RU2121681C1 - Method of determining 4-nitrophenol in biological material - Google Patents
Method of determining 4-nitrophenol in biological material Download PDFInfo
- Publication number
- RU2121681C1 RU2121681C1 RU94021200A RU94021200A RU2121681C1 RU 2121681 C1 RU2121681 C1 RU 2121681C1 RU 94021200 A RU94021200 A RU 94021200A RU 94021200 A RU94021200 A RU 94021200A RU 2121681 C1 RU2121681 C1 RU 2121681C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extracted
- water
- chloroform
- solution
- separated
- Prior art date
Links
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical class CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 22
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 claims description 7
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 abstract 1
- QKGYJVXSKCDGOK-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-ol Chemical compound CC(C)O.CCCCCC QKGYJVXSKCDGOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 7
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 7
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BOFRXDMCQRTGII-UHFFFAOYSA-N 619-08-9 Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl BOFRXDMCQRTGII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биологии и токсикологической химии, а именно к способам определения 4-нитрофенолов в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий. The invention relates to biology and toxicological chemistry, and in particular to methods for determining 4-nitrophenols in biological material, and can be used in the practice of sanitary-epidemiological stations, chemical-toxicological and veterinary laboratories.
Способ относится к числу массовых. The method belongs to the mass.
Известен способ определения органических веществ в биологическом материале путем измельчения исследуемого биологического объекта, неоднократного настаивания с этанолом (каждый раз в течение суток), объединения вытяжек, сгущения объединенного извлечения, осаждения в нем белков абсолютным этанолом, фильтрования, упаривания фильтрата до густоты сиропа и разбавления его водой с последующей экстракцией анализируемых соединений сначала из кислого, а затем из щелочного раствора [1]. A known method for the determination of organic substances in biological material by grinding the investigated biological object, repeated infusion with ethanol (every time during the day), combining extracts, condensing the combined extract, precipitating proteins with absolute ethanol in it, filtering, evaporating the filtrate to the density of the syrup and diluting it water, followed by extraction of the analyzed compounds first from an acidic, and then from an alkaline solution [1].
Способ трудоемок, требует значительных затрат времени на его осуществление, характеризуется низкой степенью извлечения 4-нитрофенолов и малой селективностью. The method is time consuming, requires a significant investment of time for its implementation, is characterized by a low degree of extraction of 4-nitrophenols and low selectivity.
Известен способ определения органических веществ кислого характера (к которым относятся и 4-нитрофенолы) из биологического материала, заключающийся в измельчении биологического объекта, обработке водным раствором гидроксида натрия, центрифугировании, обработке центрифугата вольфраматом натрия в кислой среде при кипячении на водяной бане, отделении осадка центрифугированием в течение получаса, экстракционном выделении анализируемых соединений из центрифугата эфиром с последующим подщелачиванием центрифугата и повторной экстракцией эфиром [2]. A known method of determining organic acids of an acidic nature (which include 4-nitrophenols) from biological material, which consists in grinding a biological object, treating with an aqueous solution of sodium hydroxide, centrifuging, treating the centrifugate with sodium tungstate in an acidic environment when boiling in a water bath, separating the precipitate by centrifugation within half an hour, extraction isolation of the analyzed compounds from the centrifugate with ether, followed by alkalization of the centrifugate and re-extraction nd ether [2].
Способ малоселективен, отличается низкой степенью извлечения 4-нитрофенолов. The method is poorly selective, characterized by a low degree of extraction of 4-nitrophenols.
Наиболее близким по техническому решению и достигаемым результатам является способ определения 4-нитрофенола в биологическом материале путем измельчения биологического образца, подкисления, обработки бензолом в течение 4 часов, концентрирования извлечения, хроматографирования в колонке, заполненной оксидом алюминия, с использованием в качестве подвижной фазы метанола, концентрирования и разбавления метанольного элюата водой, подщелачивания, экстракции диэтиловым эфиром, отделения водного слоя, его подключения с последующей экстракцией диэтиловым эфиром, обезвоживанием экстракта, испарением до сухого остатка, растворением остатка в метаноле и хроматографированием на бумаге с использованием в качестве подвижной фазы н-бутанола, насыщенного раствором аммиака [3]. The closest in technical solution and the achieved results is a method for determining 4-nitrophenol in a biological material by grinding a biological sample, acidification, treatment with benzene for 4 hours, concentration of extraction, chromatography in a column filled with alumina, using methanol as the mobile phase, concentration and dilution of methanol eluate with water, alkalization, extraction with diethyl ether, separation of the aqueous layer, its connection, followed by extraction diethyl ether, dehydration of the extract, evaporation to a dry residue, dissolution of the residue in methanol and chromatography on paper using n-butanol saturated with ammonia solution as a mobile phase [3].
Способ характеризуется низкой чувствительностью и недостаточно высокой точностью. The method is characterized by low sensitivity and insufficiently high accuracy.
Задачей настоящего изобретения является повышение чувствительности и точности определения. The present invention is to increase the sensitivity and accuracy of determination.
Поставленная задача достигается с помощью предлагаемого способа, заключающегося в том, что биологическую ткань (например, ткань печени) измельчают, неоднократно обрабатывают уксусным ангидридом, полученные извлечения объединяют, испаряют до половины объема, разбавляют водой в объемном соотношении 1:3 соответственно, экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, экстрагент испаряют, полученный остаток растворяют в хлороформе, экстрагируют водно-щелочным раствором при pH 9,0-9,5, экстракт отделяют, подкисляют до pH 2-4, повторно экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, полученный экстракт отделяют, экстрагент испаряют до сухого остатка, который затем растворяют в хлороформе и подвергают хроматографической очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм, с использованием в качестве подвижной фазы системы растворителей, состоящей из гексана и пропанола-2, взятых при их объемном соотношении 20:1 соответственно. The problem is achieved using the proposed method, which consists in the fact that biological tissue (for example, liver tissue) is crushed, repeatedly treated with acetic anhydride, the resulting extracts are combined, evaporated to half the volume, diluted with water in a volume ratio of 1: 3, respectively, extracted with diethyl ether saturated with water, the extractant is evaporated, the obtained residue is dissolved in chloroform, extracted with an aqueous alkaline solution at pH 9.0-9.5, the extract is separated, acidified to pH 2-4, re-extracted t with diethyl ether saturated with water, the resulting extract is separated, the extractant is evaporated to a dry residue, which is then dissolved in chloroform and subjected to chromatographic purification by high performance liquid chromatography on a column filled with Silabelz 600 silica gel with a particle size of 5 μm, using as a mobile phases of the solvent system consisting of hexane and propanol-2, taken at a volume ratio of 20: 1, respectively.
Способ осуществляется следующим образом: биологическую ткань, содержащую 4-нитрофенолы, измельчают, трижды настаивают с уксусным ангидридом (каждый раз в течение получаса), извлечения отделяют от твердых частиц биоматериала, объединяют, испаряют до половины объема, разбавляют водой в объемном соотношении 1: 3 соответственно, экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, экстрагент испаряют, полученный остаток растворяют в хлороформе, экстрагируют водно-щелочным раствором при pH 9,0-9,5, экстракт отделяют, подкисляют до pH 2-3, повторно экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, полученный экстракт отделяют, экстрагент испаряют до сухого остатка, который затем растворяют в хлороформе и подвергают хроматографической очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм, с использованием в качестве подвижной фазы системы растворителей, состоящей из гексана и пропанола-2, взятых при их объемном соотношении 20:1 соответственно. The method is as follows: the biological tissue containing 4-nitrophenols is crushed, infused three times with acetic anhydride (each time for half an hour), the extracts are separated from the solid particles of the biomaterial, combined, evaporated to half the volume, diluted with water in a volume ratio of 1: 3 accordingly, it is extracted with diethyl ether saturated with water, the extractant is evaporated, the obtained residue is dissolved in chloroform, extracted with an aqueous alkaline solution at pH 9.0-9.5, the extract is separated, acidified to pH 2-3, reextracted they agitate with saturated diethyl ether, the resulting extract is separated, the extractant is evaporated to a dry residue, which is then dissolved in chloroform and chromatographed by high performance liquid chromatography on a silabel 600 column packed with 5 μm particle size, using as a mobile phases of the solvent system consisting of hexane and propanol-2, taken at a volume ratio of 20: 1, respectively.
Способ иллюстрируется следующими примерами. The method is illustrated by the following examples.
Пример 1. Определение 4-нитрофенола в ткани печени. Example 1. Determination of 4-nitrophenol in liver tissue.
К 25 г мелкоизмельченной ткани свежей трупной печени человека прибавляют 12,5 мг 4-нитрофенола, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20oC. По истечении этого времени смесь заливают 50 мл уксусного ангидрида и выдерживают полчаса, периодически перемешивая. Извлечение отделяют и операцию настаивания повторяют еще дважды. Вытяжки объединяют, испаряют до половины объекта в токе воздуха при комнатной температуре, разбавляют водой до 300 мл и экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, трижды по 100 мл. Эфирные извлечения объединяют, испаряют до сухого остатка, остаток растворяют в 25 мл хлороформа. Полученный раствор трижды экстрагируют щелочным буферным раствором с pH 9,0-9,5 (порциями по 25 мл каждая). Щелочные экстракты отделяют, объединяют, подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3 и экстрагируют порциями диэтилового эфира, насыщенного водой, трижды по 50 мл. Эфирные извлечения объединяют, эфир испаряют. Сухой остаток растворяют в хлороформе, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 2,5 мл этого раствора вносят в колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 4 микролитра (мкл) полученного раствора вводят в хроматограф "Милихром". Хроматографирование осуществляют на колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм. Элюент - система растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему), скорость подачи элюента 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты 720 мм/час. Регистрацию оптической плотности проводят при длине волны 312 нм. В данных условиях хроматографирования время удерживания 4-нитрофенола составляет 10,12 минут, объем удерживания - 506 мкл.12.5 mg of 4-nitrophenol is added to 25 g of finely ground tissue of fresh human cadaveric liver, the biological tissue is thoroughly mixed with the substance and left for a day at a temperature of 18-20 o C. After this time, the mixture is poured into 50 ml of acetic anhydride and incubated for half an hour, stirring occasionally. The extract is separated and the infusion operation is repeated twice more. The hoods are combined, evaporated to half the object in a stream of air at room temperature, diluted with water to 300 ml and extracted with diethyl ether saturated with water, three times 100 ml. The ether extracts are combined, evaporated to a dry residue, the residue is dissolved in 25 ml of chloroform. The resulting solution was extracted three times with an alkaline buffer solution with a pH of 9.0-9.5 (each in 25 ml portions). The alkaline extracts are separated, combined, acidified with a 24% hydrochloric acid solution to a pH of 2-3 and extracted with 50 ml portions of diethyl ether saturated with water. The ether extracts are combined, the ether is evaporated. The dry residue is dissolved in chloroform, transferred to a volumetric flask with a capacity of 25 ml and adjusted to the mark with chloroform. 2.5 ml of this solution was added to a 25 ml flask and adjusted to the mark with chloroform. 4 microliters (μl) of the resulting solution are introduced into the Milichrom chromatograph. Chromatography is carried out on a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with silabel 600 silica gel with a particle size of 5 μm. The eluent is a solvent system hexane-propanol-2 (20: 1) (by volume), the flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape 720 mm / hour. Registration of optical density is carried out at a wavelength of 312 nm. Under these chromatographic conditions, the retention time of 4-nitrophenol is 10.12 minutes, and the retention volume is 506 μl.
Построение калибровочного графика. Готовится серия стандартных растворов, содержащих 0,0005%, 0,001%, 0,002%, 0,003%, 0,004% и 0,005% 4-нитрофенола. В хроматограф вводят по 4 мкл каждого раствора. Хроматографирование осуществляют на приборе "Милихром" в колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм, используя в качестве элюента систему растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему). Скорость подачи элюента составляет 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты - 720 мм/час. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 312 нм. По результатам измерений строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика от концентрации определяемого вещества. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид
S = 27,849 • C + 0,0011,
где
S - площадь пика, см2, C - концентрация вещества во вводимой пробе, мкг.Construction of a calibration graph. A series of standard solutions is being prepared containing 0.0005%, 0.001%, 0.002%, 0.003%, 0.004% and 0.005% 4-nitrophenol. 4 μl of each solution is introduced into the chromatograph. Chromatography is carried out on a Milichrom instrument in a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with Silabsar 600 silica gel with a particle size of 5 μm, using a hexane-propanol-2 (20: 1) solvent system (by volume) as an eluent. The flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape - 720 mm / hour. The optical density is recorded at a wavelength of 312 nm. According to the measurement results build a calibration graph of the dependence of the area of the chromatographic peak on the concentration of the analyte. The least squares method calculates the equation of the calibration graph, which in this case has the form
S = 27.849 • C + 0.0011,
Where
S is the peak area, cm 2 , C is the concentration of the substance in the injected sample, mcg.
Результаты определения 4-нитрофенола в ткани печени приведены в таблице 1. The results of the determination of 4-nitrophenol in liver tissue are shown in table 1.
Пример 2. Определение 2-хлор-4-нитрофенола в ткани печени. Example 2. Determination of 2-chloro-4-nitrophenol in liver tissue.
К 25 г мелкоизмельченной ткани свежей трупной печени человека прибавляют 12,5 мг 2-хлор-4-нитрофенола, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20oC. По истечении этого времени смесь заливают 50 мл уксусного ангидрида и выдерживают полчаса, периодически перемешивая. Извлечение отделяют и операцию настаивания повторяют еще дважды. Вытяжки объединяют, испаряют до половины объема в токе воздуха при комнатной температуре, разбавляют водой до 300 мл и экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, трижды по 100 мл. Эфирные извлечения объединяют, испаряют до сухого остатка, остаток растворяют в 25 мл хлороформа. Полученный раствор трижды экстрагируют щелочным буферным раствором с pH 9,0-9,5 (порциями по 25 мл каждая). Щелочные экстракты отделяют, объединяют, подкисляют до pH 2-3 24% раствором хлороводородной кислоты и экстрагируют порциями диэтилового эфира, насыщенного водой, трижды по 50 мл. Эфирные извлечения объединяют, эфир испаряют. Сухой остаток растворяют в хлороформе, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 2,5 мл этого раствора вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 4 мкл полученного раствора вводят в хроматограф "Милихром". Хроматографирование осуществляют на колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм. Элюент - система растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему), скорость подачи элюента 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты 720 мм/час. Регистрацию оптической плотности проводят при длине волны 310 нм. В данных условиях хроматографирования время удерживания 2-хлор-4-нитрофенола составляет 8,15 минут, объем удерживания - 475 мкл.12.5 mg of 2-chloro-4-nitrophenol is added to 25 g of finely divided tissue of fresh human cadaveric liver, the biological tissue is thoroughly mixed with the substance and left for a day at a temperature of 18-20 o C. After this time, the mixture is poured with 50 ml of acetic anhydride and incubated for half an hour, periodically mixing. The extract is separated and the infusion operation is repeated twice more. The extracts are combined, evaporated to half the volume in a stream of air at room temperature, diluted with water to 300 ml and extracted with diethyl ether saturated with water, three times 100 ml. The ether extracts are combined, evaporated to a dry residue, the residue is dissolved in 25 ml of chloroform. The resulting solution was extracted three times with an alkaline buffer solution with a pH of 9.0-9.5 (each in 25 ml portions). The alkaline extracts are separated, combined, acidified to pH 2-3 with a 24% solution of hydrochloric acid and extracted with 50 ml portions of diethyl ether saturated with water. The ether extracts are combined, the ether is evaporated. The dry residue is dissolved in chloroform, transferred to a volumetric flask with a capacity of 25 ml and adjusted to the mark with chloroform. 2.5 ml of this solution was added to a 25 ml volumetric flask and adjusted to the mark with chloroform. 4 μl of the resulting solution was added to the Milichrom chromatograph. Chromatography is carried out on a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with silabel 600 silica gel with a particle size of 5 μm. The eluent is a solvent system hexane-propanol-2 (20: 1) (by volume), the flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape 720 mm / hour. Registration of optical density is carried out at a wavelength of 310 nm. Under these chromatographic conditions, the retention time of 2-chloro-4-nitrophenol is 8.15 minutes, the retention volume is 475 μl.
Построение калибровочного графика. Готовится серия стандартных растворов, содержащих 0,0005%, 0,001%, 0,002%, 0,003%, 0,004% 2-хлор-4-нитрофенола. В хроматограф вводят по 4 мкл каждого раствора. Хроматографирование осуществляют на приборе "Милихром" в колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм, используя в качестве элюента систему растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему). Скорость подачи элюента составляет 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты - 720 мм/час. Оптическому плотность регистрируют при длине волны 310 нм. Но результатам измерений строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика от концентрации определяемого вещества. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид
S = 26,396 • C - 0,113,
где
S - площадь пика, см2, C - концентрация вещества во вводимой пробе, мкг.Construction of a calibration graph. A series of standard solutions is being prepared containing 0.0005%, 0.001%, 0.002%, 0.003%, 0.004% of 2-chloro-4-nitrophenol. 4 μl of each solution is introduced into the chromatograph. Chromatography is carried out on a Milichrom instrument in a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with Silabsar 600 silica gel with a particle size of 5 μm, using a hexane-propanol-2 (20: 1) solvent system (by volume) as an eluent. The flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape - 720 mm / hour. The optical density is recorded at a wavelength of 310 nm. But the measurement results build a calibration graph of the dependence of the area of the chromatographic peak on the concentration of the analyte. The least squares method calculates the equation of the calibration graph, which in this case has the form
S = 26.396 • C - 0.113,
Where
S is the peak area, cm 2 , C is the concentration of the substance in the injected sample, μg.
Результаты определения 2-хлор-4-нитрофенола в ткани печени представлены в таблице 2. The results of the determination of 2-chloro-4-nitrophenol in the liver tissue are presented in table 2.
Пример 3. Определение 2,4-динитрофенола в ткани печени. Example 3. Determination of 2,4-dinitrophenol in liver tissue.
К 25 г мелкоизмельченной ткани свежей трупной печени человека прибавляют 12,5 мг 2,4-динитрофенола, тщательно перемешивают биологическую ткань с веществом и оставляют на сутки при температуре 18-20oC. По истечении этого времени смесь заливают 50 мл уксусного ангидрида и выдерживают полчаса, периодически перемешивая. Извлечение отделяют и операцию настаивания повторяют еще дважды. Вытяжки объединяют, испаряют до половины объема в токе воздуха при комнатной температуре, разбавляют водой до 300 мл и экстрагируют диэтиловым эфиром, насыщенным водой, трижды по 100 мл. Эфирные извлечения объединяют, испаряют до сухого остатка, остаток растворяют в 25 мл хлороформа. Полученный раствор трижды экстрагируют щелочным буферным раствором с pH 9,0-9,5 (порциями по 25 мл каждая). Щелочные экстракты отделяют, объединяют, подкисляют 24% раствором хлороводородной кислоты до pH 2-3 и экстрагируют порциями диэтилового эфира, насыщенного водой, трижды по 50 мл. Эфирные извлечения объединяют, эфир испаряют. Сухой остаток растворяют в хлороформе, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 2,5 мл этого раствора вносят в колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки хлороформом. 4 мкл полученного раствора вводят в хроматограф "Милихром". Хроматографирование осуществляют на колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм. Элюент - система растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему), скорость подачи элюента - 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты - 720 мм/час. Регистрацию оптической плотности проводят при длине волны 266 нм. В данных условиях хроматографирования время удерживания 2,4-динитрофенола составляет 7 минут, объем удерживания - 350 мкл.12.5 mg of 2,4-dinitrophenol are added to 25 g of finely ground tissue of fresh human cadaveric liver, the biological tissue is thoroughly mixed with the substance and left for a day at a temperature of 18-20 o C. After this time, the mixture is poured with 50 ml of acetic anhydride and incubated half an hour, stirring occasionally. The extract is separated and the infusion operation is repeated twice more. The extracts are combined, evaporated to half the volume in a stream of air at room temperature, diluted with water to 300 ml and extracted with diethyl ether saturated with water, three times 100 ml. The ether extracts are combined, evaporated to a dry residue, the residue is dissolved in 25 ml of chloroform. The resulting solution was extracted three times with an alkaline buffer solution with a pH of 9.0-9.5 (each in 25 ml portions). The alkaline extracts are separated, combined, acidified with a 24% hydrochloric acid solution to a pH of 2-3 and extracted with 50 ml portions of diethyl ether saturated with water. The ether extracts are combined, the ether is evaporated. The dry residue is dissolved in chloroform, transferred to a volumetric flask with a capacity of 25 ml and adjusted to the mark with chloroform. 2.5 ml of this solution was added to a 25 ml flask and adjusted to the mark with chloroform. 4 μl of the resulting solution was added to the Milichrom chromatograph. Chromatography is carried out on a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with silabel 600 silica gel with a particle size of 5 μm. The eluent is a solvent system hexane-propanol-2 (20: 1) (by volume), the flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape is 720 mm / hour. Registration of optical density is carried out at a wavelength of 266 nm. Under these chromatographic conditions, the retention time of 2,4-dinitrophenol is 7 minutes, the retention volume is 350 μl.
Построение калибровочного графика. Готовится серия стандартных растворов, содержащих 0,001%, 0,002%, 0,004%, 0,006%, 0,008% 2,4-динитрофенола. В хроматограф вводят по 4 мкл каждого раствора. Хроматографирование осуществляют на приборе "Милихром" в колонке КАХ-1 размерами 64х2 мм, заполненной силикагелем "Силасорб 600" с размером частиц 5 мкм, используя в качестве элюента систему растворителей гексан-пропанол-2 (20:1) (по объему). Скорость подачи элюента составляет 50 мкл/мин, скорость диаграммной ленты - 720 мм/час. Оптическую плотность регистрируют при длине волны 266 нм. По результатам измерений строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика от концентрации определяемого вещества. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид
S = 24,385 • C + 0,699,
где
S - площадь пика, см2;
C - концентрация вещества во вводимой пробе, мкг.Construction of a calibration graph. A series of standard solutions is being prepared containing 0.001%, 0.002%, 0.004%, 0.006%, 0.008% 2,4-dinitrophenol. 4 μl of each solution is introduced into the chromatograph. Chromatography is carried out on a Milichrom instrument in a KAH-1 column with dimensions of 64x2 mm, filled with Silabsar 600 silica gel with a particle size of 5 μm, using a hexane-propanol-2 (20: 1) solvent system (by volume) as an eluent. The flow rate of the eluent is 50 μl / min, the speed of the chart tape - 720 mm / hour. The optical density is recorded at a wavelength of 266 nm. According to the measurement results build a calibration graph of the dependence of the area of the chromatographic peak on the concentration of the analyte. The least squares method calculates the equation of the calibration graph, which in this case has the form
S = 24.385 • C + 0.699,
Where
S is the peak area, cm 2 ;
C is the concentration of the substance in the injected sample, mcg.
Результаты определения 2,4-динитрофенола в ткани печени приведены в таблице 3. The results of the determination of 2,4-dinitrophenol in the liver tissue are shown in table 3.
Предлагаемый способ по сравнению с прототипом в 10 раз повышает чувствительность определения, в 4 раза увеличивает степень извлечения, характерезуется более высокой точностью (относительная ошибка уменьшается с ± 8% до ± 4%), позволяет в 2,5-3 раза сократить продолжительность анализа (с 8-9 часов до 3-3,5 часов). Результаты сравнения приведены в табл. 4
Литература
1. Швайкова М. Д. Токсикологическая химия. -М.: Медицина, 1975. - С. 119-123.The proposed method in comparison with the prototype 10 times increases the sensitivity of determination, 4 times increases the degree of extraction, is characterized by higher accuracy (relative error decreases from ± 8% to ± 4%), allows to reduce the analysis time by 2.5-3 times ( from 8-9 hours to 3-3.5 hours). The comparison results are given in table. 4
Literature
1. Shvaikova M. D. Toxicological chemistry. -M .: Medicine, 1975 .-- S. 119-123.
2. Крамаренко В.Ф. Химико-токсикологический анализ. - Киев: Вища школа, 1982. - С. 123-124. 2. Kramarenko V.F. Chemical toxicological analysis. - Kiev: Vishcha school, 1982. - S. 123-124.
3. Гадаскина И.Д., Филов В.А Превращения и определение промышленных органических ядов в организме. -Л.: Медицина, 1971. - С. 235-239. (Прототип). 3. Gadaskina ID, Filov VA. Transformations and determination of industrial organic poisons in the body. -L.: Medicine, 1971. - S. 235-239. (Prototype).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94021200A RU2121681C1 (en) | 1994-06-07 | 1994-06-07 | Method of determining 4-nitrophenol in biological material |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94021200A RU2121681C1 (en) | 1994-06-07 | 1994-06-07 | Method of determining 4-nitrophenol in biological material |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94021200A RU94021200A (en) | 1997-03-27 |
| RU2121681C1 true RU2121681C1 (en) | 1998-11-10 |
Family
ID=20156893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94021200A RU2121681C1 (en) | 1994-06-07 | 1994-06-07 | Method of determining 4-nitrophenol in biological material |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2121681C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407000C2 (en) * | 2009-01-26 | 2010-12-20 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Method of detecting mononitrophenols in aqueous media |
| RU2430372C1 (en) * | 2010-08-02 | 2011-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of determining 2,4-dinitrophenol and 2-amino-4-nitrophenol when both are present in biological fluids |
| RU2835192C1 (en) * | 2024-06-03 | 2025-02-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of determining 2-amino-4,6-dinitrophenol in a biological material |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2073723C1 (en) * | 1993-12-24 | 1997-02-20 | Малое государственное научно-производственное предприятие "Иммунотех" | Method for fermentative determination of phenols |
-
1994
- 1994-06-07 RU RU94021200A patent/RU2121681C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2073723C1 (en) * | 1993-12-24 | 1997-02-20 | Малое государственное научно-производственное предприятие "Иммунотех" | Method for fermentative determination of phenols |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Гадаскина И.Д., Филов В.А. Превращение и определение промышленных ядов в организме. - Л.: Медицина, 1971, с.235 - 239. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений. - Л.: Агропромиздат, 1987, с.114. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407000C2 (en) * | 2009-01-26 | 2010-12-20 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Method of detecting mononitrophenols in aqueous media |
| RU2430372C1 (en) * | 2010-08-02 | 2011-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of determining 2,4-dinitrophenol and 2-amino-4-nitrophenol when both are present in biological fluids |
| RU2835192C1 (en) * | 2024-06-03 | 2025-02-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of determining 2-amino-4,6-dinitrophenol in a biological material |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94021200A (en) | 1997-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kingman et al. | Isolation, purification and quantitation of several growth regulating substances in Ascophyllum nodosum (Phaeophyta) | |
| Elliott et al. | The isolation of bradykinin, a plasma kinin from ox blood | |
| Masatake | Automatic column chromatographic method for insect-moulting steroids | |
| Dreassi et al. | High-performance liquid chromatographic assay of erythromycin from biological matrix using electrochemical or ultraviolet detection | |
| RU2121681C1 (en) | Method of determining 4-nitrophenol in biological material | |
| RU2153169C1 (en) | Method of determining complex nitrophenol preparation "nitrafen" in biological material | |
| CN110146611A (en) | A method for rapid identification of chemical components in Lvjiao Buxue Granules | |
| Banes | A new partition chromatographic procedure for the assay of pharmaceuticals | |
| Parks | Evidence for transformation of sulfamethazine to its N 4-glucopyranosyl derivative in swine liver during frozen storage | |
| RU2024021C1 (en) | Method of tuberculosis diagnosis | |
| Long et al. | Matrix solid phase dispersion (MSPD) extraction and liquid chromatographic determination of five benzimidazole anthelmintics in pork muscle tissue | |
| Sjövall et al. | General and selective isolation procedures for GC/MS analysis of steroids in tissues and body fluids | |
| Lloyd et al. | Detection and determination of common benzodiazepines and their metabolites in blood samples of forensic science interest: Microcolumn cleanup and high-performance liquid chromatography with reductive electrochemical detection at a pendent mercury drop electrode | |
| CN110470763A (en) | Method that is a kind of while detecting aquatic products Malachite Green, metabolites of nitrofuran and chloramphenicol residue | |
| RU2269780C1 (en) | Method for determination of o-(2,3-dihydro-2,2-dimethyl-7-benzofuranyl)-n-methylcarbamate in biological sample | |
| Zelenski | Alkaloids of Nelumbo lutea (Willd.) pers.(Nymphaeaceae) | |
| RU2076318C1 (en) | Method of determining phytohormones in vegetable material | |
| RU2100808C1 (en) | Method to determine heterocyclic nitro compounds in biological material | |
| RU2188416C1 (en) | Method for carrying out quantitative blood phenol determination | |
| RU2287812C1 (en) | Method for assay of 2-[4-(5-trifluoromethylpyridyl-2-oxy)phenoxy]propionic acid n-butyl ester in biological material | |
| RU2835192C1 (en) | Method of determining 2-amino-4,6-dinitrophenol in a biological material | |
| Sistovaris et al. | Thin-layer chromatographic determination of major metamizole metabolites in serum and urine | |
| RU2300765C1 (en) | Method for determination of n-(benzimidazolyl-2)-o-methylcarbamate in biological material | |
| SU601611A1 (en) | Method of quantitative determining of o,o,s-trimethylthiophosphate | |
| RU2546527C1 (en) | Method for measuring blood pentachlorophenol by gas chromatography analysis |