RU2122862C1

RU2122862C1 - Cell-free antistaphylococcus vaccine for treatment of patients with chronic staphylococcus infection

Info

Publication number: RU2122862C1
Application number: RU95120818A
Authority: RU
Inventors: В.Н. Ефремова; Н.Б. Егорова; С.А. Масюкова
Original assignee: Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова
Priority date: 1995-12-08
Filing date: 1995-12-08
Publication date: 1998-12-10

Abstract

FIELD: medicine, vaccines. SUBSTANCE: invention relates to vaccine consisting of thermolabile and thermostable antigens providing high protective activity of a preparation. The latter is a cell-free antistaphylococcus vaccine involving thermolabile and thermostable protein-polysaccharide antigens from cellular wall of S. aurus, strains N 1991, 1986 exhibiting immunogenicity EД₅₀ = 20-100 mln. microbial cells, virulence ЛД₅₀ = 0.5-2.0 billion microbial cells, low content of protein A and weak allergenic activity. EFFECT: enhanced effectiveness of vaccine, low-reactive property. 7 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к вакцинным препаратам. The invention relates to medicine, namely to vaccine preparations.

Цель изобретения. Создание высокоэффективной антистафилококковой вакцины для лечения и профилактики обострений хронической стафилококковой инфекции. The purpose of the invention. The creation of a highly effective antistaphylococcal vaccine for the treatment and prevention of exacerbations of chronic staphylococcal infection.

Проблема стафилококковой инфекции на протяжении многих лет является одной из наиболее важных проблем медицинской науки и здравоохранения. Заболевания стафилококковой этиологии многообразны, поражают различные органы и, как правило, носят хронический характер. Удельный вес только хронических заболеваний кожи в разных районах станы составляет от 25 до 63%. The problem of staphylococcal infection for many years is one of the most important problems of medical science and healthcare. Diseases of staphylococcal etiology are diverse, affect various organs and, as a rule, are chronic. The proportion of only chronic skin diseases in different areas of the camp is from 25 to 63%.

В последние годы с целью лечения и предотвращения рецидивов заболевания при хронических инфекциях применяют вакцинотерапию. Имеющиеся коммерческие стафилококковые препараты для активной иммунотерапии (антифагин, корпускулярная вакцина, анатоксин) не достаточно эффективны. В частности, для лечения хронических пиодермий используется стафилококковая лечебная вакцина (антифагин), представляющая собой фильтрат экстракта убитой нагреванием в течение 1 ч при 100^oC культуры 10-12 штаммов стафилококка, выдержанного и подвергнутого аутолизу в течение 1,5 мес. Полученный жидкий препарат содержит 1,0-1,2% сухого вещества (1).In recent years, vaccine therapy has been used to treat and prevent relapse of the disease in chronic infections. Available commercial staphylococcal drugs for active immunotherapy (antifagin, corpuscular vaccine, toxoid) are not sufficiently effective. In particular, for the treatment of chronic pyoderma, a staphylococcal therapeutic vaccine (antifagin) is used, which is a filtrate of an extract killed by heating for 10-12 hours at 100 ^° C of a culture of 10-12 staphylococcus strains, aged and subjected to autolysis for 1.5 months. The resulting liquid preparation contains 1.0-1.2% of dry matter (1).

Недостатком препарата является его невысокая эффективность, что связано, в частности, с наличием в препарате только термостабильных антигенов стафилококка. The disadvantage of the drug is its low efficiency, which is associated, in particular, with the presence of only thermostable staphylococcus antigens in the drug.

Цель данного изобретения достигается получением бесклеточной антистафилококковой антибактериальной вакцины, состоящей из комплекса термолабильных и термостабильных антигенов, обеспечивающих высокую протективную активность препарата. The purpose of this invention is achieved by obtaining cell-free antistaphylococcal antibacterial vaccines, consisting of a complex of thermolabile and thermostable antigens, providing high protective activity of the drug.

Цель достигнута: содержанием термолабильных и термостабильных белковополисахаридной природы антигенов клеточной стенки стафилококка, использованием высокоиммуногенных штаммов S.aureus: ЕД₅₀ 20-100 млн. микробных клеток, характеризующихся слабой вирулентностью: ЛД₅₀ 0,5-2,0 млрд. микробных клеток, низким содержанием белка A, слабой аллергенной активностью.The goal was achieved: by the content of thermolabile and thermostable protein-polysaccharide nature of staphylococcal cell wall antigens, using highly immunogenic S.aureus strains: ED ₅₀ 20-100 million microbial cells characterized by weak virulence: LD ₅₀ 0.5-2.0 billion microbial cells, low protein A content, weak allergenic activity.

Пример осуществления способа. Для приготовления вакцины используют штаммы S. aureus N 1991 и N 1986 - депонированы в ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича. Штаммы культивируют 10 ч на плотной агаровой среде из триптического гидролизата казеина при температуре 37^oC. Культуру смывают дистиллированной водой, обрабатывают трехкратно тройным объемом ацетона с интервалом 10-18 ч с целью инактивации и высушивания микробной массы. Сухую инактивированную микробную массу подвергают водной экстракции путем добавления стерильной дистиллированной воды из расчета 80 мл на 1 г массы. Экстракцию проводят трехкратно при шюттелировании в течение 1 ч при каждой экстракции. Затем, экстракт центрифугируют при 6000 об/м в течение часа. Собирают декантат и подвергают его лиофильному высушиванию в присутствии стабилизирующих веществ желатозы и аскорбиновой кислоты. Полученный антигенный комплекс характеризуется содержанием 15-20% белка, 10-15% углеводов и дает в электрофорезе со специфической антимикробной сывороткой 3-4 линии преципитации.An example implementation of the method. For the preparation of the vaccine using strains S. aureus N 1991 and N 1986 - deposited in GNIISK them. L.A. Tarasevich. The strains were cultured for 10 h on a dense agar medium from tryptic casein hydrolyzate at a temperature of 37 ^o C. The culture was washed with distilled water, treated with three times a triple volume of acetone with an interval of 10-18 h in order to inactivate and dry the microbial mass. Dry inactivated microbial mass is subjected to water extraction by adding sterile distilled water at the rate of 80 ml per 1 g of mass. The extraction is carried out three times during shuttling for 1 hour at each extraction. Then, the extract is centrifuged at 6000 rpm for an hour. The decantate is collected and freeze-dried in the presence of stabilizing substances gelatose and ascorbic acid. The resulting antigenic complex is characterized by a content of 15-20% protein, 10-15% carbohydrates and gives 3-4 precipitation lines in electrophoresis with specific antimicrobial serum.

Полученный указанным способом препарат был подвергнут доклиническому и клиническому испытанию. Экспериментально была обоснована иммуногенность используемых штаммов на модели септической инфекции кроликов (табл.1). Obtained in this way, the drug was subjected to preclinical and clinical testing. The immunogenicity of the strains used was experimentally substantiated in a model of septic rabbit infection (Table 1).

Дефицитность штамма 1986 по белку A подтверждена в реакциях диффузии в геле и пассивной гемагглютинации в сравнении с эталонным дефицитным по белку A штаммом S.aures Wood-46. Для проведения реакции диффузии в геле получали гипериммунные антимикробные кроличьи сыворотки к штаммам 1986 и Wood-46 и ставили реакцию против очищенного протеина A. Сыворотки к штамму 1986 не взаимодействовали с протеином A. Сыворотки к штамму Wood-46 образовали слабые проципитаты. Deficiency of strain 1986 for protein A was confirmed in gel diffusion and passive hemagglutination reactions compared to the reference protein A deficient strain S.aures Wood-46. To carry out the gel diffusion reaction, hyperimmune antimicrobial rabbit sera were obtained for strains 1986 and Wood-46 and a reaction was performed against purified protein A. Serums for strain 1986 did not interact with protein A. Sera for strain Wood-46 formed weak precipitates.

В реакции пассивной гемагглютинации эритроцитарный диагностикум приготовленный на основе антигенов из штамма 1986 получен более специфический ответ в сравнении с таковым при использовании антигенов из штамма Wood-46 (табл.2). In the passive hemagglutination reaction, the erythrocytic diagnosticum prepared on the basis of antigens from strain 1986 obtained a more specific response compared to that when using antigens from strain Wood-46 (Table 2).

В доклинических испытаниях было также установлено, что протективная активность бесклеточной антистафилококковой вакцины была существенно выше протективной активности антифагина (табл.3). In preclinical trials, it was also found that the protective activity of the acellular antistaphylococcal vaccine was significantly higher than the protective activity of antifagin (Table 3).

Роль термолябильных антигенов в создании протективной активности бесклеточной стафилококковой вакцины выявлена в экспериментальных исследованиях и представлена в табл. 4. The role of thermolabile antigens in creating the protective activity of acellular staphylococcal vaccine was identified in experimental studies and is presented in table. 4.

Клиническая эффективность бесклеточной антистафилококковой вакцины показана в контролируемых государственных испытаниях на примере хронических пиодермий на базе центрального кожно-венерологического института РАМН и дерматологического отделения городской клинической больницы N 4 им. В.Г.Короленко. Исследование проведено на 3-х группах больных: 1 - больные хроническими пиодермиями, получали иммунотерапию бесклеточной антистафилококковой вакциной; 2 - иммунотерапию проводили коммерческим препаратом - антифагином и 3 - больные получали традиционное лечение без иммунотерапии. The clinical efficacy of the acellular antistaphylococcal vaccine is shown in controlled state trials using the example of chronic pyoderma on the basis of the Central Dermatovenerologic Institute of the Russian Academy of Medical Sciences and the Dermatological Department of the City Clinical Hospital No. 4 named after V.G. Korolenko. The study was conducted in 3 groups of patients: 1 - patients with chronic pyoderma, received immunotherapy with cell-free antistaphylococcal vaccine; 2 - immunotherapy was carried out with a commercial drug - antifagin and 3 - patients received traditional treatment without immunotherapy.

Результаты испытания показали, что иммунотерапия бесклеточной антистафилококковой вакциной обусловила клиническое выздоровление и ремиссию от одного до 3-х лет у 72% больных, в то время как лечение антифагином обусловило аналогичный эффект у 23% больных, традиционное лечение - 21% больных (табл. 5 и 6). The test results showed that immunotherapy with acellular anti-staphylococcal vaccine caused clinical recovery and remission from one to 3 years in 72% of patients, while antifagin treatment caused a similar effect in 23% of patients, traditional treatment - 21% of patients (Table 5 and 6).

Бесклеточная антистафилококковая вакцина хорошо переносилась больными. Общие и местные реакции были зарегистрированы у небольшого числа лиц, в основном, после 1 и 2 прививки. Через 24 часа после вакцинации реакции отмечены только у 3-х больных. Вакцина в отличие от антифагина и традиционного лечения стимулировала существенное повышение специфических антител (табл.7). Cell-free antistaphylococcal vaccine was well tolerated by patients. General and local reactions were recorded in a small number of individuals, mainly after 1 and 2 vaccinations. 24 hours after vaccination, reactions were observed in only 3 patients. The vaccine, in contrast to antifagin and traditional treatment, stimulated a significant increase in specific antibodies (Table 7).

Резюмируя полученные результаты, можно констатировать, что бесклеточная антистафилококковая вакцина, разработанная в НИИВС им. И.И.Мечникова, оказалась высокоэффективным и малореактогенным препаратов. По своей эффективности она в 3 раза превосходила коммерческий препарат антифагина. Комитет по медицинским и иммунобиологическим препаратам рассмотрел результаты и рекомендовал вакцину для внедрения в практику (решение КМИП от 23 февраля 1994 г. ). Summarizing the results obtained, it can be stated that the cell-free antistaphylococcal vaccine developed at the NIIVS them. I.I. Mechnikova, turned out to be highly effective and low reactogenic drugs. In its effectiveness, it was 3 times superior to the commercial antifagin drug. The Committee on Medical and Immunobiological Preparations reviewed the results and recommended a vaccine for implementation (KIIP decision of February 23, 1994).

Claims

Cell-free antistaphylococcal vaccine for the treatment and prevention of chronic staphylococcal infection, characterized in that it contains thermolabile and thermostable antigens of protein-polysaccharine nature from the cell wall of S. aureus strains N 1991, 1986, characterized by immunogenicity of ED ₅₀ = 20-100 million / microbial cells, virulence of LD ₅₀ 0.5-20 billion microbial cells, low in protein A and weak allergenic activity.