RU2122739C1

RU2122739C1 - Method of diagnosing gravity of endogenous intoxication in cases of acute purulo-septic diseases in children

Info

Publication number: RU2122739C1
Application number: RU96101991A
Authority: RU
Inventors: П.И. Миронов; Ф.Р. Гималов; Э.А. Мардганиева; А.А. Гумеров; Ф.С. Галеев; Р.Ш. Хасанов
Original assignee: Миронов Петр Иванович
Priority date: 1996-02-02
Filing date: 1996-02-02
Publication date: 1998-11-27

Abstract

FIELD: pediatrics and surgery. SUBSTANCE: patient's blood serum is subjected to electrophoresis and electophoregram is examined. When protein components with molecular weight below 12 kD are present in electophoregram, severe endogenous intoxication with ensued organ insufficiency is diagnosed. EFFECT: simplified procedure and enabled reliable control of treatment efficiency. 4 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения степени эндогенной интоксикации при гнойно-септических заболеваниях, и может быть использовано для оценки тяжести состояния больного, контроля за эффективностью проводимого лечения. The invention relates to medicine, namely to methods for determining the degree of endogenous intoxication with purulent-septic diseases, and can be used to assess the severity of the patient's condition, monitoring the effectiveness of the treatment.

Аналогом изобретения является способ диагностики интоксикации по определению лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ), предложенный Я.Я.Кальф-Калифом (1938 г. ). Метод основан на учете различных клеточных группировок лейкоцитарного ряда крови и определяется по следующей формуле:

где мц - миелоциты, ю - юные, п - палочкоядерные, с - сегментоядерные, п.к. - плазматические клетки, м - моноциты, л - лимфоциты, э - эозинофилы.An analogue of the invention is a method for the diagnosis of intoxication by determining the leukocyte intoxication index (LII), proposed by J. Ya. Kalf-Kalif (1938). The method is based on taking into account various cell groups of the white blood cell series and is determined by the following formula:

where mc - myelocytes, s - young, p - stab, s - segmented, p.k. - plasma cells, m - monocytes, l - lymphocytes, e - eosinophils.

В норме данный показатель составляет 0,3 - 1,5. Использование индекса возможно для динамического наблюдения за эффективностью дезинтоксикационной терапии, ранней диагностики присоединившихся воспалительных осложнений (см. книгу "Септический шок". М.И. Лыткина, Э.Д. Костина, А.Л. Костюченко, И.М. Терешина. М. Медицина. -1980 год.-С.87). ЛИИ является простым, доступным и достаточно информативным показателем тяжести эндогенной интоксикации, используемым в клинической практике. Но точность метода значительно понижается при прогрессировании эндогенной интоксикации, сопровождающейся угнетением механизмов иммунологической защиты и формированием признаков органной недостаточности. Normally, this indicator is 0.3 - 1.5. The use of the index is possible for dynamic monitoring of the effectiveness of detoxification therapy, early diagnosis of joined inflammatory complications (see the book "Septic shock". M. I. Lytkina, E. D. Kostina, A. L. Kostyuchenko, I. M. Tereshina. M . Medicine. -1980 year.-S.87). LII is a simple, affordable and fairly informative indicator of the severity of endogenous intoxication, used in clinical practice. But the accuracy of the method is significantly reduced with the progression of endogenous intoxication, accompanied by inhibition of immunological defense mechanisms and the formation of signs of organ failure.

Также аналогом изобретения является определение концентрации молекул средней массы (СМ) в сыворотке крови с целью диагностики эндогенной интоксикации, а также определения ее тяжести (см. журнал "Вестник хирургии" 1987 год, том 137,С. 126-129. Статья А.С. Владыка, Н.А. Белякова, А.И. Шугаева, А. П. Левицкого, М. Я. Малаховой: "Диагностическое значение уровня молекул средней массы в крови при оценке тяжести эндотоксемии"). Уровень СМ в плазме или сыворотке крови определяли путем осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты и спектрофотометрией супернатанта. Полученные значения выражали в условных единицах, равных величине экстинции. Тест довольно универсален, так как повышение концентрации СМ в крови обнаружено при всех видах патологии, сопровождаемых эндогенной интоксикацией (ОПН, ХПН, политравма, перитонит и др.). Диагностическая значимость данного теста не вызывает сомнения. Метод удобен для экспресс-диагностики. Однако он способен отражать лишь уровень токсемии у пациентов и недостаточно информативен при углублении явлений эндогенной интоксикации и формировании органной недостаточности. An analogue of the invention is also the determination of the concentration of medium-weight molecules (SM) in blood serum with the aim of diagnosing endogenous intoxication, as well as determining its severity (see Journal of Surgery 1987, Volume 137, pp. 126-129. Article A.C. Vladyka, N. A. Belyakova, A. I. Shugaev, A. P. Levitsky, M. Ya. Malakhova: “Diagnostic value of the level of medium-weight molecules in the blood when assessing the severity of endotoxemia”). The level of SM in plasma or serum was determined by precipitation of proteins with a solution of trichloroacetic acid and spectrophotometry of the supernatant. The obtained values were expressed in arbitrary units equal to the magnitude of extinction. The test is quite universal, since an increase in the concentration of SM in the blood was found for all types of pathology accompanied by endogenous intoxication (acute renal failure, chronic renal failure, polytrauma, peritonitis, etc.). The diagnostic significance of this test is not in doubt. The method is convenient for express diagnostics. However, it is able to reflect only the level of toxemia in patients and is not sufficiently informative with the deepening of the phenomena of endogenous intoxication and the formation of organ failure.

Аналогом изобретения является биолюминесцентный метод определения степени эндогенной интоксикации (см. журнал "Лабораторное дело" 1990 год, N9, С. 23-25. Статья Т. В. Воеводина, О.Е. Нифантьева, А.Н. Ковалевский, В.Р. Шульц, В.А. Картрасюк: "Биолюминесцентный метод определения степени интоксикации при перитоните"). Сущность метода заключается в том, что интенсивность биолюминесценции, катализируемой люциферазой, при насыщающих концентрациях субстратов (сыворотки доноров и больных перитонитом) достоверно различна. Данный метод также позволяет оценить тяжесть состояния больного и степень интоксикации на основании люциферазного индекса, равного отношению максимальной интенсивности свечения в присутствии сыворотки больного к максимальной интенсивности свечения при добавлении сыворотки донора. В норме данный показатель составляет 1-1,32. У больных перитонитом обнаружили достоверное повышение люциферазного индекса и снижение его при своевременном оперативном вмешательстве и проведении дезинтоксикационной терапии. An analogue of the invention is a bioluminescent method for determining the degree of endogenous intoxication (see the journal "Laboratory" 1990, N9, pp. 23-25. Article T. V. Voevodina, O. E. Nifantieva, A. N. Kovalevsky, V. P. Schulz, VA Kartrasyuk: "Bioluminescent method for determining the degree of intoxication with peritonitis"). The essence of the method lies in the fact that the intensity of bioluminescence catalyzed by luciferase at saturating concentrations of substrates (donor serum and patients with peritonitis) is significantly different. This method also allows you to evaluate the severity of the patient’s condition and the degree of intoxication based on the luciferase index, which is equal to the ratio of the maximum glow intensity in the presence of the patient’s serum to the maximum glow intensity when donor serum is added. Normally, this indicator is 1-1.32. In patients with peritonitis, a significant increase in the luciferase index was found and its decrease with timely surgical intervention and detoxification therapy.

Высокие цифры данного показателя без тенденции к снижению наблюдались в группе погибших больных в течение всего периода заболевания. Метод высоко чувствителен, позволяет оценить эффективность проводимой терапии, однако требует необходимости в использовании зачастую дорогостоящих приборов и материалов. Нет четких критериев оценки тяжести эндогенной интоксикации. High numbers of this indicator with no downward trend were observed in the group of dead patients during the entire period of the disease. The method is highly sensitive, it allows you to evaluate the effectiveness of the therapy, but it requires the use of often expensive instruments and materials. There are no clear criteria for assessing the severity of endogenous intoxication.

Прототипом изобретения является выявление белковых компонентов кислоторастворимой фракции плазмы крови (КФПК), их количественные и качественнее изменения у больных (см. журнал "Анастезиология и реаниматология" 1992 год, N 4, с. 36-38. Статься В.Н. Семенова, Ю.М. Азизова, И.М. Макаршева, С.С. Николаевских, Н.Е. Ястребовой "Белковые компоненты кислоторастворимой фракции плазмы крови человека в норме и у больных перитонитом). После предварительного осаждения белков плазмы крови трихлоруксусной кислотой и выделения супернатанта, содержащего КФПК, методом вертикального электрофореза в полиакриламидном геле был проведен анализ КПФК здоровых доноров и больных перитонитом. На денситограммах гелей после электрофоретического разделения КПФК видно, что КПФК здоровых лиц содержат в качестве основных белковые компоненты с молекулярной массы 14, 30, 43 килодальтон (кД), а также небольшое количество компонентов с молекулярной массой 15-20 кД и около 90 кД. При анализе денситограмм больных перитонитом обращает на себя внимание тот факт, что для КФПК данной группы сохраняются присущие донорам полосы, но интенсивность их увеличивается. Кроме того, появляется полоса, соответствующая белковому компоненту с молекулярной массой около 64 кД и существенно расширяется полоса, примыкающая к полосе 14 кД. Таким образом, данный метод позволяет определить у больных перитонитом как увеличение содержания основных фракций, присутствующих в КПФК доноров, так и генерацию новых белоксодержащих кислоторастворимых компонентов. Реализация этого способа требует длительного времени, специального оборудования, необходимости в предварительной обработке плазмы крови для выделения КФПК. Кроме того, затруднено определение степени выраженности эндогенной интоксикации и соответственно составление программы интенсивной терапии. The prototype of the invention is the identification of protein components of the acid-soluble fraction of blood plasma (CPPK), their quantitative and qualitative changes in patients (see the journal "Anesthesiology and intensive care" 1992, N 4, pp. 36-38. Become VN Semenova, Yu .M. Azizova, I.M. Makarsheva, S.S. Nikolaevskikh, N.E. Yastrebova "Protein components of the acid-soluble fraction of human blood plasma is normal and in patients with peritonitis). After preliminary precipitation of blood plasma proteins with trichloroacetic acid and isolation of supernatant, containing KFPC, meto Using vertical electrophoresis in polyacrylamide gel, an analysis of CPPC of healthy donors and patients with peritonitis was performed.The densitograms of the gels after electrophoretic separation of CPPC show that CPPC of healthy individuals contain protein components with a molecular weight of 14, 30, 43 kilodaltons (kD) as well as a small number of components with a molecular weight of 15-20 kD and about 90 kD. In the analysis of densitograms of patients with peritonitis, it is noteworthy that for CPPC of this group the bands inherent to donors are preserved, n their intensity increases. In addition, a band appears that corresponds to a protein component with a molecular weight of about 64 kD and a band widens adjacent to the 14 kD band. Thus, this method allows one to determine in patients with peritonitis both an increase in the content of the main fractions present in donor CPPK and the generation of new protein-containing acid-soluble components. The implementation of this method requires a long time, special equipment, the need for preliminary processing of blood plasma to isolate KPPK. In addition, it is difficult to determine the severity of endogenous intoxication and, accordingly, the preparation of an intensive care program.

Целью изобретения является расширение функциональных возможностей и упрощение методики исследования. The aim of the invention is the expansion of functionality and simplification of research methods.

Способ осуществляется следующим образом. У больного забирается венозная кровь в количестве 1 мл, затем после выдерживания в течение 3 часов при 4^oC отделяется сыворотка от сгустка. Предварительно готовится 30% раствор акриламида (58,4 г на 200 мл бидистиллированной воды ) и 1,6 г метиленбисакриламида. Далее на основе этого раствора готовят разделяющий и концентрирующий гели. При подготовке разделяющего геля 20 мл 30% раствора полиакриламида помещают в вакуумную колбу, добавляют 0,6 мл 10% водного раствора додецилсульфата натрия, 300 мкл персульфата аммония и 20 мкл тетраэтилендиамида, 15 мл буферного раствора (1,5 М Трис-HCl, pH 8,8) и доводят бидистиллированной водой объем до 60 мл. При подготовке концентрирующего геля к 2,66 мл раствора 30% полиакриламида, находящегося в вакуумной колбе, добавляют 5 мл буферного раствора (0,5 М Трис-HCl, pH 6,8), 0,2 мл 10% додецилсульфата натрия, 12,2 бидистиллированной воды, 100 мкл персульфата аммония и 10 мкл тетраэтилендиамида.The method is as follows. The patient takes venous blood in an amount of 1 ml, then after standing for 3 hours at 4 ^o C, the serum is separated from the clot. A 30% solution of acrylamide (58.4 g per 200 ml of bidistilled water) and 1.6 g of methylene bisacrylamide are preliminarily prepared. Next, based on this solution, separating and concentrating gels are prepared. When preparing the separation gel, 20 ml of a 30% polyacrylamide solution was placed in a vacuum flask, 0.6 ml of a 10% aqueous solution of sodium dodecyl sulfate, 300 μl of ammonium persulfate and 20 μl of tetraethylenediamide, 15 ml of buffer solution (1.5 M Tris-HCl, pH) were added. 8.8) and the volume was adjusted with bidistilled water to 60 ml. When preparing a concentrating gel, 2.66 ml of a solution of a 30% polyacrylamide in a vacuum flask were added with 5 ml of buffer solution (0.5 M Tris-HCl, pH 6.8), 0.2 ml of 10% sodium dodecyl sulfate, 12, 2 bidistilled water, 100 μl of ammonium persulfate and 10 μl of tetraethylenediamide.

Затем заливают концентрирующий гель в гелевую камеру со спейсером толщиной в 1,5 мм, так чтобы он не полностью заполнил камеру. После этого на основной гель наслаивается разделяющий гель, куда и устанавливается гребень для формирования лунок, в которые впоследствии и будет помещена исследуемая сыворотка крови. Then, the concentration gel is poured into the gel chamber with a spacer 1.5 mm thick so that it does not completely fill the chamber. After that, a separating gel is layered on the main gel, where a comb is installed to form the holes, into which the test blood serum will subsequently be placed.

После полимеризации геля в гелевой камере, примерно в течение получаса, удаляем гребень и даем отстояться сформировавшемуся гелю в течение нескольких часов при 4^oC. Ополаскиваем каждую лунку дистиллированной водой. При помощи гамильтоновских шприцов заливаем в лунки геля исследуемые образцы сыворотки крови, предварительно прокипятив их в буфере, включающем 0,125 М трис-HCl, pH 6,8, 4% раствор додецилсульфата натрия, 20% глицерин, 10% меркаптоэтанол. В одну из лунок добавляется капля 0,1% водного раствора фенолового красного.After polymerization of the gel in the gel chamber, for about half an hour, remove the comb and allow the formed gel to stand for several hours at 4 ^o C. Rinse each well with distilled water. Using Hamiltonian syringes, we fill in the studied blood serum samples into the gel wells, after boiling them in a buffer containing 0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% sodium dodecyl sulfate solution, 20% glycerol, 10% mercaptoethanol. A drop of 0.1% aqueous phenol red solution is added to one of the wells.

После этого в верхний и нижний резервуары аппарата для электрофореза заливаем буферный раствор для электрофореза (0,025 М Трис-HCl, pH 8,3, 0,192 М глицин, 0,1% додецил сульфат натрия) до тех пор, пока гелевая камера полностью не погрузиться в буферный раствор. Подключаем аппарат для электрофореза к источнику питания. Причем катод соединяется с буферным раствором в нижнем резервуаре. Проводим электрофорез при напряжении 70-80 вольт. В дальнейшем в зависимости от скорости движения в геле исследуемых образцов сыворотки крови напряжение можно изменить. По достижении уровня миграции фенолового красного на расстояние в 2-3 см от нижнего края геля прекращаем проведение электрофореза. Вынимаем гелевую камеру из аппарата для электрофореза, удаляем гель из гелевой камеры и помещаем в ванночку с окрашивающим раствором (0,125% куммаси синий G-250, 50% метанол, 10% уксусная кислота), осторожно помешивая на встряхивателе в течение 4-8 часов. После этого гель удаляется из окрашивающего раствора и помещается в ванночку с отмывающим раствором (50% метанол, 10% уксусная кислота) в течение нескольких часов при постоянном осторожном помешивании. Затем гель на несколько часов помещают в фиксирующий раствор (7% уксусная кислота, 5% метанол). После этого гель готов к визуализации, и возможна оценка полученных данных. Формирование признаков органной недостаточности на фоне проявлений эндогенной интоксикации характеризовалось появлением на электрофореграмме белковых компонентов с молекулярным весом менее 12 кД. After that, the electrophoresis buffer solution (0.025 M Tris-HCl, pH 8.3, 0.192 M glycine, 0.1% sodium dodecyl sulfate) is poured into the upper and lower tanks of the electrophoresis apparatus until the gel chamber is completely immersed in buffer solution. We connect the apparatus for electrophoresis to a power source. Moreover, the cathode is connected to the buffer solution in the lower reservoir. We carry out electrophoresis at a voltage of 70-80 volts. Subsequently, depending on the speed of movement in the gel of the studied samples of blood serum, the voltage can be changed. Upon reaching the level of migration of phenol red to a distance of 2-3 cm from the lower edge of the gel, we stop the electrophoresis. We remove the gel chamber from the electrophoresis apparatus, remove the gel from the gel chamber and place it in a bath with a staining solution (0.125% Kumasi blue G-250, 50% methanol, 10% acetic acid), gently stirring on the shaker for 4-8 hours. After that, the gel is removed from the staining solution and placed in a bath with a washing solution (50% methanol, 10% acetic acid) for several hours with constant careful stirring. Then the gel is placed for several hours in a fixing solution (7% acetic acid, 5% methanol). After that, the gel is ready for visualization, and the evaluation of the obtained data is possible. The formation of signs of organ failure against the background of manifestations of endogenous intoxication was characterized by the appearance of protein components with a molecular weight of less than 12 kD on the electrophoregram.

В процессе выполнения настоящей работы был проведен в динамике электрофоретический анализ сыворотки крови трех здоровых детей и 25 больных гнойно-септическими заболеваниями (аппендикулярным перитонитом, остеомиелитом, деструктивной пневмонией, сепсисом) в возрасте от 7 месяцев до 10 лет, находившихся на лечении в отделении реанимации детской клинической больницы Республики Башкортостан (РДКБ). В качестве иллюстрации приведем несколько клинических примеров. In the process of performing this work, a dynamic electrophoretic analysis of the blood serum of three healthy children and 25 patients with purulent-septic diseases (appendicular peritonitis, osteomyelitis, destructive pneumonia, sepsis) aged 7 months to 10 years who were treated in the intensive care unit of a child was performed Clinical Hospital of the Republic of Bashkortostan (RCCH). To illustrate, here are a few clinical examples.

Пример 1. Больная В. 1 год 11 месяцев (история болезни N 8433) поступила в РДКБ в крайне тяжелом состоянии на 20 стуки с момента заболевания с диагнозом: термический ожог туловища и конечностей 2 степени (15% поверхности тела), ожоговый сепсис. Двусторонняя полисегментарная пневмония, септический энтероколит, миокардит, гепатит, нефрит. Гнойный медиастенит. Остеомиелит 7 ребра справа. Ребенок в сопоре, выраженная одышка и тахикардия: число дыханий (ЧД) 60 в 1 минуту, число сердечных сокращений (ЧСС) 162 в минуту. Показатели общего анализа крови; эритроциты (Er) 3,1•10¹², гемоглобин (Hb) 108 г/л. Имеется плейоцитоз - лейкоцитов (L) 30•10⁹, палочкоядерных нейтрофилов (П) 5%, сегментоядерных нейтрофилов(C) 66%, лимфоцитов (Л) 28%, моноцитов (М) 3%. Отмечается наличие гипопротеинемии (общий белок 41,6 г/л), гипоксемии pO₂ 52 мм рт.ст. На электрофореграмме выявлена полоса, соответствующая белковым компонентам с молекулярным весом менее 12 кД, позволившая диагносцировать тяжелую эндогенную интоксикация с органной недостаточностью. Ребенку начато проведение антибактериальной терапии (цефазолин+гентамицин+метраджил), дезинтоксикационной и иммуномодулирующей терапии. Произведена хирургическая санация гнойных очагов. Больному в программу лечения включены экстракорпоральные методы детоксикации (2 сеанса плазмафереза, 3 сеанса УФО аутокрови). Клинически состояние больного постепенно улучшалось, на 11 сутки с момента поступления в стационар ребенок в сознании, менее выражена одышка и тахикардия, Er 3,7•10¹², Hb 128 г/л, L 19•10⁹, C 92%, Л 8%, СОЭ 57 мм в час. Купировалась гипоксемия pO₂ 72 мм рт. ст. По данным электрофоретического исследования полоса, соответствующая белковым компонентам с молекулярным весом менее 12 кД, исчезла. В дальнейшем по мере проведения интенсивной терапии состояние ребенка постепенно улучшалось, в состоянии средней тяжести девочка выписана из стационара.Example 1. Patient B. 1 year 11 months (medical history N 8433) was admitted to the RCCH in an extremely serious condition for 20 knocks from the time of the disease with a diagnosis of thermal burn of the trunk and extremities of 2 degrees (15% of the body surface), burn sepsis. Bilateral polysegmental pneumonia, septic enterocolitis, myocarditis, hepatitis, nephritis. Purulent mediastinitis. Osteomyelitis 7 ribs on the right. The child is in stupor, severe shortness of breath and tachycardia: the number of breaths (BH) is 60 in 1 minute, the number of heart contractions (HR) is 162 per minute. General blood count indicators; erythrocytes (Er) 3,1 • 10 ¹² , hemoglobin (Hb) 108 g / l. There is pleiocytosis - leukocytes (L) 30 • 10 ⁹ , stab neutrophils (P) 5%, segmented neutrophils (C) 66%, lymphocytes (L) 28%, monocytes (M) 3%. The presence of hypoproteinemia (total protein 41.6 g / l), hypoxemia pO ₂ 52 mm Hg An electrophoregram revealed a band corresponding to protein components with a molecular weight of less than 12 kD, which made it possible to diagnose severe endogenous intoxication with organ failure. The child has started antibiotic therapy (cefazolin + gentamicin + metrajil), detoxification and immunomodulating therapy. Produced surgical sanitation of purulent foci. The patient included extracorporeal detoxification methods in the treatment program (2 plasmapheresis sessions, 3 sessions of autologous ultraviolet blood). Clinically, the patient’s condition gradually improved, on the 11th day from the moment the child was admitted to hospital, shortness of breath and tachycardia are less pronounced, Er 3.7 • 10 ¹² , Hb 128 g / l, L 19 • 10 ⁹ , C 92%, L 8 %, ESR 57 mm per hour. Hypoxemia pO ₂ 72 mm Hg was stopped. Art. According to electrophoretic studies, the band corresponding to protein components with a molecular weight of less than 12 kD disappeared. In the future, as the intensive care was carried out, the child's condition gradually improved, in a moderate state the girl was discharged from the hospital.

Пример 2. Больная С. в возрасте 7 месяцев (история болезни N 8805) поступила в РДКБ в крайне тяжелом состоянии с диагнозом: разлитая флегмона дна полости рта. Сепсис, септикопиемическая форма, двусторонняя полисегментарная пневмония, септический энтероколит, токсический гепатит, нефрит, миокардит. Ребенок в сопоре, гипертермия до 39,2^oC, отмечается наличие выраженной одышки и тахикардии, ЧД 52, ЧСС 176 в минуту, гипоксемия pO₂ 62 мм рт. ст. С момента поступления в связи с декомпенсированной дыхательной недостаточностью по вентиляционному типу (сдавление дыхательных путей флегмоной) осуществлен перевод ребенка на искусственную вентиляцию легких (ИВЛ).Example 2. Patient S. at the age of 7 months (medical history N 8805) was admitted to the RCCH in an extremely serious condition with a diagnosis of spilled phlegmon of the bottom of the oral cavity. Sepsis, septicopyemic form, bilateral polysegmental pneumonia, septic enterocolitis, toxic hepatitis, nephritis, myocarditis. The child is in stupor, hyperthermia up to 39.2 ^o C, the presence of severe shortness of breath and tachycardia, BH 52, heart rate 176 per minute, hypoxemia pO ₂ 62 mm RT. Art. From the moment of admission due to decompensated respiratory failure according to the ventilation type (phlegmon compression of the airways), the child was transferred to artificial lung ventilation (ALV).

У больного анемия, Er 3,3•10¹², Hb 93 г/л, высокий лейкоцитоз L 19,8•10⁹, П 1%, С 65%, Л 32%, М 2%, СОЭ 30 мм в час. На электрофореграмме отмечено появление белковых компонентов с молекулярным весом менее 12 кД, свидетельствующее о наличии органной недостаточности на фоне тяжелой эндогенной интоксикации. Больному вскрыт и дренирован гнойный очаг, на фоне комплексной интенсивной терапии антибиотики (клафоран+гентамицин), инфузионная терапия в режиме, приближенном к форсированному диурезу, иммуномодулирующая и симптоматическая терапия, через трое суток в связи с улучшением состояния прекращена респираторная поддержка. По мере проводимой терапии состояние ребенка постепенно улучшалось. Через 10 суток с момента поступления отсутствует гипоксемия, pO₂ 78 мм рт.ст., купирована анемия, Er 4,7•10¹², Hb 120 г/л, L 14,3•10⁹, С 58%, Л 38%, М 3%, СОЭ 24 мм в час. При анализе электрофореграммы полос, соответствующих белковым компонентам с молекулярным весом менее 12 кД, не обнаружено. По мере проведения интенсивной терапии отмечалась положительная динамика в удовлетворительном состоянии, больной выписан из стационара.The patient has anemia, Er 3.3 • 10 ¹² , Hb 93 g / l, high leukocytosis L 19.8 • 10 ⁹ , P 1%, C 65%, L 32%, M 2%, ESR 30 mm per hour. On the electrophoregram, the appearance of protein components with a molecular weight of less than 12 kD is noted, indicating the presence of organ failure against the background of severe endogenous intoxication. A purulent lesion was opened and drained to the patient, against the background of complex intensive therapy, antibiotics (claforan + gentamicin), infusion therapy in a regimen close to forced diuresis, immunomodulating and symptomatic therapy, and after three days, respiratory support was discontinued due to the improvement of the condition. With the ongoing therapy, the child's condition gradually improved. After 10 days from the moment of admission, there was no hypoxemia, pO ₂ 78 mm Hg, anemia was stopped, Er 4.7 • 10 ¹² , Hb 120 g / l, L 14.3 • 10 ⁹ , C 58%, L 38% , M 3%, ESR 24 mm per hour. When analyzing the electrophoregram, bands corresponding to protein components with a molecular weight of less than 12 kD were not found. As intensive care was carried out, positive dynamics were observed in a satisfactory condition, the patient was discharged from the hospital.

Пример 3. Больная П. 10 лет (история болезни N 10887) поступила в РДКБ в крайне тяжелом состоянии с диагнозом: деструктивный аппендицит. Разлитой гнойный перитонит. Сепсис, септикопиемическая форма, септическая пневмония, гепатит, нефрит, миокардит. Токсико-инфекционный шок. Токсико-гипоксический отек головного мозга. Аппендэктомия произведена в условиях центральной районной больницы через сутки с момента заболевания. Через трое суток отмечено ухудшение состояния, появление болей в животе и гипертермия. В РДКБ переведена через 7 суток с момента первичной операции. При поступлении ребенок в состоянии токсико-инфекционного шока. Больная в сопоре, значительная одышка и тахикардия, ЧД 38, ЧСС 129 в минуту, гипертермия до 38,7^oC. Имеются признаки гиповолемии, среднее артериальное давление (СД) составило 40 мм рт.ст. У девочки олигоурия. Имеется анемия, Er 2,7•10¹², Hb 86 г/л, L 15,0•10⁹, СОЭ 34 мм в час. В анализе мочи: протеинурия 0,066%, L 2-4-6, Er 25-29-30 в поле зрения. Полученные клинико-лабораторные данные позволили диагностировать наличие шока и ПОН с вовлечением легких, сердца, головного мозга, печени, почек. Начато проведение ИВЛ, интенсивной антибактериальной (мандол+гентамицин+метраджил), инфузионной, иммуномолирующей терапии, поддержание гемодинамики введением кардиотоников. После предоперационной подготовки произведены релапаратомия, санация брюшной полости. В течение всего периода с момента поступления состояние ребенка оценивалась как крайне тяжелое, нестабильное. Производимые лечебные мероприятия положительного эффекта не оказали, через 6 часов после оперативного вмешательства ребенок умер. По данным электрофоретического исследования обнаружена интенсивно окрашенная полоса, соответствующая белковым компонентам с молекулярной массой менее 12 кД.Example 3. Patient P. 10 years old (medical history N 10887) was admitted to the RCCH in an extremely serious condition with a diagnosis of destructive appendicitis. Spilled purulent peritonitis. Sepsis, septicopyemic form, septic pneumonia, hepatitis, nephritis, myocarditis. Toxic infectious shock. Toxic-hypoxic cerebral edema. Appendectomy was performed in the conditions of the central district hospital a day after the illness. Three days later, deterioration, the appearance of abdominal pain and hyperthermia were noted. She was transferred to the RCCH 7 days after the initial operation. Upon admission, the child is in a state of toxic infectious shock. Patient in stupor, significant shortness of breath and tachycardia, BH 38, heart rate 129 per minute, hyperthermia up to 38.7 ^o C. There are signs of hypovolemia, mean arterial pressure (DM) was 40 mm Hg. The girl has oliguria. There is anemia, Er 2.7 • 10 ¹² , Hb 86 g / l, L 15.0 • 10 ⁹ , ESR 34 mm per hour. In the analysis of urine: proteinuria 0.066%, L 2-4-6, Er 25-29-30 in the field of view. The obtained clinical and laboratory data made it possible to diagnose the presence of shock and PON involving the lungs, heart, brain, liver, and kidneys. A mechanical ventilation, intensive antibacterial (mandol + gentamicin + metrajil), infusion, immunomolating therapy, and hemodynamic maintenance with the introduction of cardiotonics have begun. After preoperative preparation, relaparatomy and rehabilitation of the abdominal cavity were performed. During the entire period from the moment of receipt, the condition of the child was assessed as extremely difficult, unstable. The therapeutic measures performed did not have a positive effect, 6 hours after surgery the child died. According to the electrophoretic study, an intensely colored band was found corresponding to protein components with a molecular weight of less than 12 kD.

Пример 4. Больная Х в возрасте 6 лет (история болезни N 9061) поступила в Республиканскую детскую клиническую больницу в крайне тяжелом состоянии на 6 сутки от начала заболевания с диагнозом: uангренозно-перфоративный аппендицит. Разлитой гнойный перитонит. Деструктивная пневмония. Сепсис. При поступлении ребенок в сознании, очень вялый и слабый. ЧСС 156, ЧД 24 в минуту. В анализе крови: Er 3,3•10¹², Hb 100 г/л. L 6,5•10⁹, П 5%, С 53%, лимф. 42%, СОЭ 75 мм/час. Отмечены гипоксемия - pO₂ 58 мм.рт.ст., гипопротеинемия - общий белок 48,1 г/л, на электрофореграмме отмечено появление полос, соответствующих белковым продуктам с молекулярным весом менее 12 кД, на основании чего диагностирована тяжелая эндогенная интоксикация с органной недостаточностью. Произведены лапаротомия, санация брюшной полости. Начато проведение ИВЛ, антибактериальной (мандол+гентамицин), дезинтоксикационной и иммуномодулирующей терапии. Через 5 суток в связи с улучшением состояния респираторная поддержка прекращена. В анализе крови: Er 3,6•10¹², Hb 119 г/л, L 13,8•10⁹, С 79%, Л 18%, M 3%, СОЭ 55 мм/час, общий белок 64,2 г/л, pO₂ 68 ммрт.ст. При электрофоретическом исследовании отмечено, что полоса, соответствующая белковым компонентам с молекулярной массой менее 12 кД, исчезла, а интенсивность последней заметно уменьшилась. В дальнейшем по мере проведения интенсивной терапии отмечалась положительная динамика, в состоянии средней тяжести выписана из стационара.Example 4. Patient X at the age of 6 years (medical history N 9061) was admitted to the Republican Children's Clinical Hospital in an extremely serious condition on the 6th day from the onset of the disease with a diagnosis of uangrenous perforated appendicitis. Spilled purulent peritonitis. Destructive pneumonia. Sepsis. Upon admission, the child is conscious, very lethargic and weak. Heart rate 156, BH 24 per minute. In the blood test: Er 3.3 • 10 ¹² , Hb 100 g / l. L 6.5 • 10 ⁹ , P 5%, C 53%, lymph. 42%, ESR 75 mm / h. Hypoxemia was noted - pO ₂ 58 mm Hg, hypoproteinemia - total protein 48.1 g / l, the appearance of bands corresponding to protein products with a molecular weight of less than 12 kD was noted on the electrophoregram, on the basis of which severe endogenous intoxication with organ failure was diagnosed . Laparotomy, sanitation of the abdominal cavity were performed. Ventilation, antibacterial (mandol + gentamicin), detoxification and immunomodulating therapy have been started. After 5 days, due to an improvement in the condition, respiratory support was discontinued. In the blood test: Er 3.6 • 10 ¹² , Hb 119 g / l, L 13.8 • 10 ⁹ , C 79%, L 18%, M 3%, ESR 55 mm / h, total protein 64.2 g / l, pO ₂ 68 mmHg An electrophoretic study noted that the band corresponding to protein components with a molecular mass of less than 12 kD disappeared, and the intensity of the latter decreased markedly. In the future, as intensive care was carried out, positive dynamics were noted; in a moderate state, she was discharged from the hospital.

Таким образом, полученные данные позволяют утверждать, что изучение изменений в распределении белков сыворотки крови по молекулярной массе при острой хирургической патологии способно отражать патогенез заболевания, оценивать тяжесть состояния больного и эффективность проводимой терапии. У пациентов с выраженными проявлениями эндогенной интоксикации и наличием органной недостаточности обнаруживаются белковые компоненты с молекулярным весом менее 12 кД, исчезающие по мере улучшения общего состояния. Приведенные результаты позволяют считать, что исследование сыворотки крови методом денатурирующего электрофореза может являться одним из методов диагностики тяжести эндогенной интоксикации при острых гнойно-септических заболеваниях, позволяющим определить наличие формирования органной недостаточности, оценивать эффективность проводимой терапии. Thus, the data obtained suggest that the study of changes in the distribution of blood serum proteins by molecular weight in acute surgical pathology can reflect the pathogenesis of the disease, assess the severity of the patient's condition and the effectiveness of the therapy. In patients with severe manifestations of endogenous intoxication and the presence of organ failure, protein components with a molecular weight of less than 12 kD are found that disappear as the general condition improves. The above results suggest that the study of blood serum by the method of denaturing electrophoresis can be one of the methods for diagnosing the severity of endogenous intoxication in acute purulent-septic diseases, allowing to determine the presence of organ failure, to evaluate the effectiveness of the therapy.

В клинической медицине метод рекомендовано использовать во многих областях хирургии, реаниматологии, педиатрии в целях оценки тяжести заболевания, определения эффективности проводимой терапии. In clinical medicine, the method is recommended to be used in many areas of surgery, resuscitation, pediatrics in order to assess the severity of the disease, determine the effectiveness of the therapy.

Claims

A method for diagnosing the severity of endogenous intoxication in acute purulent-septic diseases in children by electrophoretic research, characterized in that the blood serum is examined and if there are protein components on the electrophoregram with mol. m less than 12 cd diagnose severe endogenous intoxication with the formation of organ failure.