RU2123532C1 - Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof - Google Patents
Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2123532C1 RU2123532C1 RU95119623A RU95119623A RU2123532C1 RU 2123532 C1 RU2123532 C1 RU 2123532C1 RU 95119623 A RU95119623 A RU 95119623A RU 95119623 A RU95119623 A RU 95119623A RU 2123532 C1 RU2123532 C1 RU 2123532C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- anthrax
- cultures
- vaccines
- selection
- vaccine
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при разработке, производстве и контроле качества живых сибиреязвенных вакцин. The invention relates to medical microbiology and can be used in the development, production and quality control of live anthrax vaccines.
Основными требованиями для всех живых вакцин, в том числе и сибиреязвенных, являются высокая жизнеспособность микробов в них и иммунологическая эффективность. The main requirements for all live vaccines, including anthrax, are the high viability of the microbes in them and immunological effectiveness.
Для отбора наиболее иммуногенных и перспективных субкультур для производства сибиреязвенных вакцин, а также для их контроля необходимо выполнение трудоемких и длительных по времени испытаний, связанных с использованием большого числа лабораторных животных [1]. To select the most immunogenic and promising subcultures for the production of anthrax vaccines, as well as to control them, it is necessary to carry out laborious and time-consuming tests involving the use of a large number of laboratory animals [1].
В процессе производства живых вакцин на их качество оказывают влияние такие факторы, как состав среды выращивания и режим культивирования микробов, условия лиофильного высушивания и последующего хранения препарата. Количеcтво живых микробов в вакцине является основным показателем для оценки ее качества на всех этапах приготовления и единственным, на основании которого продляют срок годности длительно хранившегося препарата: согласно требованиям ВОЗ для продления срока годности необходимо содержание в препарате не менее 50% живых спор от исходного их количества. During the production of live vaccines, their quality is influenced by factors such as the composition of the growing medium and the regime of microbial cultivation, conditions of freeze drying and subsequent storage of the drug. The number of living microbes in the vaccine is the main indicator for assessing its quality at all stages of preparation and the only one on the basis of which the shelf life of the long-stored drug is extended: according to WHO requirements, to extend the shelf life, the drug must contain at least 50% of live spores from their initial number .
Между тем, как показывает производственный опыт, серии вакцины, изготовленные из одного и того же штамма по единой технологии и содержащие одинаковое количество живых спор, отличаются друг от друга по иммунологическим свойствам и стабильности в процессе хранения. Причиной этого является неоднородность их клеточного состава по свойствам, которые вносят свой вклад в иммунологическую активность препарата [2, 3]. Meanwhile, as production experience shows, vaccine series made from the same strain using the same technology and containing the same amount of live spores differ from each other in immunological properties and stability during storage. The reason for this is the heterogeneity of their cellular composition according to properties that contribute to the immunological activity of the drug [2, 3].
Известно, что иммуногенность живых вакцин находится в обратной зависимости от их реактогенности. Реактогенность живых сибиреязвенных вакцин определяется мало изученными детерминантами вирулентности хромосомного происхождения, в частности протеазами [4, 5]. В работе [5, 6] было показано, что непротеолитический вариант культуры сибиреязвенного вакцинного штамма Sterne 34 F2 обладал более высокой иммунологической эффективностью, чем исходный штамм, обладающий протеолитической активностью [6].It is known that the immunogenicity of live vaccines is inversely related to their reactogenicity. The reactogenicity of live anthrax vaccines is determined by poorly understood determinants of chromosomal virulence, in particular, proteases [4, 5]. It was shown in [5, 6] that the non-proteolytic variant of the culture of the anthrax vaccine strain Sterne 34 F 2 had higher immunological efficacy than the original strain with proteolytic activity [6].
Исследованиями [3] было впервые установлено, что лецитиназная и гемолитическая активности сибиреязвенного микроба взаимосвязаны. Известен ряд работ, посвященных обработке методом изучения клонального состава культур сибиреязвенного микроба [7], их способности к токсинообразованию [8], образованию зон гемолиза [9, 10]. Все эти исследования проводили с целью изучения структурной и функциональной организации возбудителя сибирской язвы, для создания новых высокоэффективных методов и средств диагностики, профилактики и лечения инфекции. Но они не решают проблемы надежного отбора вакцинных штаммов и их субкультур для производства сибиреязвенных вакцин с высокими иммуногенностью и стабильностью. Studies [3] were the first to establish that the lecithinase and hemolytic activities of the anthrax microbe are interconnected. A number of works are known on processing by the method of studying the clonal composition of anthrax microbe cultures [7], their ability to toxin formation [8], and the formation of hemolysis zones [9, 10]. All these studies were carried out in order to study the structural and functional organization of the causative agent of anthrax, to create new highly effective methods and means of diagnosis, prevention and treatment of infection. But they do not solve the problem of reliable selection of vaccine strains and their subcultures for the production of anthrax vaccines with high immunogenicity and stability.
Наиболее близким к заявляемому изобретению по существу и назначению является способ испытания и оценки сибиреязвенных штаммов и вакцин, включающий идентификацию штаммов по видимым признакам (рост культуры, способность к гемолизу, чувствительность к сибиреязвенному фагу, отсутствие капсулообразования, чувствительность к антибиотикам), их безвредности, стабильности биологических свойств и иммуногенности, определяемых in vivo. При этом исключаются штаммы, способные к гемолизу на питательном агаре по Хоттингеру [1]. The essence and purpose closest to the claimed invention is a method for testing and evaluating anthrax strains and vaccines, including identification of strains by visible signs (culture growth, ability to hemolysis, sensitivity to anthrax phage, lack of capsule formation, sensitivity to antibiotics), their safety, stability biological properties and immunogenicity determined in vivo. In this case, strains capable of hemolysis on nutrient agar according to Hottinger are excluded [1].
Недостатками прототипа являются недостаточная иммуногенность и стабильность отобранных субкультур и вакцин после изготовления и хранения, большой расход лабораторных животных, длительность испытаний. Эти недостатки обусловлены тем, что исследованию подлежат все бескапсульные культуры, среди которых могут быть и не обладающие иммунологической эффективностью. Кроме того, при этом не учитывается такой фактор, как клеточный состав микробов, влияющий на иммуногенность и стабильность препарата. The disadvantages of the prototype are the lack of immunogenicity and stability of the selected subcultures and vaccines after manufacture and storage, high consumption of laboratory animals, the duration of the tests. These disadvantages are due to the fact that all capsule-free cultures are subject to research, among which there may not be immunological efficacy. In addition, this does not take into account such a factor as the cellular composition of microbes, which affects the immunogenicity and stability of the drug.
Целью изобретения является повышение иммуногенности и стабильности вакцин при сокращении времени и затрат на испытания сибиреязвенных вакцинных штаммов, выделенных из них субкультур и готовых вакцин. The aim of the invention is to increase the immunogenicity and stability of vaccines while reducing the time and cost of testing anthrax vaccine strains isolated from them subcultures and finished vaccines.
Поставленная цель достигается тем, что культуры сибиреязвенных вакцинных штаммов и изготовленные из них вакцины предварительно испытывают in vitro на способность микробных клеток к синтезу экзотоксина на иммунодиффузной среде для выявления капсуло- и токсинообразования, далее отобранные из них субкультуры с относительным содержанием Тох+ КОЕ (колониеобразующих единиц) не менее 95 - 98% от общего их числа подвергают дополнительной селекции на двухслойном агаре для выделения колоний, образующих зоны гемолиза 2 - 8 мм через 18 - 24 ч. Отобранные таким образом культуры подвергают дальнейшим испытаниям с оценкой их культурально-морфологических, биохимических и других видовых свойств, а также их безвредности in vivo по существующей схеме.This goal is achieved in that cultures of anthrax vaccine strains and vaccines made from them are pre-tested in vitro for the ability of microbial cells to synthesize exotoxin on an immunodiffusion medium to detect capsule and toxin formation, then subcultures selected with a relative content of Tox + CFU (colony forming units) ) at least 95 - 98% of the total number are subjected to additional selection on two-layer agar to isolate colonies forming hemolysis zones of 2-8 mm after 18-24 hours. In this way, cultures are subjected to further tests with an assessment of their cultural-morphological, biochemical and other species properties, as well as their in vivo safety according to the existing scheme.
По отношению к прототипу изобретение имеет следующие отличительные признаки. In relation to the prototype, the invention has the following distinctive features.
Испытание культур на способность микробных клеток к синтезу экзотоксина на иммунодиффузной среде для выявления капсуло- и токсинообразования, отбор культур, содержащих не менее 95 - 98% Тох+ КОЕ, и последующая из селекция на двухслойном агаре с Эр крови барана для выделения колоний, образующих зоны гемолиза 2 - 8 мм через 18 - 24 ч.Testing of cultures for the ability of microbial cells to synthesize exotoxin on an immunodiffusion medium to detect capsule and toxin formation, selection of cultures containing at least 95 - 98% Tox + CFU, and subsequent selection on two-layer agar with ram blood of sheep to isolate colonies forming zones hemolysis of 2-8 mm after 18-24 hours
Целесообразность использования отличительных признаков обусловлена следующими соображениями. The feasibility of using the distinguishing features is due to the following considerations.
В ходе исследования сибиреязвенных штаммов необходимо установить, являются ли они патогенными и какова степень их патогенности (вирулентности). Основными факторами патогенности возбудителя сибирской язвы являются капсула и экзотоксин. Эти два фактора патогенности продуцируются микробом in vivo в ходе патологического инфекционного процесса в организме чувствительного к сибирской язве животного или человека, а также in vitro при культивировании на искусственных питательных средах в условиях, моделирующих внутреннюю среду макроорганизма. In the study of anthrax strains, it is necessary to establish whether they are pathogenic and what is the degree of their pathogenicity (virulence). The main pathogenicity factors of the causative agent of anthrax are the capsule and exotoxin. These two pathogenicity factors are produced by the microbe in vivo during a pathological infectious process in an organism of an animal or person sensitive to anthrax, as well as in vitro when cultured on artificial nutrient media under conditions simulating the internal environment of a macroorganism.
Штаммы сибиреязвенного микроба различаются по продукции этих факторов, что в результате определяет их разную вирулентность. Последнюю можно оценить in vivo по величине LD50 (дозе сибиреязвенных микробов, вызывающих гибель половины от взятых в опыт животных) или по L (дозе,вызывающей гибель всех взятых в опыт животных), а также in vitro, по наличию и характеру продукции капсулы и экзотоксина. Экзотоксин, кроме того, является основным фактором иммуногенности у бескапсульных вакцинных штаммов.The strains of the anthrax microbe differ in the production of these factors, which as a result determines their different virulence. The latter can be estimated in vivo by the value of LD 50 (the dose of anthrax microbes that cause the death of half of the animals taken in the experiment) or by L (the dose that causes the death of all the animals taken in the experiment), as well as in vitro, by the presence and nature of the capsule production and exotoxin. Exotoxin, in addition, is a major immunogenicity factor in capsule-free vaccine strains.
Отбор культур сибиреязвенных вакцинных штаммов проводится по наличию и характеру продукции экзотоксина и отсутствию капсулообразования с использованием иммунодиффузной среды, предложенной в работе [8] для изучения вирулентных штаммов. The selection of cultures of anthrax vaccine strains is carried out according to the presence and nature of exotoxin production and the absence of capsule formation using the immunodiffusion medium proposed in [8] for the study of virulent strains.
Дополнительной немаловажной характеристикой патогенности сибиреязвенных микробов является их гемолитическая активность. An additional important characteristic of the pathogenicity of anthrax microbes is their hemolytic activity.
Выбор метода исследования культур сибиреязвенных микробов по их гемолитической активности с использованием двухслойного агара, согласно работам [9, 10] , обусловлен тем, что улучшается диффузия гемолитических продуктов, вырабатываемых сибиреязвенными микробами, и исключается ингибирующее влияние дефибринированной крови. Этот метод позволяет не только дифференцировать возбудителя сибирской язвы от близкородственных спорообразующих сапрофитов, но и сравнивать отдельные сибиреязвенные штаммы по уровню их гемолитической активности. The choice of a method for studying cultures of anthrax microbes by their hemolytic activity using bilayer agar, according to [9, 10], is due to the fact that the diffusion of hemolytic products produced by anthrax microbes improves and the inhibitory effect of defibrinated blood is excluded. This method allows not only to differentiate the anthrax causative agent from closely related spore-forming saprophytes, but also to compare individual anthrax strains by the level of their hemolytic activity.
Таким образом, использованием заявляемых отличительных признаков достигается отбор культур с заданными свойствами, обеспечивающими высокие показатели иммуногенности и стабильности вакцин, и исключаются испытания in vivo неэффективных культур, что снижает затраты времени и расход лабораторных животных. Заявляемый способ можно использовать при отборе перспективных для использования в производстве культур сибиреязвенных вакцинных штаммов и для контроля вакцин как в процессе их изготовления, так и после их длительного хранения. Thus, using the claimed distinctive features, selection of cultures with desired properties that provide high immunogenicity and stability of vaccines is achieved, and in vivo testing of ineffective cultures is excluded, which reduces the time and expense of laboratory animals. The inventive method can be used in the selection of promising for use in the production of cultures of anthrax vaccine strains and to control vaccines both during their manufacture and after long-term storage.
Культуры, содержащие менее 95% Тох+ КОЕ или совсем не продуцирующие экзотоксин, а также не образующие зон гемолиза на двухслойном агаре с Эр барана через 18 - 24 ч, формируют колонии I типа и соответственно обозначаются как культуры I типа.Cultures containing less than 95% Tox + CFU or not producing exotoxin at all, and also not forming hemolysis zones on two-layer agar from Er ram after 18-24 hours, form type I colonies and are accordingly designated as type I cultures.
Культуры, содержащие не менее 95 - 98% Тох+ КОЕ и образующие на двухслойном агаре с Эр барана зоны гемолиза 2 - 8 мм через 18 - 24 ч, формируют колонии II типа и соответственно обозначаются как культуры II типа.Cultures containing at least 95 - 98% Tox + CFU and forming hemolysis zones of 2-8 mm after 18-24 hours on two-layer agar from Er ram form colonies of type II and are accordingly designated as cultures of type II.
Культуры I типа дают типичный рост на бульоне Хоттингера в виде жгута из тонких волокон, трудно разбивающегося при встряхивании. На агаре Хоттингера через 18 - 22 ч инкубации при температуре 37oC они образуют крупные (3 - 5 мм), плоские, матовые, шероховатые колонии, с крупными сглаженными завитками на их поверхности, на двухслойном агаре через 18 - 24 ч зоны гемолиза отсутствуют.Type I cultures produce typical growth on the Hottinger broth in the form of a tow of thin fibers that is difficult to break when shaken. On Hottinger agar after 18 - 22 h of incubation at a temperature of 37 o C they form large (3 - 5 mm), flat, dull, rough colonies, with large smoothed curls on their surface, on the two-layer agar after 18 - 24 h there are no hemolysis zones .
Культуры II типа дают типичный рост для сибиреязвенного микроба в бульоне Хоттингера в виде "комочка ваты", легко разбивающегося при встряхивании с образованием гомогенной мути, на агаре Хоттингера через 18 - 22 ч инкубации при температуре 37oC они вырастают в виде мелких (до 2,5 мм) выпуклых, блестящих, с четким краем колоний, с мелкими крутыми завитками на их поверхности, при посеве на двухслойный агар с Эр барана образуют зоны гемолиза 2 - 8 мм через 18 - 24 ч. Уровень протеолитической активности у микробов культур II типа несколько ниже, чем у культур I типа.Type II cultures give a typical growth for the anthrax microbe in the Hottinger broth in the form of a “cotton ball”, which easily breaks when shaken with the formation of a homogeneous turbidity, on Hottinger agar after 18 to 22 hours of incubation at a temperature of 37 o C they grow in the form of small ones (up to 2 , 5 mm) convex, brilliant, with a clear edge of the colonies, with small steep curls on their surface, when plated on two-layer agar with Er ram, hemolysis zones of 2-8 mm are formed after 18-24 hours. The level of proteolytic activity in type II microbes slightly lower than crops I type.
Заявляемый способ осуществляется в следующей последовательности: культуры сибиреязвенных вакцинных штаммов проверяются на среде для выявления капсуло- и токсинообразования [8] , из них отбираются субкультуры, у которых токсинообразованием обладают не менее 95 - 98% микробных клеток популяции; отобранные субкультуры испытывают на двухслойном агаре с Эр барана и отбирают колонии с зоной гемолиза 2 - 8 мм через 18 - 24 ч (колонии II типа). Содержание в передаваемой для производства сибиреязвенных вакцин культуре клеток, формирующих колонии II типа, должно быть не менее 95 - 100%. Это обеспечивает стабильность вакцины при лиофильном высушивании и длительном хранении. The inventive method is carried out in the following sequence: cultures of anthrax vaccine strains are tested on a medium to detect capsule and toxin formation [8], subcultures are selected from which at least 95 - 98% of the microbial cells of the population have toxin formation; the selected subcultures were tested on two-layer agar from Er ram and colonies with a hemolysis zone of 2-8 mm were selected after 18-24 hours (type II colonies). The content in the culture of cells forming type II colonies transmitted for the production of anthrax vaccines should be at least 95-100%. This ensures the stability of the vaccine during freeze drying and long-term storage.
Возможность практического осуществления и эффективность заявляемого способа иллюстрируются примерами практического выполнения. The possibility of practical implementation and the effectiveness of the proposed method are illustrated by examples of practical implementation.
Пример 1. Готовили спорные взвеси референс - препарата вакцины СТИ, четырех вариантов вакцинного штамма 228/8 и пяти безкапсульных вариантов штамма 228, селекционированных в качестве возможных новых вакцин, при высеве из которых на чашках с агаром Хоттингера формировалось 25 - 50 колоний. Готовили чашки с иммунодиффузной средой в соответствии с работой [8], засевали каждый из вариантов на 10 - 20 чашек, посевы помещали в анаэростат, из которых выкачивали 25% воздуха и заменяли его углекислым газом. Посевы инкубировали при 37oC в течение 48 ч, затем чашки извлекали из анаэростата и переносили в холодильник, выдерживали при +4oC в течение 3 сут, после чего их просматривали при естественном освещении на темном фоне, пользуясь листом черной бумаги. Подсчитывали общее число колоний, число колоний, окруженных ореолами иммунопреципитации, и определяли их процентное содержание для каждого из вариантов. Готовили взвеси с содержанием 106 спор в 0,5 мл для всех вариантов и такими дозами иммунизировали подкожно по 30 морских свинок, с массой тела 330 - 350 г, на каждую культуру. Через 21 сут каждую группу животных заражали подкожно сибиреязвенным тест-штаммом 71/12 вторая вакцина Ценковского, в объеме 0,5 мл, дозами 102, 103, 104, 105 и 106 живых спор, по 6 животных на каждую дозу. В качестве контроля этим же штаммом заражали 30 невакцинированных морских свинок подкожно, в объеме 0,5 мл, дозами 10, 102, 103, 104, 105 живых спор, по 6 животных на каждую дозу. Через 10 сут подсчитывали число выживших животных от каждой заражающей дозы и вычисляли LD50 по Риду и Менчу для вакционированных и невакционированных морских свинок. Вычисляли индекс иммунитета (ИИ), который равен отношению LD50 заражающего штамма для вакционированных животных к LD50 этого же штамма для невакционированных морских свинок. Параллельно по этой же методике определяли индекс иммунитета для реферанс-вакцины СТИ. Результаты приведены в таблице 1.Example 1. Controversial suspensions of the reference preparation of the STI vaccine, four variants of the vaccine strain 228/8 and five capsuleless variants of strain 228 were prepared, which were selected as possible new vaccines, 25–50 colonies were formed on the plates from the Hottinger agar. Cups with immunodiffusion medium were prepared in accordance with [8], each of the options was sown for 10–20 cups, crops were placed in an anaerostat, 25% of the air was pumped out and replaced with carbon dioxide. Crops were incubated at 37 ° C for 48 h, then the plates were removed from the anaerostat and transferred to the refrigerator, kept at + 4 ° C for 3 days, after which they were viewed under natural light against a dark background using a sheet of black paper. The total number of colonies, the number of colonies surrounded by halos of immunoprecipitation were calculated, and their percentage for each of the options was determined. Suspensions of 10 6 spores in 0.5 ml were prepared for all variants and 30 guinea pigs, weighing 330-350 g, per culture were immunized subcutaneously with such doses. After 21 days, each group of animals was subcutaneously infected with the anthrax test strain 71/12, the second Zenkovsky vaccine, in a volume of 0.5 ml, in doses of 10 2 , 10 3 , 10 4 , 10 5 and 10 6 live spores, 6 animals per dose . As a control, 30 unvaccinated guinea pigs were infected with the same strain subcutaneously, in a volume of 0.5 ml, in doses of 10, 10 2 , 10 3 , 10 4 , 10 5 live spores, 6 animals per dose. After 10 days, the number of surviving animals from each infectious dose was calculated and the LD 50 of Reed and Menchu were calculated for the vaccinated and non-vaccinated guinea pigs. The immunity index (II) was calculated, which is equal to the ratio of LD 50 of the infecting strain for vaccinated animals to LD 50 of the same strain for unactivated guinea pigs. In parallel, the immunity index for the STI reference vaccine was determined using the same technique. The results are shown in table 1.
Пример 2. В чашки Петри наливали по 20 мл расплавленного 1%-ного агара (Difco) на 0,9%-ном растворе хлористого натрия. После застывания его наливали вторым слоем 5 мл 0,6 агара (Difco) на 0,9%-ном растворе хлористого натрия, содержащего 6% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя агара на чашки засевали споровые взвеси свежеприготовленных сибиреязвенных вакцин, у которых содержание Тох+ КОЕ в популяции, отобранных по примеру 1, составляло не менее 95 - 98%. Для каждой вакцины использовали 3 - 5 чашек Петри с двухслойным агаром, на которые засевали по 0,1 мл споровой взвеси из разведения, обеспечивающего рост на агаре Хоттингера 20 - 50 изолированных колоний. Чашки Петри помещали в термостат при температуре 37oC. Через 24 ч при помощи миллиметровой линейки измеряли ширину зоны лизина эритроцитов вокруг выросших колоний. Отбирали колонии с шириной зоны 2 - 8 мм (колонии II типа) и подсчитывали их процент в изучаемой культуре (табл. 2).Example 2. In Petri dishes, 20 ml of molten 1% agar (Difco) in a 0.9% sodium chloride solution were poured. After solidification, it was poured into a second layer of 5 ml of 0.6 agar (Difco) in a 0.9% solution of sodium chloride containing 6% washed sheep red blood cells. After the top layer of agar had solidified, spore suspensions of freshly prepared anthrax vaccines were seeded on plates, in which the Tox + CFU content in the population selected according to Example 1 was not less than 95 - 98%. For each vaccine, 3–5 Petri dishes with double-layer agar were used, on which 0.1 ml of spore suspension from a dilution providing for the growth of 20–50 isolated colonies on Hottinger agar was seeded. Petri dishes were placed in a thermostat at a temperature of 37 o C. After 24 hours, the width of the erythrocyte lysine zone around the grown colonies was measured using a millimeter ruler. Colonies with a zone width of 2-8 mm (type II colonies) were selected and their percentage in the studied culture was calculated (Table 2).
Пример 3. Вакцину СТИ, приготовленную из культуры I типа и культур II типа, отобранных по примерам 1 и 2, испытывали на урожайность спор при выращивании культур на среде Гладстона-Филдса, на стабильность полученных спор к нагреванию до 80oC 20 мин и к лиофильному высушиванию, а также определяли их иммуногенные свойства в соответствии с рекомендациями [1]. В этом случае для контроля использовали вакцину СТИ-референс. Результаты приведены в табл. 3.Example 3. The STI vaccine prepared from type I culture and type II cultures selected according to examples 1 and 2 was tested for the yield of spores when growing crops on Gladstone-Fields medium, for the stability of the obtained spores against heating to 80 o C for 20 min and freeze drying, and their immunogenic properties were determined in accordance with the recommendations [1]. In this case, the control vaccine STI reference was used. The results are shown in table. 3.
Пример 4. Вакцины из разных сибиреязвенных вакцинных штаммов, изготовленные из культур I и II типов, отобранных по примерам 2 и 1, испытывали на стабильность спор к нагреванию до 80oC в течение 20 мин. Результаты приведены в табл. 4.Example 4. Vaccines from various anthrax vaccine strains made from cultures of types I and II selected in examples 2 and 1 were tested for the stability of spores to heat up to 80 o C for 20 minutes The results are shown in table. 4.
Пример 5. Вакцины, изготовленные из разных штаммов, а также культур I и II типов этих же штаммов (отобраны по примерам 1 и 2), проверили на иммуногенность в соответствии с рекомендациями [1]. Параллельно по этой же методике определяли индекс иммунитета для контролей-референс-вакцины СТИ, СТИ ОСО сушки 1989 г., СТИ коммерческой. Результаты представлены в табл. 5. Example 5. Vaccines made from different strains, as well as cultures of types I and II of the same strains (selected according to examples 1 and 2), were tested for immunogenicity in accordance with the recommendations [1]. At the same time, the immunity index was determined using the same technique for the STI reference-control vaccine, STI OSO drying 1989, and STI commercial. The results are presented in table. 5.
Пример 6. Серии вакцины СТИ на разных средах высушивания, которые хранились 7 лет при 37oC и при одинаковой жизнеспособности спор в них, содержали разное количество микробных клеток, формирующих колонии II типа, испытывали на иммунологическую эффективность. Для этого вакцинированных 1 млн. живых спор морских свинок на 21 сут заражали вирулентным сибиреязвенным штаммом 81/1 в дозах 1000 и 10000 живых спор, по 12 животных на каждую дозу. Результаты представлены в таблице 6.Example 6. The STI vaccine series on different drying media, which were stored for 7 years at 37 ° C and with the same viability of spores in them, contained a different number of microbial cells forming type II colonies, and were tested for immunological efficacy. For this, 1 million live spores of guinea pigs vaccinated for 21 days were infected with a virulent anthrax strain 81/1 in doses of 1000 and 10000 live spores, 12 animals per dose. The results are presented in table 6.
Таким образом, как показали результаты испытаний сибиреязвенных вакцин, изготовленных из культур II типа, отобранных по предлагаемому способу, они имеют значительные преимущества по урожайности спор, их стабильности при нагреве до 80oC 20 мин, лиофильном высушивании, длительном хранении, а также по иммуногенным свойствам.Thus, as shown by the test results of anthrax vaccines made from cultures of type II, selected by the proposed method, they have significant advantages in spore yield, their stability when heated to 80 o C for 20 minutes, freeze drying, long-term storage, as well as immunogenic properties.
Использование изобретения позволит не только увеличить иммунологическую эффективность и стабильность сибиреязвенных вакцин, но и повысить надежность их контроля в процессе производства, а также аттестации вакцин после истечения основного срока их годности. The use of the invention will not only increase the immunological effectiveness and stability of anthrax vaccines, but also increase the reliability of their control during production, as well as the certification of vaccines after the expiration of their main shelf life.
Источники информации
1. Основные критерии отбора сибиреязвенных вакцинных штаммов, предназначенных для изготовления живых сибиреязвенных вакцин для иммунизации людей (Методические указания). - М.: 1982, 21 с.Sources of information
1. The main selection criteria for anthrax vaccine strains intended for the manufacture of live anthrax vaccines for immunization of people (Guidelines). - M.: 1982, 21 p.
2. Еременко Е.И., Фунтикова Т.Н., Солодовников Б.В., Банных В.А. Оценка иммунологических свойств сибиреязвенных вакцинных штаммов in vitro // Материалы Российской научной конференции (21 - 23 сентября 1993 г.). Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций. - Саратов: 1993, с. 196. 2. Eremenko E.I., Funtikova T.N., Solodovnikov B.V., Bannykh V.A. Evaluation of the immunological properties of anthrax vaccine strains in vitro // Materials of the Russian Scientific Conference (September 21-23, 1993). Immunology and specific prophylaxis of especially dangerous infections. - Saratov: 1993, p. 196.
3. Цыганкова О. И. , Фунтикова Т.Н., Буравцева Н.П. Изучение некоторых свойств субкультур сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ - 1, там же, с. 192. 3. Tsygankova O. I., Funtikova T. N., Buravtseva N. P. The study of some properties of subcultures of anthrax vaccine strain STI - 1, ibid., P. 192.
4. Абалакин В.А. Закономерности врожденного и приобретенного иммунитета против сибирской язвы. Автореферат диссертации на соискание уч. ст. д. мед. наук. - М.: 1990, 46 с. 4. Abalakin V.A. Patterns of congenital and acquired immunity against anthrax. Abstract of dissertation for the competition Art. d. honey sciences. - M .: 1990, 46 p.
5. Степанов А.С. Разработка основ генетического анализа возбудителей сибирской язвы. Автореферат диссертации на соискание уч. ст. д. мед. наук. - Саратов, 1992. - 40 с. 5. Stepanov A.S. Development of the basics of genetic analysis of anthrax pathogens. Abstract of dissertation for the competition Art. d. honey sciences. - Saratov, 1992 .-- 40 p.
6. Turba Ernest S. Nonproteolytic air-rulent Bacillus fnthracis as a leve vaceine // J. Baderiol. - 1966. - V. 91. - N 3. P.P. 930 - 933. 6. Turba Ernest S. Nonproteolytic air-rulent Bacillus fnthracis as a leve vaceine // J. Baderiol. - 1966. - V. 91. -
7. Пархоменко А. А., Степанов А.С. Клональный анализ культур сибиреязвенного микроба на способность продукции экзопротеаз и гемолизинов. Методическое пособие по генетике возбудителя сибирской язвы. - Саратов: 1991, с. 28 - 30. 7. Parkhomenko A. A., Stepanov A.S. Clonal analysis of anthrax microbe cultures on the ability to produce exoproteases and hemolysins. Toolkit on the genetics of the causative agent of anthrax. - Saratov: 1991, p. 28-30.
8. Jirns B.E., Welkas S.L. Cloning and expression of Bacillus anthracis protective antigen gene in Bacillus sullilis // Jnfect and . - 1986. - V. 54. - p.p. 126 - 129. 8. Jirns B.E., Welkas S.L. Cloning and expression of Bacillus anthracis protective antigen gene in Bacillus sullilis // Jnfect and. - 1986. - V. 54. - p.p. 126 - 129.
9. Авторское свидетельство СССР N 1597404, кл. C 12 O 1/04, 07.10.90. 9. Copyright certificate of the USSR N 1597404, cl. C 12
10. Определение гемолитической активности у сибиреязвенного микроба (Методические рекомендации). - Ставрополь: 1989, 40 с. 10. Determination of hemolytic activity in anthrax microbe (Methodical recommendations). - Stavropol: 1989, 40 p.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95119623A RU2123532C1 (en) | 1995-11-21 | 1995-11-21 | Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU95119623A RU2123532C1 (en) | 1995-11-21 | 1995-11-21 | Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2123532C1 true RU2123532C1 (en) | 1998-12-20 |
| RU95119623A RU95119623A (en) | 1998-12-27 |
Family
ID=20173962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95119623A RU2123532C1 (en) | 1995-11-21 | 1995-11-21 | Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2123532C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8409590B2 (en) | 2004-02-11 | 2013-04-02 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Anthrax antigens and methods of use |
-
1995
- 1995-11-21 RU RU95119623A patent/RU2123532C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Основные критерии отбора сибиреязвенных вакцинных штаммов, предназначенных для изготовления живых сибиреязвенных вакцин для иммунизации людей (Методические указания). - М.: 1982, с. 1-21. Еременко Е.И. и др. Оценка иммунологических свойств сибиреязвенных вакцинных штаммов in virto, В: Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций, Российская научная конференция (21-23 сентября 1993 г). - Саратов: 1993, с.196. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8409590B2 (en) | 2004-02-11 | 2013-04-02 | Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. | Anthrax antigens and methods of use |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Langendonck et al. | Tissue culture assays using Caco‐2 cell line differentiate virulent from non‐virulent Listeria monocytogenes strains | |
| Ananthanarayan | Ananthanarayan and Paniker's textbook of microbiology | |
| Parker | Some cultural characteristics of Staphylococcus aureus strains from superficial skin infections | |
| Panna et al. | Isolation and molecular detection of Pasteurella multocida Type A from naturally infected chickens, and their histopathological evaluation in artificially infected chickens in Bangladesh. | |
| EA021339B1 (en) | Rapid sterility microassay | |
| Herzberg et al. | IMMUNIZATION AGAINST BRUCELLA INFECTION I: Isolation and Characterization of a Streptomycin-Dependent Mutant | |
| Stephens | Disease in codling moth larvae produced by several strains of Bacillus cereus | |
| Khairallah et al. | A blend of broadly-reactive and pathogen-selected Vγ4 Vδ1 T cell receptors confer broad bacterial reactivity of resident memory γδ T cells | |
| Leonard et al. | A method for the production of staphylococcus toxin and toxoid | |
| RU2123532C1 (en) | Method of selection of anthrax vaccine strain cultures and vaccines prepared of thereof | |
| Arko et al. | Immunological and serological diversity of Neisseria gonorrhoeae: immunotyping of gonococci by cross-protein in guinea pig subcutaneous chambers | |
| Chu | Variation of Bacillus anthracis with special reference to the non-capsulated avirulent variant | |
| RU2376385C1 (en) | METHOD FOR IDENTIFICATION OF Bacillus anthracis WITH DIFFERENTIATION OF STRAINS BY PRODUCTION OF CAPSULE, PROTECTIVE ANTIGEN AND ANTIGENS OF S-LAYER | |
| RU2388489C1 (en) | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias | |
| Kibenge et al. | Staphylococcus aureus isolated from poultry in Australia I. Phage typing and cultural characteristics | |
| Corbel | Microbiological aspects | |
| RU2308969C1 (en) | LIVE TULAREMIA VACCINE Nik-sp. Francisella tularensis | |
| RU2181144C1 (en) | Method to release dermatophytes out of clinical material | |
| RU2101355C1 (en) | Method of selection of immunogenic strains and subcultures of live anthrax vaccines | |
| RU2141522C1 (en) | Test-infecting culture in assay of immunogenicity of anthrax vaccines, effectiveness of agents for emergency prophylaxis and treatment of patients with anthrax | |
| RU2654669C1 (en) | Diagnostic nutrient medium for differentiation of the bacillus anthracis by capsule and toxin formation | |
| Hooker et al. | Differentiation of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides from certain closely related caprine mycoplasmas by mycoplasmaemia and cross-protection tests in mice | |
| Hamad et al. | PREVALENCE OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS AMONG CLINICAL SAMPLES IN FALLUJAH CITY, IRAQ | |
| RU2422832C1 (en) | Method of producing erythrocytic diagnostic histoplasmosis and coccidiodomycosis antigen | |
| RU2101351C1 (en) | Method of differentiation of anthrax microbe strains by virulence in vitro |