же режиме. After reaching the specified parameters, add 30 ml of seed to the nutrient medium. Cultivation was continued until the onset of the stationary growth phase, which corresponds to the 14th hour in this example (point P on curve 1 of the attached drawing). An additional 2 hours continued fermentation in the same mode.
На 16-м часу начали вводить в ферментер стерильную дополнительную питательную среду со скоростью 120 мл/ч. Через 1,5 ч напряжение кислорода в культуральной жидкости резко возросло и за 8 мин увеличилось на 10 мм рт.ст. (стрелка вблизи точки B на кривой 1). At the 16th hour, sterile supplementary nutrient medium was introduced into the fermenter at a rate of 120 ml / h. After 1.5 hours, the oxygen tension in the culture fluid increased sharply and increased by 10 mm Hg in 8 minutes. (arrow near point B on curve 1).
В этот момент в пробирку с тремя каплями хлороформа отобрали пробу культуральной жидкости объемом 15 мл. Анализ пробы показал остаточную концентрацию сахаров в культуральной жидкости 4 г/л как минимально допустимую (критическую) для данного продуцента лизина при использовании мелассы. At this point, a 15 ml culture fluid sample was taken into a test tube with three drops of chloroform. Analysis of the sample showed a residual sugar concentration in the culture fluid of 4 g / l as the minimum allowable (critical) for this lysine producer using molasses.
Пример 2мк. Определение минимально допустимой концентрации углеводов в культуральной жидкости для штамма Brevibacterium lactofermentum-88. Example 2mk. Determination of the minimum allowable concentration of carbohydrates in the culture fluid for strain Brevibacterium lactofermentum-88.
Определение проводили, как в примере 1. Анализ пробы показал, что для этого штамма-продуцента лизина критическая концентрация сахаров мелассы в культуральной жидкости равна 5,5 г/л. The determination was carried out as in Example 1. Analysis of the sample showed that for this strain of the lysine producer, the critical concentration of molasses sugars in the culture fluid is 5.5 g / L.
Пример 3мк. Определение минимально допустимой концентрации углеводов в культуральной жидкости для штамма Brevibacterium flavum E-531
Определение проводили, как в примере 1. Анализ пробы показал, что для данного штамма-продуцента лизина критическая концентрация сахаров мелассы в культуральной жидкости равна 6,2 г/л.Example 3mk. Determination of the minimum allowable concentration of carbohydrates in the culture fluid for strain Brevibacterium flavum E-531
The determination was carried out as in example 1. Analysis of the sample showed that for this strain producing lysine, the critical concentration of molasses sugars in the culture fluid is 6.2 g / L.
Примеры биосинтеза L-лизина
Пример 1бс. Биосинтез L-лизина с использованием штамма Brevibacterium sp.ВНИИгенетика-90 (1)
Для получения посевного материала использовали стерильную питательную среду следующего состава (г/л):
меласса - 60 (по сырому весу)
кукурузный экстракт - 40 (по сухому весу)
аммоний хлористый - 5
мел - 8
По 50 мл указанной питательной среды внесли в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл выращивали посевной материал в течение 24 ч при температуре 30oC на качалке при 250 мин-1.Examples of biosynthesis of L-lysine
Example 1bs. Biosynthesis of L-lysine using a strain of Brevibacterium sp. VNIIgenetika-90 (1)
To obtain the seed used a sterile nutrient medium of the following composition (g / l):
molasses - 60 (by wet weight)
corn extract - 40 (by dry weight)
ammonium chloride - 5
chalk - 8
50 ml of the indicated nutrient medium were introduced into Erlenmeyer flasks with a capacity of 750 ml, seeds were grown for 24 h at a temperature of 30 ° C on a shaker at 250 min -1 .
Эксперименты по биосинтезу L-лизина предложенным способом проводили в четырех (А, Б, В и Г) лабораторных ферментерах емкостью 1л, оборудованных регулируемыми нагревателями со средствами контроля температуры, приспособлениями для аэрации с регулируемым расходом стерильного воздуха, мешалками с регулируемым числом оборотов, насосами-дозаторами для раздельной подачи подпитки (в виде дополнительных питательных сред) и датчиками напряжения кислорода в культуральной жидкости, с использованием следующих стерильных сред:
а) основной питательной среды следующего состава (в г/л):
кукурузный экстракт - 35 (по сухому весу)
меласса - 30 (по сырому весу)
аммоний хлористый - 7,5
диаммоний фосфат - 1,5,
б) первой дополнительной питательной среды (как подпитки-источника ростовых веществ) следующего состава (в г/л):
гидролизат БВК - 35 (по весу исходного БВК)
гидролизат кукурузного экстракта - 35 (по сухому весу исходного экстракта),
в) второй дополнительной питательной среды (как подпитки-источника углеводов) следующего состава (в г/л):
меласса - 650 (по сырому весу)
аммоний хлористый - 40,
г) 25%-ного водного раствора аммиака (как средства коррекции pH культуральной жидкости и дополнительного источника азота).The experiments on the biosynthesis of L-lysine by the proposed method was carried out in four (A, B, C and D) laboratory fermenters with a capacity of 1 liter, equipped with adjustable heaters with temperature controls, aeration devices with a controlled flow of sterile air, agitators with an adjustable speed, pumps dispensers for separate feeding of recharge (in the form of additional nutrient media) and oxygen tension sensors in the culture fluid using the following sterile media:
a) the main nutrient medium of the following composition (in g / l):
corn extract - 35 (by dry weight)
molasses - 30 (by wet weight)
ammonium chloride - 7.5
diammonium phosphate - 1.5,
b) the first additional nutrient medium (as a feed-source of growth substances) of the following composition (in g / l):
BVK hydrolyzate - 35 (by weight of the initial BVK)
hydrolyzed corn extract - 35 (by dry weight of the original extract),
c) the second additional nutrient medium (as a feed-source of carbohydrates) of the following composition (in g / l):
molasses - 650 (by wet weight)
ammonium chloride - 40,
d) 25% aqueous ammonia solution (as a means of adjusting the pH of the culture fluid and an additional source of nitrogen).
В каждый из ферментеров внесли по 200 мл основной питательной среды, включили аэрацию с подачей одного объема воздуха на 1 объем жидкости в минуту и мешалку на 600 мин-1, довели pH указанным раствором аммиака до 7,0 - 7,2, установили температуру на уровне 30-31oC, внесли по 20 мл посевного материала, содержащего указанный штамм-продуцент, и насосами-дозаторами начали подавать первую (с начальным расходом 4 мл/ч) и вторую (с начальным расходом 0,5 мл/ч) дополнительные (подпиточные) питательные среды.200 ml of the main nutrient medium was introduced into each of the fermenters, aeration was turned on with the supply of one volume of air per 1 volume of liquid per minute and the mixer for 600 min -1 , the pH of the specified ammonia solution was adjusted to 7.0 - 7.2, the temperature was set to at a level of 30-31 o C, 20 ml of seed were added containing the indicated producer strain, and metering pumps began to feed the first (with an initial flow rate of 4 ml / h) and the second (with an initial flow rate of 0.5 ml / h) (recharge) culture media.
Затем с учетом показаний датчика напряжения (парциального давления) кислорода в культуральной жидкости подачу второй дополнительной питательной среды регулировали таким образом, чтобы указанное давление в период пуска поддерживалось около (но не ниже) 12 мм рт.ст. во всех четырех ферментерах, а далее со следующими вариациями:
в ферментере A - с условием, чтобы концентрация сахаров в культуральной жидкости находилась в пределах от 1,2 до 2,8 от минимально допустимой;
в ферментере Б - в пределах от 0,8 до 1,2;
в ферментере В - в пределах от 2,8 до 3,5;
в ферментере Г - в пределах от 3,5 до 4,5.Then, taking into account the readings of the oxygen pressure (partial pressure) sensor in the culture fluid, the supply of the second additional nutrient medium was controlled so that the indicated pressure was maintained at (but not lower) 12 mm Hg during the start-up period. in all four fermenters, and then with the following variations:
in fermenter A, provided that the concentration of sugars in the culture fluid is in the range from 1.2 to 2.8 of the minimum allowable;
in fermenter B - in the range from 0.8 to 1.2;
in the fermenter B - in the range from 2.8 to 3.5;
in the fermenter G - in the range from 3.5 to 4.5.
Процессы прекращали после заполнения ферментеров культуральной жидкостью до уровня 700 мл и фиксировали время, за которое этот уровень был достигнут. The processes were stopped after filling the fermenters with culture fluid to a level of 700 ml and fixed the time for which this level was reached.
Для контроля в аналогичном ферментере Д, оборудованном лишь одним насосом-дозатором, с использованием того же штамма-продуцента проводили биосинтез L-лизина по способу-прототипу. For control in a similar fermenter D, equipped with only one metering pump, using the same producer strain, L-lysine biosynthesis was performed according to the prototype method.
В этом контроле применяли две питательные среды:
а) основную, содержащую (в г/л):
меласса - 250 (по сырому весу)
гидролизат БВК - 7 (по весу исходного БВК)
кукурузный экстракт - 18 (по сухому весу)
аммоний хлористый - 19
диаммоний фосфат - 2
б) дополнительную (подпиточную), содержащую (в г/л):
меласса - 650 (по сырому весу)
гидролизат БВК - 4 (по весу исходного БВК)
кукурузный экстракт - 9 (по сухому весу)
аммоний хлористый - 40
В ферментер Д внесли 400 мл основной питательной среды, включили аэрацию с подачей одного объема воздуха на 1 объем жидкости в минуту и мешалку на 600 мин-1, довели pH указанным раствором аммиака до 7,0 - 7,2, установили температуру на уровне 30-31oC и избыточное давление 0,02-0,03 МПа и внесли 40 мл посевного материала, содержащего указанный штамм-продуцент.Two nutrient media were used in this control:
a) basic, containing (in g / l):
molasses - 250 (wet weight)
BVK hydrolyzate - 7 (by weight of the initial BVK)
corn extract - 18 (by dry weight)
ammonium chloride - 19
diammonium phosphate - 2
b) additional (make-up), containing (in g / l):
molasses - 650 (by wet weight)
BVK hydrolyzate - 4 (by weight of the initial BVK)
corn extract - 9 (by dry weight)
ammonium chloride - 40
400 ml of the main nutrient medium was added to fermenter D, aeration was turned on with the supply of one volume of air per 1 volume of liquid per minute and the mixer for 600 min -1 , the pH of the specified ammonia solution was adjusted to 7.0 - 7.2, the temperature was set at 30 -31 o C and an overpressure of 0.02-0.03 MPa and contributed 40 ml of inoculum containing the specified producer strain.
После запуска процесса в культуральной жидкости периодически (не реже одного раза за 4 ч) контролировали концентрацию сахаров и при ее падении до 1,0 - 1,5%, что соответствовало снижению интенсивности дыхания биомассы до 35-65% от максимального значения, периодически же (через каждый час) подавали указанную подпиточную среду с расходом 8-12 мл за каждый впрыск, продолжавшийся 1-2 мин, с таким расчетом, чтобы указанная концентрация возрастала до 1,5-2,0%. After starting the process in the culture fluid, the concentration of sugars was periodically monitored (at least once in 4 hours) and when it fell to 1.0-1.5%, which corresponded to a decrease in the intensity of respiration of the biomass to 35-65% of the maximum value, periodically (every hour) fed the specified make-up medium with a flow rate of 8-12 ml for each injection lasting 1-2 minutes, so that the specified concentration increased to 1.5-2.0%.
После достижения объема культуральной жидкости 700 мл подпитку прекращали и, контролируя концентрацию сахаров и фиксируя длительность процесса, продолжали фенментацию до момента, когда указанная концентрация снижалась до 0,6%. After reaching a volume of culture fluid of 700 ml, the recharge was stopped and, controlling the concentration of sugars and fixing the duration of the process, continued phenmentation until the indicated concentration decreased to 0.6%.
В культуральных жидкостях во всех ферментерах общеизвестным методом определили концентрацию L-лизина (в г/л) и тривиальными вычислениями установили выход L-лизина (в %) в расчете на единицу массы потребленных при ферментации углеводов (сахаров). The concentration of L-lysine (in g / l) was determined in culture liquids in all fermenters by a well-known method, and the yield of L-lysine (in%) was calculated by trivial calculations per unit mass of carbohydrates (sugars) consumed during fermentation.
Сравнительные результаты приведены в таблице. Comparative results are shown in the table.
Как видно из таблицы, предложенный способ при соблюдении условий раздельной подпитки и балансировки расходов подпиточных сред с учетом скоростей прироста биомассы и синтеза целевого продукта (ферментер А) обеспечивает наилучшие результаты биосинтеза L-лизина, а при раздельной подпитке (ферментеры В и Г) обеспечивает повышение концентрации L-лизина в культуральной жидкости и повышение производительности биосинтеза. As can be seen from the table, the proposed method, subject to the conditions of separate recharge and balancing the costs of recharge media, taking into account the growth rates of biomass and the synthesis of the target product (fermenter A) provides the best results of L-lysine biosynthesis, and when separately replenished (fermenters B and D) provides the concentration of L-lysine in the culture fluid and increasing the productivity of biosynthesis.
Пример 2бс. Биосинтез L-лизина с использованием штамма Brevibacterium sp. ВНИИгенетика-90 (2)
Посевной материал нарабатывали и биосинтез целевого продукта проводили, как описано в (1бс) для ферментера А, с теми отличиями, что:
на 20-м часу ферментирования и далее через каждый 4 ч определяли соотношение массы лизина и сухой биомассы штамма-продуцента в культуральной жидкости и,
регулируя расход второй дополнительной питательной среды, удерживали это соотношение в пределах 2,4 - 2,9 г/г.Example 2bs. L-lysine biosynthesis using a strain of Brevibacterium sp. VNIIgenetika-90 (2)
The seed was produced and the biosynthesis of the target product was carried out as described in (1bs) for fermenter A, with the differences that:
at the 20th hour of fermentation and then every 4 hours the ratio of the mass of lysine and dry biomass of the producer strain in the culture fluid was determined and,
By adjusting the flow rate of the second additional nutrient medium, this ratio was kept within 2.4–2.9 g / g.
Длительность ферментации до наработки 700 мл культуральной жидкости составили 50 ч, концентрация L-лизина в культуральной жидкости 75 г/л, а выход L-лизина от массы потребленных углеводов составил 50%. The duration of fermentation to the time of production of 700 ml of culture fluid was 50 hours, the concentration of L-lysine in the culture fluid was 75 g / l, and the yield of L-lysine from the mass of consumed carbohydrates was 50%.
Пример 3бс. Биосинтез L-лизина с использованием штамма Brevibacterium lactofermentum НИТИА-88
Биосинтез целевого продукта проводили, как описано в 2бс, учитывая, что минимально допустимая концентрация углеводов в культуральной жидкости для указанного штамма равна 5,5 г/л.Example 3bs. L-lysine biosynthesis using Brevibacterium lactofermentum NITIA-88 strain
The biosynthesis of the target product was carried out as described in 2bs, given that the minimum permissible concentration of carbohydrates in the culture fluid for the specified strain is 5.5 g / L.
Длительность ферментации до наработки 700 мл культуральной жидкости составила 56 ч. концентрация L-лизина в культуральной жидкости 72 г/л, а выход L-лизина от массы потребленных углеводов составил 45%. The duration of fermentation before the production of 700 ml of culture fluid was 56 hours. The concentration of L-lysine in the culture fluid was 72 g / l, and the yield of L-lysine from the mass of consumed carbohydrates was 45%.
Пример 4бс. Биосинтез L-лизина с использованием штамма Brevibacterium flavum E-531
Биосинтез целевого продукта проводили, как описано в 2бс, учитывая, что минимально допустимая концентрация углеводов в культуральной жидкости для указанного штамма равна 6,2 г/л.Example 4bs. L-lysine biosynthesis using Brevibacterium flavum E-531 strain
The biosynthesis of the target product was carried out as described in 2bs, given that the minimum allowable concentration of carbohydrates in the culture fluid for the specified strain is 6.2 g / L.
Длительность ферментации до наработки 700 мл культуральной жидкости составила 54 ч. концентрация L-лизина в культуральной жидкости 60 г/л, а выход L-лизина от массы потребленных углеводов составил 45%. The duration of fermentation before the production of 700 ml of culture fluid was 54 hours. The concentration of L-lysine in the culture fluid was 60 g / l, and the yield of L-lysine from the mass of consumed carbohydrates was 45%.
Приведенные примеры биосинтеза L-лизина с использованием разных штаммов-продуцентов подтверждают промышленную применимость предложенного способа. The examples of L-lysine biosynthesis using different producer strains confirm the industrial applicability of the proposed method.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UA95125517 | 1995-12-28 | ||
| UA95125517 | 1995-12-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2125608C1 true RU2125608C1 (en) | 1999-01-27 |
| RU96105202A RU96105202A (en) | 1999-01-27 |
Family
ID=21689102
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96105202A RU2125608C1 (en) | 1995-12-28 | 1996-03-18 | Method of l-lysine producing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2125608C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2486248C2 (en) * | 2011-06-29 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет инженерной экологии" (ФГБОУ ВПО "МГУИЭ") | Method l-lysine biosynthesis |
| RU2815942C1 (en) * | 2020-08-19 | 2024-03-25 | Тяньцзинь Инститьют Оф Индастриал Байотекнолоджи, Чайниз Экэдеми Оф Сайенсиз | Polynucleotide having promoter activity, and use of polynucleotide for producing amino acid |
-
1996
- 1996-03-18 RU RU96105202A patent/RU2125608C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Пусковой регламент N ПР-64-186-84 на производство кормового концентрата L-лизина, утвержд.нач-ком ВПО "Союзбакпрепарат" А.С.Юдиным 12.10.84, с. 15 - 17. Бекер В.Ф., Бекер М.Е. Лизин микробного синтеза. - Рига: Зинатне, 1974, с. 17. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2486248C2 (en) * | 2011-06-29 | 2013-06-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет инженерной экологии" (ФГБОУ ВПО "МГУИЭ") | Method l-lysine biosynthesis |
| RU2815942C1 (en) * | 2020-08-19 | 2024-03-25 | Тяньцзинь Инститьют Оф Индастриал Байотекнолоджи, Чайниз Экэдеми Оф Сайенсиз | Polynucleotide having promoter activity, and use of polynucleotide for producing amino acid |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BE1008008A3 (en) | Method and apparatus for adjusting the concentration of carbon source in aerobic culture microorganism. | |
| US20050250190A1 (en) | Crypthecodinium cohnii biomass cultured to synthesize docosahexaenoic acid | |
| US20050202525A1 (en) | Novel feeding processes for fermentation | |
| JP2008054688A (en) | Osmotically controlled fermentation process for preparation of acarbose | |
| FR2745297A1 (en) | USE OF A BACTERIAL STRAIN FOR THE PRODUCTION OF FORMIC ACID OR FORMIATE AND METHOD OF FERMENTATION USING THE SAME | |
| CN101268179A (en) | Continuous culture apparatus for alcohol producing bacterium and method of culturing the bacterium | |
| RU2163076C1 (en) | Method and apparatus for biological conversion of plant wastes | |
| RU2125608C1 (en) | Method of l-lysine producing | |
| CN101822310A (en) | Method for cultivating lactobacillus and producing live lactobacillus feed by utilizing scum | |
| KR20050053701A (en) | Astaxanthin production using fed-batch fermentation process by phaffia rhodozyma | |
| Abdenacer et al. | High production of L-glutamic acid from date juice extracts by using fed-batch cultures: pulsed and continuous feeding modes | |
| CN1071951A (en) | The method of asynchronous microbiological fermentative production long-chain alpha, omega-dibasic acid | |
| SU974817A1 (en) | Method of producing l-treonin | |
| US20060270004A1 (en) | Fermentation processes with low concentrations of carbon-and nitrogen-containing nutrients | |
| KR0136719B1 (en) | Method for concurrent fermentation of basic amino acid and acidic amino acid | |
| JPS62289192A (en) | Continuous production of amino acid by fermentation | |
| SU778256A1 (en) | Method of obtaining l=lysine | |
| US4286060A (en) | Process for production of an amino acid | |
| RU2093578C1 (en) | Method of preparing the food protein product | |
| RU2486248C2 (en) | Method l-lysine biosynthesis | |
| Yech | Single-cell protein of Rhodotorula sp. Y-38 from ethanol, acetic acid and acetaldehyde | |
| SU666874A1 (en) | Method of producing l-lysine | |
| KR810000047B1 (en) | Process for preparation of citric acid by fed batch culture | |
| RU2148643C1 (en) | Method of operation over biochemical process | |
| CA1301529C (en) | Hydrocarbonated vegetal substrate based natural food product and production process |